大黃素聯(lián)合左氧氟沙星對脂多糖致大鼠急性肺損傷的影響及機(jī)制

孫 瓊，曾慈梅，鄭永先

（中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬海口醫(yī)院，海南 ?？?570208）

創(chuàng)傷和感染等多種非心源性疾病導(dǎo)致的肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞或肺泡上皮細(xì)胞彌漫性損傷會導(dǎo)致急性肺損傷（acute lung injury，ALI）發(fā)生，死亡率較高［1］。ALI 主要表現(xiàn)為肺水腫和肺部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)急性和進(jìn)行性缺氧性呼吸衰竭［2］。目前，ALI的治療主要集中在肺保護(hù)策略和激素治療等方法，缺乏特異性療法及藥物。大黃素（emodin）是一種具有生物活性的蒽醌，是中草藥大黃的有效成分，具有抗腫瘤、抑炎等多種生物學(xué)作用。動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大黃素可激活自噬并減輕致命性內(nèi)毒素血癥小鼠的炎癥性肺損傷［3］。左氧氟沙星（levofloxacin）是一種較為廣譜的抗生素，可治療細(xì)菌感染引起的肺部損傷，也可減輕流感病毒引起的肺炎并改善預(yù)后［4］。有研究表明，大黃素可增強(qiáng)抗生素的抗菌性［5］。在多重耐藥銅綠假單胞菌的抗菌治療中，大黃素與抗生素（如美羅培南和阿米卡星）聯(lián)用可降低抗生素的有效抑菌濃度，提高其對多重耐藥銅綠假單胞菌的敏感性［6］。而大黃素與左氧氟沙星聯(lián)合使用效果如何，目前尚不明確。脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）是革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞外壁的組成成分，是一種炎癥誘導(dǎo)劑，常用來建立ALI模型。本研究旨在探究大黃素聯(lián)合左氧氟沙星對LPS 誘導(dǎo)的大鼠ALI 的影響，以期為ALI 的臨床治療與研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物、試劑和儀器

大黃素（貨號：E106693，HPLC 純度≥90%），上海阿拉丁試劑有限公司；左氧氟沙星注射液（國藥準(zhǔn)字2H0013082），河北智同生物制藥股份有限公司；LPS，美國Sigma-Aldrich 公司；4%多聚甲醛、RAPI裂解液、Trizol RNA提取試劑盒、蘇木素-伊紅染液和瑞氏吉姆薩染液，武漢博士德生物工程有限公司；腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）和IL-6 ELISA 試劑盒，美國R&D 公司；丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超 氧 化 物 歧 化 酶（superoxide dismutases，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathion peroxidase，GSH-Px）和過氧化氫酶（catalase，CAT）試劑盒，南京建成生物工程研究所；兔抗大鼠NOD 樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和NF-κB p65 多克隆抗體及山羊抗大鼠甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）多 克 隆 抗體，美國Abcam 公司；辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗鼠IgG 抗體，美國Cell Signaling Technology 公司；VEGF，NF-κBp65和GAPDH引物（表1）由上海賽默飛世爾科技有限公司合成。JEM-1210 透射電鏡，日本JEOL 公司；TC-XDS-500C 熒光倒置顯微鏡，日本奧林巴斯公司；DNM-9602 酶標(biāo)儀，北京普朗新技術(shù)有限公司；1645050 雙板垂直電泳儀、ChemiDoc XRS+化學(xué)發(fā)光凝膠成像分析系統(tǒng)和CFX96 實(shí)時熒光定量PCR 儀，美國伯樂公司；GelDoc-It2 315 UVP 凝膠成像分析系統(tǒng)，美國UVP公司。

Tab.1 Primer sequence for real time quantitative PCR（RT-qPCR）

1.2 實(shí)驗(yàn)動物

135 只SPF 級SD 雄性大鼠，2～3 日齡，體重8.5～9.3 g，購于海南通用三洋藥業(yè)有限公司，動物許可證號：SCXK（瓊）2016-0012，飼養(yǎng)在SPF 級動物房。所有的程序均按照1996 年修訂的美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）的《實(shí)驗(yàn)動物的飼養(yǎng)和使用指南》（第80-23 號出版物）進(jìn)行，動物實(shí)驗(yàn)經(jīng)海口市人民醫(yī)院生物醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)通過，編號：2017-（倫審）-094。

