• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    應(yīng)用生物信息學(xué)篩選胃癌診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物

    2023-10-27 13:06:30董金鳳鄭華川
    醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐 2023年20期
    關(guān)鍵詞:胞外基質(zhì)膠原蛋白標(biāo)志物

    董金鳳 鄭華川

    承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室,河北省承德市 067000

    胃癌是全球最常見和癌癥致死率最高的疾病之一。尋找胃癌生物標(biāo)志物對(duì)早期胃癌患者的確診、預(yù)后改善和生存率的提高具有重要意義[1]。 近年來,微陣列技術(shù)和生物信息學(xué)分析被廣泛應(yīng)用于尋找腫瘤診斷、治療及預(yù)后的生物標(biāo)志物[2]。本研究從GEO數(shù)據(jù)庫下載GSE79973和GSE103236兩數(shù)據(jù)集以獲得胃癌組織和鄰近非癌組織的差異表達(dá)基因(Differentially expressed genes,DEGs),并進(jìn)行分析。報(bào)道如下。

    1 材料與方法

    1.1 下載數(shù)據(jù)集 從GEO數(shù)據(jù)庫(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo)下載胃癌的基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)集GSE79973和GSE103236。GSE79973數(shù)據(jù)集包含10個(gè)胃癌組織樣本和10個(gè)匹配的鄰近非腫瘤組織樣本;GSE103236數(shù)據(jù)集包含10個(gè)胃癌組織樣本和9個(gè)匹配的鄰近非腫瘤組織樣本。

    1.2 篩選差異基因 通過GEO2R在線工具分析兩數(shù)據(jù)集中胃癌樣本和鄰近非癌組織樣本的DEGs,adj.P<0.05和|logFC|>1被作為識(shí)別DEGs的標(biāo)準(zhǔn),并將uDEGs定義為上調(diào)基因(up-regulated DEGs),dDEGs定義為下調(diào)基因(down-regulated DEGs),并使用仙桃在線數(shù)據(jù)平臺(tái)(https://www.xiantao.love)繪制火山圖。然后,通過維恩圖在線工具(https://www.bioinformatics.com.cn)識(shí)別兩個(gè)數(shù)據(jù)集之間重疊的DEGs,并繪制維恩圖。

    1.3 GO和KEGG富集分析 為更好地探索兩數(shù)據(jù)集重疊DEGs的生物學(xué)意義,通過仙桃在線數(shù)據(jù)平臺(tái)進(jìn)行GO和KEGG富集分析。GO主要用于識(shí)別生物學(xué)功能, KEGG主要用于富集信號(hào)通路。

    1.4 構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)和篩選hub基因 將兩個(gè)數(shù)據(jù)集之間重疊的DEGs導(dǎo)入STRING在線工具(https://string-db.org)獲得重疊 DEGs編碼蛋白的PPI網(wǎng)絡(luò),“minimum required interaction score”為“medium confidence (0.4)”被作為限制條件。通過 Cytoscape 軟件(3.9.1版)可視化DEGs基因的PPI網(wǎng)絡(luò),cytoHubba插件篩選PPI網(wǎng)絡(luò)中連接度前十的hub基因。

    1.5 hub基因的表達(dá)差異分析和生存分析,以及ROC曲線分析 使用GEPIA數(shù)據(jù)平臺(tái)(http://gepia.cancer-pku.cn)的TCGA-GTEx數(shù)據(jù)庫分析hub基因在胃癌樣本和鄰近非癌樣本的表達(dá)差異。利用仙桃在線數(shù)據(jù)平臺(tái)的TCGA在線數(shù)據(jù)庫繪制hub基因的ROC曲線。最后,通過Kaplan-Meier Plotter在線數(shù)據(jù)平臺(tái)(http://kmplot.com/analysis)繪制hub基因的總體生存率(Overall survival,OS)生存曲線。

