吳茂春 劉 敏
(贛州市會(huì)昌縣人民醫(yī)院,江西 會(huì)昌 342600)
甲狀腺腫瘤發(fā)病率在世界范圍內(nèi)居第9位,在中國(guó)腫瘤人群中發(fā)病率居第7位[1]。來自中國(guó)的腫瘤數(shù)據(jù)顯示,2015年全國(guó)范圍內(nèi)新發(fā)惡性腫瘤392.9萬例,其中TC為20.1萬例,年齡標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率為10.44/10萬,呈明顯上升趨勢(shì)[2]。在中國(guó)女性人群中,甲狀腺腫瘤的發(fā)病率在15~19歲時(shí)快速上升,并在45~54歲年齡階段達(dá)到高峰[3]。近年來,甲狀腺腫瘤在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率快速增長(zhǎng),其中惡性腫瘤中甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)占比最大和增長(zhǎng)最快,女性甲狀腺腫瘤發(fā)病率明顯高于男性,且發(fā)病年齡存在年輕化趨勢(shì)[4]。2018年,國(guó)家統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示全年新發(fā)甲狀腺癌(thyroid carcinoma,TC)為567 233例,約占新發(fā)癌癥的3.1%[5]。甲狀腺是人體內(nèi)分泌器官之一,受多種因素影響,甲狀腺功能出現(xiàn)異常的概率較高,可引起甲狀腺炎、甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺功能減退等[6]。當(dāng)前臨床上可通過血清學(xué)檢測(cè)分析甲狀腺功能相關(guān)標(biāo)志物水平,據(jù)此判斷檢測(cè)者甲狀腺功能狀態(tài)[7]?;瘜W(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法技術(shù)近年來得到發(fā)展,在諸多疾病診斷中發(fā)揮著重要的作用。本研究旨在探究該技術(shù)應(yīng)用于甲狀腺功能生化檢驗(yàn)中效果,拓展甲狀腺功能檢測(cè)方法。
1.1 一般資料 選取2021年11月至2022年12月于我院就診的甲狀腺腫瘤患者94例為研究對(duì)象,所有患者均采用放射性免疫檢驗(yàn)法技術(shù)檢驗(yàn)、化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法技術(shù)檢驗(yàn)?;颊叻植记闆r,男患者11例,女患者83例,年齡23~61歲,平均年齡(38.69±2.78)歲?;疾r(shí)間最長(zhǎng)5年,最短6個(gè)月,平均患病時(shí)間(2.56±1.42)年。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。
1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):①所有患者自愿入組,對(duì)本研究知情同意。②年齡均在61歲以下。③臨床資料均完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①語(yǔ)言表達(dá)不清,且患有精神類疾病的患者。②對(duì)本次研究依從性不高的患者。③同時(shí)參與其余研究的患者。④妊娠期、哺乳期女性。⑤患有心腦腎等重大器官性疾病的患者。⑥患有惡性腫瘤性疾病的患者。
1.3 方法 ①采血:所有患者取晨起空腹靜脈血3 mL,采血后將血液標(biāo)本放置在室溫(18~25 ℃)下,后進(jìn)行離心處理(離心半徑7.95 cm,3 000 r/min,10 min),分離血清備檢。②放射性免疫檢驗(yàn)法技術(shù)檢驗(yàn):選用GC-1200型智能放免γ測(cè)量?jī)x,利用伯樂提供的質(zhì)控品在檢測(cè)前進(jìn)行質(zhì)控,按照說明書進(jìn)行血清標(biāo)本測(cè)定。③化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法技術(shù)檢驗(yàn):儀器選擇免疫分析儀及配套化學(xué)發(fā)光試劑盒(深圳新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司,型號(hào)MAGLUMI-4000型),嚴(yán)格按照使用說明書完成檢驗(yàn),檢驗(yàn)時(shí)間不低于4 h。
