長(zhǎng)鏈非編碼RNA生長(zhǎng)停滯特異性轉(zhuǎn)錄子5負(fù)調(diào)控核仁磷酸蛋白1對(duì)胃癌細(xì)胞順鉑耐藥性的影響

石飛，霍曉雪，徐建國(guó)

1.青海省人民醫(yī)院藥學(xué)部，青海西寧 810000；2.青海省人民醫(yī)院腫瘤外科，青海西寧810000

胃癌是全球最常見的消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率位居惡性腫瘤第5 位，死亡率高達(dá)第3 位，具有易轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的特點(diǎn)，導(dǎo)致患者預(yù)后差，生存率低，嚴(yán)重威脅人們的身體健康［1-2］。胃癌早期無(wú)明顯臨床癥狀，且我國(guó)胃癌早期篩查未普及，導(dǎo)致大多患者就診時(shí)已失去手術(shù)治療的機(jī)會(huì)，因此臨床上多采用化療手段治療，順鉑（cisplatin，DDP）是胃癌化療方案的關(guān)鍵藥物，但其常引起胃癌細(xì)胞化療耐藥，導(dǎo)致化療效果不佳［3-4］。因此探究胃癌細(xì)胞耐藥機(jī)制及相關(guān)生物指標(biāo)對(duì)于提高化療療效，改善患者預(yù)后十分重要。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，LncRNA）作為轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的一類重要RNA，長(zhǎng)度一般大于200 個(gè)核苷酸，在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮廣泛的調(diào)控作用，尤其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用［5-6］。研究發(fā)現(xiàn)，LncRNA 生長(zhǎng)停滯特異性轉(zhuǎn)錄子5（growth arrest specific transcript 5，GAS5）在胃癌組織和細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，上調(diào)其水平能夠抑制胃癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡［7-8］。核仁磷酸蛋白1（nucleophosmin 1，NPM1）廣泛高表達(dá)于多種腫瘤組織或細(xì)胞中，與細(xì)胞增殖能力呈正相關(guān)［9］。通過生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)starbase預(yù)測(cè)顯示，NPM1 是LncRNA GAS5 的靶基因，但關(guān)于LncRNA GAS5與NPM1在胃癌細(xì)胞DDP 耐藥中的作用及關(guān)系尚未見相關(guān)報(bào)道，因此，本研究構(gòu)建了DDP耐藥細(xì)胞，并測(cè)定相關(guān)因子水平，以探究LncRNA GAS5與NPM1在DDP耐藥細(xì)胞中的調(diào)控作用。

1 材料與方法

1.1細(xì)胞、質(zhì)粒及序列 正常人胃黏膜細(xì)胞系GES-1和人胃癌細(xì)胞系BG3-823、MGC-803、AGS 購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)，于37 ℃，5%CO2，相對(duì)濕度98%的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液為含10%胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）、100μg／mL鏈霉素和100 U／mL青霉素的DMEM 培養(yǎng)液；隔天換液，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，待各細(xì)胞單層平鋪約培養(yǎng)瓶底部80%時(shí)進(jìn)行消化傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用于后續(xù)試驗(yàn)。pLJM 空質(zhì)粒、pLJM-GAS5無(wú)關(guān)序列、pLJM-GAS5購(gòu)自湖南豐暉生物科技有限公司。

1.2主要試劑及儀器 FBS、DMEM 培養(yǎng)液購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；兔抗人核仁磷酸蛋白1（nucleophosmin 1，NPM1）單抗、兔抗人多藥耐藥基因1（multidrug resistance 1，MDR1）多抗、兔抗人耐藥基因切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1（excision repair cross complementation group 1，ERCC1）多抗、兔抗人多藥耐藥相關(guān)蛋白1（multidrug resistance-associated protein 1，MRP1）多抗、兔抗人神經(jīng)性鈣黏附素（N-cadherin）多抗、兔抗人β-actin 多抗及羊抗兔IgG／HRP 購(gòu)自上海恒斐生物科技有限公司；DDP（貨號(hào)：B24462）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；MTT 溶液（5 mg／mL，貨號(hào)：SY0502）購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司；V arioskan LUX多功能酶標(biāo)儀、Veriti?PCR儀購(gòu)自美國(guó)賽默飛世爾科技有限公司；ZF-388 凝膠成像儀購(gòu)自上海嘉鵬科技有限公司。

