• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    飼糧粗蛋白質(zhì)水平對育肥牦牛生產(chǎn)性能和瘤胃微生物多樣性的影響

    2023-11-07 08:40:46來進成劉東花李潤樺竇莉蓉
    中國飼料 2023年21期
    關鍵詞:差異水平

    來進成, 劉東花, 李潤樺, 劉 麗 , 竇莉蓉, 羅 蘭

    (1.甘肅省畜牧技術推廣總站,甘肅 蘭州 730000;2.山丹縣畜牧技術推廣站,甘肅 張掖 734000;3.新疆維吾爾自治區(qū)畜牧總站,新疆 烏魯木齊 830000)

    牦牛是生活在青藏高原及其毗鄰的高山、亞高山高寒地區(qū)的大型反芻家畜,是當?shù)啬撩裰匾纳a(chǎn)、生活資料,具有不可替代的生態(tài)和經(jīng)濟學地位。對于牦牛養(yǎng)殖來說,精準的營養(yǎng)供給是提高生產(chǎn)性能、促進產(chǎn)業(yè)發(fā)展、增加牧民收入的重要策略。如何有效利用飼糧的營養(yǎng)水平調(diào)控牦牛瘤胃微生物區(qū)系,改善瘤胃內(nèi)環(huán)境,進而提高飼料利用率和營養(yǎng)吸收率,是牦牛營養(yǎng)研究的一個重要方向。

    瘤胃是反芻動物飼料發(fā)酵、 營養(yǎng)消化的重要場所, 可消化飼料中70% ~85%的可消化物和50%的粗纖維(潘美娟等,2012)。瘤胃功能的發(fā)揮主要依靠結構復雜和數(shù)量豐富的微生物群落,其中, 細菌在整個瘤胃微生物區(qū)系中約占95%;古細菌占比為2% ~4%;真核生物約占1%,主要由原生動物和真菌組成(Brulc 等,2009)。 瘤胃微生物之間相互協(xié)調(diào)、 相互制約共同維持著瘤胃內(nèi)環(huán)境的平衡與穩(wěn)定, 通過厭氧發(fā)酵幫助宿主將自身難以利用的纖維素、半纖維素、木質(zhì)素和非蛋白氮等物質(zhì)轉(zhuǎn)化為可消化的化合物(韓旭峰,2015),為宿主提供65% ~75%的能量(郭紅等,2022)。 此外,微生物本身隨后在胃中被消化,并作為反芻動物的主要蛋白質(zhì)來源。因此,建立穩(wěn)定良好的微生物區(qū)系對維持機體健康、提高動物生產(chǎn)性能、改善動物產(chǎn)品質(zhì)量、 減少環(huán)境污染等方面具有重要的意義(崔浩然等,2021),相反,瘤胃微生物區(qū)系的紊亂會導致宿主免疫力降低、生產(chǎn)性能下降等(馬健等,2020)。因此,瘤胃微生物區(qū)系的研究一直是反芻動物研究的熱點領域。

    研究證實, 飼糧的改變可使瘤胃微生物群落打破原來的穩(wěn)定微生態(tài),建立新平衡,實現(xiàn)對微生物宿主的代謝調(diào)控, 進而影響生產(chǎn)性能 (唐鵬,2018)。粗蛋白質(zhì)作為飼糧中僅次于能量的第二大營養(yǎng)源,是影響動物生長、發(fā)育、健康和環(huán)境的一個重要因素。 其含量變化會影響提供給反芻動物的氮源。 已有學者在肉牛、山羊、綿羊等反芻動物中進行了研究(李蔣偉等,2022;張春霞,2022;牛驍麟等,2020;唐鵬,2018;李秋鳳等,2015),分析不同粗蛋白質(zhì)水平對生產(chǎn)性能或瘤胃微生物區(qū)系的影響,但在牦牛上相關報道有限。 因此,本試驗旨在研究飼糧不同蛋白水平對育肥牦牛生長性能、屠宰性能以及瘤胃微生物區(qū)系的影響,為牦牛養(yǎng)殖中合理調(diào)配飼糧蛋白水平, 進一步挖掘瘤胃微生物功能和調(diào)控機制提供思路。