1.4 觀察指標(biāo) 觀察放射性免疫檢驗(yàn)法技術(shù)檢驗(yàn)、化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法技術(shù)檢驗(yàn)甲狀腺功能檢查結(jié)果的差異,測(cè)定抗甲狀腺過氧化物酶抗體(anti thyroid peroxidase antibody,TPOAB)、抗甲狀腺球蛋白抗體(anti-thyroglobulin antibodies,TGAB)、甲狀腺激素(thyroid hormone,TSH)、游離三碘甲狀腺原氨酸(free triiodothyronine,F(xiàn)T3)、游離四碘甲狀腺原氨酸(free tetraiodothyronine,F(xiàn)T4)水平,統(tǒng)計(jì)兩種方式甲狀腺功能異常檢出率。以病理診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)分析兩種檢測(cè)方法的診斷效能。化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法檢測(cè)時(shí)甲狀腺球蛋白正常范圍為11.45~20.25 ng/mL;放射性免疫檢驗(yàn)法檢測(cè)時(shí)甲狀腺球蛋白正常范圍為0.73~84 ng/mL。診斷準(zhǔn)確度=真陽(yáng)性與真陰性例數(shù)之和/總例數(shù)×100%;敏感度=真陽(yáng)性例數(shù)/真陽(yáng)性與假陰性例數(shù)之和×100%;特異度=真陰性例數(shù)/真陰性與假陽(yáng)性例數(shù)之和×100%。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 選擇SPSS 24.0軟件為統(tǒng)計(jì)工具。符合正態(tài)分布的TPOAB、FT4、TSH等計(jì)量資料以表示、組間對(duì)比行t檢驗(yàn)。甲狀腺功能異常檢出率、診斷準(zhǔn)確度、靈敏度及特異度等計(jì)數(shù)資料以n(%)表示、組間對(duì)比行χ2檢驗(yàn);P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 兩種測(cè)定方式甲狀腺功能檢查結(jié)果比較 放射性免疫檢驗(yàn)法、化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法兩種方式比較TPOAB、TGAB水平,組間數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法TSH、FT3、FT4水平高于放射性免疫檢驗(yàn)法,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。
表1 兩種測(cè)定方式甲狀腺功能檢查結(jié)果比較()
表1 兩種測(cè)定方式甲狀腺功能檢查結(jié)果比較()
2.2 兩種方法異常檢出率對(duì)比 化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法甲狀腺功能異常檢出率98.94%(93/94),放射性免疫檢驗(yàn)法甲狀腺功能異常檢出率91.49%(86/94),兩種方式比較,化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法更高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.718,P=0.017)。
2.3 兩種診斷方式診斷效能 與金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比,放射性免疫檢驗(yàn)法檢驗(yàn)精準(zhǔn)度為75.53%,檢驗(yàn)靈敏度為70.83%,檢驗(yàn)特異度為78.57%;化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)精準(zhǔn)度為94.68%,檢驗(yàn)靈敏度為91.67%,檢驗(yàn)特異度為97.62%。化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法對(duì)于甲狀腺腫瘤的診斷準(zhǔn)確度、靈敏度及特異度均較放射性免疫檢驗(yàn)法高(P<0.05)。
甲狀腺疾病是內(nèi)分泌科臨床常見病,臨床發(fā)病率較高,女性多于男性,在發(fā)病初期的臨床表現(xiàn)不明顯,極易被忽視,一旦確診,病情較重,嚴(yán)重影響患者正常生活與身體健康。因此,及早診斷與治療對(duì)甲狀腺疾病患者而言顯得尤為重要。甲狀腺作為分泌器官,在維持正常內(nèi)分泌代謝功能、妊娠等方面發(fā)揮著積極的作用,當(dāng)甲狀腺功能出現(xiàn)異常時(shí),會(huì)增加對(duì)個(gè)體的損害,還可能引起其他器官病變。甲狀腺癌常見的癥狀是頸部有腫塊,且腫塊在頸部的生長(zhǎng)速度比較快[8]。頸部包塊會(huì)隨著吞咽動(dòng)作上下移動(dòng),頸部淋巴結(jié)也會(huì)腫大。部分患者會(huì)出現(xiàn)呼吸和吞咽比較困難或者持續(xù)喘息、聲音沙啞等癥狀,或出現(xiàn)頻繁咳嗽。