    2 結(jié)果

    2.1 差異基因的識(shí)別 在GSE79973數(shù)據(jù)集中,487個(gè)基因被上調(diào),919個(gè)基因被下調(diào)(見圖1a)。在GSE103236數(shù)據(jù)集中,331個(gè)基因被上調(diào),170個(gè)基因被下調(diào)(見圖1b)。兩數(shù)據(jù)集重疊的DEGs有156個(gè),其中包括98個(gè)上調(diào)基因和58個(gè)下調(diào)基因(見圖1c)。

    圖1 兩數(shù)據(jù)集DEGs的篩選與識(shí)別

    2.2 重疊DEGs的GO和KEGG富集分析 為進(jìn)一步探索重疊DEGs在胃癌中的生物學(xué)功能,我們通過仙桃在線數(shù)據(jù)平臺(tái)對(duì)重疊DEGs進(jìn)行GO和KEGG富集分析。uDEGs的GO分析主要富集在細(xì)胞外結(jié)構(gòu)組織、細(xì)胞外基質(zhì)組織、膠原蛋白纖維組織、含膠原蛋白的細(xì)胞外基質(zhì)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔、膠原蛋白三聚體、細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分、膠原蛋白結(jié)合、賦予拉伸強(qiáng)度細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分(見圖2a)。KEGG分析主要富集在蛋白質(zhì)消化和吸收、細(xì)胞外基質(zhì)受體相互作用(見圖2a)。而dDEGs的GO分析主要富集在細(xì)胞二價(jià)無機(jī)陽離子穩(wěn)定、肌肉系統(tǒng)過程、脂質(zhì)定位、肌肉收縮、p型離子轉(zhuǎn)運(yùn)體活性、焦磷酸水解驅(qū)動(dòng)的質(zhì)子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)體活性、兒茶酚胺結(jié)合、膽汁酸結(jié)合(見圖2b)。dDEGs的KEGG分析主要富集在鈣信號(hào)通路、胃酸分泌、組氨酸代謝(見圖2b)。

    a b

    2.3 構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)和篩選hub基因 為了解兩數(shù)據(jù)集重疊DEGs編碼蛋白之間的關(guān)系,利用STRING在線工具構(gòu)建重疊DEGs的PPI網(wǎng)絡(luò),并通過Cytoscape軟件可視化(見圖3a)。使用Cytohubba插件識(shí)別PPI網(wǎng)絡(luò)中連接度前十的hub基因,分別是COL1A1、BGN、SPARC、MMP14、LOX、THBS2、TIMP1、SPP1、VCAN、COL5A2(見圖3b),且這10個(gè)hub基因均為uDEGs。

    2.4 胃癌組織中hub基因的表達(dá)分析 我們使用GEPIA數(shù)據(jù)平臺(tái)的TCGA-GTEx數(shù)據(jù)庫進(jìn)一步分析了胃癌組織中10個(gè)hub基因的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果顯示,這些基因在胃癌組織中的表達(dá)水平均顯著高于胃正常組織(P<0.01),見圖4。

    a b

    圖4 hub基因在胃癌組織中高表達(dá)

    2.5 評(píng)價(jià)hub基因的診斷價(jià)值 通過仙桃在線數(shù)據(jù)平臺(tái)的在線TCGA數(shù)據(jù)庫繪制ROC曲線評(píng)價(jià)hub基因?qū)ξ赴┑脑\斷價(jià)值(見圖5)。結(jié)果顯示,10個(gè)hub基因的AUC 均>0.84,均具有一定診斷價(jià)值,其中COL1A1、BGN、TIMP1、SPP1、COL5A2>0.9,診斷價(jià)值較高。

    圖5 hub基因的ROC曲線

    2.6 生存分析 為了評(píng)估hub基因在胃癌的預(yù)后價(jià)值,我們通過Kaplan-Meier Plotter在線數(shù)據(jù)平臺(tái)進(jìn)一步繪制了OS生存曲線(見圖6)。表明10個(gè)hub基因均與較差的總體生存率顯著相關(guān) (P<0.01),提示這些基因可能是胃癌預(yù)后不良的生物標(biāo)志物。

    3 討論

    胃癌是全球腫瘤死亡的最常見原因之一。早期胃癌可以通過手術(shù)根治性切除,腫瘤生物標(biāo)志物可為早期診斷提供診斷依據(jù),并為分子治療提供靶點(diǎn)[1,3]。