    1 材料與方法

    1.1 試驗動物與飼養(yǎng)管理 試驗用育肥牦牛均來自張掖市肅南裕固族自治縣天然放牧的2.5 周歲左右牦牛, 于2021 年12 月收購運輸至民樂縣德華畜牧有限公司進行后續(xù)試驗。 選取體重[(190.88±5.97)kg] 相近、 體況良好的公牦牛12頭,完全隨機平均分成2 組,分別飼喂粗蛋白質(zhì)水平為13.53%(D 組)和16.20%(G 組)的全混合日糧。按照試驗設計,預飼期15 d,正飼期120 d。試驗用全混合日糧依據(jù)我國 《肉牛飼養(yǎng)標準》(NY/T815-2004) 的肉牛營養(yǎng)標準推薦值和飼養(yǎng)經(jīng)驗進行配制。正式試驗開始前對試驗牛進行編號,每組單圈飼養(yǎng)。在牦牛熟悉并適應試驗料,采食量達到正常狀態(tài)(即體重的2%以上)正式開始試驗記錄。 每天9:00 和18:00 進行飼喂,自由采食,自由飲水,牦牛的管理按牛場常規(guī)要求進行,各組飼養(yǎng)管理條件保持一致。 全混合日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

    表1 全混合飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎)

    1.2 樣品采集與處理 飼養(yǎng)試驗最后一天晨飼前,利用胃管式采樣器采集瘤胃液150 mL/頭,經(jīng)4 層無菌紗布過濾,分裝至20 mL 離心管中,立即用液氮速凍后-80 ℃冰箱保存,用于后續(xù)分析(龐凱悅等,2022)。

    1.3 指標測定及方法

    1.3.1 生長性能及屠宰性能測定 正式試驗第1天和第120 天對所有試驗牦牛進行空腹稱重,記錄初始體重和宰前活重, 計算總增重和平均日增重。 試驗結束當天,對所有牦牛進行屠宰,記錄胴體重并計算屠宰率。

    1.3.2 瘤胃液微生物區(qū)系測定 將瘤胃液樣品送至上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司, 根據(jù)E.Z.N.A.RsoilDNA Kit 試劑盒說明書提取12 個樣本的微生物群落基因組DNA。 使用引物338F (5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’)和806R(5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’) 對細菌16S rRNA V3 ~V4 區(qū)進行PCR 擴增, 通過Illumina Miseq PE300 型高通量測序儀進行測序。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 生長性能、屠宰性能數(shù)據(jù)使用Excel 2010 軟件進行整理, 利用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計分析和T 檢驗,P<0.05 表示差異顯著,P>0.05 表示差異不顯著,結果均以“平均值±標準差”表示。

    微生物數(shù)據(jù)分析在上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司云平臺上進行,使用fastp 和FLASH 軟件根據(jù)overlap 關系對PE reads 進行拼接, 同時對序列質(zhì)量進行質(zhì)控和過濾,得到優(yōu)化序列。 利用Uparse軟件,按照97%相似性對非重復序列(不含單序列)進行OTU 聚類, 在聚類過程中去除嵌合體, 得到OTU 的代表序列, 并對序列進行抽平處理。 由Mother 軟件計算α 多樣性指數(shù)。 采用RDP classifier 貝葉斯算法對OTU 代表序列進行分類學分析,通過與silva(Release138 http://www.arb-silva.de)數(shù)據(jù)庫比對,獲得各水平上的不同生物分類信息及其相對豐度信息,并分別在各個分類學水平統(tǒng)計群落物種組成。運用Wilcox 秩和檢驗比較兩組在門、屬水平上的菌落組成差異。分析結果以“平均值±標準差” 表示,P>0.05 表示差異不顯著,P<0.05 表示差異顯著,P<0.01 表示差異極顯著。

    2 結果與分析

    2.1 不同粗蛋白質(zhì)水平飼糧對育肥牦牛生產(chǎn)性能的影響 由表2 可知,飼糧不同粗蛋白質(zhì)水平對牦牛宰前活重、 胴體重和屠宰率的影響差異不顯著,但D 組測定值均高于G 組(P>0.05)。 隨著飼糧蛋白水平的降低,D 組牦牛的總增重和平均日增重較G 組分別增加7.03%和6.94%(P<0.05)。

    表2 不同粗蛋白質(zhì)水平飼糧對育肥牦牛生產(chǎn)性能的影響

    2.2 育肥牦牛瘤胃微生物菌群豐富度和多樣性分析 基于OTU 代表序列進行α 多樣性分析,計算細菌豐富度(Sobs、Chao 和Ace)指數(shù)、多樣性(Shannon 和Simpson)指數(shù)和覆蓋度(Coverage)指數(shù)。 由表3 可知,本次測序覆蓋率均達到98%以上,測序深度合理,測序范圍能涵蓋大部分區(qū)域。G 組和D 組牦牛微生物菌群在數(shù)量及結構上非常相似,D 組微生物豐富度和多樣性略高于G組,但兩組之間沒有顯著差異(P>0.05)。

