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    染色體全自動(dòng)掃描儀在低比例嵌合體核型分析中的應(yīng)用

    2023-11-06 05:47:46黃閩忠許黎娟鄭杰輝莆田市第一醫(yī)院產(chǎn)前診斷科福建莆田351100
    中國(guó)醫(yī)療器械信息 2023年18期
    關(guān)鍵詞:嵌合體核型掃描儀

    黃閩忠 許黎娟 鄭杰輝 莆田市第一醫(yī)院產(chǎn)前診斷科 (福建 莆田 351100)

    內(nèi)容提要:目的:為了提高低比例嵌合體核型分析的性能,研究染色體全自動(dòng)掃描儀在該方面的作用,從而發(fā)現(xiàn)可改進(jìn)的部分,以提高低比例嵌合體核型檢出率。通過(guò)與傳統(tǒng)方法比對(duì),探討染色體全自動(dòng)掃描儀在低比例嵌合體核型分析中的價(jià)值。方法:收集在本院進(jìn)行診斷、咨詢(xún)的2000例女性患者作為研究對(duì)象,采用數(shù)字表法隨機(jī)分為對(duì)照組(n=1000)和研究組(n=1000),對(duì)照組采用顯微鏡手動(dòng)分析法,研究組采用染色體全自動(dòng)掃描儀系統(tǒng)分析法,取外周血液淋巴細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),常規(guī)染色體采用G顯帶技術(shù)核型分析,對(duì)照組和研究組均分析計(jì)數(shù)30個(gè)中期分裂相,分析5個(gè)核型,出現(xiàn)異常者則加倍核型分析,計(jì)數(shù)100個(gè)核型。結(jié)果:通過(guò)觀察計(jì)數(shù),對(duì)照組中,檢查時(shí)出現(xiàn)低比例嵌合體5例,檢查低比例嵌合體率為0.5%;研究組中,檢查時(shí)出現(xiàn)低比例嵌合體20例,檢查低比例嵌合體率為2%,查出率顯著上升,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:相比傳統(tǒng)手動(dòng)核型分析方法,染色體全自動(dòng)掃描儀在低比例嵌合體核型分析方面,提高了低比例嵌合體核型的檢出率和準(zhǔn)確度,給臨床提供診斷參考,具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

    嵌合體說(shuō)的是一個(gè)胚胎中有兩種或兩種以上遺傳構(gòu)成有差異的細(xì)胞系現(xiàn)象[1],即一個(gè)胚胎中存在兩種或兩種以上染色體數(shù)目不同的細(xì)胞群,嵌合占比低的稱(chēng)低比例嵌合體[2]。嵌合體的形成原因是在有絲分裂期間,染色體不分離從而形成45,X、47,XXX、46,XX三種,末期延遲導(dǎo)致染色體丟失,形成2種配子,分別為45,X、46,XX[3]。嵌合體是一種染色體異常,其形成原因分為兩種類(lèi)型。首先是同源嵌合體,它是在受精卵形成后的卵裂和胚胎發(fā)育過(guò)程中出現(xiàn)突變導(dǎo)致的。這種突變可能會(huì)在胚胎發(fā)育的任何階段發(fā)生,從而形成全身性或者組織部分性嵌合體。同源嵌合體可能會(huì)受到多種外界因素的影響,例如物理、化學(xué)因素等。而異源嵌合體則通常出現(xiàn)在骨髓移植過(guò)程中。在同一個(gè)體內(nèi),不同來(lái)源的細(xì)胞系會(huì)結(jié)合,從而形成異源嵌合體。并且嵌合體患者中異常核型的比例影響著患者的臨床表現(xiàn)和嚴(yán)重程度,伴隨著異常核型比例的升高而使患者有更高的風(fēng)險(xiǎn),但也不排除存在與這種情況不一致的現(xiàn)象。通常情況下,在顯微鏡下人工對(duì)染色體中期分裂相進(jìn)行查找是一項(xiàng)極其費(fèi)時(shí)費(fèi)力的工作,而且由于長(zhǎng)時(shí)間的觀察容易導(dǎo)致視覺(jué)疲勞,忽略掉一些不太明顯的異常核型,從而造成人為的觀察結(jié)果出錯(cuò)而導(dǎo)致錯(cuò)誤的診斷。因此,染色體全自動(dòng)掃描儀正是對(duì)焦這一問(wèn)題實(shí)現(xiàn)其工作性能的,它結(jié)合了顯微鏡、全自動(dòng)掃描、圖像、核型分析和計(jì)算機(jī)等多種技術(shù)[4],工作模式、操作管理和質(zhì)量控制使其得到廣泛應(yīng)用。本文探討染色體全自動(dòng)掃描儀在低比例嵌合體核型分析中的應(yīng)用價(jià)值。

