針灸治療血管性癡呆的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展*

李玉秋,羅本華,凌艷君

廣西中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,廣西 南寧 530000

血管性癡呆(vascular dementia,VD)常繼發(fā)于腦動(dòng)脈粥樣硬化或腦卒中后,是由缺血性腦血管疾病引起的認(rèn)知功能障礙綜合征,臨床表現(xiàn)為記憶或認(rèn)知功能受損,伴運(yùn)動(dòng)、語(yǔ)言、視空間、人格障礙等[1-2]。隨著社會(huì)人口老齡化和腦卒中存活率的提高,VD發(fā)病率逐年升高,患者會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的記憶和認(rèn)知功能缺損,不僅影響生活質(zhì)量,而且造成了巨大的社會(huì)和家庭負(fù)擔(dān)[3-4]。VD是可以早期預(yù)防并有治愈可能的癡呆類疾病,已經(jīng)成為癡呆研究領(lǐng)域的重點(diǎn)之一,但由于療效不明確及不良反應(yīng)較多,目前世界范圍內(nèi)尚沒(méi)有藥物化合物被批準(zhǔn)用于VD的治療[5-6]。近年來(lái),大量研究發(fā)現(xiàn)針灸能夠多靶點(diǎn)、多途徑改善VD患者認(rèn)知障礙,為有效且相對(duì)安全的治療方法[7-8]。現(xiàn)將近年針灸治療VD的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展綜述如下。

1 改善神經(jīng)行為學(xué)

VD動(dòng)物模型的療效評(píng)價(jià)主要是通過(guò)神經(jīng)行為學(xué)的改變進(jìn)行判定,目前多采用水迷宮、Y-型迷宮、穿梭箱實(shí)驗(yàn)、跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)等評(píng)分方法,側(cè)重于客觀評(píng)估動(dòng)物學(xué)習(xí)、記憶等行為的改變。朱鈺等[9]采取雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性結(jié)扎法制作大鼠VD模型,運(yùn)用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試,發(fā)現(xiàn)與模型組大鼠比較,經(jīng)“調(diào)心通督”針刺法(斜刺水溝、神庭、百會(huì)、風(fēng)府、大椎、命門穴,直刺大陵、勞宮、內(nèi)關(guān)穴)干預(yù)的VD大鼠,穿越原平臺(tái)次數(shù)增加,平均逃避潛伏期縮短,學(xué)習(xí)記憶能力得到明顯改善。桂利[10]以“化瘀通絡(luò)”灸療法(每日灸“大椎”“百會(huì)”“神庭”穴20 min)治療VD模型大鼠3周后,受試的各組大鼠進(jìn)行每日4次、每?jī)纱斡?xùn)練之間間隔至少10 min的水迷宮訓(xùn)練,并于第5日進(jìn)行空間探索測(cè)驗(yàn),最終發(fā)現(xiàn)艾灸組的成績(jī)明顯優(yōu)于模型組,“化瘀通絡(luò)”灸療法具有與西藥鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子相同的療效。鞠慶波等[11]采用Y-型迷宮檢測(cè)眼針(眼針肝區(qū)、心區(qū)、腎區(qū))對(duì)VD大鼠的記憶能力進(jìn)行測(cè)試,每天記錄大鼠跑向迷宮安全通道按下箱頂信號(hào)燈的時(shí)間,發(fā)現(xiàn)眼針組大鼠Y-迷宮箱成績(jī)明顯優(yōu)于模型組。陳晶等[12]選用“風(fēng)池”“供血”兩個(gè)經(jīng)驗(yàn)要穴,通過(guò)電針接入刺激干預(yù)模型VD大鼠,以Y-型迷宮檢測(cè)學(xué)習(xí)記憶能力,發(fā)現(xiàn)大鼠Y迷宮學(xué)習(xí)與記憶的正確次數(shù)顯著提高。馬莉等[13]采用額區(qū)電針?lè)ǜ深A(yù)VD大鼠,以穿梭箱實(shí)驗(yàn)測(cè)評(píng)大鼠行為學(xué)變化,結(jié)果顯示,治療后VD大鼠電擊次數(shù)與電擊時(shí)間明顯縮短,證實(shí)認(rèn)知學(xué)習(xí)能力有所提升;西藥組與電針組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明針刺在改善大鼠行為學(xué)方面具有與西藥腦復(fù)康水同等的改善效果。李巖等[14]采用“醒神開(kāi)竅”針刺法進(jìn)行干預(yù),發(fā)現(xiàn)針刺大鼠在穿梭箱實(shí)驗(yàn)中遭受電擊次數(shù)、電擊時(shí)間、主動(dòng)回避次數(shù)的成績(jī)顯著優(yōu)于模型大鼠。楊春壯等[15]予VD大鼠針刺百會(huì)、大椎、人中穴治療,30 d后,通過(guò)大鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)VD大鼠的行為學(xué),發(fā)現(xiàn)針灸組大鼠跳臺(tái)檢測(cè)反應(yīng)期(即大鼠跳到安全臺(tái)躲避電擊的時(shí)間)較模型組明顯縮短,提示針灸對(duì)大鼠的認(rèn)知行為有改善作用。喬曉迪等[16]選取跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)動(dòng)態(tài)觀察耳針對(duì)VD大鼠行為學(xué)的影響,取“心”“腎”“皮質(zhì)下”等耳部穴位,分別以治療后30 d和60 d后作為測(cè)試時(shí)間點(diǎn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)耳針治療的大鼠跳臺(tái)潛伏期均顯著增加,跳臺(tái)錯(cuò)誤次數(shù)均減少,證明耳針對(duì)VD大鼠的認(rèn)知障礙具有明顯的改善作用。

