2021年四川省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對結(jié)果分析

鄧 飛,陳 斌,邵 靚,邱明雙,裴超信,陳弟詩,李 麗,周莉媛

(四川省動物疫病預(yù)防控制中心,成都 武侯 610041)

獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室的有效建設(shè),能為我國動物疫情防控工作提供重要的技術(shù)支持[1]。為保證實驗室檢測結(jié)果準(zhǔn)確、可靠,需對實驗室檢測能力進行評估,即能力驗證。開展實驗室間檢測能力比對試驗是當(dāng)前獸醫(yī)實驗室常用的能力驗證方法之一[2],通過實驗室間比對,可以發(fā)現(xiàn)檢測過程中存在的隱患,促進檢測能力提升。按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧獸醫(yī)局和四川省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳對該項工作的要求[3,4],四川省動物疫病預(yù)防控制中心于2020年9月組織開展了全省市、縣兩級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作。通過比對,對我省市、縣兩級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室的檢測能力進行了評估,比對結(jié)果真實客觀地反映出部分實驗室存在的問題,對存在問題的實驗室,四川省動物疫病預(yù)防控制中心指導(dǎo)其及時進行整改,保證了獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測質(zhì)量的提高,達到了預(yù)期的比對效果和目的。

1 材料與方法

1.1 比對項目設(shè)計 市級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室共設(shè)置3個檢測比對項目,包括非洲豬瘟病毒核酸檢測、口蹄疫病毒O型抗體檢測、禽流感病毒H5亞型抗體檢測?？h級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室比對項目包括非洲豬瘟病毒核酸檢測、口蹄疫病毒O型抗體檢測、禽流感病毒H5亞型抗體檢測、禽流感病毒H7亞型核酸檢測、豬瘟抗體檢測、布魯氏菌病抗體檢測、包蟲病抗原檢測,由各市動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)自行確定不少于3個檢測項目,對轄區(qū)內(nèi)縣級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室開展比對。

1.2 比對盲樣和試劑 市級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室比對項目中非洲豬瘟病毒核酸檢測盲樣和試劑由青島立見生物科技有限公司提供;口蹄疫病毒O型抗體檢測盲樣和試劑由蘭州獸研生物科技有限公司提供;禽流感病毒 H5亞型抗體檢測盲樣由四川省動物疫病預(yù)防控制中心制備,試劑由哈爾濱國生生物科技股份有限公司提供。各項目針對每個比對實驗室設(shè)置6份盲樣,各項目提供的檢測試劑為同一批次,盲樣和試劑經(jīng)四川省動物疫病預(yù)防控制中心測試后統(tǒng)一發(fā)放。

縣級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室比對盲樣和試劑由各市動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)自行準(zhǔn)備和發(fā)放,各比對項目針對每個比對實驗室盲樣設(shè)置不少于5份,各項目試劑為同一批次。

1.3 比對方法 所有比對項目均采用相應(yīng)的國家現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的檢測方法進行,包括實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time fluorescent quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction,qRT-PCR)、實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、血凝和血凝抑制試驗(Hemagglutination test/Hemagglutination inhibition test,HA/HI)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)(表1)。

表1 2021年四川省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對項目

1.4 比對結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 口蹄疫病毒O型抗體檢測、禽流感病毒H5亞型抗體檢測項目的判定標(biāo)準(zhǔn)為:盲樣檢測結(jié)果與參考值相差不超過1個滴度,判為正確,否則判為錯誤;其余項目判定標(biāo)準(zhǔn)為:盲樣檢測結(jié)果與參考值完全相同判為正確,否則判為錯誤。

2 結(jié)果

2.1 市級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室比對結(jié)果 全省21個市級系統(tǒng)獸醫(yī)實驗室參與了檢測能力比對,結(jié)果顯示,非洲豬瘟病毒核酸檢測項目、口蹄疫病毒O型抗體檢測項目和禽流感病毒H5亞型抗體檢測項目結(jié)果正確率分別為100%、92.06%和93.65%;其中,口蹄疫病毒O型抗體檢測項目中,有1個實驗室有4份盲樣檢測結(jié)果錯誤,1個實驗室6份盲樣檢測結(jié)果均錯誤;禽流感病毒H5 亞型抗體檢測項目中,有2個實驗室各有2份盲樣檢測結(jié)果錯誤,另有1個實驗室有4份盲樣檢測結(jié)果錯誤(表2)。