1.3 ALl模型建立、分組和處理

將大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對照組、模型組、模型+大黃素組、模型+左氧氟沙星組和模型+大黃素和左氧氟沙星聯(lián)合給藥組，每組各9 只。除正常對照組外，其余各組ip給予LPS 10 mg·kg-1構(gòu)建ALI 模型，正常對照組ip 給予等量生理鹽水，造模后約2 h 大鼠逐漸出現(xiàn)高熱、呼吸急促等癥狀，即模型成功［7］。造模成功后給藥組分別單獨(dú)或聯(lián)合ip給予大黃素10 mg·kg-1［8］和左氧氟沙星10 mg·kg-1［9］；正常對照組和模型組ip 給予等體積生理鹽水。藥后24 h，ip 給予10%水合氯醛麻醉并處死大鼠。使用無菌剪刀剪開大鼠頸部和胸部的皮膚組織，暴露胸腔。結(jié)扎右肺門，沿氣管前壁插入注射器針頭，注入PBS 0.5 mL，2 min 后吸出沖洗液并再次灌入肺組織，反復(fù)灌洗肺組織5次，雙層醫(yī)療紗布過濾并收集灌洗液，同時分離肺組織，用于后續(xù)指標(biāo)檢測。

1.4 肺系數(shù)測定和ALl病理評分

取1.3 分組處理大鼠左肺，生理鹽水漂洗，濾紙吸干表面水分，稱重為肺濕重，肺系數(shù)=肺濕重（g）/體重（g）×100。將左肺固定于4%多聚甲醛，石蠟包埋、切片（3 μm）、蘇木素-伊紅染色，中性樹膠封片，顯微鏡觀察。由2名專業(yè)病理學(xué)老師根據(jù)文獻(xiàn)［10］方法對以下4 個指標(biāo)進(jìn)行評分：①肺泡內(nèi)充血；②肺間質(zhì)水腫；③間隙或血管壁中性粒細(xì)胞浸潤或聚集；④肺泡間隔增厚或透明膜形成。0 分代表無損傷，1 分代表損傷范圍在25%以內(nèi)，2 分代表損傷范圍在25%～50%，3 分代表損傷范圍在50%～75%，4分代表損傷范圍＞75%。4項(xiàng)得分之和作為肺組織的ALI病理評分。

1.5 吉姆薩染色法檢測肺泡灌洗液中多形核白細(xì)胞（polymorphonuclear leukocyte，PMN）比例

將1.3 制備的肺泡灌洗液離心棄上清，加50 μL PBS 重懸，取10 μL 涂片進(jìn)行瑞氏吉姆薩染色，在100×10 倍顯微鏡下觀察涂片至少300 個細(xì)胞并計數(shù)，計算PMN 比例。經(jīng)過瑞氏吉姆薩染色后，PMN中的中性粒細(xì)胞呈淡紫色、嗜酸性粒細(xì)胞呈粉紅色、嗜堿性粒細(xì)胞呈紫藍(lán)色。

1.6 ELlSA檢測肺泡灌洗液中TNF-α，lL-1β和lL-6水平

收集1.3 分組大鼠給藥后24 h 肺泡灌洗液，離心取上清，嚴(yán)格按照各ELISA 試劑盒說明書操作，測定各組肺泡灌洗液中TNF-α，IL-1β 和IL-6 水平。每個樣本設(shè)置3個平行孔，使用酶標(biāo)儀讀取450 nm的吸光度值。通過樣品的吸光度值和標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品濃度，單位為ng·L-1。

