• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    應(yīng)用生物信息學(xué)篩選胃癌診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物

    2023-10-27 13:06:30董金鳳鄭華川
    醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐 2023年20期
    關(guān)鍵詞:胞外基質(zhì)膠原蛋白標(biāo)志物

    董金鳳 鄭華川

    承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室,河北省承德市 067000

    胃癌是全球最常見和癌癥致死率最高的疾病之一。尋找胃癌生物標(biāo)志物對(duì)早期胃癌患者的確診、預(yù)后改善和生存率的提高具有重要意義[1]。 近年來,微陣列技術(shù)和生物信息學(xué)分析被廣泛應(yīng)用于尋找腫瘤診斷、治療及預(yù)后的生物標(biāo)志物[2]。本研究從GEO數(shù)據(jù)庫下載GSE79973和GSE103236兩數(shù)據(jù)集以獲得胃癌組織和鄰近非癌組織的差異表達(dá)基因(Differentially expressed genes,DEGs),并進(jìn)行分析。報(bào)道如下。

    1 材料與方法

    1.1 下載數(shù)據(jù)集 從GEO數(shù)據(jù)庫(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo)下載胃癌的基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)集GSE79973和GSE103236。GSE79973數(shù)據(jù)集包含10個(gè)胃癌組織樣本和10個(gè)匹配的鄰近非腫瘤組織樣本;GSE103236數(shù)據(jù)集包含10個(gè)胃癌組織樣本和9個(gè)匹配的鄰近非腫瘤組織樣本。

    1.2 篩選差異基因 通過GEO2R在線工具分析兩數(shù)據(jù)集中胃癌樣本和鄰近非癌組織樣本的DEGs,adj.P<0.05和|logFC|>1被作為識(shí)別DEGs的標(biāo)準(zhǔn),并將uDEGs定義為上調(diào)基因(up-regulated DEGs),dDEGs定義為下調(diào)基因(down-regulated DEGs),并使用仙桃在線數(shù)據(jù)平臺(tái)(https://www.xiantao.love)繪制火山圖。然后,通過維恩圖在線工具(https://www.bioinformatics.com.cn)識(shí)別兩個(gè)數(shù)據(jù)集之間重疊的DEGs,并繪制維恩圖。

    1.3 GO和KEGG富集分析 為更好地探索兩數(shù)據(jù)集重疊DEGs的生物學(xué)意義,通過仙桃在線數(shù)據(jù)平臺(tái)進(jìn)行GO和KEGG富集分析。GO主要用于識(shí)別生物學(xué)功能, KEGG主要用于富集信號(hào)通路。

    1.4 構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)和篩選hub基因 將兩個(gè)數(shù)據(jù)集之間重疊的DEGs導(dǎo)入STRING在線工具(https://string-db.org)獲得重疊 DEGs編碼蛋白的PPI網(wǎng)絡(luò),“minimum required interaction score”為“medium confidence (0.4)”被作為限制條件。通過 Cytoscape 軟件(3.9.1版)可視化DEGs基因的PPI網(wǎng)絡(luò),cytoHubba插件篩選PPI網(wǎng)絡(luò)中連接度前十的hub基因。

    1.5 hub基因的表達(dá)差異分析和生存分析,以及ROC曲線分析 使用GEPIA數(shù)據(jù)平臺(tái)(http://gepia.cancer-pku.cn)的TCGA-GTEx數(shù)據(jù)庫分析hub基因在胃癌樣本和鄰近非癌樣本的表達(dá)差異。利用仙桃在線數(shù)據(jù)平臺(tái)的TCGA在線數(shù)據(jù)庫繪制hub基因的ROC曲線。最后,通過Kaplan-Meier Plotter在線數(shù)據(jù)平臺(tái)(http://kmplot.com/analysis)繪制hub基因的總體生存率(Overall survival,OS)生存曲線。

    2 結(jié)果

    2.1 差異基因的識(shí)別 在GSE79973數(shù)據(jù)集中,487個(gè)基因被上調(diào),919個(gè)基因被下調(diào)(見圖1a)。在GSE103236數(shù)據(jù)集中,331個(gè)基因被上調(diào),170個(gè)基因被下調(diào)(見圖1b)。兩數(shù)據(jù)集重疊的DEGs有156個(gè),其中包括98個(gè)上調(diào)基因和58個(gè)下調(diào)基因(見圖1c)。

