飼料中n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦幼蝦生長性能和抗氧化能力的影響

呂紅雨，周 越，舒 皝，王偉隆,2,3，黃旭雄,2,3*

(1.上海海洋大學(xué)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點實驗室，上海 201306；2.上海海洋大學(xué)，上海市水產(chǎn)養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，上海 201306；3.上海海洋大學(xué)，水產(chǎn)科學(xué)國家級實驗教學(xué)示范中心，上海 201306)

多不飽和脂肪酸(PUFA)是含有兩個或多個雙鍵的脂肪酸，其中n-3 PUFA 和n-6 PUFA 是重要的PUFA。蝦體自身合成n-3 PUFA 和n-6 PUFA的能力有限，需從食物中獲取來滿足機體正常需求，因此，n-3 PUFA 中的主要脂肪酸(C18:3n-3、C20:5n-3、C22:6n-3)和n-6 PUFA 中的主要脂肪酸(C18:2n-6、C20:4n-6)被認(rèn)為是蝦類重要的必需脂肪酸[1-3]。n-3 PUFA 和n-6 PUFA 具有高度的生物活性，參與機體多種生理生化反應(yīng)，如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)以及細胞分裂的調(diào)節(jié)等[4-8]。研究發(fā)現(xiàn)，n-3 PUFA 和n-6 PUFA 的合成與分解共用相同的酶系統(tǒng)，n-3 PUFA 的增加將導(dǎo)致n-6 PUFA 的合成減少[9]。然而，n-3 PUFA 和n-6 PUFA 在生物病理炎癥和受體信號調(diào)控中有著不同的作用[10-13]。因此飼料中合適的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比例對于養(yǎng)殖動物保持正常生長和生理狀態(tài)尤為重要。在以混合油脂為脂肪源時，飼料中花生四烯酸水平(C20:4n-6)影響凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)的生長性能和免疫相關(guān)基因表達，但作用效果受飼料中EPA 和DHA 水平的影響[14]。日本沼蝦(Macrobrachium nipponense)生長性能在飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為1.04時有最佳表現(xiàn)[15]。類似的生長結(jié)果在大菱鲆(Scophthalmus maximus)[16]、許氏平鲉(Sebastes schlegelii)[17]和黃河鯉(Cyprinus carpio haematopterus)[18]中均有發(fā)現(xiàn)。研究還發(fā)現(xiàn)，飼料中較高的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值會降低虹鱒(Oncorhynchus mykiss)抗SAV-1 病毒的能力[19]。

羅氏沼蝦(M.rosenbergii)由于其生長迅速，個體大、肉質(zhì)好、味道鮮美，是世界上熱門的養(yǎng)殖水產(chǎn)品。研究表明，當(dāng)羅氏沼蝦飼料中脂肪含量為5%～9%，可顯著提高增重率和特定生長率[20-21]。魚油(FO)和大豆油(SO)是水產(chǎn)上常用的脂肪源，隨著環(huán)境保護和可持續(xù)發(fā)展的理念不斷被接受，以植物油全部或部分替代魚油是飼料研發(fā)的重要內(nèi)容。然而魚油和大豆油分別富含n-3 PUFA(如C20:5n-3 和C22:6n-3)和n-6 PUFA (如C18:2n-6)[22-23]。飼料中不同n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值是否影響及對羅氏沼蝦生長性能的影響程度尚待進一步驗證。本實驗在保持油脂總量的基礎(chǔ)上調(diào)整配方中豆油和魚油的比例，配制5 組實驗飼料，以探究飼料中n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦生長性能、肌肉組分、血清生化等影響，為羅氏沼蝦飼料中合理使用脂肪源提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗設(shè)計與飼料制作

