受體酪氨酸激酶樣孤兒受體1與腫瘤細(xì)胞信號(hào)通路關(guān)系的研究進(jìn)展

其力木格, 李雪連, 紀(jì) 強(qiáng)

(1. 陽(yáng)光融和醫(yī)院 藥學(xué)部 臨床藥學(xué)室, 山東 濰坊, 261061;2. 哈爾濱醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院 藥理教研室 心血管藥物研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 黑龍江 哈爾濱, 150081)

受體酪氨酸激酶樣孤兒受體1(ROR1)是受體酪氨酸激酶(RTKs)家族成員之一,是人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系中的一種高度保守的I型單次跨膜蛋白,被發(fā)現(xiàn)時(shí)其配體未知,故命名為孤兒受體,存在于人類、雞、小鼠、斑馬魚、果蠅和蛔蟲等多種物種中[1-2]。ROR1在小鼠胚胎早期起重要作用,出生后表達(dá)下降,在人正常組織中幾乎不表達(dá)[3]。研究[4]發(fā)現(xiàn), ROR1是一種重要的癌胚蛋白,在多種惡性腫瘤中的表達(dá)遠(yuǎn)高于相鄰正常組織。ROR1通過激活多種細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路來(lái)影響腫瘤的發(fā)生及發(fā)展[5]。本文就ROR1通過細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)惡性腫瘤發(fā)揮作用的研究現(xiàn)狀展開綜述。

1 ROR1通過Wnt信號(hào)通路對(duì)惡性腫瘤的作用

Wnt(Wingless/Integrated)信號(hào)通路可調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、遷移和分化,在胚胎發(fā)育和成人組織穩(wěn)態(tài)的維持中發(fā)揮重要作用,其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能障礙存在于包括癌癥在內(nèi)的多種人類疾病[6]。Wnt信號(hào)通路分為經(jīng)典Wnt/β-catenin信號(hào)通路和非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路,后者包括Wnt/平面細(xì)胞極性(PCP)和Wnt/Ca2+通路[7]。最近研究[8]發(fā)現(xiàn)新的非經(jīng)典Wnt通路,即通過ROR1介導(dǎo)的Wnt/ROR1信號(hào)通路,可與部分Wnt配體相互作用。在結(jié)構(gòu)上,ROR1的富含半胱氨酸結(jié)構(gòu)域(CRD)與卷曲蛋白(FZD)受體的CRD相似,已被確定為Wnt配體結(jié)合的必要結(jié)構(gòu)域[9]。

1.1 Wnt5a/ROR1信號(hào)傳導(dǎo)通路

FUKUDA T等[10]在人胚腎細(xì)胞(HEK293T)共轉(zhuǎn)染NF-κB報(bào)告基因、β-半乳糖苷酶(β-gal)載體以及編碼ROR1、Wnt5a、Wnt3、Wnt5b和Wnt16的表達(dá)載體,并通過免疫共沉淀技術(shù)分析發(fā)現(xiàn), ROR1只與Wnt5a基因共表達(dá),進(jìn)而誘導(dǎo)NF-κB激活,但未激活淋巴增強(qiáng)因子/T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子(LEF/TCF)、活化T細(xì)胞核因子(NFAT)和激活蛋白-1(AP-1)的報(bào)告基因,表明ROR1可與Wnt5a相互作用,且活化NF-κB,而不是經(jīng)典Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。GHADERI A等[11]進(jìn)一步證實(shí)了Wnt5a為ROR1的配體,其通過激活非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路來(lái)刺激ROR1信號(hào)通路。

在慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)的細(xì)胞中, Wnt5a可誘導(dǎo)ROR1與ROR2形成異質(zhì)低聚物,并激活鳥嘌呤交換因子(GEF)和Rho家族小分子鳥苷三磷酸酶(GTPases),從而促進(jìn)細(xì)胞的侵襲或遷移,也可通過誘導(dǎo)ROR1與胞質(zhì)分裂作用因子2(DOCK2)相互作用來(lái)激活大鼠肉瘤病毒相關(guān)C3肉毒菌毒素底物1(Rac1/2), 進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞增殖。然而,KAN0439834(535 Da)作為一種ROR1選擇性抑制劑,可抑制Wnt5a對(duì)ROR1的磷酸化作用,從而發(fā)揮細(xì)胞凋亡和抑制細(xì)胞生存作用[12-13]。