    圖1 兩數(shù)據(jù)集DEGs的篩選與識(shí)別

    2.2 重疊DEGs的GO和KEGG富集分析 為進(jìn)一步探索重疊DEGs在胃癌中的生物學(xué)功能,我們通過仙桃在線數(shù)據(jù)平臺(tái)對(duì)重疊DEGs進(jìn)行GO和KEGG富集分析。uDEGs的GO分析主要富集在細(xì)胞外結(jié)構(gòu)組織、細(xì)胞外基質(zhì)組織、膠原蛋白纖維組織、含膠原蛋白的細(xì)胞外基質(zhì)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔、膠原蛋白三聚體、細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分、膠原蛋白結(jié)合、賦予拉伸強(qiáng)度細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分(見圖2a)。KEGG分析主要富集在蛋白質(zhì)消化和吸收、細(xì)胞外基質(zhì)受體相互作用(見圖2a)。而dDEGs的GO分析主要富集在細(xì)胞二價(jià)無機(jī)陽離子穩(wěn)定、肌肉系統(tǒng)過程、脂質(zhì)定位、肌肉收縮、p型離子轉(zhuǎn)運(yùn)體活性、焦磷酸水解驅(qū)動(dòng)的質(zhì)子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)體活性、兒茶酚胺結(jié)合、膽汁酸結(jié)合(見圖2b)。dDEGs的KEGG分析主要富集在鈣信號(hào)通路、胃酸分泌、組氨酸代謝(見圖2b)。

    a b

    2.3 構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)和篩選hub基因 為了解兩數(shù)據(jù)集重疊DEGs編碼蛋白之間的關(guān)系,利用STRING在線工具構(gòu)建重疊DEGs的PPI網(wǎng)絡(luò),并通過Cytoscape軟件可視化(見圖3a)。使用Cytohubba插件識(shí)別PPI網(wǎng)絡(luò)中連接度前十的hub基因,分別是COL1A1、BGN、SPARC、MMP14、LOX、THBS2、TIMP1、SPP1、VCAN、COL5A2(見圖3b),且這10個(gè)hub基因均為uDEGs。

    2.4 胃癌組織中hub基因的表達(dá)分析 我們使用GEPIA數(shù)據(jù)平臺(tái)的TCGA-GTEx數(shù)據(jù)庫進(jìn)一步分析了胃癌組織中10個(gè)hub基因的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果顯示,這些基因在胃癌組織中的表達(dá)水平均顯著高于胃正常組織(P<0.01),見圖4。

    a b

    圖4 hub基因在胃癌組織中高表達(dá)

    2.5 評(píng)價(jià)hub基因的診斷價(jià)值 通過仙桃在線數(shù)據(jù)平臺(tái)的在線TCGA數(shù)據(jù)庫繪制ROC曲線評(píng)價(jià)hub基因?qū)ξ赴┑脑\斷價(jià)值(見圖5)。結(jié)果顯示,10個(gè)hub基因的AUC 均>0.84,均具有一定診斷價(jià)值,其中COL1A1、BGN、TIMP1、SPP1、COL5A2>0.9,診斷價(jià)值較高。

    圖5 hub基因的ROC曲線

    2.6 生存分析 為了評(píng)估hub基因在胃癌的預(yù)后價(jià)值,我們通過Kaplan-Meier Plotter在線數(shù)據(jù)平臺(tái)進(jìn)一步繪制了OS生存曲線(見圖6)。表明10個(gè)hub基因均與較差的總體生存率顯著相關(guān) (P<0.01),提示這些基因可能是胃癌預(yù)后不良的生物標(biāo)志物。

    3 討論

    胃癌是全球腫瘤死亡的最常見原因之一。早期胃癌可以通過手術(shù)根治性切除,腫瘤生物標(biāo)志物可為早期診斷提供診斷依據(jù),并為分子治療提供靶點(diǎn)[1,3]。

