高溫對川硬皮腫腿蜂發(fā)育及Wolbachia攜帶的影響

唐艷龍，康 奎，陳思琪，王麗娜，車華濤，王小藝，魏 可*

（1.遵義師范學(xué)院生物與農(nóng)業(yè)科技學(xué)院/貴州省赤水河流域動(dòng)物資源保護(hù)與應(yīng)用研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遵義 563002；2.中國林業(yè)科學(xué)研究院森林生態(tài)環(huán)境與自然保護(hù)研究所/國家林業(yè)和草原局森林保護(hù)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 北京 100091）

川硬皮腫腿蜂Sclerodermussichuanensis是我國繼管氏腫腿蜂S.guaui之后于1994 年在四川瀘縣發(fā)現(xiàn)的一種寄生于粗鞘雙條杉天牛Semanotussionanster幼蟲的硬皮腫腿蜂屬天敵昆蟲[1]。川硬皮腫腿蜂寄主搜索能力強(qiáng)、寄主譜廣、繁殖能力強(qiáng)，目前已廣泛應(yīng)用于松褐天牛Monochamusalternatus、星天牛Anoplophora chinensis、雙條杉天牛S.bifasciatus、花椒虎天牛Clytusvalidus等林木蛀干害蟲的防治[2,3]。

溫度是影響寄生蜂繁殖力和發(fā)育速率的關(guān)鍵環(huán)境因子之一。前期研究發(fā)現(xiàn)管氏腫腿蜂在27 ℃下產(chǎn)卵量最高[4]；當(dāng)溫度在21～33 ℃時(shí)，松褐天牛腫腿蜂S.alternatusi各蟲態(tài)發(fā)育歷期隨著溫度的升高而縮短，且子代數(shù)量在27 ℃時(shí)最多[5]；白蠟吉丁腫腿蜂S.pupariae幼期發(fā)育速率同樣隨溫度的升高而加快，單雌子代數(shù)從21 ℃時(shí)的58 頭提升至30 ℃時(shí)的91 頭[6]。前期研究中有關(guān)川硬皮腫腿蜂發(fā)育與溫度的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)世代周期隨溫度增加（22～28 ℃）而縮短[1]；川硬皮腫腿蜂適宜貯存在6～15 ℃低溫條件下，12 ℃是其最適貯存溫度[7]。有關(guān)該寄生蜂在高溫環(huán)境下的生殖和發(fā)育特征還未見報(bào)道。

沃爾巴克氏體Wolbachia是廣泛存在于節(jié)肢動(dòng)物及線蟲體內(nèi)的一類胞內(nèi)共生菌，其可通過胞質(zhì)不親和、雌性化、殺雄作用、孤雌生殖等方式來調(diào)控宿主的生殖方式[8]。近年來應(yīng)用Wolbachia改變害蟲生殖遺傳特征進(jìn)而達(dá)到種群控制目的已引起廣泛的關(guān)注[9,10]。多種寄生蜂中也存在Wolbachia，且它們大多數(shù)均與寄生蜂的雌性化和孤雌生殖特征有關(guān)[8]。顯然，龐大的雌性種群是生物防治實(shí)踐中可采取天敵淹沒式釋放的基礎(chǔ)。利用Wolbachia誘導(dǎo)寄生蜂種群雌性化或產(chǎn)雌孤雌生殖，對寄生蜂的工廠化生產(chǎn)和生防效能提升均有重大意義。相關(guān)技術(shù)已在松毛蟲赤眼蜂Trichogrammadendrolimi中得到應(yīng)用[11-13]。