1.7 試劑盒檢測肺組織MDA含量及SOD，GSH-Px和CAT活性

取1.3 制備的肺組織，研磨至勻漿后3000×g離心取上清，按照試劑盒說明書操作，測定上清液中MDA含量及SOD、GSH-Px和CAT活性。

1.8 Western 印跡法檢測肺組織VEGF 和NF-κB p65蛋白表達(dá)水平

取1.3 制備的肺組織，加入適量RIPA 裂解液，冰上研磨裂解后提取總蛋白，使用BCA 蛋白濃度測定試劑盒檢測蛋白濃度，加入上樣緩沖液，沸水煮5 min 使蛋白變性，取30 μg 蛋白電泳分離蛋白，而后將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF 膜上，5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，加入一抗（VEGF，1∶500；NF-κB p65，1∶1000；GAPDH，1∶1000），4 ℃過夜。TBST 洗膜3次，加二抗（1∶4000）孵育1.5 h，TBST 洗膜3 次后ECL 化學(xué)發(fā)光顯色，采用Image J 圖像分析軟件分析積分吸光度值，以目標(biāo)蛋白與GAPDH 積分吸光度比值表示目標(biāo)蛋白表達(dá)水平。

1.9 RT-qPCR 檢 測 肺 組 織VEGF 和NF-κB p65 mRNA表達(dá)

取1.3 制備的肺組織，Trizol 試劑提取總RNA，用紫外分光光度法檢測總RNA 濃度。在逆轉(zhuǎn)錄酶催化下合成cDNA，并進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。根據(jù)VEGF和NF-κB p65 的c-DNA 序列，用Primer 5.0 引物設(shè)計軟件設(shè)計引物。PCR 反應(yīng)體系25 μL：雙蒸水17.3 μL，10×緩沖液2.5 μL，dNTP 2 μL，正向引物1 μL，反向引物1 μL，cDNA 模板1 μL，Taq 酶0.2 μL。進(jìn)行PCR反應(yīng)，PCR擴(kuò)增條件：95 ℃5 min，95 ℃10 s，58 ℃30 s，72 ℃30 s，共進(jìn)行35 個循環(huán)。將PCR產(chǎn)物置于瓊脂糖凝膠電泳分離擴(kuò)增片段，UVP凝膠成像分析系統(tǒng)對圖片進(jìn)行分析，以目的基因與GAPDH的積分吸光度值比值反映目的基因表達(dá)水平。

1.10 免疫組化檢測肺組織中NLRP3表達(dá)

取1.3制備的肺組織，石蠟包埋、切片（3 μm），用0.5% H2O2處理5 min 滅活內(nèi)源性過氧化物酶，用pH 6.0的檸檬酸緩沖液加熱10 min進(jìn)行抗原回收。室溫下用1% BSA 封閉30 min 后，將切片與兔抗大鼠NLRP3 多克隆抗體（一抗，1∶1000）室溫孵育1 h后，加二抗（1∶2000）孵育2 h。3，3'-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色（鏡下觀察至棕色），蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透化，中性樹脂封片。顯微鏡下觀察，每個切片隨機(jī)選取5個視野，棕黃色為陽性表達(dá)，藍(lán)色為細(xì)胞核。用Image J 軟件分析平均吸光度，平均吸光度=采集圖像的吸光度總和/采集圖像數(shù)。以平均吸光度反映NLRP3表達(dá)水平。

1.11 透射電鏡觀察各組大鼠肺組織自噬小體

取1.3 制備的肺組織，先用2.5%戊二醛預(yù)固定，再用1%鋨酸固定1 h，乙醇梯度脫水1.5 h。環(huán)氧樹脂浸透和包埋。Leica 超薄切片機(jī)切片，2%醋酸雙氧鈾和0.65%檸檬酸鉛染色。采用透射電鏡放大10 000 倍觀察自噬小體，隨機(jī)選取5 個視野觀察計數(shù)，自噬小體呈雙層或多層膜的液泡狀結(jié)構(gòu)。

1.12 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 大黃素聯(lián)合左氧氟沙星對LPS 所致ALl 大鼠ALl病理評分和肺系數(shù)的影響