    2.3 育肥牦牛瘤胃微生物菌群組成差異分析

    2.3.1 門水平 在門水平上,兩組共有19 個菌門(圖1A)。 兩組瘤胃微生物相對豐度>1%的優(yōu)勢菌門有擬桿菌門(Bacteroidota)、厚壁菌門(Firmicutes)、 變形菌門 (Proteobacteria)、 螺旋體門(Spirochaetota)(圖1B)。 擬桿菌門和厚壁菌門相對豐度之和在各組中占比均高達92%以上,處于絕對優(yōu)勢地位。 在G 組樣本中,相對豐度較高的菌門有擬桿菌門和螺旋體門, 分別為62.08%和1.62%,較D 組分別高出3.20%和0.54%;厚壁菌門和變形菌門在D 組中相對豐度較高,分別高于G 組2.21%和1.81%。 D 組和G 組在門水平上差異不顯著(P>0.05)(圖1C)。

    圖1 不同蛋白組的牦牛瘤胃微生物組成(門水平)

    2.3.2 屬水平 在屬水平上, 共鑒定出261 個菌屬,兩組共有237 個菌屬,G 組特有13 個菌屬,D組特有11 個菌屬(圖2A)。 在12 個樣本中,微生物相對豐度>1%的優(yōu)勢菌屬有16 個, 其中,Prevotella (19.18% )、norank_f__F082 (16.56% ) 和Rikenellaceae_RC9_gut_group(13.41%)的相對豐度高于10%, 其余13 個菌屬相對豐度低于5%(圖2B)。 運用Wilcox 秩和檢驗比較兩組在屬水平上的菌落組成差異。 在優(yōu)勢菌屬中,Rikenellaceae_RC9_gut_group 的相對豐度在D 組中顯著高于G 組(P<0.05),UCG-002 的相對豐度在D組中極顯著高于G 組(P<0.01),其他菌屬在兩組之間無顯著差異(圖2C)。

    圖2 不同蛋白組的牦牛瘤胃微生物組成(屬水平)

    3 討論

    3.1 飼糧不同粗蛋白質(zhì)水平對育肥牦牛生產(chǎn)性能的影響 蛋白質(zhì)是配制日糧配方時的一項重要指標,不僅影響動物的生產(chǎn)性能,對機體健康、養(yǎng)殖效益以及生態(tài)環(huán)境都具有重要的作用。 飼喂過高的蛋白不僅會造成資源浪費,增加飼料成本,同時還會導致動物機體氮排泄增加,造成環(huán)境污染,此外, 還可能導致動物繁殖力下降 (韓旭峰,2015)。 而過低的蛋白質(zhì)供應則無法滿足動物營養(yǎng)需要,可能會造成增重減慢、飼料轉(zhuǎn)化效率降低以及胴體質(zhì)量下降等。因此,配制適宜蛋白水平的飼糧可最大限度地提高飼料利用效率, 促進牦牛的生長,改善胴體品質(zhì)。 李秋鳳等(2015)研究發(fā)現(xiàn),飼養(yǎng)肉牛適宜的蛋白水平為12.5% ~16.0%。張春霞(2022)使用不同蛋白水平日糧飼喂西門塔爾牛,結果顯示,隨著蛋白水平的提高,平均日增重呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢, 中蛋白組與低蛋白組差異顯著(P<0.05),與高蛋白組差異不顯著。代正陽 (2018) 研究發(fā)現(xiàn), 飼喂中蛋白水平(14.95%) 日糧的金華黃牛試驗組平均日增重高于飼喂高蛋白(16.6%)和低蛋白(13.45%)水平的兩個試驗組,但差異不顯著。李紅麗等(2022)利用3 個不同蛋白質(zhì)水平 [12%(低)、14%(中)、16%(高)] 的全混合日糧分別飼喂3 組牦牛, 結果顯示,中蛋白組的終末體重、總增重和平均日增重顯著高于低蛋白質(zhì)組(P<0.05),同時也高于高蛋白組,但無顯著差異。本試驗結果與上述研究結果相似,13.53%蛋白組的總增重和平均日增重高于16.20%蛋白組,且差異達到顯著水平。 當飼糧能量水平基本一致的情況下, 牦牛的育肥營養(yǎng)水平主要取決于蛋白水平。 科學合理的能氮比可促進瘤胃重要微生物菌群的生長繁殖, 有利于瘤胃微生物蛋白的合成, 提高瘤胃對營養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收。 本研究中,過高的蛋白水平(16.20%)可能造成了飼糧能氮水平失衡, 進而影響了牦牛的生長性能(付敏等,2022;陳偉健,2008)。

