聯(lián)合應(yīng)用Xpert MTB/RIF、SAT-TB及MTB/NTM PCR方法檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液對(duì)痰涂陰性肺結(jié)核的快速診斷價(jià)值

甄利波，王靜，劉立賓，孫亞萍，王慧杰，莫婷

聯(lián)合應(yīng)用Xpert MTB/RIF、SAT-TB及MTB/NTM PCR方法檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液對(duì)痰涂陰性肺結(jié)核的快速診斷價(jià)值

甄利波，王靜，劉立賓，孫亞萍，王慧杰，莫婷

浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬杭州市胸科醫(yī)院（杭州市紅十字會(huì)醫(yī)院）結(jié)核內(nèi)科及結(jié)核實(shí)驗(yàn)室，浙江杭州 310003

評(píng)估聯(lián)合應(yīng)用多色巢式熒光定量PCR（Xpert mycobacterium tuberculosis and rifampicin sensitivity test，Xpert MTB/RIF）、RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)（simultaneous amplification and testing of tuberculosis，SAT‐TB）、熒光探針?lè)种U菌核酸檢測(cè)（mycobacterium tuberculosis/non-mycobacterium tuberculosis polymerase chain reaction，MTB/NTM PCR）3種方法檢測(cè)疑診肺結(jié)核患者的支氣管肺泡灌洗液標(biāo)本對(duì)痰涂陰性肺結(jié)核的快速診斷價(jià)值。采集2019年10月至2021年9月杭州市紅十字會(huì)醫(yī)院收治的痰涂片至少3次陰性的疑診肺結(jié)核的898例患者支氣管肺泡灌洗液，以MIGT960液體培養(yǎng)陽(yáng)性為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估Xpert MTB/RIF、SAT-TB及TB/NTM PCR在檢出MTB感染、耐藥結(jié)核感染以及NTM感染中的快速診斷價(jià)值。在對(duì)MTB的檢出效能方面，Xpert MTB/RIF、SAT-TB及TB/NTM PCR對(duì)MTB的檢出率分別為87.24%、80.73%、88.02%，3者均達(dá)到80%以上，其中SAT-TB的檢出率最低，其余兩者相當(dāng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（<0.001）。而3者組合的平行試驗(yàn)對(duì)MTB的檢出率最高達(dá)97.14%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（<0.001）。在對(duì)耐藥結(jié)核的檢出效能方面，MIGT960液體培養(yǎng)及Xpert MTB/RIF分別檢出8.59%及10.94%的耐藥結(jié)核，雖Xpert較高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（=0.122）；而兩者組合的平行試驗(yàn)可以檢出12.24%的耐藥結(jié)核，顯著高于單用Xpert的效能（=0.019）。在對(duì)NTM的檢出方面，MIGT960液體培養(yǎng)（14.03%）高于NTM-DNA（8.24%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（<0.001），兩者組合的平行試驗(yàn)的檢出率更高（14.48%）。與傳統(tǒng)細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法相比，聯(lián)合使用Xpert MTB/RIF、SAT-TB及MTB/NTM PCR可以快速、敏感地檢測(cè)出痰涂陰性疑診肺結(jié)核患者支氣管肺泡灌洗液標(biāo)本中的結(jié)核核酸，同步檢出耐藥，還同時(shí)可以鑒別MTB與NTM，縮短了確診時(shí)間，給疑診肺結(jié)核患者的早期快速診斷提供了有效的實(shí)驗(yàn)室方案，值得臨床推廣應(yīng)用。