    本研究通過生物信息學(xué)方法篩選胃癌的生物學(xué)標(biāo)志物。我們分析了GSE79973和GSE103236兩數(shù)據(jù)集重疊的DEGs,其中uDEGs的GO分析主要與細(xì)胞外基質(zhì)及膠原蛋白相關(guān)。細(xì)胞外基質(zhì)由膠原蛋白、纖連蛋白、彈性蛋白、層粘連蛋白、透明質(zhì)酸、糖胺聚糖等多種成分組成[4]。在正常組織和器官中細(xì)胞外基質(zhì)不僅可以發(fā)揮物理支架的作用和介導(dǎo)信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo),還可參與細(xì)胞形狀、遷移、存活、增殖等多種細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)節(jié)[5]。當(dāng)細(xì)胞外基質(zhì)的硬度和剛度發(fā)生病理變化時(shí),可通過本身的物理性質(zhì)和信號(hào)通路的激活促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和血管生成的能力,并降低放化療及靶向治療的療效[4]。膠原蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分,與器官組織的纖維化、細(xì)胞外基質(zhì)硬度增加、促進(jìn)血管生成和引導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲密切相關(guān)[6]。uDEGs的KEGG富集分析顯示與細(xì)胞外基質(zhì)受體相互作用有關(guān)。我們通過STRING在線工具和Cytoscape軟件從兩數(shù)據(jù)集重疊的DEGs中識(shí)別的10個(gè)hub基因均為uDEGs,提示這些基因可能與細(xì)胞外基質(zhì)成分及其生物學(xué)行為密切相關(guān)。據(jù)報(bào)道,細(xì)胞外基質(zhì)在正常胃上皮細(xì)胞—癌前病變—胃癌—胃癌進(jìn)展整個(gè)過程均具有促進(jìn)作用,是胃癌發(fā)生和發(fā)展的幫兇[7]。利用GEPIA、仙桃、Kaplan-Meier Plotter在線數(shù)據(jù)平臺(tái)分析表明,hub基因在胃癌組織中均顯著上調(diào)(P<0.01),具有一定診斷價(jià)值(AUC>0.84),并預(yù)示其預(yù)后不良 (P<0.01)。因此,這10個(gè)hub基因可能是診斷胃癌和判斷預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。

    研究表明,COL1A1和COL5A2作為膠原蛋白的組成成分在胃癌組織中均高表達(dá),對(duì)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲有促進(jìn)作用[8-9]。BGN是一種富含亮氨酸的小蛋白,其高表達(dá)與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管侵犯、復(fù)發(fā)率及較差的生存期密切相關(guān)[10]。SPARC是一種糖蛋白,在胃癌中高表達(dá),與預(yù)后不良顯著相關(guān)[11]。然而,有研究顯示SPARC在胃癌中具有抑癌作用,抑制胃癌血管生成、增殖及遷移、侵襲及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力[12]?;|(zhì)金屬蛋白酶是細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白水解酶,除了在侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要作用,還參與細(xì)胞的生長、增殖、凋亡及腫瘤血管生成和免疫逃逸的調(diào)節(jié)[13]。MMP14是基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員,可通過調(diào)控細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移和凋亡調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞的生長[14]。LOX是一種銅依賴性單胺氧化酶,在彌漫型胃癌細(xì)胞中高表達(dá),與胃癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)[15]。THBS2是血小板反應(yīng)蛋白家族成員,在胃癌組織中表達(dá)上調(diào),其表達(dá)下調(diào)對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲有抑制作用,對(duì)凋亡有促進(jìn)作用[16]。TIMP-1是一種金屬蛋白酶抑制劑,據(jù)報(bào)道TIMP-1陽性患者的復(fù)發(fā)率明顯高于陰性患者,并且是不良預(yù)后的標(biāo)志物[17]。SPP1(也稱骨橋蛋白)是一種基質(zhì)糖蛋白,在胃癌組織中顯著高表達(dá),其在血漿中的表達(dá)水平與胃癌向鄰近組織的浸潤和轉(zhuǎn)移,以及預(yù)后不良密切相關(guān)[18]。VCAN是一種蛋白多糖,參與細(xì)胞外基質(zhì)的組成,其高表達(dá)與晚期TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度和腫瘤分級(jí)相關(guān),對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲具有促進(jìn)作用[19]。因此,我們篩選出的10個(gè)hub基因均與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