    屠宰性能是判斷動物生產(chǎn)性能高低的重要指標,直接影響最終的經(jīng)濟效益。 王巍等(2020)認為,在相同能量水平下,蛋白水平的提高對屠宰性能無顯著作用。張春霞(2022)研究表明,中蛋白組西門塔爾牛胴體重和屠宰率高于高蛋白組, 但差異不顯著。本試驗結果與上述研究結果相似,胴體重和屠宰率會隨著日糧蛋白水平的提高而降低,但兩處理組之間差異不顯著, 說明蛋白水平對屠宰性能影響較小。根據(jù)本研究可得出,在不影響牦牛生長的情況下,適當?shù)亟档惋暭Z粗蛋白質(zhì)含量,可有效降低飼養(yǎng)成本,提高生產(chǎn)效益。

    3.2 飼糧不同粗蛋白質(zhì)水平對育肥牦牛瘤胃微生物菌群豐富度與多樣性的影響 α 多樣性指數(shù)是衡量微生物菌群豐富度和多樣性的綜合指標。α 多樣性越高,菌群組成越復雜、穩(wěn)定,增強了對外界干擾的抵抗力和適應性, 有利于宿主健康(Jiang 等,2021)。 以往的研究認為不同蛋白水平對瘤胃微生物豐富度有顯著影響, 但對多樣性影響不大, 菌群豐度與蛋白水平呈負相關。 郭凱等(2019)研究表明,飼喂低蛋白日糧(19%)的90 日齡犢牛瘤胃微生物群落的Chao 指數(shù)顯著高于高蛋白組(22%)(P<0.05),兩處理組間的Shannon指數(shù)沒有顯著差異。 Zhang 等(2021)以2 歲母牦牛為研究對象,飼喂4 種不同蛋白水平(9.64%、11.25%、12.48%、13.87%)飼糧,結果發(fā)現(xiàn)蛋白水平最高組(13.87%)的瘤胃微生物群的Ace 指數(shù)顯著降低(P<0.05),其他組之間差異不顯著,不同組Shannon 指數(shù)之間差異不顯著。 本研究結果發(fā)現(xiàn)牦牛瘤胃微生物菌群α 多樣性指數(shù)在不同蛋白組之間均差異不顯著, 但菌群多樣性和豐度會隨著飼糧蛋白水平的增高而降低, 與上述結果相似。說明在相同的食物成分下,改變粗蛋白質(zhì)濃度并不足以引起瘤胃微生物群的強烈波動, 低蛋白組更有利于微生物繁殖。

    3.3 不同粗蛋白質(zhì)水平對牦牛瘤胃微生物菌群組成的影響 無論是品種、 飼養(yǎng)方式還是營養(yǎng)水平改變, 厚壁菌門和擬桿菌門的相對豐度都占據(jù)著反芻動物瘤胃微生物的主導地位, 其次還有少量的變形菌門、螺旋體菌門和軟壁菌門等(李蔣偉等,2022;姜君等,2021;譚子璇等,2020;馬力等,2019;Singh 等,2015)。 本研究結果與上述結論一致,在門水平下,兩組相對豐度高于1%的菌門均為厚壁菌門、擬桿菌門、變形菌門和螺旋體門,在不同蛋白處理組之間差異不顯著。 厚壁菌門和擬桿菌門的相對豐度在牦牛瘤胃中占據(jù)絕對優(yōu)勢地位,占比達到92%以上,對牦牛健康起著非常關鍵的作用。厚壁菌門促進食物中的纖維降解,將纖維素轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性脂肪酸, 促進食物消化和生長發(fā)育; 擬桿菌門主要促進食物中蛋白質(zhì)和碳水化合物的消化吸收, 從而促進胃腸道免疫系統(tǒng)的發(fā)育(Jiang 等,2021)。在本研究中,高蛋白組的擬桿菌門相對豐度高于低蛋白組, 以促進蛋白的消化利用。 變形菌門的相對豐度比擬桿菌門和厚壁菌門要低得多,但在瘤胃代謝中仍起著重要作用。變形菌門是細菌中最大的細菌門, 參與多種功能代謝,例如氮代謝等,此外,變形菌門還包括很多病原菌, 其數(shù)量的增加是生物失調(diào)和疾病風險的潛在診斷特征(Shin 等,2015)。 螺旋體門也同樣發(fā)揮著重要的作用,能有效降解纖維素、果膠和磷酸鹽,發(fā)酵形成揮發(fā)性脂肪酸,為反芻動物機體提供能量。以上研究說明,反芻動物都共享著一個核心瘤胃微生物菌群, 不會因飼糧中的一種營養(yǎng)成分的改變而引起厚壁菌門和擬桿菌門的優(yōu)勢地位發(fā)生改變。