核酸擴(kuò)增；結(jié)核分枝桿菌；非結(jié)核分枝桿菌；支氣管肺泡灌洗液；診斷效能

結(jié)核病仍然是我國(guó)面臨的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題，世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）《全球結(jié)核病報(bào)告2022》[1]指出，我國(guó)仍然是全球22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一，無(wú)論是新發(fā)病例數(shù)還是患病總?cè)藬?shù)仍居全球第2位，現(xiàn)有結(jié)核病患者約100萬(wàn)，每年死于結(jié)核病的患者約20萬(wàn)人，給我國(guó)經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展帶來(lái)巨大負(fù)擔(dān)。尤其是在新冠病毒感染此起彼伏的影響下，結(jié)核病疫情的防控局面仍受到嚴(yán)峻挑戰(zhàn)[2]。WHO在2016—2035年的工作計(jì)劃中指出，2025年結(jié)核病死亡率應(yīng)在2015年的基礎(chǔ)上下降75%，2035年下降95%；結(jié)核病發(fā)病率分別下降50%和90%[3]。要實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)目前面臨的困難很多，如2022年新發(fā)現(xiàn)的結(jié)核病患者中，估計(jì)被發(fā)現(xiàn)和報(bào)告的僅為67%左右[4]；要達(dá)到全球終止結(jié)核病的目標(biāo)，需要在診斷方法和發(fā)現(xiàn)策略方面采取更有效的措施。在結(jié)核病的傳播研究方面，我國(guó)結(jié)核病的傳播以近期傳播為主；感染北京基因型菌株和耐多藥菌株是導(dǎo)致近期傳播的危險(xiǎn)因素；而1/3的近期傳播是由涂陰培陽(yáng)結(jié)核病患者所致[5]。國(guó)外研究也表明，痰涂陰性肺結(jié)核的接觸者被感染的概率為7.3%～21.0%[6]，因此，如何提高涂陰肺結(jié)核的診斷發(fā)現(xiàn)率，做到早期發(fā)現(xiàn)、早期治療，對(duì)及時(shí)截?cái)鄠鞑ネ緩?，減少播散，并最終消滅結(jié)核病具有重要意義[7]。

核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)聯(lián)合支氣管鏡下肺泡灌洗術(shù)，兩者相輔相成，相對(duì)于傳統(tǒng)的培養(yǎng)及涂片檢測(cè)方法，縮短了檢測(cè)周期，具有高靈敏度和準(zhǔn)確度，已成為肺部感染病原體檢測(cè)的有效工具[8]。本研究前期聯(lián)合使用兩種分子檢測(cè)手段檢測(cè)早期痰涂陰性肺結(jié)核患者的支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF），取得了較好的臨床效果[9]，所以進(jìn)一步研究支氣管鏡下靶向感染局部的支氣管肺泡灌洗術(shù)聯(lián)合多種分子生物學(xué)手段的檢測(cè)在痰涂陰性肺結(jié)核的早期診斷中具有重要的臨床意義[10]。本研究收集痰涂陰性疑診肺結(jié)核患者的BALF標(biāo)本，使用多色巢式熒光定量PCR（Xpert mycobacterium tuberculosis and rifampicin sensitivity test，Xpert MTB/RIF）、RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)（simultaneous amplification and testing of tuberculosis，SAT-TB）及熒光探針?lè)种U菌核酸檢測(cè)（mycobacterium tuberculosis/non- mycobacterium tuberculosis polymerase chain reaction，MTB/NTM PCR）3種不同類型靶標(biāo)核酸檢測(cè)方法實(shí)行聯(lián)合檢測(cè)，評(píng)估單一方法及3者任一陽(yáng)性的平行試驗(yàn)對(duì)痰涂陰性肺結(jié)核的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年10月至2021年9月在杭州市紅十字會(huì)醫(yī)院結(jié)核病診療中心及呼吸科就診疑診為肺結(jié)核的898例患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡>12周歲；②肺部影像學(xué)提示“活動(dòng)性肺結(jié)核”；③至少3次鏡檢抗酸桿菌痰涂片陰性者（簡(jiǎn)稱“涂陰”）；④可耐受支氣管鏡下支氣管肺泡灌洗術(shù)；⑤患者及家屬同意本研究并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并意識(shí)障礙、精神性疾病者；②合并嚴(yán)重心、肝、腎等器官功能不全者；③合并顏面部外傷后、畸形，或鼻咽、口咽手術(shù)等不適合行支氣管鏡檢查者；④嚴(yán)重凝血功能異常，或血流動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定需使用血管活性藥物者。所有患者均完成電子支氣管鏡下支氣管肺泡灌洗術(shù)，BALF使用美國(guó)BD公司BactecMGIT 960專業(yè)分枝桿菌快速培養(yǎng)、鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)培養(yǎng)提示分枝桿菌生長(zhǎng)的疑診肺結(jié)核患者898例，其中培養(yǎng)提示NTM為130例，耐多藥肺結(jié)核66例，其余702例均為敏感肺結(jié)核。男535例，女363例，年齡（44.32±12.56）歲。本研究經(jīng)杭州市紅十字會(huì)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批號(hào)：2018研審第235號(hào)），并獲得患者知情同意。