    綜上所述,本研究應(yīng)用生物信息學(xué)方法從胃癌基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)集中篩選的10個(gè)hub基因COL1A1、BGN、SPARC、MMP14、LOX、THBS2、TIMP1、SPP1、VCAN、COL5A2在胃癌中高表達(dá),與胃癌的生物學(xué)行為及不良預(yù)后密切相關(guān),可能是胃癌診斷和預(yù)后不良的潛在生物標(biāo)志物。

    猜你喜歡
    胞外基質(zhì)膠原蛋白標(biāo)志物
    脫細(xì)胞外基質(zhì)制備與應(yīng)用的研究現(xiàn)狀
    關(guān)于經(jīng)絡(luò)是一種細(xì)胞外基質(zhì)通道的假說
    想不到你是這樣的膠原蛋白
    Coco薇(2017年12期)2018-01-03 21:27:09
    美國肉參膠原蛋白肽對(duì)H2O2損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用
    膿毒癥早期診斷標(biāo)志物的回顧及研究進(jìn)展
    膠原蛋白在食品中的應(yīng)用現(xiàn)狀及其發(fā)展前景分析
    梭魚骨膠原蛋白的提取及其性質(zhì)
    冠狀動(dòng)脈疾病的生物學(xué)標(biāo)志物
    腫瘤標(biāo)志物在消化系統(tǒng)腫瘤早期診斷中的應(yīng)用
    MR-proANP:一種新型心力衰竭診斷標(biāo)志物
    伊人亚洲综合成人网| av女优亚洲男人天堂| 亚洲高清免费不卡视频| 日本爱情动作片www.在线观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲精品视频女| 满18在线观看网站| 女性生殖器流出的白浆| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 韩国高清视频一区二区三区| 久久综合国产亚洲精品| 欧美精品av麻豆av| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲国产精品成人久久小说| a级毛片黄视频| av女优亚洲男人天堂| 国产精品嫩草影院av在线观看| 99九九在线精品视频| 午夜91福利影院| 毛片一级片免费看久久久久| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 亚洲在久久综合| 人妻一区二区av| 国产探花极品一区二区| 女性生殖器流出的白浆| 九九在线视频观看精品| 成人毛片60女人毛片免费| 男女免费视频国产| 亚洲一码二码三码区别大吗| 美女大奶头黄色视频| 男女啪啪激烈高潮av片| 看十八女毛片水多多多| 九九在线视频观看精品| 母亲3免费完整高清在线观看 | 午夜视频国产福利| 秋霞伦理黄片| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产成人一区二区在线| 国产在线免费精品| 岛国毛片在线播放| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 寂寞人妻少妇视频99o| 一级,二级,三级黄色视频| 一区二区三区精品91| 日韩伦理黄色片| 久久久久久伊人网av| 777米奇影视久久| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 欧美性感艳星| 99视频精品全部免费 在线| 国产精品久久久久久久电影| 国产精品 国内视频| 一区二区三区精品91| 亚洲欧美成人综合另类久久久| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品免费大片| 九色成人免费人妻av| 丰满迷人的少妇在线观看| 高清不卡的av网站| 成人无遮挡网站| 成年人午夜在线观看视频| 韩国高清视频一区二区三区| 三上悠亚av全集在线观看| 丝袜喷水一区| 18+在线观看网站| 国产成人精品福利久久| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲av国产av综合av卡| 日本av免费视频播放| 美女国产视频在线观看| 少妇的逼好多水| 视频中文字幕在线观看| 丝袜美足系列| av不卡在线播放| 日韩一区二区三区影片| 久热久热在线精品观看| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲丝袜综合中文字幕| 赤兔流量卡办理| 黄色配什么色好看| 久久国产精品大桥未久av| 国产福利在线免费观看视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 国产成人av激情在线播放| 久久韩国三级中文字幕| 性色avwww在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 九色亚洲精品在线播放| 18禁动态无遮挡网站| av黄色大香蕉| 在线观看免费视频网站a站| 在线精品无人区一区二区三| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲精品视频女| 免费观看在线日韩| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产极品粉嫩免费观看在线| 日韩av免费高清视频| 国精品久久久久久国模美| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 丁香六月天网| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲精品美女久久av网站| 在线看a的网站| 免费人妻精品一区二区三区视频| 五月伊人婷婷丁香| 五月玫瑰六月丁香| 精品一区在线观看国产| 日日摸夜夜添夜夜爱| 女性被躁到高潮视频| 飞空精品影院首页| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 日韩在线高清观看一区二区三区| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产精品无大码| 