    許多微生物對飼料底物濃度比較敏感, 長時間飼喂不同營養(yǎng)水平的日糧,會使瘤胃菌群的數(shù)量和結構發(fā)生改變。 Henderson 等(2015)對水牛、野牛、綿羊、山羊、鹿、羊駝、大羊駝等32 個動物品種的瘤胃微生物進行研究,發(fā)現(xiàn)飼糧改變會引起瘤胃中微生物菌屬的改變。本研究利用高通量測序技術分析發(fā)現(xiàn),在屬水平上,優(yōu)勢菌屬共有16 個,其中7 個屬于擬桿菌門,8 個屬于厚壁菌門,1 個屬于變形菌門。 相對豐度大于10%的菌屬有Prevotella、norank_f__F082 和Rikenellaceae_RC9_gut_group。Prevotella 屬于擬桿菌門,在瘤胃中一直處于優(yōu)勢地位,是瘤胃中主要蛋白降解菌屬之一,參與淀粉和蛋白質(zhì)的分解, 蛋白濃度的增加會引發(fā)普雷沃氏菌屬數(shù)量增多(張潔等,2020)。 因此,本研究中高蛋白組的Prevotella 的相對豐度大幅度上升,成為瘤胃中占比最高的菌屬。 Rikenellaceae_RC9_gut_group 屬于擬桿菌門,可促進脂質(zhì)代謝,參與短鏈脂肪酸,特別是丙酸的產(chǎn)生(Conte 等,2022)。Rikenellaceae_RC9_gut_group 還與宿主動物生長性能呈正相關, 其豐度在生長性能最好的動物中更高(Daghio 等,2021)。 本研究中,Rikenellaceae_RC9_gut_group 在低蛋白組的相對豐度顯著高于高蛋白組(P<0.05),同時低蛋白組的平均日增重顯著高于高蛋白組 (P<0.05), 說明Rikenellaceae_RC9_gut_group 的數(shù)量會受到飼糧蛋白濃度的影響,同時其與生產(chǎn)性能可能成正相關,其是否影響反芻動物的生產(chǎn)性能還需進一步驗證。UCG-002 屬于厚壁菌門,在低蛋白組中相對豐度極顯著升高(P<0.01)。 UCG-002 的相關報道較少,功能可能與脂質(zhì)代謝相關。 綜上所述,飼糧蛋白水平的改變會對牦牛的瘤胃微生物組成產(chǎn)生一定影響。

    4 結論

    綜上所述, 與16.20%蛋白水平飼糧相比,13.53%蛋白水平的飼糧更有利于育肥牦牛的生長,總增重和日增重顯著增加。不同蛋白水平飼糧對瘤胃微生物α 多樣性無顯著影響,但對微生物優(yōu)勢菌屬組成產(chǎn)生一定影響,13.53%蛋白水平飼糧更有利于瘤胃微生物的繁殖。 本研究為提高牦牛育肥生產(chǎn)效率、 優(yōu)化瘤胃微生物區(qū)系提供重要參考。