在黑素瘤中, ROR1的下調(diào)會(huì)導(dǎo)致ROR2和Wnt5a的表達(dá)增加,而ROR2的下調(diào)會(huì)刺激ROR1的表達(dá)[8]。Wnt5a也可以導(dǎo)致ROR1招募造血系細(xì)胞特異性蛋白-1(HS1)與細(xì)胞皮質(zhì)區(qū)肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白,HS1細(xì)胞皮質(zhì)區(qū)肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白復(fù)合物將ROR1連接到肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架上,從而促進(jìn)平面細(xì)胞極性、絲狀偽足的形成和趨化因子定向遷移[14]。在細(xì)胞外, Wnt5a與ROR1的CRD的結(jié)合可以觸發(fā)ROR1信號(hào)通路的激活,最終在細(xì)胞核中表達(dá)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)酶1/2(ERK1/2)、核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)和核因子紅細(xì)胞系2相關(guān)因子2(NRF2)靶基因[4]。

由此可見, Wnt5a-ROR1結(jié)合可能通過誘導(dǎo)Rac1/2、GTP、NF-κB、ERK1/2、NRF2激活非典型Wnt通路,以維持細(xì)胞存活和增殖。

1.2 Wnt5b/ROR1信號(hào)傳導(dǎo)通路

Wnt5b與ROR1結(jié)合后激活蓬亂蛋白2/3(DVL2/3)、Rac1、細(xì)胞分裂周期蛋白42(Cdc42)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶5(CDK5)、SIN3轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子家族成員A(Sin3A)信號(hào)傳導(dǎo)和抑制β-catenin活性,從而抑制成骨細(xì)胞的分化[15]。人類Wnt5b是非典型的Wnt配體受體,通過FZD3或FZD6受體以及ROR1、ROR2或蛋白酪氨酸激酶7(PTK7)共受體傳導(dǎo)Wnt/PCP信號(hào)[16]。

1.3 Wnt3a/ROR1信號(hào)傳導(dǎo)通路

研究[17]證明,在HEK293T細(xì)胞共轉(zhuǎn)染ROR1與Wnt5a和Wnt3a時(shí),可抑制Wnt3a誘導(dǎo)的報(bào)告基因質(zhì)?；钚?并呈劑量依賴性,表明Wnt5a和ROR1可能通過抑制Wnt3a信號(hào)通路來(lái)調(diào)控卵巢發(fā)育。

1.4 Wnt9a/ROR1信號(hào)傳導(dǎo)通路

共表達(dá)Wnts和ROR1或ROR2的HEK293T細(xì)胞提取物的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, Wnt9a(曾稱Wnt14)可以與ROR1相互作用,且Wnt9a是通過與ROR1的免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域結(jié)合而發(fā)揮其作用[18]。ROR1和Wnt9a在成人肌肉骨骼系統(tǒng)的再生和維持中起著關(guān)鍵作用[19-20]。ROR1hyp/hyp和Wnt9a-/-單突變體均沒有顯示出與腭裂表型, ROR1hyp/hyp沒有表現(xiàn)長(zhǎng)骨相關(guān)表型, Wnt9a突變體僅顯示出輕微的縮短; 然而在ROR1hyp/hyp與Wnt9a-/-雙突變體模型中表現(xiàn)出較短的長(zhǎng)骨; 還觀察到腭裂繼發(fā)性表型,這表明ROR1在基因上與Wnt9a相互作用,且ROR1和Wnt9a的下游通路在軟骨細(xì)胞成熟過程中匯聚并協(xié)同作用[18]。

1.5 Wnt16b/ROR1信號(hào)傳導(dǎo)通路

在t(1; 19)(q23; p13)異位的B前體急性淋巴細(xì)胞白血病(BCP-ALL)中過表達(dá)的ROR1和Wnt16b均不激活經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路,而是通過上調(diào)Rho GTPases來(lái)驅(qū)動(dòng)非典型Wnt通路激活,從而促進(jìn)增殖生存和抑制分化,表明這些細(xì)胞中可能存在Wnt16b/ROR1信號(hào)通路[21]。對(duì)ROR1和Wnt16共轉(zhuǎn)染的HEK293T細(xì)胞的ROR1免疫沉淀樣本進(jìn)行蛋白印跡(WB)分析,結(jié)果顯示ROR1和Wnt16之間存在直接相互作用,提示W(wǎng)nt16可能是ROR1的另一種配體[22]。

2 ROR1通過磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳動(dòng)物西羅莫司靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信號(hào)通路對(duì)惡性腫瘤的作用

PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞增殖、凋亡、代謝和血管生成等生物調(diào)節(jié)中起重要作用[23]。在許多腫瘤實(shí)體中, ROR1的激活會(huì)導(dǎo)致PI3K、Akt、環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)和mTOR以及其下游靶點(diǎn)核糖體蛋白S6(RPS6)和重組人翻譯起始因子4E結(jié)合蛋白1(4EBP1)的磷酸化[24-25]。

2.1 ROR1通過PI3K/Akt/mTOR對(duì)血液及淋巴腫瘤的作用

在套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)中, ROR1的異常表達(dá)可激活PI3K-Akt細(xì)胞信號(hào)通路,從而促進(jìn)MCL細(xì)胞的生長(zhǎng)[26]。

研究[27]表明, ROR1是彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)生存的新型預(yù)后標(biāo)志物, ROR1通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路顯著促進(jìn)DLBCL腫瘤發(fā)生。肺腺癌細(xì)胞株用siRNA沉默ROR1可顯著抑制Akt、mTOR、Raptor和核糖體40s小亞基S6蛋白激酶(p70S6K)Thr389部位的磷酸化,并顯著降低體外肺腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力,這表明ROR1可能通過Akt/mTOR信號(hào)在肺腺癌的腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用[28]。

將從接受Cirmtuzumab(ROR1特異性抗體)治療的CLL患者分離的細(xì)胞用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)(RNA-seq)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)ROR1的特異性抗體降低了mTORC1(mTOR含有2種復(fù)合體: mTORC1、mTORC2)誘導(dǎo)的基因,表明mTORC1通路是ROR1的下游信號(hào)通路[29]。

2.2 ROR1通過PI3K/Akt/mTOR對(duì)呼吸系統(tǒng)腫瘤的作用

在PC-9人肺腺癌細(xì)胞中,阻斷ROR1顯著下調(diào)了細(xì)胞周期誘導(dǎo)分子CDK4和Cyclin E1及抗凋亡分子Bcl-XL和Bcl-2的表達(dá),同時(shí)顯著上調(diào)了Bak、Caspase-3和Caspase-7等促凋亡分子的表達(dá),導(dǎo)致Akt失活,并通過去磷酸化激活糖原合成酶激酶3α/β(GSK3α/β), 最后使mTOR失活,從而有效地調(diào)節(jié)肺癌的細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和自噬等[30]。在NSCLC細(xì)胞中沉默ROR1后發(fā)現(xiàn), GSK3β、磷酸酶張力蛋白同源物(PTEN)、Akt、mTOR和核糖體蛋白S6激酶β1(RPS6Kβ1)等Akt/mTOR信號(hào)通路關(guān)鍵分子的活性顯著降低[31]。評(píng)估ROR1對(duì)肺腺癌靶向治療的適用性研究[32]發(fā)現(xiàn),在人肺腺癌細(xì)胞沉默ROR1后顯著下調(diào)了PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的活性,這與腫瘤細(xì)胞的凋亡和抗增殖有關(guān)。在肺腺癌中,過表達(dá)的ROR1很可能對(duì)維持存活期PI3K-Akt和促凋亡p38信號(hào)傳導(dǎo)之間的有利平衡發(fā)揮作用[33]。

2.3 ROR1通過PI3K/Akt/mTOR對(duì)乳腺腫瘤的作用

在人類乳腺癌的腫瘤細(xì)胞, ROR1與酪蛋白激酶1(CK1)的相互作用可使PI3K介導(dǎo)的Akt磷酸化和激活CREB[34]。在三陰性乳腺癌中,木麻黃素可抑制ROR1的磷酸化Akt為p-Akt作用,進(jìn)而抑制下游GSK3β的磷酸化,最終導(dǎo)致細(xì)胞存活率的降低和激活半胱氨酸蛋白酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)[35]。

2.4 ROR1通過PI3K/Akt/mTOR對(duì)其他惡性腫瘤的作用

ROR1通過蓬亂蛋白相關(guān)形態(tài)形成活化因子1(Daam1)和PI3K/Akt信號(hào)通路激活RhoA, 并調(diào)節(jié)骨肉瘤細(xì)胞的遷移[36]。在人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞過表達(dá)的ROR1通過上調(diào)PI3K/Akt/mTOR通路中關(guān)鍵激酶的磷酸化水平而促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移和侵襲,而ROR1表達(dá)被干擾時(shí)具有相反的效果[37]。