    本研究通過生物信息學(xué)方法篩選胃癌的生物學(xué)標(biāo)志物。我們分析了GSE79973和GSE103236兩數(shù)據(jù)集重疊的DEGs,其中uDEGs的GO分析主要與細(xì)胞外基質(zhì)及膠原蛋白相關(guān)。細(xì)胞外基質(zhì)由膠原蛋白、纖連蛋白、彈性蛋白、層粘連蛋白、透明質(zhì)酸、糖胺聚糖等多種成分組成[4]。在正常組織和器官中細(xì)胞外基質(zhì)不僅可以發(fā)揮物理支架的作用和介導(dǎo)信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo),還可參與細(xì)胞形狀、遷移、存活、增殖等多種細(xì)胞生物學(xué)行為的調(diào)節(jié)[5]。當(dāng)細(xì)胞外基質(zhì)的硬度和剛度發(fā)生病理變化時(shí),可通過本身的物理性質(zhì)和信號(hào)通路的激活促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和血管生成的能力,并降低放化療及靶向治療的療效[4]。膠原蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分,與器官組織的纖維化、細(xì)胞外基質(zhì)硬度增加、促進(jìn)血管生成和引導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲密切相關(guān)[6]。uDEGs的KEGG富集分析顯示與細(xì)胞外基質(zhì)受體相互作用有關(guān)。我們通過STRING在線工具和Cytoscape軟件從兩數(shù)據(jù)集重疊的DEGs中識(shí)別的10個(gè)hub基因均為uDEGs,提示這些基因可能與細(xì)胞外基質(zhì)成分及其生物學(xué)行為密切相關(guān)。據(jù)報(bào)道,細(xì)胞外基質(zhì)在正常胃上皮細(xì)胞—癌前病變—胃癌—胃癌進(jìn)展整個(gè)過程均具有促進(jìn)作用,是胃癌發(fā)生和發(fā)展的幫兇[7]。利用GEPIA、仙桃、Kaplan-Meier Plotter在線數(shù)據(jù)平臺(tái)分析表明,hub基因在胃癌組織中均顯著上調(diào)(P<0.01),具有一定診斷價(jià)值(AUC>0.84),并預(yù)示其預(yù)后不良 (P<0.01)。因此,這10個(gè)hub基因可能是診斷胃癌和判斷預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物。

    研究表明,COL1A1和COL5A2作為膠原蛋白的組成成分在胃癌組織中均高表達(dá),對(duì)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲有促進(jìn)作用[8-9]。BGN是一種富含亮氨酸的小蛋白,其高表達(dá)與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管侵犯、復(fù)發(fā)率及較差的生存期密切相關(guān)[10]。SPARC是一種糖蛋白,在胃癌中高表達(dá),與預(yù)后不良顯著相關(guān)[11]。然而,有研究顯示SPARC在胃癌中具有抑癌作用,抑制胃癌血管生成、增殖及遷移、侵襲及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力[12]?;|(zhì)金屬蛋白酶是細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白水解酶,除了在侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要作用,還參與細(xì)胞的生長、增殖、凋亡及腫瘤血管生成和免疫逃逸的調(diào)節(jié)[13]。MMP14是基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員,可通過調(diào)控細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移和凋亡調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞的生長[14]。LOX是一種銅依賴性單胺氧化酶,在彌漫型胃癌細(xì)胞中高表達(dá),與胃癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)[15]。THBS2是血小板反應(yīng)蛋白家族成員,在胃癌組織中表達(dá)上調(diào),其表達(dá)下調(diào)對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲有抑制作用,對(duì)凋亡有促進(jìn)作用[16]。TIMP-1是一種金屬蛋白酶抑制劑,據(jù)報(bào)道TIMP-1陽性患者的復(fù)發(fā)率明顯高于陰性患者,并且是不良預(yù)后的標(biāo)志物[17]。SPP1(也稱骨橋蛋白)是一種基質(zhì)糖蛋白,在胃癌組織中顯著高表達(dá),其在血漿中的表達(dá)水平與胃癌向鄰近組織的浸潤和轉(zhuǎn)移,以及預(yù)后不良密切相關(guān)[18]。VCAN是一種蛋白多糖,參與細(xì)胞外基質(zhì)的組成,其高表達(dá)與晚期TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度和腫瘤分級(jí)相關(guān),對(duì)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲具有促進(jìn)作用[19]。因此,我們篩選出的10個(gè)hub基因均與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