    猜你喜歡
    差異水平
    相似與差異
    音樂探索(2022年2期)2022-05-30 21:01:37
    張水平作品
    作家葛水平
    火花(2019年12期)2019-12-26 01:00:28
    找句子差異
    加強上下聯(lián)動 提升人大履職水平
    人大建設(2019年12期)2019-05-21 02:55:32
    DL/T 868—2014與NB/T 47014—2011主要差異比較與分析
    生物為什么會有差異?
    老虎獻臀
    M1型、M2型巨噬細胞及腫瘤相關巨噬細胞中miR-146a表達的差異
    收入性別歧視的職位差異
    久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 欧美不卡视频在线免费观看 | 视频区欧美日本亚洲| 免费看十八禁软件| 校园春色视频在线观看| 国产乱人伦免费视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 黄色视频不卡| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 黄片播放在线免费| 丝袜在线中文字幕| 美女高潮到喷水免费观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 级片在线观看| 国产乱人伦免费视频| 啦啦啦免费观看视频1| 黄色视频,在线免费观看| 一级作爱视频免费观看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲人成电影免费在线| 日日爽夜夜爽网站| 少妇粗大呻吟视频| 国产精品二区激情视频| 在线观看日韩欧美| 久久影院123| 欧美精品亚洲一区二区| 午夜a级毛片| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 操美女的视频在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 制服丝袜大香蕉在线| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产1区2区3区精品| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 两性夫妻黄色片| 国产片内射在线| 午夜激情av网站| 久久狼人影院| 久久久久久久久久久久大奶| 国产精品永久免费网站| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 又大又爽又粗| 我的亚洲天堂| www.自偷自拍.com| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 操美女的视频在线观看| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| av在线天堂中文字幕| 精品一区二区三区四区五区乱码| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产av在哪里看| 免费高清在线观看日韩| 亚洲欧美精品综合久久99| 黄片播放在线免费| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国内精品久久久久精免费| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产1区2区3区精品| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲色图综合在线观看| 女性被躁到高潮视频| 免费少妇av软件| 最近最新中文字幕大全免费视频| 午夜成年电影在线免费观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 看黄色毛片网站| 天天一区二区日本电影三级 | 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 视频区欧美日本亚洲| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| www.999成人在线观看| 精品人妻在线不人妻| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲成国产人片在线观看| 日韩国内少妇激情av| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久久久国内视频| 脱女人内裤的视频| 色在线成人网| 亚洲精华国产精华精| 伦理电影免费视频| 国产高清视频在线播放一区| 叶爱在线成人免费视频播放| 成人三级做爰电影| 亚洲欧美激情在线| 日韩三级视频一区二区三区| 成人国语在线视频| 国语自产精品视频在线第100页| 日韩精品免费视频一区二区三区| 成年人黄色毛片网站| 国内精品久久久久精免费| ponron亚洲| 久久久久久大精品| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产97色在线日韩免费| 欧美性长视频在线观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 99在线视频只有这里精品首页| 国产亚洲av高清不卡| 国产欧美日韩一区二区三| 午夜免费激情av| 亚洲在线自拍视频| 波多野结衣高清无吗| 午夜福利免费观看在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| 麻豆成人av在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久性视频一级片| 日日爽夜夜爽网站| 美女大奶头视频| 精品国产乱码久久久久久男人| www国产在线视频色| 亚洲av五月六月丁香网| 他把我摸到了高潮在线观看| 在线观看日韩欧美| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 91精品三级在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 韩国av一区二区三区四区| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲av熟女| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美黄色片欧美黄色片| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 男女床上黄色一级片免费看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 在线观看舔阴道视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 精品久久久久久久毛片微露脸| 女人被狂操c到高潮| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 99国产精品免费福利视频| 无人区码免费观看不卡| 国产精品一区二区精品视频观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 两人在一起打扑克的视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 欧美在线黄色| 可以在线观看的亚洲视频| 精品久久久精品久久久| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲人成电影观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 丰满的人妻完整版| 两人在一起打扑克的视频| 精品福利观看| 91成年电影在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 大型黄色视频在线免费观看| 午夜福利在线观看吧| 精品第一国产精品| 午夜免费成人在线视频| 十八禁人妻一区二区| 日日爽夜夜爽网站| 一a级毛片在线观看| 青草久久国产| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 夜夜夜夜夜久久久久| 国语自产精品视频在线第100页| 天堂动漫精品| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产精品日韩av在线免费观看 | 一区二区日韩欧美中文字幕| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 天天一区二区日本电影三级 | netflix在线观看网站| 