覆盆子及其易混品桉葉懸鉤子的鑒別

鄧雯姬，楊潔瑜（廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣州 510160）

覆盆子（RubuschingiiHu）始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，原藥材為薔薇科的華東覆盆子，以其果實(shí)入藥，主要分布在江西、浙江、安徽等地，是益腎固精常用的中藥材[1-2]。覆盆子主要成分為黃酮類、甾類和萜類，這類物質(zhì)臨床藥理作用多為抗菌、抗炎、抗癌、抗氧化[3-5]。此外覆盆子還含有酚酸活性成分[6]，中醫(yī)理論記載性味酸能縮、能澀，固臨床上治療漏尿遺尿、陽(yáng)痿遺精效果顯著[7]。由于用藥范圍廣，市場(chǎng)需求量大，其采收和臨床應(yīng)用常出現(xiàn)易混品混淆誤用的情況。目前已有很多研究對(duì)覆盆子的易混品進(jìn)行鑒別，如綿果懸鉤子[8]、山莓[9]、樹莓[10]、毛栓莓[11]等。但未有對(duì)其易混品桉葉懸鉤子相關(guān)的研究。桉葉懸鉤子RubuseucalyptusFocke，藥材名為軟覆盆子，來(lái)源于薔薇科植物的干燥果實(shí)，主要分布陜西、甘肅、四川等地?，F(xiàn)收載于四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（2010年版），但該標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)軟覆盆子的整體性狀及粉末顯微特征進(jìn)行鑒別，且以文字形式記載。

本文運(yùn)用體式顯微鏡比較覆盆子及軟覆盆子的外觀形態(tài)和內(nèi)在結(jié)構(gòu)的區(qū)別，并采用光學(xué)顯微鏡觀察兩者橫切面和粉末的顯微特征，從宏觀到微觀對(duì)兩者開展比較研究，為兩藥的鑒別提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

富士S8100 數(shù)碼相機(jī)（日本富士公司）；奧林巴斯BX53型顯微鏡和奧林巴斯SZ61型體式顯微鏡（日本奧林巴斯株式會(huì)社）。

1.2 藥材

收集了不同產(chǎn)地的樣品，經(jīng)鑒定分別為薔薇科植物華東覆盆子RubuschingiiHu的干燥果實(shí)和薔薇科植物桉葉懸鉤子RubuseucalyptusFocke的干燥果實(shí)，具體信息見表1。

表1 樣品信息Tab 1 Information of samples

2 方法

2.1 性狀鑒別

2.1.1 藥材表面性狀 藥材除去雜質(zhì)后，選取不同規(guī)格大小置于附有標(biāo)尺的拍攝臺(tái)上，日光下觀察其自然形態(tài)，并用數(shù)碼相機(jī)記錄外觀特征。

2.1.2 聚合果表面特征 選取中等大小具有代表性的藥材置于在載物臺(tái)上，應(yīng)用體式顯微鏡觀察藥材不同面（正面、底面、頂面、橫切面）的性質(zhì)特征，并用數(shù)碼成像系統(tǒng)記錄影像數(shù)據(jù)。

2.1.3 小核果表面特征 摘取中等大小具有代表性的小核果，應(yīng)用體式顯微鏡觀察藥材不同面（正面、外側(cè)面、內(nèi)側(cè)面、橫切面）的性質(zhì)特征，并用數(shù)碼成像系統(tǒng)記錄影像數(shù)據(jù)。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 橫切面鑒別 藥材泡水軟化后，用吸水紙擦掉附在藥材表面的水分，將藥材固定于切割板上，用刀片進(jìn)行切制。切制后的薄片放置載玻片上，用滴管滴加少量水合氯醛，稍放置，置于加熱板上透化，該步驟重復(fù)1～2次，冷卻至室溫后用稀甘油封片，置于奧林巴斯BX53型顯微鏡下觀察并用數(shù)碼成像系統(tǒng)記錄特征。

2.2.2 粉末鑒別 取粉碎后的藥材過(guò)五號(hào)篩，蘸取細(xì)粉于載玻片上均勻展開，按“2.2.1”項(xiàng)下透化步驟操作，冷卻后蓋上蓋玻片，置于奧林巴斯BX53型顯微鏡下觀察并用數(shù)碼成像系統(tǒng)記錄特征。

3 結(jié)果

3.1 性狀特征

3.1.1 聚合果特征 覆盆子整體為黃綠或淡棕色，表面密被灰白色茸毛，由眾多半月形的小核果聚合而成，聚合果手摸有茸毛感，呈類圓錐形，高0.6～1.3 cm，直徑0.6～1.1 cm。質(zhì)輕較硬。氣味偏酸、澀。體式顯微鏡下，正面觀察覆盆子聚合果，呈類圓形或類三角形；底面觀中心凹入，殘存萼片，宿萼短于聚合果，下有果梗痕；頂面觀呈類圓形。橫切面類圓形，中部花托類圓形，其四周圍繞眾多小核果。詳見圖1A。