    綜上所述,本研究應(yīng)用生物信息學(xué)方法從胃癌基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)集中篩選的10個(gè)hub基因COL1A1、BGN、SPARC、MMP14、LOX、THBS2、TIMP1、SPP1、VCAN、COL5A2在胃癌中高表達(dá),與胃癌的生物學(xué)行為及不良預(yù)后密切相關(guān),可能是胃癌診斷和預(yù)后不良的潛在生物標(biāo)志物。

    猜你喜歡
    胞外基質(zhì)膠原蛋白標(biāo)志物
    脫細(xì)胞外基質(zhì)制備與應(yīng)用的研究現(xiàn)狀
    關(guān)于經(jīng)絡(luò)是一種細(xì)胞外基質(zhì)通道的假說
    想不到你是這樣的膠原蛋白
    Coco薇(2017年12期)2018-01-03 21:27:09
    美國肉參膠原蛋白肽對(duì)H2O2損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用
    膿毒癥早期診斷標(biāo)志物的回顧及研究進(jìn)展
    膠原蛋白在食品中的應(yīng)用現(xiàn)狀及其發(fā)展前景分析
    梭魚骨膠原蛋白的提取及其性質(zhì)
    冠狀動(dòng)脈疾病的生物學(xué)標(biāo)志物
    腫瘤標(biāo)志物在消化系統(tǒng)腫瘤早期診斷中的應(yīng)用
    MR-proANP:一種新型心力衰竭診斷標(biāo)志物
    深夜a级毛片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 麻豆成人av视频| 高清黄色对白视频在线免费看 | 激情 狠狠 欧美| 欧美成人一区二区免费高清观看| 免费看av在线观看网站| 国产精品国产av在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产日韩欧美在线精品| 黄色欧美视频在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 国产在线男女| 国产精品99久久久久久久久| 日本免费在线观看一区| 国产有黄有色有爽视频| 人体艺术视频欧美日本| 最近中文字幕2019免费版| 免费观看av网站的网址| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲av欧美aⅴ国产| 日本与韩国留学比较| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲精品视频女| 一级片'在线观看视频| 国产精品久久久久成人av| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 欧美最新免费一区二区三区| 日日撸夜夜添| 好男人视频免费观看在线| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产伦理片在线播放av一区| 久久热精品热| 777米奇影视久久| 国产在视频线精品| 乱码一卡2卡4卡精品| 欧美最新免费一区二区三区| 我的女老师完整版在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 亚洲精品一区蜜桃| 熟女电影av网| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 晚上一个人看的免费电影| 久久久久久久久久成人| 国产一区二区在线观看日韩| 一级二级三级毛片免费看| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲丝袜综合中文字幕| 中文天堂在线官网| 亚洲怡红院男人天堂| 国产成人91sexporn| 亚洲av福利一区| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产成人精品婷婷| 亚洲伊人久久精品综合| 国产熟女欧美一区二区| 青春草视频在线免费观看| 色视频www国产| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 亚洲色图av天堂| av.在线天堂| 国产色爽女视频免费观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 永久免费av网站大全| 一区二区三区精品91| 草草在线视频免费看| 黑人高潮一二区| 国产高清国产精品国产三级 | 亚洲精品日韩av片在线观看| 美女福利国产在线 | 国产精品偷伦视频观看了| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲最大成人中文| 各种免费的搞黄视频| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产有黄有色有爽视频| 国产亚洲最大av| 成年免费大片在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲成人手机| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲精品国产av蜜桃| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产成人免费观看mmmm| 狂野欧美激情性bbbbbb| 久久久久国产网址| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 五月天丁香电影| 赤兔流量卡办理| 欧美精品一区二区免费开放| 国产成人a∨麻豆精品| av在线app专区| 制服丝袜香蕉在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久热久热在线精品观看| 熟女电影av网| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 在线免费十八禁| 99热6这里只有精品| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲无线观看免费| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 中国国产av一级| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲丝袜综合中文字幕| 大陆偷拍与自拍| 欧美bdsm另类| 一级毛片久久久久久久久女| 国产淫片久久久久久久久| 久久久久网色| 国产精品嫩草影院av在线观看| 