亚洲国产看品久久| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 午夜福利欧美成人| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲精品一区av在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 黄片小视频在线播放| av网站免费在线观看视频| 十分钟在线观看高清视频www| 久久热在线av| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲第一电影网av| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 久久人人爽av亚洲精品天堂| 色在线成人网| 一进一出抽搐动态| 亚洲熟女毛片儿| 天天添夜夜摸| 人人澡人人妻人| 亚洲美女黄片视频| 亚洲成av人片免费观看| 亚洲国产精品合色在线| 久久久精品欧美日韩精品| 色尼玛亚洲综合影院| 日韩免费av在线播放| 国产成人精品无人区| 中文字幕久久专区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 给我免费播放毛片高清在线观看| 不卡av一区二区三区| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产成人欧美在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 国产精品久久视频播放| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产精品二区激情视频| www.熟女人妻精品国产| 成人三级黄色视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲精品国产区一区二| 老鸭窝网址在线观看| 看片在线看免费视频| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲人成伊人成综合网2020| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 最近最新中文字幕大全免费视频| 黑人操中国人逼视频| 一进一出好大好爽视频| 人妻久久中文字幕网| 少妇粗大呻吟视频| 青草久久国产| 久久国产精品影院| 满18在线观看网站| 成人永久免费在线观看视频| 女性生殖器流出的白浆| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 无遮挡黄片免费观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 成年版毛片免费区| 日本a在线网址| 精品国内亚洲2022精品成人| 18禁国产床啪视频网站| 午夜成年电影在线免费观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲成人免费电影在线观看| 免费搜索国产男女视频| 搞女人的毛片| 叶爱在线成人免费视频播放| 精品久久久久久久毛片微露脸| 免费在线观看亚洲国产| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久亚洲真实| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产欧美日韩精品亚洲av| 色av中文字幕| 国产男靠女视频免费网站| 大香蕉久久成人网| 一级a爱视频在线免费观看| 国产精品精品国产色婷婷| 午夜久久久久精精品| 亚洲成人精品中文字幕电影| aaaaa片日本免费| 精品国产亚洲在线| 十八禁人妻一区二区| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美最黄视频在线播放免费| 天堂动漫精品| 两个人看的免费小视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产区一区二久久| av天堂在线播放| 亚洲五月天丁香| 美国免费a级毛片| 国产欧美日韩精品亚洲av| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 无遮挡黄片免费观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 老汉色∧v一级毛片| 视频在线观看一区二区三区| 激情在线观看视频在线高清| 18禁美女被吸乳视频| 看黄色毛片网站| www.999成人在线观看| www.熟女人妻精品国产| 丁香欧美五月| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久精品91蜜桃| 一级片免费观看大全| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产一区二区三区综合在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看 | 日韩精品免费视频一区二区三区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 少妇粗大呻吟视频| 一级作爱视频免费观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 国语自产精品视频在线第100页| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 成人精品一区二区免费| 久久精品人人爽人人爽视色| 免费在线观看日本一区| 亚洲av成人av| 91老司机精品| 国产成年人精品一区二区| 亚洲第一电影网av| 国产精品久久久久久精品电影 | 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产成人精品在线电影| 亚洲中文日韩欧美视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲av片天天在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区| 免费在线观看日本一区| 啦啦啦 在线观看视频| 黄片播放在线免费| 十八禁网站免费在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 婷婷六月久久综合丁香| 国产成人啪精品午夜网站| 美女大奶头视频| 国产亚洲欧美98| 此物有八面人人有两片| 很黄的视频免费| 91字幕亚洲| 麻豆国产av国片精品| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 欧美午夜高清在线| 一级片免费观看大全| 国产免费av片在线观看野外av| а√天堂www在线а√下载| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 中文字幕高清在线视频| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 精品欧美一区二区三区在线| 女同久久另类99精品国产91| 久久久国产精品麻豆| 日韩欧美在线二视频| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 丝袜美腿诱惑在线| www.熟女人妻精品国产| 亚洲专区中文字幕在线| 丝袜人妻中文字幕| 一级黄色大片毛片| 91国产中文字幕| 成人特级黄色片久久久久久久| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 久久婷婷成人综合色麻豆| 男人的好看免费观看在线视频 | 国产精品永久免费网站| 欧美黑人精品巨大| 伦理电影免费视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产99久久九九免费精品| 99国产精品免费福利视频| 黄色a级毛片大全视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 动漫黄色视频在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲精品中文字幕在线视频| 一级片免费观看大全| 搞女人的毛片| 亚洲人成77777在线视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲第一av免费看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产熟女xx| 淫秽高清视频在线观看| 国产亚洲精品一区二区www| or卡值多少钱| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲五月色婷婷综合| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲专区国产一区二区| 