圖1 樣品性狀特征圖Fig 1 Characteristics of samples

桉葉懸鉤子與覆盆子相似，大小規(guī)格相等，為灰綠色或灰褐色類圓錐形的聚合果，表面密被灰白色茸毛，有棕褐色花絲附著表面，高0.5～1.3 cm，直徑0.4～1.5 cm。質(zhì)輕較硬，手摸茸毛感，氣味酸澀。體式顯微鏡下正面觀多呈類圓三角形；底面觀中心深凹成孔，無(wú)萼片；頂面觀呈類圓形。橫切面類圓形，密被茸毛，花托中空，四周圍繞眾多小核果。詳見圖1B。

3.1.2 小核果特征 覆盆子小核果為黃棕色，高2.0～2.5 mm，直徑0.7～1.3 mm，表面有明顯的橫紋。正面觀為半月形，整體網(wǎng)格狀紋凹陷明顯，具絲絹光澤，頂端鈍圓密被茸毛，底部略尖較光滑。外側(cè)面中央隆起有一棱線向兩端彎曲，棱線上附著茸毛。內(nèi)側(cè)面光滑，幾乎無(wú)茸毛。橫切類橢圓形兩端略尖，種子一枚，位于中心。種子半透明類橢圓形，約占小核果的三分之二。詳見圖2A。

圖2 小核果特征圖Fig 2 Characteristics of Fructus

桉葉懸鉤子為灰綠色，表面密被眾多灰白色長(zhǎng)茸毛，附著棕色花絲，高2.0～2.7 mm，直徑0.9～1.5 mm，無(wú)橫紋。正面觀為半月形，網(wǎng)格狀紋凹陷，全身密被茸毛。外側(cè)面中央隆起有一棱線向兩端彎曲，密被茸毛。內(nèi)側(cè)面茸毛眾多。斷面類橢圓形兩端略尖，種子一枚，位于中心。種子較小，半透明扁橢圓形。詳見圖2B。

3.2 顯微特征

3.2.1 橫切面顯微特征 覆盆子外果皮表皮細(xì)胞呈類方形，外被角質(zhì)層，單列切向延長(zhǎng)，外緣波狀彎曲。表皮細(xì)胞向外突起形成非腺毛。中果皮細(xì)胞數(shù)列，外側(cè)細(xì)胞略切向延長(zhǎng)，常見草酸鈣簇晶。維管束外韌型，位于內(nèi)果皮脊?fàn)钔黄鸬耐鈧?cè)，四周有纖維及網(wǎng)紋細(xì)胞圍繞[12]。內(nèi)果皮壁厚木化，為20余列纖維脊?fàn)钔黄穑瑑?nèi)外纖維層交錯(cuò)排列。種皮表皮細(xì)胞黃棕色，單列呈類方形。子葉細(xì)胞中含糊粉粒、草酸鈣簇晶及脂肪油滴。胚乳細(xì)胞含大量脂肪油滴及糊粉粒（見圖3）。

圖3 樣品橫切圖Fig 3 Cross-cutting characteristics of samples

桉葉懸鉤子外果皮表皮細(xì)胞呈類方形，單列切向延長(zhǎng)，外被角質(zhì)層。向外突起的非腺毛長(zhǎng)而彎曲。中果皮細(xì)胞數(shù)列，常見草酸鈣簇晶。維管束外韌型，位于內(nèi)果皮脊?fàn)钔黄鸬耐鈧?cè)，四周有纖維，網(wǎng)紋細(xì)胞偶見。內(nèi)果皮壁厚木化，為20余列纖維脊?fàn)钔黄?，?nèi)外纖維層交錯(cuò)排列。種皮表皮細(xì)胞黃棕色，單列呈類方形。子葉細(xì)胞中含糊粉粒、草酸鈣簇晶及脂肪油滴。胚乳細(xì)胞含大量脂肪油滴及糊粉粒（見圖3）。