    1.資料與方法

    1.1 臨床資料

    收集2016年11月~2021年1月在本院進(jìn)行診斷、咨詢(xún)的2000例女性患者作為研究對(duì)象,其有不良生育史或者原發(fā)性、繼發(fā)性不孕癥等,年齡25~45歲,平均(33.87±5.34)歲,采用數(shù)字表法隨機(jī)分為對(duì)照組和研究組。對(duì)照組中有1000例,年齡26~44歲,平均(34.19±5.37)歲。研究組中有1000例,年齡25~44歲,平均(33.55±5.19)歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并通過(guò),且患者及其家屬均簽署知情同意書(shū)。研究組和對(duì)照組的年齡等基本資料經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較無(wú)顯著差異性(P>0.05),結(jié)果具有可比性。

    納入標(biāo)準(zhǔn):①成年女性;②沒(méi)有溝通障礙及智力障礙;③資料信息完全;④知道研究具體情況且簽署知情同意書(shū),在專(zhuān)業(yè)人員指導(dǎo)下積極配合研究。

    排除標(biāo)準(zhǔn):①女性或其配偶存在染色體異常;②具有不良孕產(chǎn)史等;③有精神病或有精神病家族史。

    1.2 方法

    染色體檢查方法為取女性患者外周血液淋巴細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),放入溫度為37°C、二氧化碳濃度為5%的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)6d或者7d,期間連續(xù)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況,并且及時(shí)換液,當(dāng)出現(xiàn)許多個(gè)克隆的圓形細(xì)胞時(shí)加入秋水仙素,然后再培養(yǎng)3h左右,進(jìn)而收獲制片,常規(guī)染色體采用G顯帶技術(shù)核型分析。對(duì)照組和研究組都分析計(jì)數(shù)30個(gè)中期分裂相,分析5個(gè)核型,出現(xiàn)異常者則加倍核型分析,計(jì)數(shù)100個(gè)核型。

    對(duì)照組采用顯微鏡手動(dòng)分析法,即標(biāo)本經(jīng)過(guò)培養(yǎng)、收獲、制片、顯帶后,在顯微鏡下使用傳統(tǒng)核型分析方法進(jìn)行核型分析和核型計(jì)數(shù)。

    研究組采用染色體全自動(dòng)掃描儀系統(tǒng)分析法,標(biāo)本經(jīng)過(guò)培養(yǎng)、收獲、制片、顯帶后,將其放入掃描儀中進(jìn)行掃描,由系統(tǒng)里的分析軟件自動(dòng)分析核型,結(jié)果顯示在電腦上,分析軟件與自動(dòng)掃描平臺(tái)配置使用,設(shè)定掃描2張片子,每個(gè)片子上有100個(gè)中期分裂相,自動(dòng)掃描儀系統(tǒng)中的中期分裂相選擇分析具有條件穩(wěn)定、要求標(biāo)準(zhǔn)化的特點(diǎn)。

    1.3 觀察指標(biāo)與判定標(biāo)準(zhǔn)