實驗飼料配方及營養(yǎng)組成如表1 所示，通過改變配方中豆油和魚油的比例調(diào)節(jié)飼料的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值，共配制5 組等氮等脂飼料。飼料原料購自浙江粵海飼料有限公司。所有原料經(jīng)破碎后，過80 目篩網(wǎng)，按照飼料配方比例混勻后加水調(diào)成團塊狀，采用絞肉機擠壓成面條狀，于陰涼通風(fēng)處晾干并制成不同規(guī)格的顆粒，抽真空密封于-20 °C 冰箱保存待用。為降低飼料制作過程中PUFA 的氧化，油脂中添加抗氧化劑(2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚，BHT)，同時以α-淀粉為糖源，以保證未經(jīng)后熟化處理的實驗飼料在水中有良好的穩(wěn)定性。各組實驗飼料的脂肪酸組成見表2。D1～D5 組飼料的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值分別為0.37、0.59、0.93、1.51 和4.38。

表1 實驗飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì))Tab.1 Ingredients and nutrient levels of the experimental diets (dry matter) %

表2 實驗飼料脂肪酸組成(干物質(zhì))Tab.2 Fatty acid compositions of the experimental diets (dry matter) mg/g

1.2 實驗蝦及養(yǎng)殖管理

養(yǎng)殖實驗在上海海洋大學(xué)濱海養(yǎng)殖基地進行，蝦苗經(jīng)30 d 暫養(yǎng)后，挑選規(guī)格整齊、健康的羅氏沼蝦幼蝦[平均體重(0.44±0.02) g] 800 尾，隨機分配到20 個網(wǎng)箱(1.0 m×1.0 m×1.0 m)內(nèi)，每網(wǎng)箱內(nèi)投放40 尾幼蝦。分別投喂5 組飼料，每組設(shè)4個平行。每天分別于7:00、12:00 和18:00 投喂，日投喂量約占蝦體重的5%～8%，并根據(jù)攝食情況及生長階段進行微調(diào)。養(yǎng)殖實驗持續(xù)8 周，養(yǎng)殖期間每周換水2 次，每次換水量1/4。連續(xù)充氣保持水體溶解氧含量＞6 mg/L，pH 為7.8～8.5，氨氮含量＜0.2 mg/L，水溫為(30±2) °C，水體鹽度為0。實驗過程中操作人員嚴(yán)格遵守實驗動物倫理規(guī)范，并按照上海海洋大學(xué)動物倫理委員會制定的規(guī)章制度執(zhí)行 。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖實驗結(jié)束后，饑餓24 h，稱重并統(tǒng)計存活數(shù)，計算增重率(WGR)、存活率(SR)、特定生長率(SGR)以及餌料系數(shù)(FCR)。每網(wǎng)箱隨機取8尾蝦，用一次性注射器從圍心腔抽取血淋巴置于1.5 mL 離心管中，用消毒的鑷子取肝胰腺于10 mL 離心管，將抽過血和取過肝胰腺的蝦剝殼取肌肉，分別置于液氮罐和冰塊中帶回實驗室，血淋巴解凍后低溫離心(4 °C，3 500 r/min，10 min)制備血清，用于后續(xù)測定分析。各類生長指標(biāo)計算方法：

式中，Wf為實驗結(jié)束后網(wǎng)箱中羅氏沼蝦的總重量(g)；Wi為實驗開始時網(wǎng)箱中羅氏沼蝦的總重量(g)；Nf為實驗結(jié)束后網(wǎng)箱中羅氏沼蝦存活的尾數(shù)；Ni為實驗開始時網(wǎng)箱中羅氏沼蝦的尾數(shù)；Wd為實驗開始到實驗結(jié)束網(wǎng)箱中所投喂飼料的干重(g)；t為養(yǎng)殖周期(d)。

1.4 樣品檢測分析

飼料和肌肉中的水分含量采用105 °C 烘箱干燥恒重法檢測(GB/T 6435—2014)；總脂肪采用氯仿-甲醇法檢測(GB/T 6433—2006)；灰分采用550 °C馬弗爐灼燒法檢測(GB/T 6438—2007)；粗蛋白質(zhì)采用凱氏定氮法檢測(GB/T 6432—2018)。