1.3各細(xì)胞中LncRNA GAS5水平的檢測(cè) 采用qRTPCR 法。TRIzol 法提取各組細(xì)胞總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA（逆轉(zhuǎn)錄體系：5×gDNA Eraser Buffer 2μL，Total RNA 2μL，gDNA Eraser 1 μL，RNase-free dH2O 5 μL），以其為模板進(jìn)行qRT-PCR 擴(kuò)增。LncRNA GAS5 上游引物序列：5'-AATAATCAAGGTTTTCGAGGTAGGAGTCGA-3'，下游引物序列：5'-AATAATTTCGAATGGATTGCAAAAATTTATAAAATTG-3'；GAPDH 上游引物序列：5'-GGTGAAGGTCGGAGTCAACG-3'，下游引物序列5'-CCATGTAGTTGAGGTCAATGAAG-3'。引物由蘇州泓迅生物科技股份有限公司合成。擴(kuò)增體系：2 ×QuantiFast SYBR Green PCR Master Mix 10 μL，正向引物2 μL，反向引物2 μL，cDNA 2 μL，RNase-free dH2O 4 μL；擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性10 s，60 ℃退火34 s，68 ℃延伸30 s，共38 個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min。反應(yīng)結(jié)束后觀察熔解曲線，采用2-ΔΔCT法計(jì)算LncRNA GAS5、NPM1 相對(duì)定量的結(jié)果，每個(gè)樣本重復(fù)6次。

1.4胃癌AGS 細(xì)胞DDP 耐藥模型的構(gòu)建及細(xì)胞轉(zhuǎn)染 參考文獻(xiàn)［10］及預(yù)試驗(yàn)對(duì)AGS細(xì)胞構(gòu)建DDP 耐藥（AGS／DDP）。用0.5、1.0、2.0、4.0、8.0μg／mL DDP進(jìn)行梯度誘導(dǎo)，每個(gè)濃度37 ℃誘導(dǎo)14 d，至AGS細(xì)胞呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)時(shí)，更換至下一濃度，待AGS細(xì)胞在8.0μg／mL DDP 中呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后，結(jié)束誘導(dǎo)。MTT法檢測(cè)半抑制濃度（IC50）［11］。常規(guī)培養(yǎng)7 d后進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組（無(wú)DDP耐藥、無(wú)轉(zhuǎn)染）、空質(zhì)粒組（BC 組，DDP 耐藥、轉(zhuǎn)染pLJM 空質(zhì)粒）、GAS5無(wú)義干擾組（pLJM-GAS5 NC 組，DDP 耐藥、轉(zhuǎn)染pLJM-GAS5 無(wú)關(guān)序列）、GAS5 過表達(dá)組（pLJM-GAS5組，DDP耐藥、轉(zhuǎn)染pLJM-GAS5）。

取AGS／DDP細(xì)胞經(jīng)0.25%胰酶消化后，用不含F(xiàn)BS的DMEM培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度至2×104個(gè)／mL，接種24 孔培養(yǎng)板，待細(xì)胞密度約占培養(yǎng)板50%時(shí)，按照實(shí)驗(yàn)分組，采用LipofectamineTM2000 將pLJMGAS5、pLJM-GAS5 無(wú)關(guān)序列、pLJM 空質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至AGS／DDP 細(xì)胞中，37 ℃轉(zhuǎn)染24 h后，更換DMEM培養(yǎng)液，qRT-PCR法檢測(cè)LncRNA GAS5水平，Western blot法檢測(cè)NPM1水平，繼續(xù)培養(yǎng)用作后續(xù)試驗(yàn)。

