肺癌組織與血液中DHX32的表達水平及臨床意義

王友祥 尹向飛 梁小亮

（廈門醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院醫(yī)學檢驗科，福建 廈門 361021）

探索實體腫瘤中DHX32表達情況，分析DHX32在癌旁組織、肺癌中的表達、變化情況。和正常細胞相比，結腸癌細胞中的DHX32表達更高。研究發(fā)現，以結腸癌細胞為對象，發(fā)現干擾DHX32能對癌細胞增殖產生阻礙，同時可以提升癌細胞對5-FU等化療藥物的敏感性[1]。DHX32可以對β-catenin泛素化產生抑制，促使其穩(wěn)定性提升，基于轉錄層面，可以提升VEGFA含量，宿主內皮細胞結構逐漸過渡到腫瘤，形成微血管。DHX32b初次見于白血病細胞，在DHX32序列中其屬于第四外顯子。醫(yī)學家在肝癌細胞中第一次檢測出DHX32剪切異構體[2]。DHX32于肝癌組織中的表達情況直接影響癌細胞轉移和肝癌分期，DHX32高表達意味著肝癌轉移率更高，但關于其在肺癌血液、組織中的研究很少。本次研究以肺癌患者為對象，分析患者肺癌組織、血液中DHX32的表達情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年8月至2021年10月廈門醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院99例肺癌患者（肺癌組），28例肺良性結節(jié)患者（肺良性結節(jié)組）、100例健康體檢人群（健康體檢人群組）開展研究。肺癌組中有4例為小細胞癌，有74例為腺癌，有17例為鱗癌，有3例為神經內分泌癌，有1例未明確類型；男61例，女38例；平均年齡（59.35±5.40）歲。肺良性結節(jié)組男13例，女15例；平均年齡（58.11±5.71）歲。健康體檢人群組有男57例，女43例；平均年齡（58.46±5.34）歲。3組的性別、年齡資料比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），具有可比性。本研究已獲得我院倫理委員會的批準。

納入標準：①肺癌組、良性結節(jié)組均經手術病理確診。②均具有完整資料。③患者知情同意本次研究。

排除標準：①肺部以外的良惡性腫瘤，伴有血液疾病。②心臟、腎臟伴有嚴重器質性疾病。③有精神疾病。

1.2 方法 以前期研究作為基礎，借助DHX32多克隆抗體、DHX32單克隆抗體8H3A、17D8（包括剪接體和全長），于細胞、組織水平，研究肺癌中DHX32表達情況。采用免疫組織化學法測量肺癌組和肺良性結節(jié)組肺組織中的DHX32（包括DHX32a和DHX32b）；借助ELISA方法測量3組血清中的DHX32（包括DHX32a和DHX32b）；經由化學發(fā)光法或電化學法檢驗3組血清中的CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC和ProGRP，分析DHX32等指標在3組研究對象的結果，探討臨床意義。

1.3 觀察指標 評價肺不同性質組織中的DHX32表達（包括DHX32a和DHX32b）。評價3組血清中的DHX32表達（包括DHX32a和DHX32b）。評價3組血清中的相關指標檢驗結果（包括CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC和ProGRP）。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 23.0處理數據，計量資料用（）表示，行t檢驗，P＜0.05，表述差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組肺部不同性質組織中的DHX32表達比較 肺癌組組織中的DHX32a和DHX32b均高于肺良性結節(jié)組（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組肺部不同性質組織中的DHX32表達比較（）

表1 兩組肺部不同性質組織中的DHX32表達比較（）

2.2 3組肺部不同性質血清中的DHX32表達比較 健康體檢人群組、肺良性結節(jié)組和肺癌組血清中的DHX32a和DHX32b均呈現出明顯升高趨勢（P＜0.05）。見表2。

表2 3組肺部不同性質血清中的DHX32表達比較（）

表2 3組肺部不同性質血清中的DHX32表達比較（）

2.3 3組血清指標檢驗結果比較 健康體檢人群組、肺良性結節(jié)組和肺癌組的CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC和ProGRP均呈現出明顯升高趨勢（P＜0.05）。見表3。

表3 3組血清指標檢驗結果比較（）

表3 3組血清指標檢驗結果比較（）

3 討論

肺癌是臨床多發(fā)惡性腫瘤之一，可能產生于肺部支氣管腺體或黏膜，常見表現有喘鳴、咳嗽等，疾病不會傳染，但具有遺傳易感性，存在家族聚集性。現階段，該病的發(fā)病人群以男性為主，在所有惡性腫瘤中該病發(fā)生率最高，在女性群體中發(fā)生率位居第三。該病的影響因素如下。①吸煙：該因素占比最高，吸煙者發(fā)生肺癌的概率約為不吸煙者的20倍，同患肺癌，吸煙者的病死率可高出不吸煙者的4～10倍[3]。②職業(yè)接觸：職業(yè)環(huán)境中存在致癌因子，如甲醛、芥子氣和石棉等，可能誘發(fā)肺癌。③空氣污染：包括室外污染（如工業(yè)廢氣）與室內污染（如燃料燃燒）等。④其他：包括飲食、電離輻射等。盡早發(fā)現，予以患者診治，能取得良好預后，疾病發(fā)展到晚期后，治療困難，預后效果不佳。目前臨床診斷肺癌多采取實驗室檢查及相關輔助檢查，主要有以下內容。①影像診斷：常見技術有X線檢查、MRI檢查、CT檢查、纖維支氣管鏡檢查、PET/CT檢查和縱隔鏡檢查等。②病理學檢驗：主要包括兩項技術，其一為轉移灶組織檢查，其二為活檢。③細胞診斷：主要包括兩項技術，其一為胸水檢查，其二為痰液脫落細胞學檢查。④生化學診斷：主要為腫瘤標志物。⑤其他：包括檢測抑癌基因和染色體等。