1.2 方法

1.2.1 支氣管鏡檢查 患者空腹下接受局部麻醉或靜吸復(fù)合麻醉下經(jīng)鼻或經(jīng)口電子支氣管鏡下常規(guī)檢查術(shù)。

1.2.2 BALF標(biāo)本采集 結(jié)合患者胸部CT表現(xiàn)，支氣管鏡頭端吸引孔道靶向病灶局部支氣管末端，抵住末端管口，經(jīng)孔道注入生理鹽水10～15ml入遠(yuǎn)端肺泡組織，靜置5s后經(jīng)孔道負(fù)壓吸引，收集BALF 5～10ml。

1.2.3 樣本液化處理和菌體富集 取5ml以上的BALF標(biāo)本，視BALF清濁程度加入0.5%N‐乙酰‐L‐半胱氨酸（NALC）‐NaOH處理液漩渦震蕩混勻（液化時(shí)間不能超過(guò)5min），離心得沉渣后采用6.8% PBS洗滌后分別進(jìn)行抗酸染色、Bactec‐MGIT960結(jié)核分枝桿菌快速培養(yǎng)、DNA及RNA提取。

1.2.4 萋尼氏抗酸染色 按照結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行[9]。

1.2.5 Bactec MGIT 960結(jié)核分枝桿菌快速培養(yǎng) 按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行（批號(hào)20190110和20205810等）。

1.2.6 菌型鑒定 采用德國(guó)HAIN Lifescience的The GenoType system 鑒定（簡(jiǎn)稱HAIN試驗(yàn)），按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行（批號(hào)20191020）。

1.2.7 MTB/NTM PCR檢測(cè) 采用分枝桿菌（MTB/ NTM）核酸檢測(cè)試劑盒（PCR‐熒光探針?lè)ǎ?，?gòu)自凱杰生物工程（深圳）有限公司，按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行（批號(hào) 20191104和 20201511等）。

1.2.8 RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)檢測(cè) 采用結(jié)核分枝桿菌（，TB）核酸檢測(cè)試劑盒（RNA恒溫?cái)U(kuò)增），購(gòu)自上海仁度公司，按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行（批號(hào) 20192015和20201591等）。

1.2.9 多色巢式熒光定量PCR（Xpert MTB/RIF）檢測(cè) 采用賽沛公司GeneXpert分子診斷系統(tǒng)，標(biāo)本使用2:1的試劑進(jìn)行液化和滅活，然后轉(zhuǎn)入試驗(yàn)盒中，然后插入MTB/RIF試驗(yàn)臺(tái)，由設(shè)備自動(dòng)進(jìn)行標(biāo)本的濾過(guò)和清洗、超聲溶解、DNA釋放，并在整合反應(yīng)管里自動(dòng)進(jìn)行巢式實(shí)時(shí)擴(kuò)增和檢測(cè)，并自動(dòng)生成檢測(cè)結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 3種檢測(cè)方法對(duì)痰涂陰性患者BALF中MTB檢出效果分析