1.5DDP 對(duì)AGS、AGS／DDP 細(xì)胞增殖能力影響的檢測(cè) 用不含F(xiàn)BS 的DMEM 培養(yǎng)液將AGS 和AGS／DDP 細(xì)胞密度調(diào)整為5 × 104個(gè)／mL，接種96 孔板，37 ℃，5% CO2恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁；棄原培養(yǎng)液，PBS 洗滌3 次，加入200μL 含終濃度分別為0、10、20、40、80、100μmol／L DDP 的培養(yǎng)液，設(shè)6 個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)調(diào)零孔和不加DDP 的對(duì)照組，繼續(xù)培養(yǎng)48 h；加入25 μL MTT 溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h；棄原培養(yǎng)液，加入150 μL DMSO 溶液，37 ℃，100 r／min 恒溫振蕩混合10 min；多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)樣品在490 nm波長(zhǎng)處的A值，按下式計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。

細(xì)胞增殖抑制率（%）=［1-（實(shí)驗(yàn)組A值-調(diào)零孔A值）／（對(duì)照組A值-調(diào)零孔A值）］×100%

1.6AGS、AGS／DDP細(xì)胞中NPM1、MDR1、ERCC1、MRP1、N-cadherin 水平的檢測(cè) 采用Western blot法。加入400 μL RIPA 蛋白裂解液，充分裂解細(xì)胞后，離心取上清，提取各細(xì)胞總蛋白，BCA 法測(cè)定各細(xì)胞蛋白含量，以20μg／mL蛋白上樣，經(jīng)10%SDSPAGE（80 V 電泳30 min，120 V 電泳60 min）分離后，轉(zhuǎn)膜，5% BSA 常溫封閉結(jié)合位點(diǎn)60 min；加入兔抗人NPM1、MDR1、ERCC1、MRP1、N-cadherin、β-actin抗體（均1∶1 000 稀釋），4 ℃孵育24 h；加入羊抗兔IgG／HRP（1∶1 000 稀釋），37 ℃避光孵育30 min；曝光，ECL 顯色后，用凝膠成像軟件Image Lab 分析灰度值，計(jì)算各細(xì)胞中蛋白相對(duì)含量。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 22.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（x ± s）表示，多組比較行單因素方差分析，任意兩組比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1各細(xì)胞中LncRNA GAS5水平 與人正常胃黏膜GES-1細(xì)胞（1.02±0.13）相比，人胃癌BG3-823（0.84±0.10）、AGS 細(xì)胞（0.57 ± 0.08）中LncRNA GAS5 水平明顯降低（q分別為4.139、10.346，P均＜0.05），MGC-803 細(xì)胞（0.94 ± 0.11）中LncRNA GAS5 水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=1.839，P＞0.05）。表明AGS細(xì)胞中LncRNA GAS5 相對(duì)表達(dá)水平最低，因此選擇AGS細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

2.2轉(zhuǎn)染后AGS／DDP細(xì)胞中LncRNA GAS5及NPM1水平 經(jīng)DDP誘導(dǎo)耐藥后，與對(duì)照組相比，BC和pLJMGAS5 NC 組AGS 細(xì)胞中LncRNA GAS5 水平明顯降低（q分別為10.038、8.880，P均＜0.05），NPM1水平顯著升高（q分別為18.870、18.031，P均＜0.05）；與BC 和pLJM-GAS5 NC 組相比，pLJM-GAS5 組AGS／DDP 細(xì)胞中LncRNA GAS5 水平顯著升高（q分別為8.108、6.950，P均＜0.05），NPM1水平明顯降低（q分別為12.999、12.160，P均＜0.05）；pLJM-GAS5 NC和BC 組AGS／DDP 細(xì)胞中LncRNA GAS5、NPM1 水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q分別為1.158、0.839，P均＞0.05），提示轉(zhuǎn)染成功，pLJM-GAS5 組AGS／DDP 細(xì)胞中NPM1下調(diào)。見圖1和表1。