2 抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡

一定的外界生理或病理?xiàng)l件會(huì)誘發(fā)細(xì)胞產(chǎn)生凋亡刺激信號(hào),此時(shí)基因自主控制細(xì)胞為了保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定而進(jìn)行的自主性死亡過(guò)程為細(xì)胞凋亡[17-18]。研究發(fā)現(xiàn),神經(jīng)細(xì)胞凋亡是大腦缺血后引發(fā)腦神經(jīng)元損傷的一種機(jī)制[19-20]。腦部缺血再灌注會(huì)引起細(xì)胞凋亡,細(xì)胞凋亡的加重又促進(jìn)了VD的發(fā)生[21]。凋亡過(guò)程需多種蛋白質(zhì)參與,以B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)和半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase)兩大家族為主,這兩大家族能較好地接收、傳導(dǎo)和擴(kuò)大細(xì)胞內(nèi)外的凋亡信號(hào)[22-23]。研究表明,針灸可通過(guò)調(diào)節(jié)這兩類蛋白的表達(dá)抑制神經(jīng)元凋亡,改善記憶能力[24]。鹿俊磊等[25]采用免疫組化染色法檢測(cè)VD大鼠海馬組織,發(fā)現(xiàn)頭穴叢刺的干預(yù)可上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2,下調(diào)促凋亡基因Bax、凋亡執(zhí)行蛋白酶caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞,并進(jìn)行動(dòng)物行為學(xué)學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)試,推測(cè)頭穴叢刺改善VD學(xué)習(xí)記憶能力與抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)。郭菲等[26]觀察電針干預(yù)(大椎、百會(huì)、后三里、膈俞)對(duì)VD大鼠海馬組織相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,結(jié)果顯示,電針可顯著降低凋亡執(zhí)行啟動(dòng)蛋白酶caspase-8、執(zhí)行蛋白酶caspase-3表達(dá),及下調(diào) c-Jun 氨基末端蛋白激酶(c-Jun NH2-terminalprotein kinase,JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)蛋白表達(dá)(caspase凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活蛋白),從而抑制腦缺血再灌注對(duì)海馬神經(jīng)元造成的損傷。朱雯等[27]于造模后采用針刺足三里、百會(huì)穴進(jìn)行干預(yù),應(yīng)用免疫熒光法、尼氏染色法(Nissl staining)、TUNEL法分別觀察VD大鼠皮質(zhì)的p-JNK 表達(dá)、神經(jīng)元形態(tài)學(xué)改變、神經(jīng)元凋亡情況,發(fā)現(xiàn)針刺治療可抑制VD模型大鼠皮質(zhì)p-JNK 的表達(dá),改善神經(jīng)元細(xì)胞核固縮、深染情況,減少細(xì)胞凋亡數(shù)量。張?chǎng)蔚萚28]采用通督調(diào)神針刺療法(穴選“百會(huì)”“大椎”“脾俞”“腎俞”)干預(yù),以Morris水迷宮檢測(cè)空間學(xué)習(xí)記憶能力后,分離各組大鼠海馬組織,觀察各組大鼠海馬的細(xì)胞凋亡數(shù)量及促凋亡蛋白磷酸酶和張力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn),經(jīng)通督調(diào)神針刺療法干預(yù)的VD模型大鼠細(xì)胞凋亡數(shù)量及促凋亡蛋白 PTEN表達(dá)顯著降低,學(xué)習(xí)記憶能力明顯改善。陳英華等[29]運(yùn)用四血管阻斷法制作VD大鼠模型,對(duì)模型大鼠分別進(jìn)行手針及電針治療后,采用免疫組化法檢測(cè)海馬組織,發(fā)現(xiàn)不論是手針組還是電針組(均選用神聰穴、風(fēng)池穴干預(yù)),均能有效抑制腦組織細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白caspase-3、NF-κB p65及PTEN mRNA表達(dá),提示針刺對(duì)腦缺血再灌注具有腦保護(hù)作用。