剔除NTM后，對(duì)液體快速培養(yǎng)提示結(jié)核分枝桿菌陽(yáng)性768例患者BALF的檢測(cè)方面，Xpert MTB/RIF、SAT-TB、MTB/NTM-PCR 3種方法檢測(cè)陽(yáng)性例數(shù)分別為670例、620例、676例，檢出率分別為87.24%、80.73%、88.02%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（>0.05）。3者同時(shí)為陽(yáng)性的檢出例數(shù)為562例，陽(yáng)性率為73.18%。如果把3者組合為一個(gè)平行試驗(yàn)，即同一患者的BALF標(biāo)本3種檢測(cè)方法中任一陽(yáng)即認(rèn)定為陽(yáng)性，以此作為標(biāo)準(zhǔn)其陽(yáng)性病例檢出數(shù)為746例，陽(yáng)性率為97.14%，顯著高于3種方法單一使用的檢出效能（<0.001）。SAT-TB+Xpert MTB/RIF雙陽(yáng)、SAT-TB+MTB/NTM-PCR雙陽(yáng)的檢出的病例數(shù)分別為578例、620例，檢出率分別為75.26%、80.73%，后者的檢出率顯著高于前者，（=0.010），見表１。

表1 3種檢測(cè)方法對(duì)BALF中MTB檢出效果分析[n（%），n=768]

注：與Xpert及PCR比較，*<0.001；與SAT+Xpert雙陽(yáng)比較，#=0.010

2.2 Xpert MTB/RIF與MGIT 960對(duì)痰涂陰性患者BALF耐利福平結(jié)核菌（RR-TB）檢出效果比較

BALF標(biāo)本培養(yǎng)提示結(jié)核分枝桿菌陽(yáng)性768例患者中，MGIT 960提示耐多藥肺結(jié)核66例，耐多藥檢出率8.59%，其中，Xpert同步提示利福平耐藥者56例，陽(yáng)性率為84.85%。768例患者中，Xpert提示利福平耐藥者84例，陽(yáng)性率為10.94%，同步MGIT 960檢出56例，陽(yáng)性率為66.67%。Xpert MTB/RIF檢測(cè)RR-TB的敏感度為66.67%（95%：59.61～72.45），特異性為98.54%（95%：93.65～98.89）。而兩者聯(lián)用檢出耐藥共計(jì)94例，耐藥檢出率為12.24%。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，768例患者中，Xpert提示利福平耐藥且DNA陽(yáng)性者78例，陽(yáng)性率為10.10%，高于培養(yǎng)耐藥檢出率，見表2、3。

表2 Xpert MTB/RIF與MGIT 960對(duì)BALF中MTB耐藥情況檢出效果分析

表3 3種檢測(cè)方法對(duì)BALF中MTB耐藥情況檢出效果分析[n（%），n=768]

注：與培養(yǎng)耐藥比較，*=0.122，#=0.019

2.3 MTB/NTM-PCR與液體快速培養(yǎng)在NTM檢出方面的效果分析

因?yàn)門B/NTM-PCR同時(shí)整合了結(jié)核分枝桿菌（MTB）及NTM的特異性探針，所以可以鑒別MTB與NTM，若是MTB-DNA陽(yáng)性同時(shí)NTM-DNA陰性，則明確為MTB感染；而MTB-DNA陰性同時(shí)NTM-DNA陽(yáng)性，則明確為NTM感染。本研究中，在培養(yǎng)提示NTM的126份BALF標(biāo)本中，NTM-DNA檢出陽(yáng)性70例，檢出率為55.56%，檢出率并不高，尚不能滿足臨床對(duì)于快速診斷NTM肺病的需要。NTM-DNA檢出陽(yáng)性的74例標(biāo)本中，同步培養(yǎng)提示NTM者達(dá)到70例，培養(yǎng)檢出率為94.59%。960快速培養(yǎng)聯(lián)合NTM-DNA共計(jì)檢出NTM130例，在898份BALF樣本中總體檢出率為14.48%，見表4。

表4 MTB/NTM PCR聯(lián)合Bactec MGIT 960快速培養(yǎng)在NTM檢出方面的效果分析[n（%）]