如圖1 所示，正常對照組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)清晰完整，肺泡間隔正常，肺泡及肺間質(zhì)未見明顯炎細(xì)胞浸潤。模型組肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡間隔明顯增寬，肺泡及肺間質(zhì)大量炎癥細(xì)胞浸潤。大黃素單獨(dú)給藥組、左氧氟沙星單獨(dú)給藥組和聯(lián)合給藥組肺組織癥狀介于正常對照組與模型組之間，其中聯(lián)合組與正常對照組最為接近。與正常對照組相比，造模后24 h，模型組肺系數(shù)和ALI病理評分均顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，大黃素單獨(dú)給藥組、左氧氟沙星單獨(dú)給藥組和聯(lián)合給藥組大鼠肺系數(shù)（P＜0.05，P＜0.01）和ALI 病理評分（P＜0.01）均顯著降低；與單給大黃素或左氧氟沙星組相比，聯(lián)合給藥組肺系數(shù)（P＜0.05）和ALI 病理評分（P＜0.01）顯著降低。

Fig.1 Effects of emodin combined with levofloxacin on acute lung injury（ALl）scores and lung coefficients in lipopolysaccharide（LPS）-induced ALl rats. Except for the normal control group，the rats were intraperitoneally injected with LPS 10 mg·kg-1 to establish an acute lung injury model，and the control group was intraperitoneally injected with the same volume of normal saline. After successful modeling，the model+emodin group was intraperitoneally injected with emodin 10 mg·kg-1 ，while the model+levofloxacin group with levofloxacin 10 mg·kg-1 ，the model+combination group with emodin 10 mg·kg-1 and levofloxacin 10 mg·kg-1，and the normal control group and LPS group with the same volume of normal saline. A：typical HE staining results of lung tissues；B and C：ALI score and lung coefficient of rats. Lung coefficient=wet weight of the lungs（g）/body weight（g）×100. ±s，n=9. ＊＊P＜0.01，compared with normal control group；#P＜0.05，##P＜0.01，compared with model group；△P＜0.05，△△P＜0.01，compared with model+levofloxacin group；&P＜0.05，&&P＜0.01，compared with model+emodin group.

2.2 大黃素聯(lián)合左氧氟沙星對LPS 所致ALl 大鼠肺泡灌洗液中PMN比例的影響

如圖2 所示，與正常對照組相比，造模后24 h，模型組肺泡灌洗液中PMN 比例顯著增加（P＜0.01）；與模型組相比，各給藥組肺泡灌洗液中PMN比例顯著降低（P＜0.01），與單藥給藥組相比，聯(lián)合給藥組肺泡灌洗液中PMN 比例顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。

Fig.2 Effects of emodin combined with levofloxacin on polymorphonuclear（PMN）leukocyte counts in alveolar lavage fluid in LPS-induced ALl rats. See Fig.1 for the rat treatment. ±s，n=9. ＊＊P＜0.01，compared with normal control group；##P＜0.01，compared with model group；△P＜0.05，compared with model+levofloxacin group；&&P＜0.01，compared with model+emodin group.

2.3 大黃素聯(lián)合左氧氟沙星對LPS 所致ALl 大鼠肺泡灌洗液中TNF-α，lL-1β和lL-6水平的影響

如圖3 所示，與正常對照組相比，造模后24 h，模型組肺泡灌洗液中炎癥因子TNF-α，IL-1β和IL-6的水平均顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，各給藥組肺泡灌洗液中TNF-α，IL-1β和IL-6的水平均顯著降低（P＜0.01），與單藥給藥組相比，聯(lián)合給藥組肺泡灌洗液中TNF-α，IL-1β和IL-6的水平顯著降低（P＜0.01）。

Fig.3 Effects of emodin combined with levofloxacin on levels of tumor necrosis factor-α（TNF-α），interleukin-1β（lL-1β）and lL-6 in the alveolar lavage fluid in LPS-induced ALl rats by ELlSA. See Fig.1 for the rat treatment. ±s，n=9. ＊＊P＜0.01，compared with normal control group；##P＜0.01，compared with model group；△△P＜0.01，compared with model+levofloxacin group；&&P＜0.01，compared with model+emodin group.