中国三级夫妇交换| 一本色道久久久久久精品综合| 国国产精品蜜臀av免费| 午夜福利视频精品| 少妇 在线观看| 成年av动漫网址| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产免费现黄频在线看| 亚洲精品视频女| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产亚洲最大av| 天美传媒精品一区二区| 美女内射精品一级片tv| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产色婷婷99| 看免费成人av毛片| 精品福利永久在线观看| 欧美bdsm另类| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 黄色怎么调成土黄色| 午夜福利影视在线免费观看| 免费黄色在线免费观看| 久久久a久久爽久久v久久| 国产在线视频一区二区| 国产精品 国内视频| 久久久久久伊人网av| 9色porny在线观看| 五月天丁香电影| 成年av动漫网址| 91精品三级在线观看| 男女免费视频国产| 亚洲美女视频黄频| 欧美性感艳星| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久久久久久大尺度免费视频| 美女中出高潮动态图| 五月开心婷婷网| 美女主播在线视频| 伦理电影免费视频| av国产久精品久网站免费入址| 免费黄色在线免费观看| 日本91视频免费播放| 黄色配什么色好看| 亚洲精品自拍成人| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 看免费av毛片| 亚洲精品成人av观看孕妇| 丁香六月天网| 五月开心婷婷网| 只有这里有精品99| 久久久国产一区二区| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲av综合色区一区| 久久久精品免费免费高清| 国产av码专区亚洲av| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲情色 制服丝袜| 国产黄色视频一区二区在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 欧美激情国产日韩精品一区| 精品人妻偷拍中文字幕| 各种免费的搞黄视频| 毛片一级片免费看久久久久| 热re99久久精品国产66热6| 午夜福利乱码中文字幕| 99视频精品全部免费 在线| 国产国语露脸激情在线看| 激情五月婷婷亚洲| 99久久精品国产国产毛片| av黄色大香蕉| 女性生殖器流出的白浆| 国产 一区精品| 亚洲国产精品一区三区| 国产精品99久久99久久久不卡 | 激情五月婷婷亚洲| 国产精品嫩草影院av在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产精品一国产av| 男女国产视频网站| 久久久久网色| 久久久国产欧美日韩av| 久久久国产精品麻豆| 欧美日韩精品成人综合77777| 青春草亚洲视频在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 日本91视频免费播放| 亚洲人成77777在线视频| 欧美日韩综合久久久久久| 男女免费视频国产| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 青春草亚洲视频在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 成人综合一区亚洲| 人体艺术视频欧美日本| 免费观看a级毛片全部| 国产亚洲最大av| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产探花极品一区二区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产精品欧美亚洲77777| 在线 av 中文字幕| 极品少妇高潮喷水抽搐| 成人免费观看视频高清| 国产一区二区三区av在线| 欧美另类一区| 欧美国产精品va在线观看不卡| 男女午夜视频在线观看 | www.熟女人妻精品国产 | 99精国产麻豆久久婷婷| 日韩中字成人| av国产精品久久久久影院| 国产精品久久久久久精品古装| 18+在线观看网站| 日韩人妻精品一区2区三区| 少妇的丰满在线观看| 一本久久精品| 国产在线一区二区三区精| 精品少妇黑人巨大在线播放| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产亚洲欧美精品永久| 国产1区2区3区精品| 纯流量卡能插随身wifi吗| 欧美人与善性xxx| 制服诱惑二区| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产乱来视频区| kizo精华| 男女下面插进去视频免费观看 | 亚洲精品一区蜜桃| 少妇高潮的动态图| av福利片在线| 国产成人av激情在线播放| 青春草国产在线视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产黄色免费在线视频| 有码 亚洲区| 丝袜脚勾引网站| 人妻 亚洲 视频| 国产成人精品久久久久久| 欧美精品国产亚洲| 精品一区二区三区视频在线| 久久精品国产a三级三级三级| 色94色欧美一区二区| 久久这里只有精品19| 成人无遮挡网站| av在线老鸭窝| 国产有黄有色有爽视频| 久久久久久伊人网av| 亚洲国产最新在线播放| 乱人伦中国视频| 日本免费在线观看一区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲高清免费不卡视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲经典国产精华液单| 视频区图区小说| 亚洲国产最新在线播放| 免费黄频网站在线观看国产| av在线老鸭窝| 黑丝袜美女国产一区| 我的女老师完整版在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久人人97超碰香蕉20202| av有码第一页| 精品久久久久久电影网| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 