蝦體肌肉及飼料脂肪酸組成測定采用三氟化硼甲酯化法。將蝦肌肉及飼料樣品冷凍干燥后，采用氯仿-甲醇(V∶V=2∶1)抽提總脂肪，加入1 mL正己烷將所得總脂溶解，加入1 mL 未甲酯化的C19作為內(nèi)標(biāo)，真空干燥4 h；加入2 mL 14 %三氟化硼甲醇溶液，100 °C 水浴25 min；然后加入2 mL 甲醇和2 mL 苯，100 °C 水浴25 min；再加入1 mL 蒸餾水和1 mL 正己烷，振蕩混勻后3 500 r/min 離心5～10 min，取上清液，使用氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。以脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma)的保留時間和分析圖譜對樣品脂肪酸進行定性分析，按內(nèi)標(biāo)法計算各脂肪酸的絕對含量：

式中，Cx表示某脂肪酸在樣品中的含量(mg/g)；C19為內(nèi)標(biāo)物濃度(mg/mL)；V19為內(nèi)標(biāo)物加入的體積(mL)；M19為內(nèi)標(biāo)物甲酯分子量；S19為內(nèi)標(biāo)物的峰面積；Mx為某脂肪酸甲酯的分子量；Sx為某脂肪酸的峰面積；m為樣品重量(g)。

血清及肝胰腺生化指標(biāo)采用試劑盒測定(南京建成生物工程研究所)。將肝胰腺在冰水浴中用生理鹽水按1∶9 (重量比)勻漿，勻漿液于3 500 r/min、4 °C 離心10 min，取上清液。并按照試劑盒的說明書測定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、總抗氧化能力(T-AOC)、血清銅藍蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(T-CHO)、總蛋白(TP)、葡萄糖(GLU)、蛋白酶、脂肪酶、α-淀粉酶等生理指標(biāo)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

實驗結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)的方式表示，使用SPSS 25.0 軟件中的單因素方差分析(One-Way ANOVA)分析數(shù)據(jù)的差異，當(dāng)差異顯著時進一步用Duncan 氏方法比較各處理之間的差異，P＜0.05 表示差異顯著。脂肪酸的相關(guān)性分析采用雙變量相關(guān)分析(Bivariate Correlations)。

2 結(jié)果

2.1 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦生長性能的影響

隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的升高，羅氏沼蝦FW、WGR 和SGR 均先升后降，其中D3 組最高，且顯著高于D1、D2 和D5 組(P＜0.05)。D3 組的FCR 顯著低于D2 (P＜0.05)，但與其他組沒有顯著差異(P＞0.05)。飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA比值對羅氏沼蝦存活率無顯著影響(P＞0.05) (表3)。采用折線模型回歸分析，羅氏沼蝦幼蝦WGR 在飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.94 時最大，而羅氏沼蝦幼蝦SGR 在飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.86 時最大(圖1)。

圖1 飼料中n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值與羅氏沼蝦幼蝦增重率(a)和特定生長率(b)的回歸分析Fig.1 Regression analysis of n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio and the WGR (a)/ SGR (b) of juvenile M.rosenbergii

表3 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦幼蝦生長性能的影響Tab.3 Effect of dietary n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio on the growth performance of juvenile M.rosenbergii

2.2 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦肌肉組分的影響

飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對蝦體肌肉水分、粗蛋白質(zhì)和灰分含量均無顯著影響(P＞0.05)；肌肉總脂肪含量隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的增加先升后降，在D3 組達到最高，且顯著高于其他組(P＜0.05) (表4)。

表4 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦幼蝦肌肉常規(guī)組分的影響Tab.4 Effect of n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio on the muscular composition of juvenile M.rosenbergii %

飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦肌肉脂肪酸含量有顯著影響(P＜0.05) (表5)。D5 組SFA 含量最高，并顯著高于其他組(P＜0.05)；D4組MUFA 含量最高，并顯著高于D1 和D2 組(P＜0.05)；隨飼料 n-3 PUFA/n-6 PUFA比值的增加，羅氏沼蝦肌肉n-3 PUFA 含量上升，在D5 組達到最高，并顯著高于其他組(P＜0.05)；而n-6 PUFA含量顯著下降(P＜0.05)，在D5 組降到最低；肌肉n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的升高而上升，在D5 組達到最高，并顯著高于其他組(P＜0.05)。