3 調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)

腦中常見(jiàn)的神經(jīng)遞質(zhì)有膽堿類、單胺類、氨基酸類等,這些神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)參與大腦的學(xué)習(xí)、記憶功能,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要組成部分,研究發(fā)現(xiàn)這些神經(jīng)遞質(zhì)的異常代謝不同程度地參與了VD的病理過(guò)程[30-31]。李新華等[32]在采用兩血管阻斷加硝普鈉降壓法造模后,通過(guò)對(duì)比西藥尼莫同組,觀察交通任督法(針刺“風(fēng)府”“百會(huì)”“人中”“關(guān)元”)對(duì)VD大鼠學(xué)習(xí)記憶功能及海馬乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase,AChE)活性的影響,證實(shí)交通任督針?lè)擅黠@改善VD大鼠海馬組織的AChE含量異常減少現(xiàn)象,增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力。楊曉波等[33]采用反復(fù)夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈-再灌注法復(fù)制VD大鼠模型后,觀察溫通針?lè)▽?duì)其海馬煙堿型乙酰膽堿受體(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)亞單位蛋白表達(dá)水平的影響,發(fā)現(xiàn)溫通針?lè)赏ㄟ^(guò)上調(diào)VD大鼠海馬nAChR表達(dá)來(lái)改善學(xué)習(xí)記憶能力。董娟等[34]以交通任督針?lè)ǜ深A(yù)VD大鼠,發(fā)現(xiàn)干預(yù)大鼠與模型組比較,海馬組織的5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量明顯提高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,從而得出交通任督法針刺對(duì)VD大鼠海馬單胺類遞質(zhì)的代謝紊亂及認(rèn)知障礙具有改善作用的結(jié)論。楊俊麗等[35]以頭穴叢刺長(zhǎng)留針?lè)橹委煼椒?取大鼠的額區(qū)、頂前區(qū)、頂區(qū),留針6 h,治療4周后,發(fā)現(xiàn)VD大鼠海馬組織ACh含量明顯增多,多巴胺(dopamine,DA)、5-HT含量升高,頭穴叢刺可調(diào)節(jié)記憶相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)的釋放,減輕神經(jīng)元受損程度。張秀景[36]發(fā)現(xiàn),采用電針刺激“大椎”“百會(huì)”“膈俞”“后三里”穴可以明顯增加VD模型小鼠海馬組織的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素(norepinephrine,NE)、DA和5-HT含量。仲秀艷等[37]觀察電針針刺腎俞、膈俞、百會(huì)穴對(duì)VD大鼠海馬谷氨酸 (glutamate,Glu)、γ-氨基丁酸(γ-AminobutyricAcid,GABA)含量的影響,用氨基酸自動(dòng)分析儀檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn),電針可顯著升高VD大鼠海馬的抑制性氨基酸GABA含量,降低海馬組織興奮性氨基酸Glu含量,對(duì)大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力有改善作用。張茜等[38]采用電針(百會(huì)、大椎、膈俞、后三里)干預(yù)VD模型大鼠,并檢測(cè)大鼠海馬組織中的Glu含量和N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)蛋白表達(dá)量,結(jié)果發(fā)現(xiàn),電針組Glu含量及NMDAR表達(dá)量較模型組明顯降低,提示電針治療可通過(guò)抑制Glu-NMDAR的神經(jīng)興奮毒性,對(duì)抗神經(jīng)細(xì)胞損傷。