3 ROR1與Hippo-YAP信號(hào)傳導(dǎo)通路

Hippo信號(hào)通路是由一組保守的激酶構(gòu)成的抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的信號(hào)通路, Yes關(guān)聯(lián)蛋白(YAP)為其核心效應(yīng)分子,是一個(gè)候選致癌因子[38]。近年研究[39]證實(shí),Hippo信號(hào)傳導(dǎo)通路還在癌癥發(fā)生、組織再生以及干細(xì)胞的功能調(diào)控方面發(fā)揮著重要的作用。

研究[40]證明,神經(jīng)肽1觸發(fā)ROR1和人表皮生長(zhǎng)因子受體3(HER3)的異源二聚化,導(dǎo)致HER3的Tyr1307位點(diǎn)磷酸化, p-HER3募集幼蟲巨大致死性基因2(Lgl2)、lncRNA MAYA和tRNA 5-甲基胞嘧啶-甲基轉(zhuǎn)移酶(NSUN6)為L(zhǎng)Lgl2-MAYA-NSUN6復(fù)合物,后者使Lys59處的Hippo/Mst1甲基化,導(dǎo)致Mst1的失活和YAP靶基因的激活,從而引起破骨細(xì)胞分化和骨吸收。

抗體藥物結(jié)合恩美曲妥珠單抗(T-DM1)治療HER2陽(yáng)性乳腺癌可誘導(dǎo)ROR1的表達(dá),后者再通過激活Hippo轉(zhuǎn)錄共激活因子YAP1, 從而產(chǎn)生耐藥,并且抑制YAP1可限制T-DM1治療誘導(dǎo)的ROR1過表達(dá)和腫瘤干細(xì)胞(CSC)自我更新[41]。Wnt5a結(jié)合ROR1/FZD復(fù)合體后激活RhoAα12/13, 并導(dǎo)致大腫瘤抑制因子1/2(Lats1/2)活性的抑制,從而引起YAP/TAZ(基于PDZ結(jié)合基序的轉(zhuǎn)錄共激活子)去磷酸化和核易位, YAP/TAZ轉(zhuǎn)錄水平的升高又可以上調(diào)ROR1的表達(dá)[42]。

4 ROR1與JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路

NADANAKA S等[43]發(fā)現(xiàn),硫酸軟骨素通過MDA-MB-231細(xì)胞中的ROR1/JNK軸促進(jìn)癌癥侵襲性。在B細(xì)胞淋巴細(xì)胞白血病中,ROR1通過上調(diào)JNK信號(hào)誘導(dǎo)細(xì)胞侵襲性、轉(zhuǎn)移能力和治療抵抗[44]。

5 ROR1與NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)通路

在豚鼠耳蝸毛細(xì)胞,ROR1與Wnt5a相互作用,通過誘導(dǎo)p65的磷酸化來(lái)激活NF-κB信號(hào)通路,且Wnt5a依賴性NF-κB信號(hào)通路可減少過表達(dá)ROR1的噪聲性聽力損失(NIHL)豚鼠的聽力受損[45]。FUKUDA T等[10]研究發(fā)現(xiàn),在HEK293細(xì)胞中共表達(dá)Wnt5a與ROR1可誘導(dǎo)NF-κB的活化,并增強(qiáng)CLL細(xì)胞在體外的存活率,然而該作用被抗ROR1抗血清所中和。

6 ROR1與ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路

細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)是胚胎發(fā)生,細(xì)胞分化,細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡調(diào)控的關(guān)鍵組成部分,ERK途徑起源于質(zhì)膜中的活化受體,并通過Ras/Raf/MEK至ERK[46]。在MCL細(xì)胞中,ROR1與CD19結(jié)合形成ROR1/CD19復(fù)合物,并以B細(xì)胞抗原受體(BCR)信號(hào)通路獨(dú)立的方式激活MEK-ERK信號(hào)通路,從而促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)[26]。

7 ROR1與STAT3信號(hào)傳導(dǎo)途徑

信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)最早被發(fā)現(xiàn)為癌基因,參與調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡等生理途徑[47]。