注：與PCR比較，*<0.001

3 討論

我國(guó)作為全球結(jié)核病疫情第二大國(guó)，一直存在結(jié)核病的早期檢出率不高，診斷治療不及時(shí)的問(wèn)題，并帶來(lái)耐藥結(jié)核檢測(cè)率及治療率低的問(wèn)題[10-11]，不利于結(jié)核病疫情的防控，也給經(jīng)濟(jì)社會(huì)帶來(lái)巨大負(fù)擔(dān)。隨著常規(guī)肺部影像篩查方法的日漸普及，早期痰涂陰性肺結(jié)核的檢出率越來(lái)越高，但痰涂陰性肺結(jié)核的確診比較困難，普通痰涂片病原學(xué)檢測(cè)的敏感度、陽(yáng)性率太低，培養(yǎng)的周期較長(zhǎng)，均不能滿足臨床開展病原診斷精準(zhǔn)、快速的需求。所以在縣級(jí)及以上醫(yī)療機(jī)構(gòu)針對(duì)疑診肺結(jié)核患者開展支氣管鏡下BALF進(jìn)行MTB核酸的檢測(cè)開展得越來(lái)越普遍。

結(jié)核病臨床及實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用較多的檢測(cè)項(xiàng)目包括基于DNA的Xpert MTB/RIF、MTB/NTM PCR，以及基于RNA的SAT-TB，3者無(wú)論是從技術(shù)原理還是臨床應(yīng)用上均有一定差異。

基于熒光定量PCR的Xpert MTB/RIF檢測(cè)系統(tǒng)，為一整套全自動(dòng)的結(jié)核分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)，人工加樣后系統(tǒng)可以在2h內(nèi)自動(dòng)完成MTB的分子鑒定及利福平耐藥性的檢測(cè)，最低檢測(cè)限約為131CFU/ml，敏感度和固體培養(yǎng)接近，特異性接近100%，操作簡(jiǎn)單、安全，對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求不高，還可以同時(shí)檢測(cè)利福平耐藥基因位點(diǎn)突變，是2010年到目前為止WHO強(qiáng)烈推薦用于結(jié)核和利福平耐藥的快速診斷技術(shù)[12]。由于其對(duì)實(shí)驗(yàn)室清潔度要求不高，在縣級(jí)醫(yī)院的普通細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室就可以實(shí)現(xiàn)，可以極大方便偏遠(yuǎn)地區(qū)肺結(jié)核患者的快速診斷需求。本研究發(fā)現(xiàn)Xpert MTB/RIF檢測(cè)BALF標(biāo)本總體陽(yáng)性率達(dá)到87.24%，利福平耐藥肺結(jié)核檢出陽(yáng)性率為10.94%，比培養(yǎng)檢出耐藥率8.59%要高。且Xpert MTB/RIF檢測(cè)24h出結(jié)果，快速診斷價(jià)值更高。兩者聯(lián)用對(duì)于耐藥肺結(jié)核檢出共計(jì)94例，耐藥檢出率為12.24%，這與世衛(wèi)組織對(duì)我國(guó)預(yù)估耐藥率的水平相當(dāng)[1]，說(shuō)明聯(lián)合使用Xpert MTB/RIF和960液體快速培養(yǎng)對(duì)于早期快速檢出耐多藥肺結(jié)核意義重大。

但是基于DNA的檢測(cè)方法有不足之處，即無(wú)法區(qū)分死菌與活菌、不能區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核與非活動(dòng)性結(jié)核，因?yàn)榛谖覈?guó)的國(guó)情，有規(guī)范抗結(jié)核治療史的非活動(dòng)性肺結(jié)核患者有一個(gè)龐大的人群，這給基于DNA檢測(cè)方法的解讀帶來(lái)了極大的挑戰(zhàn)。且DNA標(biāo)本之間容易交叉污染，一旦污染又難以消除，這一方面，可以提示病原轉(zhuǎn)錄活性RNA可以彌補(bǔ)。