久久午夜福利片| 免费观看无遮挡的男女| 青春草亚洲视频在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 国产男人的电影天堂91| 国产精品一及| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 在线观看免费日韩欧美大片 | 色视频在线一区二区三区| 少妇人妻 视频| av国产免费在线观看| 中文字幕av成人在线电影| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 18禁动态无遮挡网站| 干丝袜人妻中文字幕| 欧美成人精品欧美一级黄| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲人与动物交配视频| 国产精品久久久久久av不卡| 国产黄色视频一区二区在线观看| 香蕉精品网在线| 男人添女人高潮全过程视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 在线观看免费日韩欧美大片 | 亚洲人成网站在线观看播放| 成人免费观看视频高清| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 精品一区二区免费观看| 久久影院123| 一本久久精品| 免费看日本二区| 国产成人a区在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 免费av中文字幕在线| 国产在视频线精品| 亚洲人成网站在线播| 国产在线男女| 色网站视频免费| 26uuu在线亚洲综合色| 最近手机中文字幕大全| 免费看不卡的av| 少妇被粗大猛烈的视频| a 毛片基地| 亚洲久久久国产精品| 日韩制服骚丝袜av| 人妻系列 视频| 黄色一级大片看看| 97在线视频观看| 特大巨黑吊av在线直播| 1000部很黄的大片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 一区二区三区乱码不卡18| 国产 精品1| 国产精品嫩草影院av在线观看| 女性被躁到高潮视频| 久久99热6这里只有精品| 国产成人午夜福利电影在线观看| 男的添女的下面高潮视频| 精品久久久久久久久亚洲| 国国产精品蜜臀av免费| 91久久精品国产一区二区成人| 极品教师在线视频| 女性生殖器流出的白浆| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲成人手机| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 三级经典国产精品| 欧美bdsm另类| 久久韩国三级中文字幕| 啦啦啦啦在线视频资源| 观看免费一级毛片| 色网站视频免费| 色吧在线观看| 五月天丁香电影| 成人综合一区亚洲| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲国产欧美在线一区| 丝袜脚勾引网站| 联通29元200g的流量卡| 精品人妻偷拍中文字幕| 日韩中文字幕视频在线看片 | 少妇 在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 黄色配什么色好看| 日韩av在线免费看完整版不卡| 日韩精品有码人妻一区| 激情 狠狠 欧美| 在线观看免费高清a一片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 久久韩国三级中文字幕| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 日本欧美视频一区| 秋霞伦理黄片| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久久欧美国产精品| 中国美白少妇内射xxxbb| 免费看光身美女| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 这个男人来自地球电影免费观看 | 中文字幕久久专区| 精品一区二区免费观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 男女边摸边吃奶| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产成人freesex在线| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 91精品国产九色| 国产免费一级a男人的天堂| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 99久久精品一区二区三区| 少妇人妻 视频| 人妻系列 视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 视频中文字幕在线观看| 99久久精品一区二区三区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 三级国产精品片| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国精品久久久久久国模美| 秋霞伦理黄片| 成人国产av品久久久| 91精品国产国语对白视频| 久久久精品免费免费高清| 亚洲av成人精品一二三区| 人妻系列 视频| 欧美xxⅹ黑人| 日韩免费高清中文字幕av| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 涩涩av久久男人的天堂| 国产伦精品一区二区三区视频9| a级毛色黄片| 国产成人精品久久久久久| 一区二区三区四区激情视频| 国产伦在线观看视频一区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 国产免费一级a男人的天堂| 国产精品久久久久久av不卡| 黄色配什么色好看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 联通29元200g的流量卡| 精品午夜福利在线看| 免费黄网站久久成人精品| 久久久亚洲精品成人影院| 一区二区三区乱码不卡18| 国产成人freesex在线| 男女国产视频网站| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 高清av免费在线| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产美女午夜福利| 欧美精品一区二区大全| 成年人午夜在线观看视频| 久久国产精品大桥未久av | 