涩涩av久久男人的天堂| 熟女电影av网| 女人精品久久久久毛片| 亚洲欧美清纯卡通| 久久久久久久亚洲中文字幕| 最近中文字幕2019免费版| 十分钟在线观看高清视频www| 丰满少妇做爰视频| 新久久久久国产一级毛片| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 各种免费的搞黄视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| av视频免费观看在线观看| 人体艺术视频欧美日本| 国产成人91sexporn| 国产亚洲精品久久久com| 午夜福利乱码中文字幕| 免费人妻精品一区二区三区视频| 搡老乐熟女国产| 欧美日韩av久久| 亚洲欧美成人精品一区二区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 蜜桃国产av成人99| 欧美人与善性xxx| 五月伊人婷婷丁香| 一二三四中文在线观看免费高清| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 午夜福利视频精品| 亚洲av在线观看美女高潮| 99国产综合亚洲精品| 精品久久蜜臀av无| 曰老女人黄片| 亚洲人成网站在线观看播放| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久久久久久精品精品| 99久久人妻综合| 精品福利永久在线观看| 国产亚洲最大av| 亚洲精品国产av蜜桃| 免费高清在线观看日韩| 在线观看三级黄色| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 免费在线观看黄色视频的| 国产免费一区二区三区四区乱码| 蜜桃国产av成人99| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久久久精品久久久久真实原创| 日韩欧美精品免费久久| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 免费高清在线观看日韩| 大片电影免费在线观看免费| 麻豆乱淫一区二区| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲综合色惰| 免费日韩欧美在线观看| 尾随美女入室| 精品久久久久久电影网| 老司机影院成人| 18禁国产床啪视频网站| 看非洲黑人一级黄片| 99久国产av精品国产电影| 宅男免费午夜| 99热网站在线观看| av电影中文网址| 熟女av电影| 日日撸夜夜添| a级毛片黄视频| 久久久久精品人妻al黑| 成人国语在线视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| av有码第一页| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲国产色片| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲av男天堂| 国产 精品1| 五月开心婷婷网| 国产精品免费大片| 一级黄片播放器| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲成国产人片在线观看| 99热6这里只有精品| 色94色欧美一区二区| 欧美另类一区| 亚洲国产成人一精品久久久| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产深夜福利视频在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 黑人欧美特级aaaaaa片| 精品亚洲成国产av| 亚洲美女黄色视频免费看| 高清欧美精品videossex| 宅男免费午夜| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 99热全是精品| 色网站视频免费| 亚洲精品国产色婷婷电影| 熟妇人妻不卡中文字幕| 男女啪啪激烈高潮av片| 91精品国产国语对白视频| 久久婷婷青草| 日韩精品有码人妻一区| 午夜激情av网站| 亚洲av电影在线进入| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲精品一区蜜桃| 22中文网久久字幕| 国精品久久久久久国模美| 久久这里有精品视频免费| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 九色亚洲精品在线播放| 久久女婷五月综合色啪小说| 97在线视频观看| 亚洲伊人色综图| 一区二区三区精品91| 久久久久网色| 成人免费观看视频高清| 一级毛片电影观看| 精品亚洲成国产av| 一区二区三区精品91| 一本大道久久a久久精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 中国三级夫妇交换| 少妇 在线观看| 色网站视频免费| 校园人妻丝袜中文字幕| 日韩电影二区| 69精品国产乱码久久久| av卡一久久| 欧美激情 高清一区二区三区| 日日撸夜夜添| 久久久久久久大尺度免费视频| 久久免费观看电影| 丰满少妇做爰视频| 十八禁网站网址无遮挡| 少妇的逼好多水| 99久久人妻综合| 国产激情久久老熟女| 国产精品国产三级国产专区5o| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产不卡av网站在线观看| 99热网站在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产成人免费无遮挡视频| 午夜福利乱码中文字幕| 日本wwww免费看| 亚洲成人一二三区av| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲综合精品二区| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 妹子高潮喷水视频| 中文天堂在线官网| 精品久久久精品久久久| 亚洲在久久综合| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 18禁观看日本| 