SAT‐TB技術(shù)是建立在RNA恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)技術(shù)基礎(chǔ)上的檢測(cè)技術(shù)，是以MTB特異的16S rRNA為檢測(cè)靶標(biāo)，通過(guò)恒溫RNA擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增靶標(biāo)片段，從而快速準(zhǔn)確地判斷待檢樣本中是否有MTB活菌的存在。在《肺結(jié)核活動(dòng)性判斷規(guī)范及臨床應(yīng)用專家共識(shí)》[13]中，強(qiáng)烈推薦使用基于RNA的SAT‐TB等檢測(cè)技術(shù)來(lái)判定肺結(jié)核活動(dòng)性。本研究中因?yàn)榧{入的均為培養(yǎng)陽(yáng)性的病例，故無(wú)法體現(xiàn)RNA診斷活動(dòng)性肺結(jié)核的優(yōu)越性，但在活動(dòng)性肺結(jié)核的檢出方面優(yōu)勢(shì)明顯，768例活動(dòng)性肺結(jié)核患者中，SAT-TB檢出676例，檢出率為88.02%，對(duì)于快速診斷活動(dòng)性肺結(jié)核價(jià)值巨大，與既往的研究也類似[14]。借助于SAT-TB區(qū)分死菌和活菌的特點(diǎn)，有利于肺結(jié)核治療療效的監(jiān)測(cè)和輔助判愈，為治療方案提供參考，減少過(guò)度醫(yī)療，也比培養(yǎng)法更有時(shí)效性，更具有快速診斷價(jià)值。同時(shí)，聯(lián)合使用Xpert MTB/RIF既可以明確肺結(jié)核活動(dòng)性，又可以明確利福平耐藥情況，兩者雙陽(yáng)病例578例，檢出率為75.26%，對(duì)于臨床的診斷價(jià)值也較高。

MTB/NTM PCR檢測(cè)同時(shí)整合了MTB與NTM的DNA靶點(diǎn)，對(duì)于疑診肺結(jié)核并需要鑒別NTM肺病的患者有較大價(jià)值。本研究中，MTB-DNA陽(yáng)性者620例，檢出率為80.73%，與培養(yǎng)的符合率100%，與既往研究結(jié)果基本一致[14]，可見MTB/NTM PCR對(duì)MTB感染的檢出效果較為理想，具有較好的快速診斷價(jià)值。在對(duì)NTM感染的檢出方面，在培養(yǎng)提示NTM的126份BALF標(biāo)本中，NTM-DNA檢出陽(yáng)性70例，檢出率為55.56%，檢出率并不高，尚不能滿足臨床對(duì)于快速診斷NTM肺病的需要。NTM-DNA檢出陽(yáng)性的74例標(biāo)本中，同時(shí)培養(yǎng)提示NTM者達(dá)到70例，培養(yǎng)檢出率為94.59%，提示960快速培養(yǎng)在NTM的檢出方面較為優(yōu)秀。960快速培養(yǎng)聯(lián)合NTM-DNA共計(jì)檢出NTM 130例，在898份BALF樣本中總體檢出率為14.48%，與其他研究相仿[15]。另外，NTM-DNA陽(yáng)性標(biāo)本可以直接加做熔解曲線或基因分型從而在24h內(nèi)鑒定出NTM菌種，為早期快速制定抗NTM治療方案提供依據(jù)。由于臨床致病的大部分NTM在960快速液體培養(yǎng)系統(tǒng)中生長(zhǎng)速度較MTB顯著增快，所以聯(lián)合使用NTM-DNA和快速液體培養(yǎng)系統(tǒng)在NTM肺病的診斷中具有顯著優(yōu)勢(shì)。同時(shí)，MTB-DNA陽(yáng)性者可在48h內(nèi)完善熔解曲線耐藥基因檢測(cè)，同時(shí)明確異煙肼、利福平、氟喹諾酮類藥物的耐藥情況，有利于快速制定耐多藥治療方案，減少住院時(shí)間，減輕患者負(fù)擔(dān)及醫(yī)保負(fù)擔(dān)，也有利于減少耐多藥肺結(jié)核患者的社會(huì)面暴露時(shí)間，對(duì)于耐多藥肺結(jié)核疫情的防控至關(guān)重要。

在Xpert MTB/RIF、SAT-TB及MTB/NTM PCR 3種方法組合使用的平行試驗(yàn)中，3者任一陽(yáng)性即認(rèn)定為陽(yáng)，共計(jì)檢出MTB感染746例，檢出率為97.14%?？梢奡AT-TB、MTB/NTM PCR、Xpert MTB/RIF 組合使用的平行試驗(yàn)的陽(yáng)性率最高，與快速培養(yǎng)的金標(biāo)準(zhǔn)相比較也幾乎能完全覆蓋，充分體現(xiàn)了聯(lián)合使用3種方法檢測(cè)BALF對(duì)于快速診斷痰涂陰性肺結(jié)核患者的臨床價(jià)值。