表1 轉(zhuǎn)染后AGS／DDP 細(xì)胞中LncRNA GAS5、NPM1 水平比較（±s，n=6）Tab.1 Comparison of LncRNA GAS5 and NPM1 levels in AGS／DDP cells after transfection（±s，n=6）

表1 轉(zhuǎn)染后AGS／DDP 細(xì)胞中LncRNA GAS5、NPM1 水平比較（±s，n=6）Tab.1 Comparison of LncRNA GAS5 and NPM1 levels in AGS／DDP cells after transfection（±s，n=6）

注：a表示與對(duì)照組相比，P ＜0.05；b表示與BC組相比，P ＜0.05；c表示與pLJM-GAS5 NC組相比，P ＜0.05。

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2.3DDP 對(duì)轉(zhuǎn)染后AGS／DDP 細(xì)胞增殖能力的影響 不同濃度DDP 分別處理AGS、AGS／DDP 細(xì)胞48 h后，細(xì)胞增殖抑制率均隨DDP 濃度增大而增加，具有濃度依賴性。同濃度DDP（除0μmol／L 外）處理后，與對(duì)照組相比，BC、pLJM-GAS5 NC 組AGS／DDP 細(xì)胞增殖抑制率明顯降低（q分別為13.729、14.347，15.624、16.114，19.529、20.011，21.633、21.994，25.541、25.826，P均＜0.05）；與BC、pLJMGAS5 NC 組相比，pLJM-GAS5 組AGS／DDP 細(xì)胞增殖抑制率顯著升高（q分別為6.772、7.390，10.107、10 598，15.046、15.527，16.426、16.787，19.611、19.896，P均＜0.05）。DDP 對(duì)pLJM-GAS5 組AGS／DDP細(xì)胞48 h的IC50為（65.38±5.04）μmol／L，顯著高于對(duì)照組［（49.17±4.59）μmol／L］（q=8.756，P均＜0.05），明顯低于BC［（120.74±4.17）μmol／L］、pLJM-GAS5 NC 組［（120.24 ± 4.29）μmol／L］（q分別為29.902、29.632，P均＜0.05）。見圖2。提示上調(diào)LncRNA GAS5 水平，可增強(qiáng)DDP 對(duì)AGS／DDP 細(xì)胞增殖抑制率。

圖2 DDP處理后AGS、AGS／DDP細(xì)胞增殖抑制率Fig.2 Inhibition rate of proliferation of AGS and AGS／DDP cells after treatment with DDP

2.4轉(zhuǎn)染后AGS／DDP細(xì)胞中MDR1、ERCC1、MRP1、N-cadherin水平 與對(duì)照組相比，BC、pLJM-GAS5 NC組AGS／DDP細(xì)胞中MDR1、ERCC1、MRP1、N-cadherin水平顯著升高（q分別為14.587、15.462，11.737、12.149，17.917、17.241，16.494、16.733，P均＜0.05）；與BC、pLJM-GAS5 NC組相比，pLJM-GAS5組MDR1、ERCC1、MRP1、N-cadherin 水平明顯降低（q分別為5.543、6.418，5.560、5.972，11.832、11.156，5.737、5.976，P均＜0.05）；pLJM-GAS5 NC 和BC 組AGS 細(xì)胞中MDR1、ERCC1、MRP1、N-cadherin水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q分別為0.875、0.412、0.676、0.239，P均＞0.05）。見圖3 和表2。提示上調(diào)LncRNA GAS5 水平，可降低AGS／DDP細(xì)胞中MDR1、ERCC1、MRP1、N-cadherin表達(dá)。

表2 轉(zhuǎn)染后AGS／DDP 細(xì)胞中MDR1、ERCC1、MRP1、Ncadherin水平比較（±s，n=6）Tab.2 Comparison of MDR1，ERCC1，MRP1 and N-cadherin levels in AGS／DDP cells after transfection（±s，n=6）