4 減輕氧化應(yīng)激損傷

腦部慢性缺氧缺血是VD重要的病理學(xué)基礎(chǔ),缺氧缺血可引發(fā)腦組織氧化應(yīng)激反應(yīng),造成大腦神經(jīng)元損傷,從而導(dǎo)致認(rèn)知障礙[39-40]。腦缺血期間產(chǎn)生的過(guò)量氧自由基會(huì)攻擊細(xì)胞生物膜,導(dǎo)致血腦屏障被破壞,血管內(nèi)皮與血小板黏附功能增強(qiáng),腦組織的微循環(huán)障礙加重,同時(shí)也造成腦細(xì)胞內(nèi)氧化磷酸化的失調(diào),使神經(jīng)功能受損[41-42]。人體抗氧化防御系統(tǒng)主要分為抗氧化酶(超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫酶等)和抗氧化劑(維生素C、維生素E、輔酶Q、谷胱甘肽等);人體內(nèi)主要的自由基有活性氧(reactive oxygen species,ROS)和活性氮(reactive nitrogen species,RNS)、一氧化氮(nitric oxide,NO)[43-44];氧化應(yīng)激反應(yīng)的代謝產(chǎn)物主要有丙二醛(malonaldehyde,MDA),可反映自由基導(dǎo)致細(xì)胞損傷的程度[45]。姬軍風(fēng)等[46]造模后選用百會(huì)、膈俞、膻中、氣海、三陰交穴(益氣活血方)治療VD大鼠,發(fā)現(xiàn)針刺可提高大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,降低海馬組織中MDA水平,升高超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,具有清除自由基的作用。姜孝德[47]從抗氧化機(jī)制角度探討“嗅三針”對(duì)VD模型大鼠的作用機(jī)理,通過(guò)檢測(cè)大鼠血清中谷胱甘肽(glutathione,r-glutamyl cysteingl glycine,GSH)、SOD、MDA的含量,發(fā)現(xiàn)“嗅三針”(印堂穴、兩側(cè)迎香穴)能明顯提高GSH含量及SOD活性,顯著降低MDA含量,從而強(qiáng)化VD大鼠的抗氧化機(jī)制。孫彥輝等[48]在完成缺血再灌注VD小鼠模型復(fù)制后,予“百會(huì)”“大椎”“膈俞”“足三里”進(jìn)行電針刺激,干預(yù)結(jié)束后,觀察海馬SOD活性,發(fā)現(xiàn)造模當(dāng)日和造模第3天電針組小鼠SOD活性均明顯增強(qiáng),一氧化氮合酶(NO synthetase,NOS)、MDA含量均明顯降低,且造模第3天電針組改善明顯優(yōu)于造模當(dāng)天。杜斯琪等[49]通過(guò)DHE染色檢測(cè)ROS含量,通過(guò)黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)SOD活性,發(fā)現(xiàn)與模型組大鼠比較,針刺百會(huì)、雙側(cè)足三里后,VD大鼠前額葉皮層SOD活性明顯升高,ROS含量顯著降低,推斷針刺可抑制VD大鼠前額葉皮層的氧化應(yīng)激水平。武澤惠等[50]觀察不同頻率電針對(duì)VD模型小鼠海馬組織自由基影響的差異性:選取百會(huì)、大椎、膈俞及足三里穴,毫針刺入后接電針儀,分別以不同頻率干預(yù),采用硫代巴比妥酸比色法測(cè)定MDA含量,分光光度法測(cè)定NOS活性,黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)電針干預(yù)后的小鼠海馬組織MDA含量明顯降低,NOS活性降低,SOD活性提高,提示不同頻率的電針治療均可對(duì)抗VD大鼠脂質(zhì)過(guò)氧化損傷,以疏密波2 Hz/80 Hz的干預(yù)效果最突出。