Wolbachia有強(qiáng)烈的環(huán)境溫度依賴特征，其表達(dá)與宿主生存的環(huán)境溫度密切相關(guān)。對卷蛾赤眼蜂T.cacoeciae、松毛蟲赤眼蜂、食胚赤眼蜂T.embryophagum和麗蚜小蜂Encarsiaformosa的研究發(fā)現(xiàn)，宿主在高溫條件下繁育會(huì)抑制體內(nèi)Wolbachia的活性，甚至引起全部Wolbachia失活，并且均有顯著的世代累積效應(yīng)[14-17]。麗蠅蛹集金小蜂Nasoniavitripennis經(jīng)30 ℃的熱處理后，體內(nèi)沃爾巴克氏體密度下降可達(dá)74%[18]。前期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)管氏腫腿蜂體內(nèi)存在Wolbachia[19]。我們對實(shí)驗(yàn)室繁育的川硬皮腫腿蜂、白蠟吉丁腫腿蜂、松褐天牛腫腿蜂進(jìn)行分子檢測發(fā)現(xiàn)其均攜帶Wolbachia。在腫腿蜂工廠化繁殖中，為了能夠在短時(shí)間內(nèi)獲得更多的天敵產(chǎn)品，往往會(huì)采取提高溫度進(jìn)而縮短腫腿蜂繁殖周期的辦法。那么，在高溫條件下繁育的腫腿蜂，其體內(nèi)Wolbachia是否受到影響，或者什么樣的溫度條件會(huì)影響到腫腿蜂的Wolbachia攜帶率值得探索。另外，腫腿蜂是一類具有高度偏雌性比的寄生蜂，偏雌性比的形成機(jī)制目前還未得到解釋。如果在高溫條件下繁育的腫腿蜂其Wolbachia攜帶率下降，是否會(huì)引起偏雌性比特征的改變，一樣值得我們研究?；谝陨夏康模狙芯恳源ㄓ财つ[腿蜂為研究對象，通過設(shè)置不同的溫度進(jìn)行續(xù)代繁育，研究高溫對川硬皮腫腿蜂生殖適合度的影響，同時(shí)評(píng)價(jià)高溫對其體內(nèi)Wolbachia攜帶率的影響。研究結(jié)果可為川硬皮腫腿蜂的繁育和利用提供參考，同時(shí)以期為揭示環(huán)境溫度依賴的Wolbachia對寄生蜂生殖調(diào)控的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試?yán)ハx

川硬皮腫腿蜂由國家林業(yè)和草原局生物防治工程中心提供，實(shí)驗(yàn)室種群由麻天牛Thyestillagebleri幼蟲作寄主續(xù)代繁殖得到，繁殖條件為25 ℃，RH 60%～70%，光周期8L:16D。經(jīng)充分交配后的3 日齡雌蜂為本研究的供試蜂，供試寄主為體質(zhì)量在200.0～250.0 mg 的麻天牛幼蟲。

1.2 川硬皮腫腿蜂接種

將寄主單頭裝入玻璃指形管內(nèi)（直徑1.0 cm，高度5.0 cm）。在供試腫腿蜂中挑選個(gè)體大小相近的雌蜂，單頭接入盛有寄主的指形管內(nèi)并用脫脂棉塞緊管口。設(shè)置繁蜂溫度為27 ℃、30 ℃和33 ℃，不同溫度條件下濕度和光周期保持一致（RH 60%～70%，光周期8L:16D），每個(gè)溫度條件下接種30 管。首次羽化得到的川硬皮腫腿蜂子代記為F1，在此種群中隨機(jī)挑選個(gè)體大小相近的3 日齡雌蜂繼續(xù)接種繁殖，羽化得到的子代記為F2，每個(gè)溫度下仍接種30 管。重復(fù)上述接種過程，得到在不同溫度條件下續(xù)代繁殖的F4腫腿蜂種群。參考項(xiàng)宇等[14]對卷蛾赤眼蜂的研究結(jié)果，發(fā)現(xiàn)在30 ℃條件下連續(xù)繁育5 代后即完全檢測不到卷蛾赤眼蜂體內(nèi)的Wolbachia。因此，本研究在獲得不同溫度下繁育得到的F4腫腿蜂種群后，用此種群做測定對象，用于對比研究其生殖適合度及Wolbachia攜帶率。