表2 轉(zhuǎn)染后AGS／DDP 細(xì)胞中MDR1、ERCC1、MRP1、Ncadherin水平比較（±s，n=6）Tab.2 Comparison of MDR1，ERCC1，MRP1 and N-cadherin levels in AGS／DDP cells after transfection（±s，n=6）

注：a 表示與對(duì)照組相比，P ＜0.05；b 表示與BC 組相比，P ＜0.05；c表示與pLJM-GAS5 NC組相比，P ＜0.05。

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圖3 轉(zhuǎn)染后AGS／DDP 細(xì)胞中MDR1、ERCC1、MRP1、Ncadherin水平Fig.3 Levels of MDR1，ERCC1，MRP1 and N-cadherin in AGS／DDP cells after transfection

3 討論

DDP 是臨床上胃癌化療首選藥物之一，可作用于DNA 的嘧啶和嘌呤堿基，從而抑制DNA 復(fù)制過程，具有抗癌譜廣、療效確切的特點(diǎn)［12-13］。DDP 能夠降低胃癌患者轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)率，但約有35%的胃癌患者因出現(xiàn)DDP 耐藥導(dǎo)致化療失敗，目前DDP 耐藥已成為治療胃癌的主要障礙［14］。為進(jìn)一步探討LncRNA GAS5 和NPM1 在人胃癌細(xì)胞DDP 耐藥中的作用，本研究首先選取正常人胃黏膜細(xì)胞系GES-1 和人胃癌細(xì)胞系BG3-823、MGC-803、AGS作為研究對(duì)象，測(cè)定LncRNA GAS5 水平，結(jié)果顯示，與GES-1 細(xì)胞相比，人胃癌BG3-823、AGS 細(xì)胞中LncRNA GAS5 水平降低，其中AGS 細(xì)胞中LncRNA GAS5 水平最低，因此采用AGS 細(xì)胞開展后續(xù)試驗(yàn)，并依據(jù)濃度梯度誘導(dǎo)法，用低濃度DDP構(gòu)建AGS／DDP細(xì)胞模型，MTT試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，DDP 對(duì)AGS／DDP 細(xì)胞IC50明顯高于AGS細(xì)胞，表明AGS／DDP細(xì)胞模型構(gòu)建成功。

由于化療藥物的耐藥機(jī)制尚不明確，癌基因、抑癌基因以及常見的一些細(xì)胞因子等均可能參與化療藥物耐藥形成的過程，其中目前在胃癌多藥耐藥機(jī)制中研究最多的主要包括MDR1、MRP1、ERCC1、Ncadherin、P-糖蛋白（P-glycolprotein，P-gp）及肺耐藥蛋白（lung resistance protein，LRP）等，這些主要通過改變藥物的胞內(nèi)分布或?qū)⒒熕幬锱懦黾?xì)胞外而參與腫瘤的多藥耐藥機(jī)制［15-16］。研究還發(fā)現(xiàn)，多藥耐藥的產(chǎn)生與ATP 結(jié)合盒蛋白家族的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)載體高表達(dá)相關(guān)，其中包括MDR1及其編碼產(chǎn)物P-gp、MRP1［17］。皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲及遷移，使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生化療耐藥。研究還發(fā)現(xiàn)，上調(diào)N-cadherin表達(dá)，可促進(jìn)上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，最終引起EMT［18-19］。而ERCC1是核苷酸切除修復(fù)系統(tǒng)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其主要通過在核苷酸切除修復(fù)過程中發(fā)揮識(shí)別損傷DNA 以及鏈接切割的作用，參與著色性干皮病F 蛋白（xeroderma pigmentosum group F，XPF）形成復(fù)合物切除損傷DNA 序列，從而快速修復(fù)DNA 損傷而介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞對(duì)DDP耐藥［20］。本研究發(fā)現(xiàn)，AGS／DDP細(xì)胞中MDR1、ERCC1、MRP1、N-cadherin 水平顯著高于AGS 細(xì)胞，同樣說(shuō)明AGS／DDP 細(xì)胞模型構(gòu)建成功，DDP 耐藥性增強(qiáng)。