5 營(yíng)養(yǎng)神經(jīng),促進(jìn)神經(jīng)、血管再生

腦缺血后,腦內(nèi)血液供應(yīng)不足,許多研究者以挽救瀕臨死亡的細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞為重點(diǎn)方向,各種刺激腦內(nèi)毛細(xì)血管生成的干預(yù)措施成為治療VD的新手段。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)作為腦部營(yíng)養(yǎng)性質(zhì)因子,可激活多種胞內(nèi)信號(hào),從而刺激受損神經(jīng)元修復(fù),促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞再生與增殖,延長(zhǎng)神經(jīng)細(xì)胞存活時(shí)間[51-52]。劉佩等[53]以BDNF為檢測(cè)指標(biāo),觀察不同時(shí)相電針治療(百會(huì)、大椎穴)后VD大鼠海馬BDNF mRNA表達(dá)的變化規(guī)律,結(jié)果提示電針可提高海馬BDNF mRNA的含量,且其表達(dá)隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。田玥等[54]以鹽酸多奈哌齊為對(duì)照,探討通督醒神針?lè)?百會(huì)、神庭、人中穴)對(duì)VD模型大鼠海馬神經(jīng)再生的影響,用免疫組化法檢測(cè)BDNF與其酪氨酸激酶受體B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)的蛋白表達(dá),發(fā)現(xiàn)該針?lè)茱@著上調(diào)VD大鼠BDNF與TrkB的蛋白表達(dá)水平,具有促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞再生的功能。張媛媛等[55]觀察VD大鼠BDNF、TrkB表達(dá)水平與化瘀通絡(luò)灸的關(guān)系,懸灸百會(huì)、大椎、神庭穴,每穴20 min,每天治療1次,14 d為1個(gè)療程,并將艾灸組按療程分組,采用免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察各組BDNF、TrkB表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)化瘀通絡(luò)灸可上調(diào)BDNF及TrkB蛋白的表達(dá),且蛋白表達(dá)隨療程的增加而逐步增加。梁慧英等[56]對(duì)大鼠海馬組織BDNF與突觸后致密蛋白-95的蛋白表達(dá)影響進(jìn)行免疫印跡檢測(cè),發(fā)現(xiàn)采用電針百會(huì)、足三里穴治療的大鼠海馬組織中BDNF蛋白質(zhì)表達(dá)均顯著增加,推測(cè)電針對(duì)VD大鼠記憶力的改善可能與BDNF表達(dá)增加相關(guān)。樊吟秋等[57]觀察灸法與VD大鼠神經(jīng)血管新生的關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)懸灸百會(huì)、大椎和神庭穴可提高模型大鼠海馬巢蛋白(nestin)、雙皮質(zhì)素(doublecortin,DCX)和CD34等神經(jīng)新生及血管再生重要因子蛋白的表達(dá),提示艾灸有助于海馬的神經(jīng)新生和血管生成,改善VD記憶缺陷。王頻等[58]對(duì)VD大鼠百會(huì)穴使用隔附子餅灸,神庭、大椎穴用清艾條懸灸,結(jié)果發(fā)現(xiàn)VD大鼠海馬內(nèi)促腦血管新生的關(guān)鍵因子血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表達(dá)顯著上調(diào),提示該法可促進(jìn)要害部位的血管生成。高音來(lái)等[59]以海馬組織VEGF、血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)蛋白表達(dá)為切入點(diǎn),在成功造模后,采用“調(diào)心通督”針?lè)?穴選百會(huì)、神庭、水溝、大椎、風(fēng)府、命門、內(nèi)關(guān)、大陵、勞宮穴)對(duì)VD大鼠進(jìn)行針刺干預(yù),結(jié)果提示“調(diào)心通督”針刺法能明顯上調(diào)海馬組織VEGF、Ang-1蛋白表達(dá),誘導(dǎo)血管新生,改善VD癥狀。張曼等[60]采用化瘀通絡(luò)灸治療VD模型大鼠,將大鼠剃毛固定后分別于百會(huì)、神庭、大椎穴位隔上附子餅,并以清艾條壓灸,療程結(jié)束后以大鼠血清VEGF、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子作為干預(yù)的觀察對(duì)象,結(jié)果發(fā)現(xiàn)化瘀通絡(luò)灸可以顯著增強(qiáng)VEGF和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的蛋白表達(dá)。馬莉等[61]在頭穴叢刺基礎(chǔ)上加用電針治療VD大鼠,選用額區(qū)的前庭、囟會(huì)等穴位,發(fā)現(xiàn)電針組大鼠的血清VEGF含量明顯高于模型組,并于光鏡下觀察到電針組大鼠海馬凋亡細(xì)胞顯著減少,推測(cè)針灸可通過(guò)調(diào)節(jié)血清VEGF含量從而促進(jìn)腦血管再生,抑制細(xì)胞凋亡,改善臨床癥狀。