表5 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦幼蝦肌肉脂肪酸組成的影響(干物質(zhì))Tab.5 Effect of dietary n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio on muscular fatty acid profiles of juvenile M.rosenbergii (dry matter) mg/g

隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的上升，蝦體肌肉中脂肪酸與飼料中對應(yīng)脂肪酸多數(shù)呈正相關(guān)，只有C16:1n7 和ΣPUFA 呈負相關(guān)。在正相關(guān)中的相關(guān)程度也有不同，其中ΣSFA、C18:3n3 和C20:5n3呈顯著相關(guān)(P＜0.05)，C18:2n6、C22:5n3、Σn-6PUFA 和n-3/n-6 呈極顯著相關(guān)(P＜0.01) (表6)。

表6 飼料脂肪酸與肌肉脂肪酸的相關(guān)性分析結(jié)果Tab.6 Correlation analysis results of fatty acids in feed and corresponding fatty acids in muscle

2.3 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦抗氧化能力的影響

隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的上升，羅氏沼蝦血清T-SOD 活性、T-AOC 和血清CP 含量均先升后降，其中T-SOD 活性和T-AOC 在D3 組達到最大，血清CP 含量在D4 組達到最大，與D3 組沒有顯著差異(P＞0.05)，但顯著高于D1、D2 和D5 組 (P＜0.05)。血清MDA 含量隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值上升而增加，在D5 組達到最大，并顯著高于D1、D2 和D3 組(P＜0.05)。對羅氏沼蝦肝胰腺抗氧化能力的分析表明，T-SOD活性和T-AOC 分別在D4 和D3 組達到最大。MDA含量在D5 組達到最大(表7)。

表7 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦抗氧化能力的影響Tab.7 Effect of n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio on antioxidant capacities of juvenile M.rosenbergii

2.4 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦血清生化指標(biāo)的影響

飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦血清TP 和GLU 含量無顯著影響(P＞0.05)；羅氏沼蝦血清AST 和ALT 活性均在D3 組降到最低，與D4 組無顯著差異(P＞0.05)，但顯著低于其他組(P＜0.05)；羅氏沼蝦血清TG 和T-CHO 含量在D1組達到最大，并顯著高于其他組(P＜0.05) (表8)。

表8 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦幼蝦血清生化參數(shù)的影響Tab.8 Effect of n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio on serum biochemical indicators of juvenile M.rosenbergii

2.5 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦肝胰腺消化酶活性的影響

隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的增大，羅氏沼蝦肝胰腺蛋白酶活性和脂肪酸合成酶活性均先升后降，在D3 組達到最大，并顯著高于其他組(P＜0.05)；脂肪酶活性在D5 組達到最大，并顯著高于D1、D2 和D3 組(P＜0.05)，但與D4 組沒有顯著差異(P＞0.05)；淀粉酶活性先降后升，在D3 組降到最低，且顯著低于D1、D4 和D5 組(P＜0.05) (表9)。

表9 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦幼蝦肝胰腺消化酶活性的影響Tab.9 Effect of n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio on hepatopancreas digestive enzyme activities of juvenile M.rosenbergii