也有部分患者沒有明顯癥狀,只有在常規(guī)檢查時(shí)會(huì)檢查出腫塊或結(jié)節(jié)。在發(fā)病中期出現(xiàn)的癥狀是進(jìn)食有哽噎感、吞咽不適、胸口憋悶不適,主要是腫瘤壓迫所致。此外,還會(huì)發(fā)生腫瘤侵犯的改變,如聲音沙啞,音調(diào)也發(fā)生改變。某些特殊的患者會(huì)出現(xiàn)手腳麻木和抽搐的癥狀。部分患者會(huì)出現(xiàn)甲狀腺癌癥綜合征,癥狀表現(xiàn)在腹瀉、消瘦、心悸、面部潮紅等。在發(fā)病晚期的癥狀是頸部包塊較硬,聲嘶嗆咳,甚至呼吸窘迫、出血等威脅生命的癥狀,且癌細(xì)胞會(huì)轉(zhuǎn)移到身體其他器官,出現(xiàn)相應(yīng)癥狀。甲狀腺癌癥是在生活常見的一種惡性腫瘤,但是惡性程度不高,治愈率比較高,患者的生存期相對(duì)其他惡性腫瘤較長(zhǎng)。甲狀腺癌在發(fā)病早期進(jìn)行確診,且早治療是可以治愈的。甲狀腺癌表現(xiàn)的形狀是很不規(guī)律的,邊界很模糊,結(jié)節(jié)的內(nèi)部回聲沒有規(guī)律,不均勻,出現(xiàn)粗大或微型鈣化的情況。甲狀腺腫瘤發(fā)病原因[9]:①放射線照射頸部會(huì)引起甲狀腺癌的發(fā)生,特別是兒童、嬰兒對(duì)放射線尤為敏感。②碘的過量食用或缺乏,造成甲狀腺功能紊亂,分泌過多的甲狀腺素,從而引發(fā)甲狀腺癌變。③甲狀腺囊腫、腺瘤、良性腫瘤手術(shù)后,在做病理檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)了一種隱性腫瘤,可能與甲狀腺癌有關(guān),有待醫(yī)學(xué)進(jìn)一步證實(shí)。④受遺傳基因的影響,患有甲狀腺癌家族的發(fā)病率明顯高于普通家族。該疾病為顯性的染色體遺傳疾病。⑤甲狀腺癌的發(fā)生很有可能與致癌基因的激活、抑癌基因的失活、突變有關(guān)系,一般會(huì)引發(fā)甲狀腺癌。
早期甲狀腺腫瘤一般不會(huì)有明顯的征兆,診斷較為困難。隨著近年來大規(guī)模健康體檢工作的開展,甲狀腺結(jié)節(jié)可通過頸部超聲檢測(cè)。目前,CT、MRI、超聲等診斷方法均能達(dá)到較好的診斷效果,而MRI、CT的診斷準(zhǔn)確率較高,但由于成本較高且難以重復(fù)使用,因此不能被患者所接受[10]。近年的臨床研究發(fā)現(xiàn),生化免疫檢驗(yàn)應(yīng)用在甲狀腺腫瘤診斷中有著較大優(yōu)勢(shì),化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法技術(shù)為其中一種有效方法,該方法可以借助化學(xué)發(fā)光劑,給予抗原和抗體標(biāo)記,并通過磁場(chǎng)分離法開展準(zhǔn)確分析與沉淀,從而明確診斷結(jié)果[11]。該方法可以有效彌補(bǔ)放射免疫測(cè)量方法的不足,在腫瘤標(biāo)志物以及病毒等監(jiān)測(cè)方面有著較高準(zhǔn)確度。通過分析血清中TPOAB、TGAB、TSH、FT3、FT4等水平,可幫助臨床醫(yī)師判斷患者的甲狀腺功能。以往測(cè)定甲狀腺功能采用放射性免疫技術(shù),此種方法通過放射性核素標(biāo)記抗體或抗原結(jié)合被測(cè)抗原或抗體形成抗原體復(fù)合物,測(cè)定抗原抗體復(fù)合物濃度,了解甲狀腺功能受損情況。化學(xué)發(fā)光是以發(fā)光物質(zhì)代替放射性核素,在反應(yīng)體系中發(fā)光物質(zhì)在堿性介質(zhì)中氧化時(shí)釋放大量自由能,產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體,該激發(fā)態(tài)的中間體由最低振動(dòng)能級(jí)回到穩(wěn)定的基態(tài),各個(gè)振動(dòng)能級(jí)時(shí)產(chǎn)生輻射,同時(shí)產(chǎn)生能量,多余的能量即為發(fā)射光子,從而產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象。利用發(fā)光信號(hào)的測(cè)量?jī)x器,分析接收光量子的產(chǎn)量,通過計(jì)算機(jī)系統(tǒng)轉(zhuǎn)換成被測(cè)甲狀腺物質(zhì)的濃度單位?;瘜W(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法技術(shù)較之放射性免疫檢驗(yàn)法技術(shù)檢驗(yàn)靈敏度高、線性范圍寬,無放射性污染,且能提高甲狀腺功能異常的檢出率。在自然環(huán)境下,化學(xué)發(fā)光原理進(jìn)行檢驗(yàn),可靈敏檢驗(yàn)出患者的病因。本研究發(fā)現(xiàn),化學(xué)發(fā)光免疫方法的失誤率不高,遠(yuǎn)低于放射免疫方法,靈敏度較高,不僅能夠較好地對(duì)甲狀腺腫瘤疾病進(jìn)行檢測(cè),還可以使用到其余生化科學(xué)醫(yī)療技術(shù)中,對(duì)提升醫(yī)療水平具有重要作用,對(duì)免疫學(xué)的發(fā)展前景,更是有著不可估量的意義。總之,化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法方法,在生化檢驗(yàn)中的使用,可明顯提升疾病診斷精確率,臨床使用比較廣泛,對(duì)更好滿足臨床疾病診斷,意義重大。