表2 市級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室比對結(jié)果

2.2 縣級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室比對結(jié)果 全省共148個縣級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室參與比對,各實驗室比對項目不完全相同。禽流感病毒H7亞型核酸檢測和布魯氏菌抗體檢測項目結(jié)果正確率均為100%,非洲豬瘟病毒核酸檢測、口蹄疫病毒O型抗體檢測、包蟲病抗原檢測、豬瘟抗體檢測、禽流感病毒H5亞型抗體檢測項目結(jié)果正確率依次為99.19%、98.11%、97.50%、96.99%、96.68%;其中,非洲豬瘟病毒核酸檢測項目中,有1個實驗室2份盲樣檢測結(jié)果錯誤,4個實驗室各有1份盲樣檢測結(jié)果錯誤;口蹄疫病毒O型抗體檢測項目中,有1個實驗室2份盲樣檢測結(jié)果錯誤,8個實驗室各有1份盲樣檢測結(jié)果錯誤;包蟲病抗原檢測項目中,有1個實驗室1份盲樣檢測結(jié)果錯誤;豬瘟抗體檢測項目中,有1個實驗室2份盲樣檢測結(jié)果錯誤,8個實驗室各有1份盲樣檢測結(jié)果錯誤;禽流感病毒H5 亞型抗體檢測項目中,有1個實驗室3份盲樣檢測結(jié)果錯誤,6個實驗室各有2份盲樣檢測結(jié)果錯誤,10個實驗室各有1份盲樣檢測結(jié)果錯誤(表3)。

表3 縣級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室比對結(jié)果

3 分析

盲樣檢測結(jié)果錯誤最多的項目為禽流感病毒H5亞型抗體檢測,市級有3個實驗室共8份盲樣檢測結(jié)果錯誤,縣級有17個實驗室共25份盲樣檢測結(jié)果錯誤,可能原因有:個別實驗室未嚴(yán)格按照國家現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)要求進行檢測,使用生理鹽水代替PBS緩沖液;1%紅細(xì)胞配置過程中紅細(xì)胞破裂,未嚴(yán)格量取沉積紅細(xì)胞體積等導(dǎo)致紅細(xì)胞懸液配置不準(zhǔn)確;4單位抗原配置后未進行抗原回溯,抗原效價測定不準(zhǔn)確,影響HI結(jié)果;結(jié)果判定中主觀因素影響。

口蹄疫病毒O型抗體檢測項目中,市級有2個實驗室共10份盲樣檢測結(jié)果錯誤,縣級有9個實驗室共10份盲樣檢測結(jié)果錯誤;豬瘟抗體檢測項目也有9個縣級實驗室共10份盲樣檢測結(jié)果錯誤,原因可能有:口蹄疫病毒O型抗體使用固相競爭ELISA進行檢測,部分實驗室檢測人員對該方法不熟悉,操作失誤或結(jié)果判定錯誤;酶標(biāo)儀未定期檢定,影響檢測結(jié)果的讀取和判定。

非洲豬瘟病毒核酸檢測項目市級實驗室正確率均為100%,這與近幾年各地對非洲豬瘟的重視和檢測強度增加分不開;縣級有5個實驗室共6份盲樣檢測結(jié)果錯誤,可能原因有:縣級實驗室中部分實驗室無自動核酸提取設(shè)備,手動提取影響結(jié)果穩(wěn)定性;部分實驗室的分子生物學(xué)檢測室為新建,檢測人員操作不夠熟練;檢測過程中存在污染等,導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差。

4 討論

實驗室檢測能力比對就像是實驗室質(zhì)量體系的“體檢醫(yī)師”,通過比對能檢查出實驗室質(zhì)量體系在運行中存在的問題,加以整改并制定改進和預(yù)防措施,可顯著降低實驗室檢測結(jié)果的偏離率。本次四川省獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對結(jié)果,真實客觀地反映出一些實驗室存在的問題:一是人員方面,部分實驗室專職人員不足,尤其是縣級實驗室人員崗位調(diào)動頻繁,新進人員未得到有效的培訓(xùn),操作不熟練,大大增加檢測錯誤的概率;二是設(shè)施設(shè)備方面,個別實驗室設(shè)施達不到生物安全要求,缺少設(shè)備或部分設(shè)備陳舊老化,未定期檢定或校準(zhǔn),影響檢測結(jié)果。

獸醫(yī)實驗室是動物疫病防控體系的重要組成部分,獸醫(yī)實驗室檢測能力的提升,對于充分發(fā)揮其在動物疫病防控工作中的技術(shù)支撐作用具有重要意義。各級獸醫(yī)主管部門應(yīng)高度重視實驗室建設(shè)工作,穩(wěn)定獸醫(yī)實驗室人員隊伍,強化實驗室能力建設(shè),加強獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室在基礎(chǔ)設(shè)施設(shè)備、質(zhì)量管理體系、生物安全管理體系方面的建設(shè),強化實驗室專項資金保障力度,保證獸醫(yī)實驗室有序、有效運行。