1024视频免费在线观看| av卡一久久| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产精品久久久久久精品古装| a级毛片在线看网站| 精品卡一卡二卡四卡免费| 91精品三级在线观看| 九色成人免费人妻av| av在线app专区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 99久久人妻综合| 国产精品一国产av| 免费黄色在线免费观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 成人影院久久| 青春草视频在线免费观看| 99热网站在线观看| 久久久久久人妻| 哪个播放器可以免费观看大片| 免费人成在线观看视频色| 五月开心婷婷网| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 美女中出高潮动态图| 最新中文字幕久久久久| 丰满饥渴人妻一区二区三| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久午夜福利片| 欧美激情国产日韩精品一区| 免费在线观看黄色视频的| 热re99久久精品国产66热6| 久久免费观看电影| 精品一区二区三区视频在线| 日本-黄色视频高清免费观看| videossex国产| 国产成人精品在线电影| 午夜免费鲁丝| 亚洲,欧美精品.| 国产精品免费大片| av黄色大香蕉| 亚洲国产av影院在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 最近手机中文字幕大全| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 9热在线视频观看99| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 在线 av 中文字幕| 中文字幕人妻丝袜制服| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美人与善性xxx| 久久午夜综合久久蜜桃| 丝袜喷水一区| 国产成人91sexporn| 久热久热在线精品观看| 亚洲精品自拍成人| 五月天丁香电影| 在线天堂最新版资源| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 女性生殖器流出的白浆| 国产视频首页在线观看| 亚洲人成网站在线观看播放| √禁漫天堂资源中文www| 国产一区有黄有色的免费视频| 七月丁香在线播放| 飞空精品影院首页| 国产极品天堂在线| 欧美精品亚洲一区二区| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 欧美人与性动交α欧美软件 | 啦啦啦视频在线资源免费观看| 高清视频免费观看一区二区| 两个人看的免费小视频| 久久毛片免费看一区二区三区| 一级毛片电影观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 日本欧美视频一区| 各种免费的搞黄视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 久久久久视频综合| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产国语露脸激情在线看| 丝袜在线中文字幕| 国产一区二区在线观看日韩| 三级国产精品片| freevideosex欧美| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲精品自拍成人| a 毛片基地| 日韩av在线免费看完整版不卡| 韩国av在线不卡| 视频在线观看一区二区三区| 欧美xxxx性猛交bbbb| 男女啪啪激烈高潮av片| 免费黄色在线免费观看| 一区二区三区精品91| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产精品一国产av| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 99热国产这里只有精品6| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 日韩精品有码人妻一区| 久久精品国产亚洲av天美| 少妇人妻久久综合中文| 国产乱人偷精品视频| 少妇的丰满在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 我的女老师完整版在线观看| 自线自在国产av| 日韩中字成人| 韩国精品一区二区三区 | 狠狠精品人妻久久久久久综合| 最新中文字幕久久久久| 国产精品蜜桃在线观看| 日韩制服骚丝袜av| av线在线观看网站| 亚洲av男天堂| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 国产色婷婷99| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产伦理片在线播放av一区| 天美传媒精品一区二区| h视频一区二区三区| 夫妻午夜视频| 宅男免费午夜| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 亚洲av日韩在线播放| 99久久精品国产国产毛片| 天天操日日干夜夜撸| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产精品成人在线| 激情视频va一区二区三区| 免费在线观看黄色视频的| 内地一区二区视频在线| 亚洲国产av影院在线观看| 在线观看人妻少妇| 五月玫瑰六月丁香| 免费人成在线观看视频色| av一本久久久久| 黄色配什么色好看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产精品久久久久久久电影| 在线 av 中文字幕| 婷婷色麻豆天堂久久| 飞空精品影院首页| 国产成人91sexporn| 老女人水多毛片| 国国产精品蜜臀av免费| 熟女av电影| 高清不卡的av网站| 国产有黄有色有爽视频| 9热在线视频观看99| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 久久女婷五月综合色啪小说| 日韩欧美精品免费久久| 国产免费一级a男人的天堂| 欧美成人午夜精品|