近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，LncRNA 在腫瘤細(xì)胞耐藥性中發(fā)揮關(guān)鍵作用，LncRNA GAS5在膀胱尿路上皮癌（T24）細(xì)胞中低表達(dá)，上調(diào)其水平可抑制T24 細(xì)胞多柔比星耐藥性，下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2水平，促進(jìn)耐藥T24細(xì)胞凋亡［21］。李孝敏等［22］研究發(fā)現(xiàn)，與正常結(jié)腸細(xì)胞相比，結(jié)腸癌（SW480）細(xì)胞中LncRNA GAS5 水平明顯降低，過表達(dá)LncRNA GAS5 可增強(qiáng)SW480 細(xì)胞放射敏感性。本研究為評(píng)價(jià)LncRNA GAS5在AGS／DDP細(xì)胞中的作用，構(gòu)建了pLJM-GAS5轉(zhuǎn)染的AGS／DDP細(xì)胞，與BC和pLJM-GAS5 NC組相比，pLJM-GAS5組AGS／DDP 細(xì)胞中LncRNA GAS5 水平升高，表明pLJM-GAS5 轉(zhuǎn)染成功。MTT 試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與BC、pLJMGAS5 NC 組相比，pLJM-GAS5 組AGS／DDP 細(xì)胞增殖抑制率升高；DDP 對(duì)pLJM-GAS5 組AGS／DDP 細(xì)胞48 h 的IC50值低于BC、pLJM-GAS5 NC 組AGS／DDP 細(xì)胞，表明上調(diào)LncRNA GAS5 水平可提高DDP對(duì)AGS／DDP細(xì)胞增殖抑制能力，逆轉(zhuǎn)DDP耐藥。此外上調(diào)LncRNA GAS5水平后，AGS／DDP細(xì)胞中MDR1、ERCC1、MRP1、N-cadherin 水平降低，表明LncRNA GAS5 可能抑制相關(guān)耐藥蛋白表達(dá)從而發(fā)揮逆轉(zhuǎn)耐藥作用。

NPM1可穿梭于胞質(zhì)、核質(zhì)、核仁，參與核糖體的裝配、染色體復(fù)制等胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)［23］。陳思穎等［24］研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌甲氨蝶呤耐藥（MCF-7／MTX）細(xì)胞中NPM高表達(dá)，下調(diào)其水平可降低MCF-7／MTX耐藥性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。隨后賀兼斌等［25］將肺腺癌DDP 耐藥細(xì)胞接種至小鼠皮下，行化學(xué)治療，發(fā)現(xiàn)耐藥組小鼠抑瘤率明顯低于非耐藥組，瘤組織中NPM水平顯著高于非耐藥組。本研究發(fā)現(xiàn)，AGS／DDP細(xì)胞中NPM1水平高于AGS細(xì)胞，表明NPM1與AGS細(xì)胞耐藥相關(guān)。上調(diào)LncRNA GAS5水平后，與BC和pLJMGAS5 NC組AGS／DDP細(xì)胞相比，pLJM-GAS5組NPM1水平降低，表明LncRNA GAS5 可能通過下調(diào)NPM1水平參與AGS細(xì)胞耐藥進(jìn)程。

綜上所述，LncRNA GAS5 在AGS／DDP 細(xì)胞低表達(dá)，NPM1 高表達(dá)，上調(diào)LncRNA GAS5 表達(dá)可降低AGS／DDP細(xì)胞耐藥性，且下調(diào)NPM1水平。但本文僅使用一種胃癌細(xì)胞系進(jìn)行功能研究，可能證據(jù)不夠充分，后期將通過其他胃癌細(xì)胞系進(jìn)行LncRNA GAS5 的功能驗(yàn)證，從而更加完善本研究的內(nèi)容。同時(shí)，本研究未探討LncRNA GAS5 通過何種信號(hào)通路作用于NPM1，有待后續(xù)完善。