Abdelhaeem教授于2002年以急性淋巴細胞白血病為對象展開研究，首次提出DHX32，并得出結論DHX32屬于RNA螺旋酶[4]。目前國內外研究DHX32調控機制和功能的報道較少，處于剛起步階段。當下，國外探討DHX32大多圍繞調節(jié)免疫細胞功能，如T細胞、淋巴細胞等。Alli、Abdelhaeem等學者提出DHX32影響細胞凋亡和增殖分化。Freedman和Gold于1965年最先提出CEA，提取自胚胎組織及結腸癌，CEA屬于酸性糖蛋白，該物質存在人類胚胎抗原特性，來源于內胚層細胞，經由其分化形成，所處位置為癌癥細胞表面，在細胞膜中屬于結構蛋白[5]。CEA形成自細胞質，穿過細胞膜進入體液、血液，臨床能夠在糞便、胸腹水、乳汁和血清等多種成分中檢出該物質。在結直腸癌早期診斷中常將CEA視為特異性標志物，后續(xù)經大量研究顯示，除胃腸道惡性腫瘤以外，其他惡性腫瘤中CEA表達也較高，如肺癌等。CEA被稱之為廣譜腫瘤標志物，盡管在惡性腫瘤診斷中不能作為特異性指標，但其惡性腫瘤臨床診療中發(fā)揮著重要輔助價值。CYFRA21-1來源于細胞角蛋白，具有可溶性，常被視為腫瘤標志物，特別是在肺癌診斷中作用明確[6]。細胞角蛋白參與上皮細胞生成過程，以等電點、分子量等存在差異為依據，通過雙向電泳，可將其分為多種類型，目前已知有20余種。細胞角蛋白主要涵蓋兩個亞群，其一為Ⅰ類，代表酸性蛋白；其二為Ⅱ類，表示堿性蛋白。CYFRA21-1屬于Ⅰ類，其分子量大概在40 000 Da，在所有角蛋白中其分子量最小。CYFRA21-1普遍存在于正常組織表面，如鱗狀上皮等。針對惡性上皮細胞，蛋白酶被激活，細胞降解速度加快，眾多細胞角蛋白片段涌入機體血液中，因可溶性片段能夠結合BM19.21與KS19.1，故而命名為CYFRA21-1[7]。NSE屬于酸性蛋白酶，僅存在于神經內分泌細胞、神經元中，在SCLC診斷中，NSE是一種腫瘤標志物，敏感性最高。NSE可用于鑒別診斷肺癌，關注病情進展，評估療效，預測癌癥復發(fā)情況。SCC來源于鱗狀上皮細胞，最早見于鱗癌診斷，在檢驗肺癌、胃腸道腫瘤時，SCC呈現出增加趨勢，病情越重，SCC含量越高。通過檢驗SCC，可以監(jiān)測腫瘤轉歸、發(fā)展情況[8]。ProGRP是GRP前體，常用于診斷小細胞肺癌。以往，醫(yī)學家普遍認為該物質存在于消化道腺體上皮中，隨著醫(yī)學事業(yè)發(fā)展，臨床研究深入，目前人們發(fā)現呼吸系統(tǒng)上皮細胞中也存在該物質。ProGRP增加時意味著上皮細胞DNA分裂速度、增殖速度提高，細胞周期出現調控異常的概率提升。一般情況下，GRP存在于胃部、胃部的神經纖維中，該物質能對胃壁G細胞產生刺激，釋放出胃泌素，和平滑肌收縮關系密切，小細胞肺癌患者GRP表達異常增高。上述物質含量受多種因素影響：①受癌癥分期影響，隨疾病進展，上述指標呈增加趨勢[9]。②受腫瘤轉移影響：患者出現腫瘤轉移后，上述指標水平隨之增加。③受癌癥組織類型影響：敏感度最高的為腺癌，然后為低分化癌，或者為腺癌。④受疾病預后影響：疾病惡化，上述指標含量提升；疾病好轉，上述指標水平下降[10]。由此可見，通過測量上述指標，能作為惡性腫瘤輔助診斷信息，可以反映出預后情況。本次研究結果顯示肺癌組織中的DHX32a和DHX32b均高于肺良性結節(jié)組（P＜0.05）；健康體檢人群組、肺良性結節(jié)組和肺癌組血清中的DHX32a和DHX32b均呈現出明顯升高趨勢（P＜0.05），表示高表達DHX32意味著肺部病變嚴重，臨床可借助該指標判斷病灶性質。CEA、CYFRA21-1等指標在肺癌診治中發(fā)揮著重要作用，疾病惡性程度增加，各指標表達含量提升。健康體檢人群組、肺良性結節(jié)組和肺癌組的血清CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC和ProGRP均呈現出明顯升高趨勢（P＜0.05），表明臨床可通過上述指標預測肺部有無病變，同時判斷病變性質。在肺癌檢驗中CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC和ProGRP可作為重要輔助指標，分析上述指標水平有助于預防肺癌，且指標水平越高，代表疾病越嚴重，可以為后續(xù)診療提供重要信息支持。

綜上所述，肺癌組織、血液中DHX32高表達，通過測量DHX32，能有效預測肺部病變情況，同時可以鑒別肺部疾病性質，區(qū)分良惡性病灶，為疾病診療提供重要參考信息。