国产v大片淫在线免费观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产精品一区www在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 午夜老司机福利剧场| 亚洲国产日韩一区二区| 国产综合精华液| 国产色婷婷99| 中国三级夫妇交换| 精品人妻一区二区三区麻豆| 精品一区二区免费观看| 伊人久久国产一区二区| 99久久精品热视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产真实伦视频高清在线观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 男女啪啪激烈高潮av片| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 寂寞人妻少妇视频99o| 六月丁香七月| 欧美最新免费一区二区三区| 好男人视频免费观看在线| 看免费成人av毛片| 国产高清有码在线观看视频| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲国产欧美人成| 精品一品国产午夜福利视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 美女中出高潮动态图| 色吧在线观看| 丝袜喷水一区| 我的女老师完整版在线观看| 如何舔出高潮| 街头女战士在线观看网站| 水蜜桃什么品种好| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产黄色视频一区二区在线观看| 男女边摸边吃奶| 97热精品久久久久久| 男人添女人高潮全过程视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久久久久久久久久丰满| 黄色一级大片看看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲色图av天堂| 国产一区二区三区av在线| 美女福利国产在线 | 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲国产精品一区三区| 老熟女久久久| 亚洲精品aⅴ在线观看| 中国三级夫妇交换| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产av码专区亚洲av| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产精品一二三区在线看| 伦理电影大哥的女人| 亚洲国产欧美人成| 大香蕉97超碰在线| 亚洲av成人精品一区久久| 三级国产精品欧美在线观看| 舔av片在线| 日本黄色片子视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 国产久久久一区二区三区| 全区人妻精品视频| 午夜激情久久久久久久| 麻豆乱淫一区二区| 成人亚洲精品一区在线观看 | 欧美xxxx性猛交bbbb| 高清视频免费观看一区二区| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产在线男女| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日韩亚洲欧美综合| 国产精品99久久久久久久久| www.色视频.com| 免费黄色在线免费观看| 久久鲁丝午夜福利片| 一级片'在线观看视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 成人黄色视频免费在线看| 一级av片app| 亚洲熟女精品中文字幕| 熟妇人妻不卡中文字幕| 日本vs欧美在线观看视频 | 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 夜夜骑夜夜射夜夜干| av.在线天堂| 国内精品宾馆在线| 午夜福利高清视频| 免费黄色在线免费观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产精品伦人一区二区| 最新中文字幕久久久久| 极品少妇高潮喷水抽搐| av又黄又爽大尺度在线免费看| 欧美97在线视频| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美人与善性xxx| 免费观看性生交大片5| www.av在线官网国产| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 成人亚洲精品一区在线观看 | 国产欧美亚洲国产| 97热精品久久久久久| 色网站视频免费| 高清欧美精品videossex| 身体一侧抽搐| 秋霞在线观看毛片| 日本午夜av视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 97在线人人人人妻| 中文精品一卡2卡3卡4更新| h视频一区二区三区| 国产视频首页在线观看| 十八禁网站网址无遮挡 | 国产爽快片一区二区三区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 97在线人人人人妻| 高清av免费在线| 人人妻人人看人人澡| 一级毛片久久久久久久久女| 久久久久久久久久久免费av| 日本一二三区视频观看| 中文字幕av成人在线电影| 三级国产精品片| 日本午夜av视频| av线在线观看网站| xxx大片免费视频| 人妻 亚洲 视频| 成人影院久久| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 午夜福利影视在线免费观看| 22中文网久久字幕| 免费看日本二区| 一区二区av电影网| 亚洲第一av免费看| 国产视频首页在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲欧美精品自产自拍| 少妇熟女欧美另类| 久久久久精品久久久久真实原创| 少妇精品久久久久久久| 欧美国产精品一级二级三级 | 日本午夜av视频| 99久久人妻综合| 97超视频在线观看视频| 另类亚洲欧美激情| 国产精品精品国产色婷婷| 九草在线视频观看| 我要看黄色一级片免费的| 午夜福利高清视频| 国产v大片淫在线免费观看| 日本wwww免费看| 精品久久久噜噜| 成人影院久久| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲欧美清纯卡通| 国产黄色免费在线视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 我的女老师完整版在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产av国产精品国产| 插逼视频在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 国产乱人偷精品视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 蜜桃在线观看..