1.3 不同繁育溫度下川硬皮腫腿蜂的生殖適合度

在27 ℃、30 ℃和33 ℃溫度條件下繁育得到的F4中各隨機(jī)選取30 頭個(gè)體大小相近的3 日齡雌蜂，單頭接種至1 頭麻天牛幼蟲，繼續(xù)在3 組溫度條件下繁育。記錄母蜂對寄主的寄生能力差異，包括寄生率和子代羽化率，其中寄生率為被寄生的寄主數(shù)量占供試寄主總數(shù)的比例，子代羽化率為有子代蜂羽化的寄主數(shù)量占供試寄主總數(shù)的比例。記錄母蜂產(chǎn)卵前期、子代蜂的發(fā)育歷期和數(shù)量。產(chǎn)卵前期為接蜂至觀察到第1 粒卵被產(chǎn)出的間隔期。子代蜂發(fā)育歷期包括卵歷期、幼蟲歷期、蛹?xì)v期和幼期歷期。其中，卵歷期為第1 粒卵產(chǎn)出至第1 頭幼蟲孵化的間隔期；幼蟲歷期為第1 頭幼蟲孵化至第1 個(gè)繭出現(xiàn)的間隔期；蛹?xì)v期為第1 個(gè)繭出現(xiàn)至第1 頭成蜂羽化的間隔期；幼期歷期為第1 粒卵產(chǎn)出至第1 頭成蜂羽化的間隔時(shí)間。子代蜂發(fā)育歷期均是每個(gè)接種的指形管內(nèi)記錄1 次數(shù)據(jù)，用于代表子代群體的發(fā)育進(jìn)度。子代蜂完全羽化后，統(tǒng)計(jì)每頭寄主上育得的雌蜂、雄蜂數(shù)量和雄性比。雄性比為1 頭寄主上育得的雄蜂占子代總數(shù)的比例。以上均每日記錄1 次。

1.4 Wolbachia 檢測

在不同溫度下繁育得到的F4中各隨機(jī)選取30 頭雌蜂（每管1～2 頭），單頭檢測其是否攜帶Wolbachia。腫腿蜂基因組DNA 為單頭提取，方法參照DNeasy Blood & Tissue Kit（Qiagen）試劑盒說明書。目標(biāo)檢測基因?yàn)閣sp基因，通用引物為81F/691R[20]。PCR 擴(kuò)增使用GoTaq? Green Master Mix（Promega）試劑，反應(yīng)體系（25 μL）：GoTaq?Green Master Mix 2×為12.5 μL，正向和反向引物（10 μmol/L）各1 μL，DNA模板1 μL，Nuclease-Free Water 為9.5 μL。反應(yīng)程序如下：94 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性30 s，50 ℃退火1 min，72 ℃延伸40 s，30 個(gè)循環(huán)；72 ℃再延伸7 min。PCR 產(chǎn)物通過1%瓊脂糖凝膠（含0.1‰的10×gel red）電泳分離后，凝膠成像系統(tǒng)檢測是否有目標(biāo)條帶。每頭待檢川硬皮腫腿蜂的DNA 作模板，重復(fù)擴(kuò)增3 次，均無條帶視為不攜帶Wolbachia。統(tǒng)計(jì)不同溫度下繁殖的腫腿蜂雌蜂的Wolbachia攜帶率差異。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

Fisher’s 精確檢驗(yàn)用于檢驗(yàn)不同溫度下川硬皮腫腿蜂的寄生能力差異，同時(shí)也用于檢驗(yàn)經(jīng)不同溫度連續(xù)繁殖后，川硬皮腫腿蜂雌蜂Wolbachia的攜帶率。在不同溫度下繁殖的川硬皮腫腿蜂的產(chǎn)卵前期、發(fā)育歷期、子代數(shù)量和雄性比用單因素方差分析檢驗(yàn)處理間差異，LSD 法進(jìn)行多重比較。雄性比數(shù)據(jù)通過反正弦轉(zhuǎn)化后符合正態(tài)分布和方差齊性，轉(zhuǎn)化后的數(shù)據(jù)用于差異性檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)用SPSS 20 完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溫度下川硬皮腫腿蜂的寄生能力