6 減輕炎癥反應(yīng)

由慢性腦缺血引起的腦組織炎癥反應(yīng)與缺血后的繼發(fā)性大腦神經(jīng)元損傷密切相關(guān)[62]。當(dāng)腦部發(fā)生缺血后,局部?jī)?nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)元等被激活,釋放白細(xì)胞介素-lβ(interleukin-1β,IL-1β)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α等炎性因子,進(jìn)一步刺激其他炎性因子的釋放,并誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞進(jìn)入損傷的腦組織,引發(fā)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng),造成神經(jīng)元損傷,導(dǎo)致認(rèn)知障礙[63-64]。黃琳娜等[65]應(yīng)用頭皮針針刺VD大鼠,頭針組選頭部“倒臟上焦(雙側(cè))、記憶(雙側(cè))、信號(hào)(雙側(cè))、思維”穴,經(jīng)2個(gè)療程治療后,發(fā)現(xiàn)頭皮針可減少VD大鼠大腦海馬組織中 IL-6 含量,對(duì)VD大鼠神經(jīng)具有保護(hù)作用。曹燕[66]對(duì)VD模型大鼠予針刺“百會(huì)”穴及雙側(cè)“足三里”穴治療后,采用ELISA技術(shù)檢測(cè)海馬促炎因子 IL-6 和TNF-α含量,結(jié)果顯示干預(yù)組海馬促炎因子 IL-6 和TNF-α含量降低,mRNA表達(dá)水平顯著下降,提示針刺有抑制神經(jīng)炎癥的作用。房雅楠等[67]選取完骨穴為電針針刺穴位,探討針灸作用于VD的機(jī)制,發(fā)現(xiàn)電針完骨穴可以顯著降低VD大鼠海馬組織炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-6及IL-1β mRNA的表達(dá),從而推測(cè)針灸可通過(guò)抑制海馬炎性因子的過(guò)度產(chǎn)生來(lái)修復(fù)受損神經(jīng),改善VD記憶障礙。田文靜等[68]以頭針治療VD模型大鼠,并用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)到治療組大鼠海馬組織中炎性介質(zhì)TNF-α含量顯著低于模型組。楊靜雯等[69]以雙血管阻斷法建立的VD大鼠模型為研究對(duì)象,觀察各組大腦前額葉皮層炎癥調(diào)節(jié)因子Toll樣受體4(Toll-like receptor4,TLR4)表達(dá)及下游炎癥因子 IL-1β、IL-6的mRNA表達(dá),發(fā)現(xiàn)針刺“足三里”“百會(huì)”可降低VD大鼠大腦前額葉皮層炎癥調(diào)節(jié)因子TLR4、IL-1β、IL-6的含量,改善學(xué)習(xí)記憶能力。阮靜茹等[70]通過(guò)懸灸“關(guān)元”“命門”“大椎”穴探討艾灸對(duì)VD大鼠炎性因子的影響,發(fā)現(xiàn)經(jīng)艾灸治療后,VD大鼠海馬組織中促炎因子TNF-α、髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65、IL-6、IL-1β表達(dá)明顯下降,推測(cè)艾灸干預(yù)抑制了VD大鼠促炎因子表達(dá),能夠減輕腦缺血后的炎性反應(yīng)性損傷,進(jìn)而改善認(rèn)知功能。