在线观看免费日韩欧美大片| 欧美亚洲日本最大视频资源| 午夜老司机福利片| 亚洲美女黄片视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产精品九九99| 国产精品野战在线观看| 日韩视频一区二区在线观看| 搞女人的毛片| 亚洲国产欧美一区二区综合| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美日韩福利视频一区二区| 最好的美女福利视频网| 欧美成人免费av一区二区三区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久影院123| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 免费在线观看日本一区| 亚洲人成77777在线视频| 国产熟女xx| 51午夜福利影视在线观看| 久久精品91蜜桃| 色播亚洲综合网| 一级黄色大片毛片| 99在线视频只有这里精品首页| 一进一出抽搐gif免费好疼| 在线观看免费午夜福利视频| 国产精品综合久久久久久久免费 | 麻豆成人av在线观看| 青草久久国产| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲国产精品999在线| 欧美成人免费av一区二区三区| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 一区福利在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3 | 大陆偷拍与自拍| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 18禁国产床啪视频网站| 欧美色视频一区免费| 一级a爱视频在线免费观看| 国产精品精品国产色婷婷| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久久久亚洲av毛片大全| 欧美日韩福利视频一区二区| 悠悠久久av| 高清毛片免费观看视频网站| 美国免费a级毛片| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久 成人 亚洲| 亚洲九九香蕉| 亚洲专区国产一区二区| 久久久国产成人免费| 亚洲精品在线观看二区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产精品免费一区二区三区在线| 真人做人爱边吃奶动态| 91av网站免费观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 欧美色视频一区免费| 99国产极品粉嫩在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲第一青青草原| 日日夜夜操网爽| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美日韩精品网址| 国产av又大| 欧美+亚洲+日韩+国产| 中文字幕色久视频| 国产91精品成人一区二区三区| 99精品在免费线老司机午夜| 日本免费a在线| 在线观看66精品国产| 久9热在线精品视频| av天堂在线播放| 亚洲avbb在线观看| 国产成年人精品一区二区| 色综合婷婷激情| а√天堂www在线а√下载| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 免费在线观看黄色视频的| 涩涩av久久男人的天堂| 黄色丝袜av网址大全| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品亚洲美女久久久| 中亚洲国语对白在线视频| 身体一侧抽搐| 欧美丝袜亚洲另类 | 制服丝袜大香蕉在线| 真人做人爱边吃奶动态| 在线天堂中文资源库| 国产激情久久老熟女| 国产精品久久久av美女十八| 午夜久久久久精精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 一级毛片高清免费大全| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 99精品在免费线老司机午夜| 18禁美女被吸乳视频| 一区二区三区激情视频| 国内精品久久久久久久电影| 久热这里只有精品99| 日日夜夜操网爽| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲人成伊人成综合网2020| 黄色女人牲交| 成人精品一区二区免费| 国产精品 国内视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 两人在一起打扑克的视频| 国产免费av片在线观看野外av| 中文字幕av电影在线播放| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲熟女毛片儿| aaaaa片日本免费| 国产av一区二区精品久久| 免费在线观看日本一区| 国产高清有码在线观看视频 | 久久九九热精品免费| 欧美日本视频| 在线观看www视频免费| 国产亚洲av嫩草精品影院| 麻豆久久精品国产亚洲av| 欧美乱妇无乱码| 国产精品免费视频内射| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 一本大道久久a久久精品| 久久久久久大精品| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久天堂一区二区三区四区| 久久影院123| 国产精品二区激情视频| 搞女人的毛片| 香蕉国产在线看| 亚洲国产精品999在线| 伦理电影免费视频| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲精品国产精品久久久不卡| 超碰成人久久| 欧美色视频一区免费| 国产xxxxx性猛交| 国产成人av激情在线播放| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久香蕉精品热| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲成av人片免费观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产99久久九九免费精品| 男女下面插进去视频免费观看| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲色图av天堂| 在线观看免费午夜福利视频| 两个人免费观看高清视频| 色播在线永久视频| 一本久久中文字幕| 亚洲成人精品中文字幕电影| 高潮久久久久久久久久久不卡| 满18在线观看网站| 18禁观看日本| 正在播放国产对白刺激| 国产精品av久久久久免费| 亚洲精品在线美女| 国产单亲对白刺激| 老汉色av国产亚洲站长工具| 手机成人av网站| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产91精品成人一区二区三区| 香蕉久久夜色| tocl精华| 亚洲国产看品久久| 成人精品一区二区免费| 99riav亚洲国产免费| 91成人精品电影| 高潮久久久久久久久久久不卡| 男女下面插进去视频免费观看| 午夜两性在线视频| 亚洲人成电影免费在线| 最好的美女福利视频网| 久久这里只有精品19| 久久青草综合色| 国产三级黄色录像| 韩国av一区二区三区四区| 免费在线观看影片大全网站| 黄片大片在线免费观看| 国产视频一区二区在线看| 免费在线观看黄色视频的| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲人成电影免费在线| 国产又爽黄色视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美不卡视频在线免费观看 | 成人欧美大片| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 中文字幕高清在线视频| 亚洲黑人精品在线| 悠悠久久av| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产欧美日韩一区二区三| 一级毛片高清免费大全| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲精品久久国产高清桃花| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲欧美激情综合另类| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲情色 制服丝袜| 国产一区二区三区综合在线观看| 一本综合久久免费| 国产精品久久视频播放| 一二三四在线观看免费中文在|