3 討論

3.1 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦生長性能的影響

在本研究中，飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦存活率無顯著影響，但攝食D3 組飼料(n-3 PUFA/n-6 PUFA=0.93)的羅氏沼蝦表現(xiàn)出最大的增重率和最小的飼料系數(shù)。折線回歸分析表明，飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.94或0.86 時羅氏沼蝦表現(xiàn)出最大的增重率或特定生長率，表明飼料中適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值有利于羅氏沼蝦的生長。Teshima 等[24]發(fā)現(xiàn)飼料中C18：3n-3 與C18：2n-6 比值為0.083 時能顯著提高羅氏沼蝦增重率。對日本沼蝦[15]和黃河鯉[18]的研究也表明，飼料中保持適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值(1.04 和1.09)也可促進其生長，提高增重率。適宜飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的實驗組蝦體生長性能的提高可能與脂質(zhì)代謝運轉(zhuǎn)的改善有關(guān)。攝食n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.93(D3 組)飼料的羅氏沼蝦肝胰腺中蛋白酶和脂肪酸合成酶表現(xiàn)出最大的活性，表明飼料中適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值會促進羅氏沼蝦對食物中蛋白質(zhì)的消化和脂肪的有效沉積，而過高或過低均會使蝦體消化能力和脂肪沉積能力變?nèi)?。譚青等[16]證實大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼魚飼料中保持適宜n-3/n-6 LC-PUFA 比例也可顯著提高蛋白酶和脂肪酸合成酶活性。大量研究表明，飼料中適宜的必需脂肪酸(C18:3n-3、C20:5n-3、C22:6n-3、C18:2n-6 和C20:4n-6)可促進水產(chǎn)動物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，從而達到促生長作用[1-2,14]。而在本研究中，飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的變化實際上是由飼料中所有脂肪酸的變化所產(chǎn)生的。因此，推測在適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 添加量下，實驗組蝦體脂質(zhì)代謝運轉(zhuǎn)的改善可能與該組飼料滿足了蝦體對必需脂肪酸(C18:3n-3、C20:5n-3、C22:6n-3、C18:2n-6 和C20:4n-6)的需要量有關(guān)。低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值組的羅氏沼蝦生長較差，一方面與這些實驗組蝦體消化能力和脂肪沉積能力變?nèi)跤嘘P(guān)，另一方面，推測與低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的飼料處理組蝦體沒有攝入足夠的C≥20PUFA 有關(guān)。低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值飼料組(D1 和D2)中含有高量C18 PUFA (18.6 和11.47 mg/g)和較少的C20-PUFA，高n-3 PUFA/n-6 PUFA (D5)比值飼料組中含有高量C20-PUFA (13.85 mg/g)和較少的C18-PUFA，而淡水蝦由C18-PUFA向C20-PUFA 的轉(zhuǎn)化能力較弱。C20-PUFA 是細胞膜重要的組成部分，飼料C20-PUFA 的缺乏影響蝦體達到最大生長速率[25]。過高n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值組羅氏沼蝦生長下降，除了高n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值組羅氏沼蝦對食物中蛋白質(zhì)消化和脂肪沉積變?nèi)跤嘘P(guān)外，推測還與食物中的n-3 PUFA 與n-6 PUFA 競爭酶系統(tǒng)有關(guān)。在生物體內(nèi)缺乏Δ3 脫氫酶，n-3 和n-6不飽和脂肪酸不能相互轉(zhuǎn)化，且代謝是相互競爭的[9,26]，而高水平的n-3 或n-6 會抑制對方的正常代謝，影響生長性能。

飼料 n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為 0.93 時(D3 組)可促進羅氏沼蝦肌肉粗脂肪有效沉積，比值過高或過低均會對羅氏沼蝦肌肉粗脂肪有效沉積有明顯的抑制作用，這一現(xiàn)象在其他養(yǎng)殖動物上也得到了驗證[6,15-16,18,27]。本研究中D3 組羅氏沼蝦肝胰腺脂肪酸合成酶活性顯著高于其他組，也進一步證實飼料中適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值可促進羅氏沼蝦肌肉粗脂肪有效沉積。同時，不同組羅氏沼蝦肌肉中絕大多數(shù)脂肪酸的變化與其攝食飼料對應(yīng)脂肪酸變化呈正相關(guān)，其中n-3 PUFA、EPA、DHA、C18:2n6 和n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值呈顯著正相關(guān)，說明蝦體肌肉脂肪酸組成受飼料中脂肪酸組成的影響，這在凡納濱對蝦[28]、虹鱒[29]和大西洋鮭(Salmo salar)[30]等養(yǎng)殖品種中都得到了證實。