7 討論

近年來(lái),隨著心腦血管疾病發(fā)病率顯著提高,VD的防治已成為醫(yī)學(xué)界亟須解決的難題,而針灸對(duì)于VD患者顯著的臨床療效推動(dòng)了相關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的深入開(kāi)展。研究發(fā)現(xiàn),針灸能夠通過(guò)改善VD動(dòng)物模型的神經(jīng)行為學(xué)、神經(jīng)細(xì)胞凋亡、神經(jīng)遞質(zhì)異常、氧化應(yīng)激、炎癥損傷及神經(jīng)血管損傷等途徑減輕VD認(rèn)知障礙,療效顯著,應(yīng)用前景廣闊。但目前研究仍存在一定的不足:(1)在動(dòng)物模型復(fù)制方面,VD造模方法多樣,但多數(shù)實(shí)驗(yàn)采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法及雙側(cè)頸總動(dòng)脈加椎動(dòng)脈阻斷法,這兩種造模方法存在動(dòng)物病死率高、操作難度大的缺點(diǎn),適用于全腦缺血的慢性低灌注型VD,但不適用于臨床常見(jiàn)的VD分型,即多發(fā)梗死性癡呆,導(dǎo)致可信度差;部分實(shí)驗(yàn)采用的血管栓塞法具有與多發(fā)梗死的病理?yè)p害高度相似的特點(diǎn),也存在造模難度大以及對(duì)操作者要求較高的問(wèn)題;(2)研究多通過(guò)水迷宮、Y迷宮、穿梭箱實(shí)驗(yàn)、跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)評(píng)分方法對(duì)動(dòng)物認(rèn)知水平進(jìn)行測(cè)評(píng),儀器設(shè)備不統(tǒng)一,且評(píng)分判斷多受實(shí)驗(yàn)者主觀因素的影響,客觀性不足;(3)機(jī)制研究存在局限性,如腦神經(jīng)元功能、血管病理形態(tài)、基因信號(hào)通路方面的研究少見(jiàn)報(bào)道,研究指標(biāo)、靶點(diǎn)單一;(4)多數(shù)實(shí)驗(yàn)研究樣本量不足、設(shè)計(jì)欠嚴(yán)謹(jǐn),造模后未進(jìn)一步采用行為學(xué)或影像學(xué)檢測(cè)篩選模型,可能會(huì)有個(gè)別動(dòng)物模型不符合癡呆標(biāo)準(zhǔn),降低結(jié)果的可信度。故今后的實(shí)驗(yàn)研究可從以下幾方面入手:(1)探索更具有代表性、操作更為簡(jiǎn)單的模型復(fù)制方法,提高動(dòng)物存活率,降低造模對(duì)操作者熟練程度的依賴性;(2)挖掘更具客觀性的動(dòng)物認(rèn)知能力評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),盡可能減少實(shí)驗(yàn)者主觀因素的影響;(3)加強(qiáng)腦神經(jīng)元功能學(xué)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及血管病理形態(tài)等方面的機(jī)制研究;(4)規(guī)范實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),提高樣本量,造模后利用行為學(xué)檢測(cè)或影像學(xué)技術(shù)剔除不符合標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物模型,為干預(yù)方法的可行性提供客觀嚴(yán)謹(jǐn)?shù)淖C據(jù)?？傊?加強(qiáng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的廣度、深度,為針灸治療VD提供更加充分、科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù),是推廣針灸臨床應(yīng)用、提高VD患者生活質(zhì)量的重要途徑。