本研究結(jié)果表明,放射性免疫檢驗(yàn)法技術(shù)檢驗(yàn)、化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法技術(shù)檢驗(yàn)TPOAB、TGAB水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法TSH、FT3、FT4水平較放射性免疫檢驗(yàn)法高(P<0.05);化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法更高,98.94%(93/94)vs.91.49%(86/94),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比,化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法對(duì)于甲狀腺腫瘤的診斷準(zhǔn)確度、靈敏度及特異度均較放射性免疫檢驗(yàn)法高(94.68%、91.67%、97.62%vs.75.53%、70.83%、78.57%),P<0.05。本次研究中使用化學(xué)免疫分析法進(jìn)行檢測(cè),化學(xué)免疫分析方法與其余方法相比,比較簡(jiǎn)單、實(shí)用?;瘜W(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法是根據(jù)抗原與抗體特異度結(jié)合的原理,使用特殊標(biāo)記技術(shù)對(duì)組織或細(xì)胞中的特異度抗原或抗體進(jìn)行定性檢測(cè)的一種檢測(cè)技術(shù)?;瘜W(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法具有特異度強(qiáng)、靈敏度高、操作步驟簡(jiǎn)單的特點(diǎn),在病理診斷工作中應(yīng)用廣泛。采用該項(xiàng)檢查技術(shù)不僅提高了病理診斷的準(zhǔn)確性,而且在分析腫瘤起源、確定腫瘤性質(zhì)、指導(dǎo)后續(xù)治療等方面都發(fā)揮了重要作用。
化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法具有以下價(jià)值[12]:①發(fā)現(xiàn)有利于確定病原體與腫瘤的關(guān)系。化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法可以應(yīng)用于研究病原體引起癌癥的機(jī)制,該檢測(cè)方法在發(fā)現(xiàn)癌癥發(fā)生原因工作中有著重要意義。如在對(duì)乙肝病毒進(jìn)行化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法時(shí),通過使用HBsAg單克隆抗體與多克隆抗體,還有已經(jīng)被生物素標(biāo)記過的HBVDNA探針,可檢出標(biāo)志物。②有利于確定腫瘤的發(fā)生起源。免疫組化檢查技術(shù)在研究腫瘤來源的過程中也起到了關(guān)鍵作用,通過開展化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法,可以分析在各種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的特異度抗體,有助于人們更加明確地發(fā)現(xiàn)腫瘤的真正起源,如淋巴結(jié)組織內(nèi)存在大量惡性腫瘤細(xì)胞,利用免疫組化就能夠有助于人們判斷腫瘤細(xì)胞起源。③有利于鑒別診斷腫瘤的發(fā)展位置。免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)還普遍應(yīng)用于對(duì)腫瘤中的抗原進(jìn)行檢查,如通過檢查甲胎蛋白來判別人體肝臟、卵巢、睪丸等部位是否出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞。若消化道、卵巢、子宮、乳房和膀胱等部位出現(xiàn)惡性腫瘤,那么這些部位會(huì)廣泛分布有癌胚抗原,雖然該抗原不具備特異度,但是在一定的條件下依舊可以清晰識(shí)別出來,其表達(dá)情況可直接反映出腫瘤的惡化程度。