經(jīng)不同溫度連續(xù)繁育4 代后，川硬皮腫腿蜂寄生能力未發(fā)生顯著改變。在27 ℃、30 ℃和33 ℃這3個(gè)溫度條件下，雌蜂對麻天牛的寄生率均保持在90%以上，寄生率無顯著差異（χ2＝2.944，df＝2，P＝0.363）。同時(shí)，在如上3 個(gè)溫度條件下，川硬皮腫腿蜂子代羽化率仍無顯著差異（χ2＝0.328，df＝2，P＝1.000），在27 ℃和33 ℃條件下子代羽化率均為90.00%，在30 ℃下子代羽化率為86.67%（表1）。

表1 不同溫度下川硬皮腫腿蜂的寄生能力Table 1 Parasitism ability of S.sichuanensis rearing in different temperatures

2.2 不同溫度下川硬皮腫腿蜂的產(chǎn)卵前期和子代歷期

結(jié)果表明，在不同的繁育溫度下，川硬皮腫腿蜂產(chǎn)卵前期存在顯著差異（F＝5.239，df＝2, 82，P＝0.007）。當(dāng)環(huán)境溫度為27 ℃，平均產(chǎn)卵前期為4.63 d。當(dāng)環(huán)境溫度提升至30 ℃后，平均產(chǎn)卵前期顯著延長，為5.37 d；當(dāng)環(huán)境溫度進(jìn)一步增加時(shí)，其產(chǎn)卵前期無顯著變化（圖1）。由表2 可知，川硬皮腫腿蜂子代歷期隨繁育溫度的升高而縮短。環(huán)境溫度為27 ℃時(shí)平均卵歷期為4.33 d，溫度提升后卵歷期顯著縮短（F＝20.769，df＝2, 82，P＜0.001）。在27 ℃條件下川硬皮腫腿蜂幼蟲平均需約7 d 才能發(fā)育至蛹，當(dāng)溫度提升到30 ℃時(shí)縮短至約6 d，提升至33 ℃時(shí)平均僅需約5 d，三者差異極顯著（F＝23.239，df＝2,78，P＜0.001）。三組繁育溫度下川硬皮腫腿蜂蛹?xì)v期均存在顯著差異（F＝74.504，df＝2, 77，P＜0.001），溫度升高至33 ℃時(shí)平均蛹?xì)v期較27 ℃下縮短了約3 d。總體上，繁育溫度升高顯著縮短了川硬皮腫腿蜂的幼期歷期（F＝151.390，df＝2, 77，P＜0.001），在33 ℃時(shí)完成幼期發(fā)育較27 ℃和30 ℃分別提前了約5 d 和2 d。

圖1 不同溫度下川硬皮腫腿蜂的產(chǎn)卵前期Fig.1 The pre-oviposition period of S.sichuanensis rearing in different temperatures

表2 不同溫度下川硬皮腫腿蜂的子代歷期Table 2 The progeny developmental period of S.sichuanensis rearing in different temperatures