| 亚洲,一卡二卡三卡| 高清午夜精品一区二区三区| 久久精品夜色国产| 免费黄频网站在线观看国产| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 秋霞伦理黄片| 亚洲欧洲日产国产| tube8黄色片| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 身体一侧抽搐| 简卡轻食公司| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产高清国产精品国产三级 | 欧美精品国产亚洲| 中文字幕久久专区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 99热这里只有是精品50| 日韩制服骚丝袜av| 久久精品久久久久久久性| 交换朋友夫妻互换小说| 精品久久久精品久久久| 黄色日韩在线| 美女内射精品一级片tv| 成人免费观看视频高清| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久鲁丝午夜福利片| 久久久久久久精品精品| 内射极品少妇av片p| 18禁在线播放成人免费| 91精品一卡2卡3卡4卡| 日韩强制内射视频| 国产精品人妻久久久久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久精品免费免费高清| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 在线观看免费视频网站a站| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 国产成人91sexporn| 丝瓜视频免费看黄片| 2018国产大陆天天弄谢| 久久精品国产亚洲av涩爱| 日本一二三区视频观看| 亚洲精品,欧美精品| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲国产欧美人成| 亚洲中文av在线| 在线免费十八禁| 婷婷色综合大香蕉| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 色视频在线一区二区三区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲国产av新网站| 欧美高清成人免费视频www| 美女福利国产在线 | 亚洲精品国产av成人精品| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产在线一区二区三区精| 免费av中文字幕在线| 女人久久www免费人成看片| 下体分泌物呈黄色| 26uuu在线亚洲综合色| 精品视频人人做人人爽| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲精品国产av蜜桃| 一级a做视频免费观看| www.av在线官网国产| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 高清欧美精品videossex| 国产黄频视频在线观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 青春草亚洲视频在线观看| 熟女电影av网| 亚洲av综合色区一区| 亚洲自偷自拍三级| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产片特级美女逼逼视频| av国产免费在线观看| 国产淫语在线视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲av在线观看美女高潮| 搡老乐熟女国产| 最近中文字幕2019免费版| 久久99热6这里只有精品| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久亚洲国产成人精品v| 春色校园在线视频观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲三级黄色毛片| 天堂8中文在线网| 性高湖久久久久久久久免费观看| 插阴视频在线观看视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 超碰97精品在线观看| 亚洲国产av新网站| 日韩电影二区| 舔av片在线| 伦理电影大哥的女人| 2021少妇久久久久久久久久久| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲成人一二三区av| 久久久久久久久大av| 日韩视频在线欧美| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产一区二区三区综合在线观看 | 特大巨黑吊av在线直播| 99久久精品热视频| 国产日韩欧美在线精品| 97在线视频观看| 十八禁网站网址无遮挡 | 亚洲国产色片| 亚洲精品视频女| 极品教师在线视频| 亚洲综合色惰| 久久婷婷青草| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产免费一级a男人的天堂| 久久久久性生活片| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产精品欧美亚洲77777| 少妇的逼水好多| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 九九在线视频观看精品| 国产成人aa在线观看| 国产一区二区三区av在线| 99久久人妻综合| 少妇的逼好多水| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 午夜精品国产一区二区电影| 十分钟在线观看高清视频www | 欧美高清性xxxxhd video| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲在久久综合| 一本一本综合久久| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 日本午夜av视频| av在线老鸭窝| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 欧美区成人在线视频| 国产中年淑女户外野战色| 久久久成人免费电影| 久久久欧美国产精品|