當(dāng)然，本研究的研究設(shè)計(jì)存在一定局限，未納入排除結(jié)核的患者進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和討論，這樣就無(wú)法進(jìn)行各種方法的特異性和敏感度的精確統(tǒng)計(jì)和研究。本研究結(jié)果證明，支氣管鏡下肺泡灌洗術(shù)聯(lián)合3種方法聯(lián)合檢測(cè)，對(duì)不能開展結(jié)核分枝桿菌快速培養(yǎng)、NTM 鑒定的醫(yī)院或非結(jié)核病專業(yè)的呼吸科醫(yī)生而言，在結(jié)核病的快速精準(zhǔn)診斷、耐多藥肺結(jié)核的快速早期檢出、NTM肺病的精準(zhǔn)診療中的巨大價(jià)值應(yīng)該引起足夠重視。

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Value of Xpert MTB/RIF, RNA isothermal amplification real‐time testing and MTB/NTM PCR combined with detection of bronchoalveolar lavage fluid in rapid diagnosis of sputum smear‐negative pulmonary tuberculosis

Department of Tuberculosis and Tuberculosis Laboratory, Affiliated Hangzhou Chest Hospital, Zhejiang University School of Medicine (Hangzhou Red Cross Hospital), Hangzhou 310003, Zhejiang, China

To evaluate the value in detection of bronchoalveolar lavage fluid with Xpert mycobacterium tuberculosis and rifampicin sensitivity test (Xpert MTB/RIF), RNA simultaneous amplification and testing of tuberculosis (SAT-TB) and mycobacterium tuberculosis/non-mycobacterium tuberculosis polymerase chain reaction (MTB/NTM PCR) combined in diagnosis of sputum smear‐negative pulmonary tuberculosis.From October 2019 to September 2021, the bronchoalveolar lavage fluid specimens were collected from patients with suspected pulmonary tuberculosis who were tested negative for sputum smear for at least 3 times, With Bactec MGIT 960 culture set as the golden standard, rapid diagnostic value of Xpert MTB/RIF combined with SAT‐TB and MTB/NTM PCR in testing MTB infection, drug-resistant TB infection, and NTM infection were evaluated and compared with single Xpert MTB/RIF, SAT-TB and MTB/NTM PCR.A total of 898 cases were positive cultured with Bactec MGIT 960 system, 130 specimens were NTM, others were MTB. In the detection of tuberculosis, Xpert MTB/RIF, SAT-TB and MTB/NTM PCR could detect 670 specimens, 620 specimens and 676 specimens respectively, detection rate were 87.24%, 80.73% and 88.02% respectively; there was no significant difference in the value of diagnosis between the single detection of Xpert MTB/RIF and MTB/NTM PCR; the detection rate of SAT-TB was significantly lower than other two (<0.001), detection rate of 3 combined parallel test (single positive) was significantly higher than Xpert or MTB/NTM PCR (<0.001).As compared with traditional bacteriological detection, using Xpert MTB/RIF, SAT-TB and MTB/NTM PCR in combination is rapid and sensitive in diagnosis of sputum‐negative drug-sensitive and -resistance pulmonary tuberculosis and can discriminate from MTB to NTM, shorten the diagnosis time, raise the accuracy, and offer an effective auxiliary mean for diagnosis of the sputum smear‐negative pulmonary tuberculosis, and it is worthy to be promoted in hospital.

Nucleic acid amplification; Mycobacterium tuberculosis; Nontuberculosis mycobacteria; Bronchoalveolar lavage fluid; Diagnostic efficiency

R651.15

A

10.3969/j.issn.1673-9701.2023.26.001

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目（2023KY968）；杭州市衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目（0020190112）

甄利波，電子信箱：zhenlibodoctor@163.com

（2023–02–01）

（2023–08–27）