2.3 不同溫度下川硬皮腫腿蜂的子代數(shù)量和雄性比

由表3 可知，繁育溫度對川硬皮腫腿蜂子代雄蜂和雌蜂的數(shù)量均有顯著影響，但對其子代總量影響不大。子代雄蜂數(shù)隨繁育溫度升高而逐漸增多，在三組溫度下單雌平均產(chǎn)雄數(shù)分別為2.11 頭（27 ℃）、3.73頭（30 ℃）和7.63 頭（33 ℃），存在顯著差異（F＝4.837，df＝2,77，P＝0.010）。在30 ℃時(shí)川硬皮腫腿蜂單雌產(chǎn)雌數(shù)最多，平均為54.31 頭；在33 ℃條件下單雌產(chǎn)雌數(shù)顯著減少，平均為38.81 頭（F＝3.384，df＝2,77，P＝0.039）。不同溫度條件下，川硬皮腫腿蜂單雌子代總數(shù)分別為49.96 頭（27 ℃）、58.04 頭（30 ℃）和46.44 頭（33 ℃），三者無顯著差異（F＝1.919，df＝2,77，P＝0.154）。不同溫度條件下，子代雄性比差異顯著（F＝4.973，df＝2,77，P＝0.009）（圖2）。子代雄性比隨繁育溫度升高逐漸增加；27 ℃時(shí)平均為5.01%，30 ℃增加到7.94%，33 ℃時(shí)顯著增加到16.09%。

圖2 川硬皮腫腿蜂在高溫下各組子代雄性比的變化Fig.2 The male proportion of S.sichuanensis rearing in different temperatures

表3 不同溫度下川硬皮腫腿蜂的子代數(shù)量Table 3 The progeny number of S.sichuanensis rearing in different temperatures

2.4 不同溫度下川硬皮腫腿蜂雌蜂Wolbachia 攜帶率

在不同溫度下連續(xù)繁育4 代后，川硬皮腫腿蜂雌蜂的Wolbachia攜帶率存在顯著差異（χ2＝91.638，df＝3，P＜0.001），溫度與攜帶率呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系（表4）。在27 ℃條件下繁育4 代的川硬皮腫腿蜂雌蜂的Wolbachia攜帶率仍為100%；但當(dāng)溫度提升至30 ℃時(shí)，其攜帶率下降至50%。在33 ℃條件下繁育4 代后的川硬皮腫腿蜂雌蜂的Wolbachia攜帶率僅有6.67%。

表4 不同溫度下川硬皮腫腿蜂Wolbachia 攜帶率Table 4 Wolbachia infection rate of S.sichuanensis rearing in different temperatures

3 討論

環(huán)境溫度是昆蟲機(jī)體表現(xiàn)和生態(tài)成功的主要決定因素[21,22]。溫度變化可影響機(jī)體的具體生物過程，包括行為、生長和發(fā)育速度、生殖力和生理代謝等[23-25]。對寄生蜂而言，其生長和發(fā)育過程受溫度的影響往往較植食性昆蟲更大，因?yàn)闇囟炔粌H直接影響寄生蜂個(gè)體的各項(xiàng)生物過程，還通過影響寄主昆蟲的生長發(fā)育而間接影響寄生蜂的發(fā)育[26,27]。本研究發(fā)現(xiàn)，在27、30 和33 ℃三個(gè)溫度條件下，川硬皮腫腿蜂雌蜂的寄生能力未發(fā)生顯著改變，表明母蜂的寄生行為在該溫度區(qū)間內(nèi)表現(xiàn)無差異，未出現(xiàn)因高溫致死母蜂情況的產(chǎn)生。同時(shí)，在不同溫度條件下，可育出子代蜂的比例也無差異，表明此溫度區(qū)間同樣適宜川硬皮腫腿蜂幼期發(fā)育。對很多容性寄生蜂（寄生蜂產(chǎn)卵后寄主繼續(xù)取食發(fā)育）而言，環(huán)境溫度提升往往會(huì)對子代羽化產(chǎn)生負(fù)效應(yīng)，這一結(jié)果主要是因?yàn)闇囟壬吆蠹闹靼l(fā)育加快，可供寄生蜂繁育的特定寄主蟲期縮短，進(jìn)而影響子代蜂羽化[25,28]。川硬皮腫腿蜂屬抑性寄生蜂，即母蜂在產(chǎn)卵前通過注射毒素麻痹寄主，在幼蜂發(fā)育過程中寄主不食不動(dòng)。因此，溫度對該寄生蜂的影響主要來自于對寄生蜂的直接作用，通過影響寄主進(jìn)而間接影響寄生蜂發(fā)育的可能性較小。