3.2.2 粉末顯微特征 覆盆子粉末呈棕黃色。非腺毛長(zhǎng)60～450 μm，多為單細(xì)胞，壁厚木化，長(zhǎng)60～450 μm，表面具雙螺紋，常見非腺毛脫落，基部表面觀似石細(xì)胞呈類圓形，殘留于表皮層，直徑約25 μm。草酸鈣簇晶棱角明顯，單個(gè)散落或存在中果皮細(xì)胞中，直徑18～50 μm。網(wǎng)紋細(xì)胞直徑5～26 μm，表面觀長(zhǎng)梭形或橢圓形。果皮纖維無(wú)色或黃色，縱橫交錯(cuò)或斜向排列成片存在。種皮表皮細(xì)胞無(wú)色或淡黃色，類多角形壁薄細(xì)波狀彎曲，多成片存在，有的胞腔可見淺棕色顆粒狀物。子葉細(xì)胞無(wú)色或黃色，富含脂肪油滴和糊粉粒，并可見細(xì)小簇晶（見圖4）。

桉葉懸鉤子粉末灰綠色。非腺毛壁厚木化，胞腔線形或不明顯，表面無(wú)螺紋。其大多碎斷，長(zhǎng)60～1000 μm，平直或彎曲，常脫落殘留形如石細(xì)胞狀的基部埋于表皮層。草酸鈣簇晶棱角明顯，單個(gè)散落或存在中果皮細(xì)胞中，直徑15～50 μm。網(wǎng)紋細(xì)胞直徑5～20 μm，表面觀長(zhǎng)梭形或橢圓形。果皮纖維無(wú)色或黃色，縱橫交錯(cuò)或斜向排列成片存在。種皮表皮細(xì)胞無(wú)色或淡黃色，類多角形壁薄細(xì)波狀彎曲，多成片存在，有的胞腔可見淺棕色顆粒狀物。子葉細(xì)胞無(wú)色或黃色，富含脂肪油滴和糊粉粒，并可見眾多細(xì)小簇晶散在?；ǚ哿｜S棕色，類圓形，壁微厚內(nèi)含顆粒狀物（見圖4）。

4 討論

覆盆子為常用的補(bǔ)益中藥，標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國(guó)藥典》，其易混品較多。相關(guān)文獻(xiàn)主要在鑒別綿果懸鉤子、山莓、樹莓等，目前暫無(wú)文獻(xiàn)研究其易混品桉葉懸鉤子。桉葉懸鉤子現(xiàn)收載于四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)（2010年版），但該標(biāo)準(zhǔn)僅為文字描述，且無(wú)桉葉懸鉤子顯微橫切面鑒別。本文補(bǔ)充了桉葉懸鉤子顯微橫切面的研究，并提供了豐富的外觀形狀、內(nèi)在結(jié)構(gòu)、粉末特征等彩圖。

通過(guò)研究比較發(fā)現(xiàn)，兩者性狀鑒別要點(diǎn)為：覆盆子聚合果基面觀中心微凹入，殘存萼片，宿萼短于聚合果，下有果梗痕，斷面實(shí)心；小核果表面有橫紋，頂端密被茸毛，底部較光滑無(wú)毛。而桉葉懸鉤子基面觀中心深凹成孔，無(wú)萼片，斷面中空；小核果表面無(wú)橫紋，全身密被茸毛。橫切顯微特征，覆盆子外韌型維管束四周圍繞網(wǎng)紋細(xì)胞；而桉葉懸鉤子外韌型維管束偶見網(wǎng)紋細(xì)胞。粉末顯微特征，覆盆子非腺毛較短且平直，表面有螺紋；桉葉懸鉤子非腺毛長(zhǎng)而彎曲，無(wú)螺紋。桉葉懸鉤子顯微粉末特征雖含花粉粒，但《本草綱目》[13]記載“覆盆以四五月熟”，現(xiàn)代相關(guān)研究[14]也指出覆盆子的最佳采收期為4～5月，而4～5月正為桉葉懸鉤子的花期，故花粉粒不能作為區(qū)別兩者的要點(diǎn)。兩者差異區(qū)別要點(diǎn)見表2。

表2 覆盆子和桉葉懸鉤子鑒別要點(diǎn)Tab 2 Characteristics identification of Rubus chingii Hu and Rubus eucalyptus Focke

本文通過(guò)研究覆盆子及與其易混淆品桉葉懸鉤子的生藥學(xué)特征，比較兩者外觀性狀、內(nèi)在構(gòu)造和顯微特征的區(qū)別點(diǎn)，研究結(jié)果為桉葉懸鉤子的鑒別提供了依據(jù)，有利于提高軟覆盆子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，也為鑒別覆盆子及與其易混淆品桉葉懸鉤子提供依據(jù)。此外，本文運(yùn)用體式顯微鏡和光學(xué)顯微鏡，達(dá)到了圖像化描述的效果。通過(guò)數(shù)字圖像化能更好地了解藥材外觀形狀及內(nèi)在結(jié)構(gòu)，對(duì)智能識(shí)別藥材有重要意義。