3.2 飼料中不同 n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦抗氧化能力的影響

過量的氧自由基誘導(dǎo)產(chǎn)生的MDA 是判斷細胞氧化損傷程度的指標(biāo)。Jin 等[5]發(fā)現(xiàn)黑棘鯛(Acanthopagrus schlegelii)攝食高水平的n-3 PUFA 飼料會顯著提高其肝臟中MDA 的濃度。相比高水平的n-6 PUFA，高水平的n-3 PUFA 更容易使細胞膜脂質(zhì)過氧化的敏感性提高[31]。本研究中，高水平的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值飼料組(D5)含有高水平的n-3 PUFA (14.62 mg/g)，低水平的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值飼料組(D1)含有高水平的n-6 PUFA (16.20 mg/g)，羅氏沼蝦血清和肝胰腺中MDA 含量隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的增加而上升，表明攝食高n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的飼料加深了蝦體內(nèi)氧化損傷。SOD 是內(nèi)源性抗氧化防御系統(tǒng)的關(guān)鍵酶，可以保護細胞和組織免受氧化損傷[32]。T-AOC 是指機體可以清除體內(nèi)產(chǎn)生各種氧自由基的能力[33]。血清銅藍蛋白也具有清除體內(nèi)過氧化自由基的作用[34]。在本研究中，飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.93～1.51 時肝胰腺和血清SOD 活性、T-AOC 以及血清CP 含量均達到最大。表明飼料中適宜n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值會提升羅氏沼蝦抗氧化能力，過高或過低都會產(chǎn)生不利的影響。攝食高水平(D5)和低水平(D1和D2) n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值飼料組的羅氏沼蝦抗氧化能力下降，推測可能與高水平的n-3 PUFA 或n-6 PUFA 及其比例不平衡導(dǎo)致的氧化應(yīng)激引起的炎癥反應(yīng)有關(guān)。有研究表明，長期攝入過量的n-3 PUFA 或n-6 PUFA 會使蝦體出現(xiàn)過度的炎癥反應(yīng)[16]，引起機體氧化應(yīng)激，使細胞過氧化物酶和體脂肪氧化相關(guān)基因表達量升高，并伴隨炎癥水平的升高，而炎癥會危害機體包括免疫和抗氧化機能的正常發(fā)揮[35]。

3.3 飼料中不同 n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對羅氏沼蝦血清生化指標(biāo)的影響

AST 和ALT 是機體內(nèi)重要的轉(zhuǎn)氨酶，參與機體內(nèi)氨基轉(zhuǎn)運，肝臟中較多，但當(dāng)肝臟組織發(fā)生病變造成細胞膜通透性增強時會進入到血液中[36-37]。在本研究中，飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.93 時，羅氏沼蝦血清中AST 和ALT 酶含量最低，表明飼料不適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA比值會增加肝胰腺細胞的損傷。Jin 等[38]在黑棘鯛中也發(fā)現(xiàn)，飼料中適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值會明顯降低血清中AST 和ALT 的含量。攝食過高或過低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值飼料的羅氏沼蝦肝胰腺細胞損傷與脂代謝運轉(zhuǎn)有關(guān)。飼料中適宜的脂肪酸比例會促進脂質(zhì)代謝的運轉(zhuǎn)[16]，減少肝胰腺中脂肪的過度沉積，進而減少羅氏沼蝦肝胰腺中細胞的損傷。

此外，當(dāng)肝臟受外界因素影響發(fā)生病理或生理變化時，血清T-CHO 和TG 濃度會迅速增加[38]，因此血清中T-CHO 和TG 濃度可反映出肝臟的健康狀況。在大西洋鮭[39]和大菱鲆[40]飼料中保持低水平的n-3 LC-PUFA 時，其血清中極低密度脂蛋白和甘油三酯含量顯著升高。本研究也得到類似結(jié)果，低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值組(D1)的沼蝦血清T-CHO 和TG 含量顯著高于其他組，說明飼料低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值會影響羅氏沼蝦肝胰腺的健康。攝食低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值飼料的羅氏沼蝦血清T-CHO 和TG 升高的原因可能是蝦體沒有攝入足夠的n-3 PUFA。高含量的n-3 LC-PUFA 攝入可減少肝臟中極低密度脂蛋白和甘油三酯的分泌，促進血漿中極低密度脂蛋白和甘油三酯的清除，進而降低血清中甘油三酯和極低密度脂蛋白濃度[41]。

飼料適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值可顯著提升羅氏沼蝦生長性能和抗氧化能力，對增重率和特定生長率進行折線回歸，建議羅氏沼蝦幼蝦飼料中最適n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.86～0.94。

（作者聲明本文無實際或潛在的利益沖突）