本研究發(fā)現(xiàn)，溫度對川硬皮腫腿蜂發(fā)育的直接影響主要體現(xiàn)在影響母蜂產(chǎn)卵前期、子代發(fā)育進(jìn)度和子代數(shù)量三個(gè)方面。川硬皮寄生蜂是一種卵育型寄生蜂，雌蜂麻痹寄主后需取食寄主血淋巴補(bǔ)充營養(yǎng)，完成卵子發(fā)育。不同溫度下產(chǎn)卵前期的長短即代表了該溫度下母蜂卵成熟所需的時(shí)間。本研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)溫度為30 ℃或更高時(shí)，川硬皮腫腿蜂產(chǎn)卵前期較在27 ℃條件下更長。我們認(rèn)為，雖然設(shè)置的3 組溫度對母蜂寄生能力影響較小，但母蜂在27 ℃更容易完成補(bǔ)充營養(yǎng)和卵子成熟的過程，這可能與環(huán)境溫度越高時(shí)母蜂自身機(jī)體能量消耗更大密切相關(guān)。相較于對川硬皮腫腿蜂母蜂寄生過程較小的影響外，溫度顯著地影響了子代幼蜂的發(fā)育進(jìn)度。當(dāng)環(huán)境溫度升高時(shí)，子代蜂卵歷期、幼蟲歷期、蛹?xì)v期和世代發(fā)育歷期均呈顯著縮短，33 ℃下幼期發(fā)育歷期較27 ℃時(shí)縮短了約5 d。在升溫條件下，寄生蜂的幼期歷期并不是一味地縮短，如倉蛾圓柄姬蜂Venturiacanescens在15～30 ℃下發(fā)育歷期隨溫度升高逐漸縮短，但超過30 ℃后發(fā)育歷期反而延長[29]；綠眼賽繭蜂Zelechlorophthalmus隨著溫度升高發(fā)育歷期變短，但當(dāng)溫度升至29 ℃后發(fā)育歷期又比25 ℃條件下有所延長[30]。在本研究的試驗(yàn)溫度范圍內(nèi)未出現(xiàn)川硬皮腫腿蜂發(fā)育歷期隨溫度升高而延長的現(xiàn)象，可能和設(shè)置溫度未達(dá)到其適宜發(fā)育溫度的閾值有關(guān)，即33 ℃仍是川硬皮腫腿蜂的適宜發(fā)育條件，這一結(jié)果與前期發(fā)現(xiàn)當(dāng)溫度需升高至35 ℃時(shí)才不利于白蠟吉丁腫腿蜂寄生和發(fā)育的研究結(jié)論一致[6,31]。

在本研究的試驗(yàn)溫度范圍內(nèi)，川硬皮腫腿蜂子代數(shù)量受溫度影響不顯著，但不同溫度條件顯著地影響了子代蜂的雌雄比例。川硬皮腫腿蜂單雌產(chǎn)雄數(shù)和子代雄性比隨溫度升高顯著增加，33 ℃下的單雌產(chǎn)雄數(shù)和雄性比例較27 ℃時(shí)提升了近3 倍。多種硬皮腫腿蜂的自然性比是高度穩(wěn)定的偏雌性，在母蜂數(shù)量、寄主大小和溫度等條件變化時(shí)，偏雌性比會(huì)產(chǎn)生一定程度的偏移[5,6,32,33]。母蜂數(shù)量增大和寄主質(zhì)量變差時(shí)，往往會(huì)產(chǎn)生更多的雄性后代。對于前者，其潛在原因可能是當(dāng)僅有1 頭母蜂時(shí)，子代幼蜂之間的資源競爭更弱，母蜂可以更多地產(chǎn)出雌性子代，這樣即可在子一代就增加親代的適合度。當(dāng)有多頭母蜂時(shí)，寄主資源受到限制，母蜂在這種情況下選擇增加雄性后代比例，這些雄性后代可與其他母蜂的雌性后代交配，如此親代適合度可在子二代實(shí)現(xiàn)最大化。對于寄主質(zhì)量變差時(shí)子代雄性比例增加的潛在原因也是歸因于上述的子代蜂資源競爭，而一般認(rèn)為雄性完成發(fā)育所需的寄主資源較雌性更少，所以產(chǎn)雄是在寄主資源受限時(shí)的一種生殖權(quán)衡。