IKEDA T等[48]研究發(fā)現(xiàn),在腫瘤微環(huán)境中, Wnt5a-ROR2信號(hào)通路在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)中誘導(dǎo)CXCL16的表達(dá), CXCL16以旁分泌的方式作用于人胃癌細(xì)胞(MKN45)激活CXCR6, 進(jìn)而刺激STAT3信號(hào)通路,最終誘導(dǎo)MKN45細(xì)胞中ROR1的表達(dá),產(chǎn)生促進(jìn)腫瘤的增殖和遷移作用。在CLL細(xì)胞中,凝膠遷移實(shí)驗(yàn)(EMSA)和染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(ChIP)研究[49]表明,激活的STAT3與ROR1啟動(dòng)子結(jié)合,激活ROR1, 并誘導(dǎo)CLL細(xì)胞中ROR1蛋白的產(chǎn)生。研究[50]發(fā)現(xiàn), Wnt5a-ROR1信號(hào)通過激活RhoA/Rac1 GTPases和上調(diào)STAT3來(lái)活化非規(guī)范Wnt信號(hào),從而增強(qiáng)TCF3-PBX1細(xì)胞的存活和增殖[12]。研究發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素6(IL-6)通過激活ROR1, 誘導(dǎo)STAT3磷酸化,并以時(shí)間和劑量依賴的方式上調(diào)ROR1蛋白水平。

8 靶向ROR1腫瘤免疫治療

8.1 應(yīng)用于腫瘤免疫治療的單克隆抗體

單克隆抗體是人體細(xì)胞特異性識(shí)別、抵抗病原微生物入侵產(chǎn)生的物質(zhì),可直接阻斷配體結(jié)合,激活免疫系統(tǒng)消除腫瘤細(xì)胞,具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、毒性低等優(yōu)點(diǎn)。單克隆抗體主要應(yīng)用于臨床診療,中國(guó)已研制出300多種用于腫瘤治療的單克隆抗體。目前,針對(duì)ROR1不同結(jié)構(gòu)域(CRD結(jié)構(gòu)域、Ig結(jié)構(gòu)域、Kringle結(jié)構(gòu)域)構(gòu)建的抗ROR1單克隆抗體已經(jīng)被開發(fā)出來(lái),可產(chǎn)生明顯的抗體依賴性毒性或補(bǔ)體依賴性毒性,使腫瘤細(xì)胞凋亡加劇[51]。有研究利用小鼠抗ROR1單克隆抗體5F1-B10評(píng)估ROR1在膀胱癌細(xì)胞表面的表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示5F1-B10單抗在人膀胱細(xì)胞系5637、EJ138中分別能識(shí)別86.1%和45.6%的ROR1分子。ROR1在非癌性人胎包皮成纖維細(xì)胞(HFFF)中表達(dá)量為5.49%。免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫組織化學(xué)染色結(jié)果也證實(shí)了ROR1分別存在于膀胱癌細(xì)胞和組織表面。細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 5F1-B10單抗可誘導(dǎo)5637和EJ138細(xì)胞株凋亡。該研究[52]認(rèn)為ROR1可能是開發(fā)新型膀胱癌治療藥物的一個(gè)有希望的靶點(diǎn)。另外,有研究提供了抗ROR1單克隆抗體Zilovertamab在高級(jí)別漿液性卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌中的臨床前證據(jù)。單藥Zilovertamab在72 h內(nèi)能顯著抑制高級(jí)別漿液性卵巢癌細(xì)胞和子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖, Ⅰ期臨床試驗(yàn)中顯示出Zilovertamab血漿半衰期為32.4 d[53]。靶向ROR1的Cirmtuzumab人源化單克隆抗體也在臨床試驗(yàn)中進(jìn)行了評(píng)估,在cirmtuzumab治療CLL患者的Ⅰ期試驗(yàn)中觀察到有益的效果,可抑制CLL患者腫瘤細(xì)胞ROR1信號(hào)傳導(dǎo)[54]。

8.2 應(yīng)用于腫瘤免疫治療的基因工程抗體

基因工程抗體是指將編碼抗體的基因進(jìn)行加工改造后轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞表達(dá)所得的抗體,又稱為重組抗體。基于ROR1靶向單克隆抗體, ROR1靶向基因工程抗體也被開發(fā)出來(lái),包括單鏈片段可變抗體(scFv)、Fab抗體片段、抗體藥物偶聯(lián)物(ADC)等。

scFv是由抗體重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)在一段肽鏈的連接下構(gòu)成的小分子,是具有抗體活性的最小功能結(jié)構(gòu)單位,相對(duì)于單克隆抗體而言,scFv分子質(zhì)量小,穿透力強(qiáng),半衰期短,免疫原性低,在藥代動(dòng)力學(xué)、藥效學(xué)方面具有潛在的治療優(yōu)勢(shì)。AGHEBATI-MALEKI L等[55]利用噬菌體展示技術(shù)選擇了針對(duì)ROR1細(xì)胞外區(qū)域特定肽的scFvs, 結(jié)果表明,分離的scFvs對(duì)ROR1肽具有特異性反應(yīng)。scFv對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞和CLL細(xì)胞的生長(zhǎng)有顯著抑制作用。此外,用特異性scFv處理24 h可誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞和CLL細(xì)胞凋亡。該研究結(jié)果表明,使用肽特異性scFv靶向ROR1可能是一種有效的血液惡性腫瘤免疫治療策略。