    觀察統(tǒng)計(jì)嵌合體的數(shù)量,包括47,XXX和45,X和46,XX。通常,對(duì)30例染色體進(jìn)行了普通計(jì)數(shù),5例進(jìn)行了核型分析。如果出現(xiàn)下列情況,當(dāng)清點(diǎn)計(jì)數(shù)時(shí),只有一種染色體是45,X或47,XXX,則需要增加數(shù)量到100種染色體核型。加二減三原則的含義是:100個(gè)核型中同一染色體缺少1條,且有3個(gè)或3個(gè)以上的核型;或者說(shuō)是,100個(gè)核型中同一染色體上多出1條,且有2個(gè)或2個(gè)以上的核型,那就屬于嵌合體。認(rèn)為<10%的可能是低比例嵌合體。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    采用SPSS20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)數(shù)資料以[n(%)]形式顯示,再行檢驗(yàn)獲得統(tǒng)計(jì)值。P<0.05為組間數(shù)據(jù)對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2.結(jié)果

    使用顯微鏡手動(dòng)分析法對(duì)1000例女性患者進(jìn)行染色體核型檢查,檢查時(shí)出現(xiàn)低比例嵌合體5例,檢查低比例嵌合體率為0.5%。使用染色體全自動(dòng)掃描儀系統(tǒng)分析法對(duì)1000例女性患者進(jìn)行染色體核型檢查,檢查時(shí)出現(xiàn)低比例嵌合體20例,檢查低比例嵌合體率為2%。兩組的低比例嵌合體查出率之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.114,P=0.003),研究組中檢查出嵌合體的數(shù)量顯著高于對(duì)照組中的數(shù)量,查出率明顯上升。說(shuō)明染色體全自動(dòng)掃描儀提高了低比例嵌合體的查出率。染色體全自動(dòng)掃描儀分析100個(gè)核型中發(fā)現(xiàn)45,X的核型有4個(gè),并且保證了顯微鏡下中期分裂相四周不存在其他核型染色體,見(jiàn)表1。

    表1 兩組低比例嵌合體的檢出情況

    3.討論

    在胚胎發(fā)育過(guò)程中,在胚胎發(fā)生過(guò)程中,或在胚胎成熟后24h以?xún)?nèi),均可產(chǎn)生畸形的染色體。在2~4d(分裂和胚胎階段),嵌合產(chǎn)物的數(shù)量會(huì)發(fā)生變化。在3個(gè)胚胎細(xì)胞中,其中一個(gè)胚胎細(xì)胞中的一種細(xì)胞發(fā)生了染色體的改變,從而造成了胚胎細(xì)胞所形成的細(xì)胞和細(xì)胞功能的改變[5]。在不同的組織和器官中,如果出現(xiàn)了一些有缺陷的染色體嵌合體,那么通過(guò)外周血液的檢測(cè)是很難檢測(cè)到的。在進(jìn)行染色體核型分析的時(shí)候,偶爾會(huì)遇到1個(gè)核型是45,X的情況,在使用顯微鏡分析的時(shí)候,通常的方法是增加計(jì)數(shù),然后在鏡面下手動(dòng)找核型。但是,在選擇的時(shí)候,并沒(méi)有固定的標(biāo)準(zhǔn),而且很困難。通常,當(dāng)數(shù)到30~50個(gè)核型時(shí),大概率就不想再繼續(xù)進(jìn)行了。因此,大部分的人都會(huì)覺(jué)得,在采集制作過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)缺失,用這樣的傳統(tǒng)人工核型分析和計(jì)數(shù)的方法,即使能夠勉強(qiáng)計(jì)數(shù)到100個(gè)核型,也有可能會(huì)遺漏一些異常核型,從而造成低比例嵌合體核型的查出率下降。