2.4 大黃素聯(lián)合左氧氟沙星對LPS所致ALl大鼠肺組織MDA含量及SOD，GSH-Px和CAT活性的影響

如圖4所示，與正常對照組相比，模型組肺組織中MDA 水平顯著上升（P＜0.01），SOD，GSH-Px 和CAT 活性均顯著降低（P＜0.01）；與模型組相比，各給藥組肺組織中MDA 含量均顯著降低（P＜0.01），SOD，GSH-Px 和CAT 活性均顯著升高（P＜0.01）；與單藥給藥組相比，聯(lián)合給藥組肺組織中MDA 含量顯著降低（P＜0.01），SOD，GSH-Px 和CAT 活性顯著升高（P＜0.01）。

Fig.4 Effects of emodin combined with levofloxacin on malondialdehyde（MDA）content（A），superoxide dismutase（SOD），glutathione peroxidase（GSH-Px）and catalase（CAT）activities（B）in lung tissue in LPS-induced ALl rats. See Fig.1 for the rat treatment. ±s，n=9. ＊＊P＜0.01，compared with normal control group；##P＜0.01，compared with model group；△△P＜0.01，compared with model+levofloxacin group；&&P＜0.01，compared with model+emodin group.

2.5 大黃素聯(lián)合左氧氟沙星對LPS 所致ALl 大鼠肺組織中VEGF 和NF-κB p65 mRNA 和蛋白表達(dá)水平的影響

RT-qPCR 和Western 印跡結(jié)果顯示（圖5 和圖6），與正常對照組相比，模型組肺組織中VEGF和NF-κB p65 mRNA 和蛋白表達(dá)顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，各給藥組肺組織中VEGF 和NF-κB p65 mRNA 和蛋白表達(dá)均顯著降低（P＜0.01）；與單藥給藥組相比，聯(lián)合給藥組肺組織中VEGF 和NF-κB p65 mRNA 和蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.01）。

Fig.5 Effects of emodin combined with levofloxacin on mRNA expressions of VEGF and NF-κB p65 in lung tissue in LPS-induced ALl rats by RT-qPCR. See Fig.1 for the rat treatment. B was the semi-qualitative result of A.x ± s，n=9. ＊＊P＜0.01，compared with normal control group；##P＜0.01，compared with model group；△△P＜0.01，compared with model+evofloxacin group；&&P＜0.01，compared with model+emodin group.

2.6 大黃素聯(lián)合左氧氟沙星對LPS 所致ALl 大鼠肺組織中NLRP3表達(dá)和自噬小體數(shù)量的影響

如圖7 和圖8 所示，與正常對照組相比，模型組大鼠肺組織中NLRP3表達(dá)和自噬小體數(shù)量明顯增加（P＜0.01）；與模型組相比，各給藥組肺組織中NLRP3表達(dá)和自噬小體數(shù)量明顯降低（P＜0.01），與單藥給藥組相比，聯(lián)合給藥組肺組織中NLRP3 表達(dá)和自噬小體數(shù)量明顯降低（P＜0.01）。

Fig.7 Effects of emodin combined with levofloxacin on expressions of NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3（NLRP3）in lung tissue in LPS-induced ALl rats by lmmunohistochemistry. See Fig.1 for the rat treatment. B was the semi-qualitative result of A. ±s，n=9. ＊＊P＜0.01，compared with normal control group；##P＜0.01，compared with model group；△△P＜0.01，compared with model+levofloxacin group；&&P＜0.01，compared with model+emodin group.

Fig.8 Effects of emodin combined with levofloxacin on number of autophagosome in lung tissue in LPS-induced ALl rats by transmission electron microscope. See Fig.1 for the rat treatment. A：transmission electron microscopy of autophagosome in lung tissue. B was the qualitative results of A. ±s，n=9. ＊＊P＜0.01，compared with normal control group；##P＜0.01，compared with model group；△△P＜0.01，compared with model+levofloxacin group；&&P＜0.01，compared with model+emodin group.