在溫度升高時(shí)，腫腿蜂雄性比例為何增加當(dāng)前還缺乏相關(guān)推論和假設(shè)?；趯υ诓煌瑴囟认逻B續(xù)繁育4 代后的川硬皮腫腿蜂雌蜂的Wolbachia攜帶率的檢測，我們發(fā)現(xiàn)溫度與攜帶率存在顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。在27 ℃條件下繁育4 代的川硬皮腫腿蜂Wolbachia攜帶率仍為100%，在33 ℃條件下繁育4 代后的川硬皮腫腿蜂Wolbachia攜帶率僅有6.67%。Wolbachia可誘導(dǎo)寄生蜂產(chǎn)雌孤雌生殖，且在未出現(xiàn)產(chǎn)雌孤雌生殖的寄生蜂中，Wolbachia侵染會(huì)增加寄生蜂的雌性比例[34-36]。本研究中用于測定生殖適合度的母蜂為在不同溫度下續(xù)代繁殖4 代后的個(gè)體，即代表了它們在完成寄生行為前攜帶Wolbachia的比例不同。環(huán)境溫度升高造成母蜂體內(nèi)Wolbachia豐度降低或完全失活，進(jìn)而影響了該菌在寄生蜂生殖中殺雄作用，最終造成雄性比例增多，可能是溫度升高時(shí)川硬皮腫腿蜂雄性比增大的原因之一。此外，本研究發(fā)現(xiàn)在33 ℃下，經(jīng)連續(xù)4 代繁殖，雌性川硬皮腫腿蜂的Wolbachia攜帶率就不足10%。這一結(jié)果預(yù)示著，高溫作用下的世代累積效應(yīng)也許可以完全去除其體內(nèi)的Wolbachia，以此獲得完全不攜帶該菌的種群。這一途徑相較于通過飼喂抗生素來去除Wolbachia是極大的便利，為研究該菌對腫腿蜂生殖方式的調(diào)控機(jī)制提供了技術(shù)基礎(chǔ)。但Wolbachia在腫腿蜂子代性別分配中的作用方式還需進(jìn)一步研究。

以管氏腫腿蜂、川硬皮腫腿蜂、白蠟吉丁腫腿蜂和松褐天牛腫腿蜂為代表的腫腿蜂屬寄生蜂是我國林業(yè)上廣泛應(yīng)用的天敵昆蟲，每年都需釋放數(shù)億頭腫腿蜂防治害蟲[37]。淹沒式天敵釋放需要以強(qiáng)大的工廠化繁殖技術(shù)作保障。溫度提升顯然對縮短腫腿蜂的繁殖周期是有利的。然而我們的研究結(jié)果表明，溫度升高會(huì)引起雄性后代的比例增多，而過多的雄蜂對生物防治是無效的。此外，若寄生蜂的Wolbachia能水平轉(zhuǎn)移至害蟲種群中，進(jìn)而誘導(dǎo)害蟲生殖細(xì)胞胞質(zhì)不親和而產(chǎn)生生殖能力缺陷的個(gè)體，對害蟲種群的控制也是有益的。綜上，我們認(rèn)為繁育溫度過高對川硬皮腫腿蜂生殖適合度是不利的，規(guī)?；庇郎囟炔灰顺^30 ℃。