    自從出現(xiàn)染色體全自動(dòng)掃描儀后,上述問(wèn)題便開(kāi)始得到解決,隨著技術(shù)的改善和性能的優(yōu)化,全自動(dòng)掃描儀得到廣泛的應(yīng)用[6-9],以便于對(duì)異常染色體的識(shí)別和分析判斷?,F(xiàn)下,一直在對(duì)染色體全自動(dòng)掃描儀內(nèi)部的部件進(jìn)行升級(jí),使準(zhǔn)確度能夠達(dá)到更高[10]。掃描儀系統(tǒng)組成和配置包括顯微鏡部分、掃描系統(tǒng)主機(jī)部分、核型分析終端部分和黑白激光打印機(jī),它內(nèi)嵌有一套標(biāo)準(zhǔn)化的中期分裂相選擇功能,掃描拍攝的用于核型分析的片子數(shù)量可自行確定,一般給一個(gè)患者掃描2~3張片子,再由系統(tǒng)選擇清晰、分散性好的染色體中期分裂相,如圖1所示。本文分析5個(gè),計(jì)數(shù)30個(gè)核型,如果出現(xiàn)異常就計(jì)數(shù)100個(gè)核型。分裂相會(huì)非常清晰地顯示在電腦屏幕上,可以打印報(bào)告。

    圖1.染色體中期分裂相圖

    周靜等[11]研究報(bào)道,在羊水細(xì)胞性染色體嵌合產(chǎn)前診斷中,傳統(tǒng)的羊水細(xì)胞染色體核型分析技術(shù)的檢測(cè)結(jié)果并不準(zhǔn)確,會(huì)丟失異常類(lèi)型的獲得數(shù)據(jù),因此需要選擇更精準(zhǔn)的分析技術(shù),綜合分析以提供更準(zhǔn)確的臨床信息,指導(dǎo)產(chǎn)前診斷和臨床咨詢(xún)。也有研究表明[12],對(duì)于淋巴細(xì)胞微核試驗(yàn)中,對(duì)比全自動(dòng)染色體掃描儀和傳統(tǒng)手動(dòng)收獲淋巴細(xì)胞,結(jié)果顯示,使用前者方法得到的微核率、微核細(xì)胞率和微核陽(yáng)性率均優(yōu)于后者,因此,認(rèn)為使用全自動(dòng)染色體掃描儀不僅可以減輕實(shí)驗(yàn)室人員的工作量,還可以提高淋巴細(xì)胞微核的檢出率。

    本研究中,使用兩種方法進(jìn)行低比例嵌合體核型分析,對(duì)照組采用顯微鏡手動(dòng)分析法,研究組采用染色體全自動(dòng)掃描儀系統(tǒng)分析法,從實(shí)驗(yàn)結(jié)果上看,對(duì)照組檢查出的嵌合體例數(shù)為5,研究組檢查出的嵌合體例數(shù)為20,嵌合體檢出率明顯上升,P<0.05,兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這是因?yàn)?,傳統(tǒng)顯微鏡核型分析完全是手工操作的,在自身顯微鏡下進(jìn)行分裂相分析時(shí),一般選擇具有比較完整特征的核型分析,會(huì)忽略不太明顯的異常核型,因此很難發(fā)現(xiàn)比例較低的嵌合體。而染色體全自動(dòng)掃描系統(tǒng)內(nèi)部有一套完善的標(biāo)準(zhǔn)化的識(shí)別和判斷中期分裂相的功能,在超大工作量的同時(shí),工作效率也不會(huì)降低,提高了低比例嵌合體核型的查出率。

    綜上所述,染色體全自動(dòng)掃描儀在低比例嵌合體核型分析方面,提高了低比例嵌合體的檢出率,彌補(bǔ)了人工分析的不足,為臨床提供低比例嵌合體診斷的參考依據(jù),具有較高的應(yīng)用價(jià)值。盡管有嵌合體形成的人群不一定會(huì)出現(xiàn)癥狀,但這種遺傳物質(zhì)的存在可能會(huì)影響生育。它可能會(huì)導(dǎo)致胎兒畸形或者胚胎停止發(fā)育的幾率增加。所以在必要時(shí),應(yīng)該進(jìn)行胚胎染色體檢查,以保證胚胎的健康。

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