8q24.13q24.23微重復(fù)病兒1例的臨床及遺傳學(xué)分析

邱惠國，陳波

作者單位：廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科/廈門市基因檢測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 廈門361001

目前國內(nèi)外對8q24.13q24.23的微重復(fù)鮮見案例報(bào)道，對其影響尚不能確定。本研究中我們將對1例攜帶8q24.13q24.23微重復(fù)的胎兒及其母親、父親進(jìn)行細(xì)胞遺傳學(xué)及分子方面進(jìn)行分析，并對該胎兒做產(chǎn)前診斷。

1 資料與方法

1.1 一般資料 孕婦，40歲，身高167 cm，體質(zhì)量67 kg，孕1產(chǎn)0。孕20周時(shí)至廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院行無創(chuàng)產(chǎn)前篩查。孕婦與丈夫否認(rèn)近親結(jié)婚，否認(rèn)家族遺傳病史，否認(rèn)家族胎兒畸形史。唐氏篩查未檢查。

1.2 方法

1.2.1 外周血及羊水染色體核型分析 采集孕婦及其丈夫靜脈血3 mL，在超聲引導(dǎo)定位下無菌操作行經(jīng)腹羊膜腔穿刺，采集孕婦羊水20 mL，常規(guī)的細(xì)胞接種，收獲，滴片，烤片，G顯帶及核型分析。采用德國萊卡公司生產(chǎn)的GSL-120全自動(dòng)染色體分析系統(tǒng)。羊水細(xì)胞染色體、外周血染色體每例均計(jì)數(shù)20個(gè)核型，分析5個(gè)核型。核型描述按照《人類細(xì)胞遺傳學(xué)國際命名體制》（ISCN2016）標(biāo)準(zhǔn)描述。病人或其近親屬知情同意，本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.2.2 無創(chuàng)產(chǎn)前篩查（NIPT） 采集孕婦外周血5～6 mL于EDTA抗凝管中，顛倒混勻，室溫放置，一般48 h內(nèi)對標(biāo)本進(jìn)行提取，建庫，擴(kuò)增，自檢，上機(jī)。在安諾優(yōu)達(dá)測序平臺(tái)（型號(hào)TPNB500151AR）中對擴(kuò)增后的標(biāo)本進(jìn)行測序，所得序列與人類基因組數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對，進(jìn)而得到各條染色體的數(shù)目。

1.2.3 染色體微陣列分析（CMA）檢測 采用含有6萬個(gè)60 bp大小的寡核苷酸探針的Agilent CGH+SNP 8x60k芯片進(jìn)行染色體微缺失/重復(fù)檢測。數(shù)據(jù)分析參考：ISCA、dbVar、Decipher、OMIM、PubMed、GHR、ClinGen等數(shù)據(jù)庫?？截悢?shù)變異（copy number variations，CNV）致病性按美國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)會(huì)指南進(jìn)行判讀［1］。對于判讀為臨床意義不明拷貝數(shù)變異（variants of unknown significance，VOUS），建議行父母驗(yàn)證。若該CNV遺傳來自于表型正常的親代，根據(jù)指南可判讀為偏良性VOUS；若為新發(fā)突變，則判讀為偏致病性VOUS［2］。

1.2.4 B超檢查 行胎兒心臟彩超及常規(guī)產(chǎn)前超聲篩查（Ⅱ級(jí)）。

2 結(jié)果

2.1 染色體核型分析結(jié)果 胎兒羊水細(xì)胞染色體核型為：46，XX，dup（8）（8q24.13q24.23）（圖1）；病兒父親外周血染色體核型46，XY（圖2）；病兒母親外周血染色體核型為：46，XX，dup（8）（8q24.13q24.2 3）（圖3）。

圖1 胎兒核型46，XX，dup（8）（8q24.13q24.23）

圖2 病兒父親核型46，XY

圖3 病兒母親核型46，XX，dup（8）（8q24.13q24.23）

2.2 孕婦NIPT的檢測結(jié)果 胎兒“21-三體”“18-三體”“13-三體”均為低風(fēng)險(xiǎn)。但本次檢測還對其他染色體區(qū)域進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：8號(hào)染色體長臂8q24.13q24.23存在重復(fù)。

2.3 胎兒羊水細(xì)胞CMA的檢測結(jié)果 arr［grch37］8q24.13q24.23（126646442-137947833）x3。

2.4 B超檢查結(jié)果 胎兒心臟結(jié)構(gòu)篩查及常規(guī)產(chǎn)前超聲篩查（Ⅱ級(jí)）均未見異常。

2.5 妊娠結(jié)局隨訪 孕婦2017年7月17日于外院孕41周剖宮產(chǎn)1名4.3 kg女嬰，電話回訪表示體檢未見異常。

3 討論

DNA芯片及細(xì)胞遺傳學(xué)分析顯示，該病人8號(hào)染色體q24.13 q24.23區(qū)域存在大小約為11.3 Mb的重復(fù)（chr8：126646442-137947833）。