Fab片段是由一條完整的輕鏈與重鏈的VH和CH1結(jié)構(gòu)域(Fd段)組成,也叫做抗原結(jié)合片段,分子量約5×104。Fab類抗體片段具有分子質(zhì)量小、免疫原性低、組織特異性強(qiáng)、可基因工程操作等特點(diǎn),使Fab成為了醫(yī)藥研究領(lǐng)域的重要成員之一。嵌合Fab片段是由鼠源可變區(qū)和人源恒定區(qū)組成, YIN Z N等[56]研究開發(fā)了一種新型嵌合抗ROR1 Fab抗體(ROR1-cFab), 該研究通過三輪亞克隆親和篩選,將ROR1免疫滴度高的小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,構(gòu)建ROR1-cfab陽(yáng)性融合細(xì)胞原核表達(dá)載體,發(fā)現(xiàn)ROR1-cfab可以特異性結(jié)合ROR1蛋白和ROR1陽(yáng)性卵巢癌A2780細(xì)胞,并抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移,誘導(dǎo)ROR1陽(yáng)性A2780細(xì)胞凋亡,且呈劑量依賴性。該研究[56]認(rèn)為ROR1-cfab是一種新型的抗ROR1抗體,是治療ROR1陽(yáng)性卵巢癌的可能候選者之一。

ADC是將單克隆抗體和強(qiáng)效高毒性小分子毒物通過生物活性連接子偶聯(lián)而成的定點(diǎn)靶向癌細(xì)胞的強(qiáng)效抗癌藥物, ADC既能保證靶向性,又能改善細(xì)胞毒藥物的治療窗,被認(rèn)為是未來(lái)疾病治療的重要手段。VLS-101是一種ADC, 用于治療表達(dá)ROR1(ROR1+)的癌癥,中國(guó)于2022年批準(zhǔn)其用于治療難治性或復(fù)發(fā)性彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤。VLS-101包括UC-961(一種人源化免疫球蛋白G1單克隆抗體,可結(jié)合人ROR1的細(xì)胞外表位),一種馬酰亞胺丙基-纈氨酸-瓜氨酸-對(duì)氨基苯甲酸酯連接物,以及一種微管聚合抑制劑單甲基奧瑞他汀E (MMAE)。VLS-101與ROR1的結(jié)合導(dǎo)致MMAE的快速細(xì)胞內(nèi)化和傳遞,從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡。VAISITTI T等[57]研究了4例RS患者來(lái)源的異種移植模型,其具有不同水平的ROR1表達(dá)(11%、32%、85%和99%), VLS-101對(duì)表達(dá)ROR1最低的患者無(wú)效,但可完全緩解ROR1表達(dá)水平較高患者的腫瘤負(fù)擔(dān)。

9 小 結(jié)

綜上所述, ROR1是腫瘤相關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)通路的重要成員,可以結(jié)合配體并激活下游的信號(hào)通路,對(duì)各種腫瘤細(xì)胞的增殖、生存、生長(zhǎng)、遷移和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。雖然有研究揭示了ROR1在癌癥中的促腫瘤功能,但其在不同腫瘤中的調(diào)節(jié)機(jī)制和在腫瘤發(fā)生中的作用還不完全清楚。在各種臨床前模型中, ROR1結(jié)合小分子抑制ROR1可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞顯著凋亡并抑制腫瘤細(xì)胞功能,充分了解ROR1的結(jié)構(gòu)特征以及下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等生物學(xué)特性,可優(yōu)化在血液和非血液惡性腫瘤中的ROR1靶向癌癥治療方案。目前開發(fā)了許多靶向ROR1的抗體,可特異性識(shí)別腫瘤抗原,高效殺滅腫瘤細(xì)胞,但獲得上市批準(zhǔn)的藥物不多,期待將來(lái)會(huì)有更多的靶向ROR1應(yīng)用于腫瘤免疫治療。