3 討論

大黃素在多種病理情況下可發(fā)揮抗炎作用，在LPS 誘導(dǎo)的角膜炎、腎炎和肝炎動物模型中，大黃素可抑制炎癥反應(yīng)并減輕組織損傷［3］。在ALI 小鼠中，大黃素可抑制肺組織和外周血中炎癥因子TNF-α和IL-6 表達(dá)［11］。已有研究發(fā)現(xiàn)，左氧氟沙星與中藥聯(lián)合使用不僅安全有效，還可通過調(diào)節(jié)炎癥因子表達(dá)，降低炎癥復(fù)發(fā)率［12］。本研究中，與大黃素或左氧氟沙星單獨(dú)用藥相比，大黃素聯(lián)合左氧氟沙星可大幅降低肺系數(shù)和ALI 評分，降低肺泡灌洗液中PMN比例和促炎細(xì)胞因子TNF-α，IL-1β 和IL-6 的水平。表明大黃素和左氧氟沙星聯(lián)用可較好抑制炎癥反應(yīng)，減輕肺損傷。

氧化應(yīng)激是體內(nèi)氧化與抗氧化作用失衡，產(chǎn)生大量氧化中間產(chǎn)物的一種狀態(tài)。氧化應(yīng)激可參與炎癥級聯(lián)反應(yīng)，介導(dǎo)炎癥細(xì)胞浸潤和組織損傷，與ALI 的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［13］。本研究發(fā)現(xiàn)，與大黃素或左氧氟沙星單獨(dú)用藥相比，大黃素聯(lián)合左氧氟沙星可增加肺組織中抗氧化酶SOD，GSH-Px 和CAT活性，降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量。提示大黃素和左氧氟沙星聯(lián)用有利于減輕肺組織氧化應(yīng)激損傷。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，血管內(nèi)皮生長因子VEGF 可調(diào)節(jié)血管通透性，影響組織的損傷和炎癥［14］。在結(jié)腸炎中VEGF 可誘導(dǎo)結(jié)腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加，加重腸道炎癥；VEGF過表達(dá)還可增加新生小鼠肺動脈通透性［15］，提示VEGF 可能參與急性肺損傷后肺毛細(xì)血管通透性的增加，參與肺水腫的形成。此外，LPS 誘導(dǎo)的ALI 與NF-κB 通路有關(guān)［16］。NF-κB 的活化可誘導(dǎo)多種組織炎癥，且NF-κB 在VEGF 誘導(dǎo)的血管生成中起重要作用［17］，表明VEGF 和NF-κB 可能參與LPS 誘導(dǎo)的大鼠ALI。本研究結(jié)果顯示，與大黃素或左氧氟沙星單獨(dú)用藥相比，大黃素聯(lián)合左氧氟沙星可抑制LPS 誘導(dǎo)的肺組織中VEGF 和NF-κB p65 水平升高，表明其可能通過降低肺組織VEGF 的表達(dá)和抑制NF-κB 信號通路發(fā)揮對ALI傷的保護(hù)作用。

另外，本研究中，大黃素聯(lián)合左氧氟沙星可升高肺組織NLRP3 表達(dá)和自噬小體數(shù)量。自噬在維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和適應(yīng)不利環(huán)境方面具有重要作用，但過度的自噬可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，加重肺損傷的進(jìn)程［18］。NLRP3 既受自噬與氧化應(yīng)激的調(diào)控，又與炎癥性疾病的發(fā)展密切相關(guān)［19］。

綜上，大黃素聯(lián)合左氧氟沙星可降低LPS 誘導(dǎo)的大鼠ALI，其機(jī)制可能與下調(diào)NF-κB/VEGF 信號通路，抑制炎癥和氧化應(yīng)激有關(guān)。本研究結(jié)果可為ALI的臨床治療與深入研究提供理論依據(jù)。