目前8q重復(fù)的報(bào)道，在產(chǎn)前診斷中大部分是夫妻雙方中的一方8號(hào)染色體與其他染色體的易位，在胎兒中伴隨著其他的染色體片段缺失或以其他方式的染色體重排［3-10］，因此削弱這些病人之間的基因分型的相關(guān)性，而對于單純報(bào)道8號(hào)染色體長臂部分片段重復(fù)的報(bào)道比較少。Farcas等［11］報(bào)告了1例8q24.12q24.3單體8q24.12q24.3三體的嵌合體，產(chǎn)前超聲檢查顯示多處異常，但其父母決定繼續(xù)妊娠。嬰兒出生于妊娠38周，Apgar評(píng)分為2分，在出生后不到24 h內(nèi)死亡。Concolino等［12］報(bào)告了1例8q22.2q24.3重復(fù)的病例，片段約為44.9 Mb，病人具有畸形特征、臍疝、隱睪、身材矮小、先天性心臟病和輕度精神發(fā)育遲滯等癥狀。我們所報(bào)告的片段dup（8）（8q24.13q24.23）與上述的病例均不相同，且片段遺傳于母親。ClinVar及Decipher數(shù)據(jù)庫雖有收錄幾個(gè)更大片段重復(fù)或僅有幾百個(gè)kb的小片段的致病案例，但未發(fā)現(xiàn)與本次所測得的片段重復(fù)一致的致病性報(bào)道。該8q24.13q24.23區(qū)域涉及KCNQ3、LRRC6、TG等OMIM基因。KCNQ3是鉀通道電壓門控家族的成員，該家族中最早發(fā)現(xiàn)的人類基因是KCNQ1和KCNQ2。KCNQ1在心臟和內(nèi)耳表達(dá)；KCNQ2和KCNQ3在大腦中表達(dá)。M-通道是一種緩慢激活和失活的鉀電導(dǎo)，在決定神經(jīng)元閾下電興奮性以及對突觸輸入的反應(yīng)性方面起著關(guān)鍵作用。外周交感神經(jīng)元中首次描述了M電流，這種電導(dǎo)的差異表達(dá)產(chǎn)生了具有不同放電模式的交感神經(jīng)元亞型。M-通道也在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的許多神經(jīng)元中表達(dá)。KCNQ2和KCNQ3通道亞單位可以共同組裝，形成一個(gè)對天然M通道具有基本相同的生物物理特性和藥理學(xué)敏感性的通道，KCNQ2和KCNQ3基因表達(dá)模式與這些編碼天然M通道的基因一致。KCNQ3通道是一種電壓門控、快速激活的K（+）選擇性通道，類似于KCNQ1。KCNQ2和KCNQ3的共表達(dá)導(dǎo)致電流振幅顯著協(xié)同增加，表明這兩個(gè)通道之間存在功能性相互作用。KCNQ2和KCNQ3也被發(fā)現(xiàn)與KCNE1相互作用。KCNQ3基因變異可能導(dǎo)致良性家族性新生兒癲癇發(fā)作-2型。良性家族性新生兒癲癇發(fā)作-2是一種常染色體顯性遺傳性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其特征在于出生后最初幾天出現(xiàn)陣攣發(fā)作或強(qiáng)直陣攣發(fā)作。LRRC6為纖毛相關(guān)基因，在睪丸和鼻呼吸上皮細(xì)胞中的表達(dá)。LRRC6基因純合變異可能導(dǎo)致原發(fā)性睫狀體運(yùn)動(dòng)障礙-19型。原發(fā)性睫狀體運(yùn)動(dòng)障礙-19是一種常染色體隱性粒細(xì)胞病，其特征為慢性竇肺感染、軟骨癥和運(yùn)動(dòng)性纖毛。受影響個(gè)體的呼吸上皮細(xì)胞和精子鞭毛缺乏內(nèi)側(cè)和外側(cè)動(dòng)力臂。甲狀腺球蛋白TG是三碘甲狀腺激素（T3甲狀腺原氨酸）和四碘（T4甲狀腺原氨酸）的糖蛋白前體。它的分子量為660 kD，具有2個(gè)相同的亞基，但其完全水解僅產(chǎn)生2～4個(gè)T3和T4分子。甲狀腺球蛋白提供3種物質(zhì)：甲狀腺激素前體，碘的儲(chǔ)存和甲狀腺激素的儲(chǔ)存。TG基因變異可能導(dǎo)致甲狀腺激素生成障礙3型或自身免疫性甲狀腺疾病，易感性，3型。以上3個(gè)基因均未見明確劑量效應(yīng)證據(jù)。據(jù)美國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)會(huì)指南［1］，對于VOUS，建議行父母驗(yàn)證。若該CNV遺傳自表型正常的親代，根據(jù)指南判讀為偏良性VOUS；若為新發(fā)突變，則判讀為偏致病性VOUS［2］。該例孕婦在我院4次B超均未見明顯異常；dup（8）（q24.13q24.23）片段臨床意義尚不明確；重復(fù)片段遺傳于母親；母親亦無明顯的臨床癥狀；高齡產(chǎn)婦。經(jīng)充分遺傳咨詢后，孕婦愿意繼續(xù)妊娠。孕婦于外院產(chǎn)1名女嬰，電話回訪未見異常，持續(xù)隨訪中。

基因數(shù)據(jù)庫需不斷完善方能對臨床中出現(xiàn)罕見微缺失微重復(fù)的胎兒進(jìn)行遺傳學(xué)評(píng)估，有助于評(píng)估他們的預(yù)后，為臨床診斷和遺傳咨詢提供科學(xué)依據(jù)。