除此之外,在前列腺腫瘤診斷過程中,已知前列腺酸性磷酸酶與前列腺腫瘤的分化程度呈現(xiàn)正相關(guān),因此通過對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)對(duì)于研究前列腺腫瘤的發(fā)展情況具有重要意義。④有利于區(qū)分分化差的腫瘤。在對(duì)腫瘤疾病進(jìn)行治療的過程中,其細(xì)胞分化程度往往不同,單靠光鏡無法具體判斷之間的差別,因此正確分別出腫瘤和肉瘤是臨床醫(yī)師亟待解決的問題。通過利用免疫組化的標(biāo)記細(xì)胞角蛋白、波形蛋白、S-100蛋白、白細(xì)胞共同抗原(CD45RB)等就可以進(jìn)行區(qū)分。對(duì)上皮組織細(xì)胞進(jìn)行檢查后,若表現(xiàn)為細(xì)胞角蛋白陽(yáng)性,則可以確定為惡性腫瘤,若檢測(cè)結(jié)果為波形蛋白陽(yáng)性,則可以確定其為間葉組織腫瘤。若表現(xiàn)為S-100陽(yáng)性,可判定其為神經(jīng)組織腫瘤和黑色素瘤,檢驗(yàn)結(jié)果表現(xiàn)為白細(xì)胞共同抗原(CD45RB)陽(yáng)性,則可判定為淋巴瘤,而檢測(cè)結(jié)果為白細(xì)胞共同抗原(CD45RB)陰性,可以判斷為是其他類型的惡性腫瘤。通過進(jìn)行化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法,不僅可以協(xié)助醫(yī)師發(fā)現(xiàn)病變位置,還能夠進(jìn)一步的確定腫瘤性質(zhì),有助于正確的診斷并為后續(xù)的治療進(jìn)行指導(dǎo)。⑤有利于確定腫瘤性質(zhì)。在對(duì)淋巴造血系統(tǒng)的疾病進(jìn)行診斷時(shí),免疫組化染色檢查幾乎已成為常規(guī)開展的檢查項(xiàng)目,不僅有助于鑒別反應(yīng)性增生性疾病與淋巴瘤,也是各類淋巴瘤分型的重要依據(jù)。⑥有利于測(cè)定腫瘤的增殖活性。惡性腫瘤的生物學(xué)行為在很大程度上與惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)活動(dòng)密切相關(guān),而化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法則可以通過直接測(cè)定細(xì)胞核內(nèi)的與細(xì)胞增殖行為有關(guān)的蛋白酶,從而間接地探討了惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖活動(dòng),對(duì)臨床估計(jì)腫瘤的惡性程度以及制訂治療方案等方面提供了重要的參考信息。增殖細(xì)胞核抗原是一種36kD的核孔基因,同時(shí)也是DNA聚合酶δ的一個(gè)重要輔助因子,由于DNA的結(jié)構(gòu)與細(xì)胞發(fā)展的狀況有關(guān),所以增殖細(xì)胞核抗原可以成為判斷腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為以及治療預(yù)后的關(guān)鍵。Ki-67是另一個(gè)與蛋白質(zhì)增殖活動(dòng)有關(guān)的核蛋白,由于Ki-67蛋白能夠與DNA融合,在調(diào)控蛋白質(zhì)的增殖活動(dòng)中具有主要功能,其水平隨細(xì)胞周期的變化而產(chǎn)生變化,所以Ki-67單克隆抗體被廣泛應(yīng)用于測(cè)定腫瘤蛋白質(zhì)水平和確定其增殖活動(dòng)。⑦用于指導(dǎo)腫瘤的治療以及判斷預(yù)后。聯(lián)合化療是治療惡性腫瘤的最重要的方式之一,而在化療過程中的耐藥現(xiàn)象是醫(yī)師面臨的最大問題。胸苷酸合成酶(thymidylate synthetase,TS)是5-FU產(chǎn)生耐藥的一個(gè)重要酶,癌組織中TS的表達(dá)水平可以用于指導(dǎo)治療并與患者的預(yù)后相關(guān),臨床可通過TS的表達(dá)情況來判斷結(jié)腸癌患者的預(yù)后效果,預(yù)后效果較好的患者,TS指標(biāo)較低。TS高表達(dá)患者對(duì)5-FU的敏感性明顯高于低表達(dá)者,TS低意味著患者更容易對(duì)5-FU出現(xiàn)耐藥性,因此術(shù)后5-FU輔助化療對(duì)于TS指標(biāo)較高的患者效果更加好,因此TS蛋白的表達(dá)情況對(duì)臨床結(jié)腸癌患者的后續(xù)治療方案的制訂具有指導(dǎo)意義,對(duì)患者的預(yù)后也有一定指導(dǎo)作用。
綜上所述,化學(xué)發(fā)光免疫檢驗(yàn)法甲狀腺功能在生化檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果較為理想,可以測(cè)定患者TPOAB、TGAB、TSH、FT3、FT4等情況,甲狀腺異常檢出率較之放射性免疫檢驗(yàn)法技術(shù)檢驗(yàn)更高廣。