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    不同時(shí)間高氧對(duì)大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞能量代謝的影響

    2023-10-15 05:20:51黃蓉蓉瞿珊珊郭鴻陳蘇衡楊傳奇張俊妹李玉蘭
    關(guān)鍵詞:能量代謝高氧肺泡

    黃蓉蓉 瞿珊珊 郭鴻 陳蘇衡 楊傳奇 張俊妹 李玉蘭

    摘要:目的 探討不同時(shí)間高濃度氧對(duì)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞線粒體能量代謝的影響。方法 將大鼠RLE-6TN細(xì)胞分為對(duì)照組(21% O2常規(guī)培養(yǎng)4 h)、高氧1、2、3、4 h組(95% O2分別培養(yǎng)1、2、3、4 h)。采用熒光素酶化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)各組細(xì)胞的三磷酸腺苷(ATP)含量,采用微量法檢測(cè)線粒體呼吸鏈復(fù)合體V活性,熒光探針JC-1檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)線粒體呼吸鏈復(fù)合體 Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的核心亞基NADH脫氫酶亞基1(ND1)、細(xì)胞色素b(Cytb)、細(xì)胞色素C氧化酶亞基I(COXI)、ATP酶6(ATPase6)mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果 與對(duì)照組比較,高氧1、2、3、4 h組細(xì)胞線粒體呼吸鏈復(fù)合體核心亞基ND1(q=24.800,P<0.001;q=13.650,P<0.001;q=9.869,P<0.001;q=20.700,P<0.001)、COXI(q=16.750,P<0.001;q=10.120,P<0.001;q=8.476,P<0.001;q=14.060,P<0.001)及ATPase6 mRNA(q=22.770,P<0.001;q=15.540,P<0.001;q=12.870,P<0.001;q=18.160,P<0.001)表達(dá)水平均顯著降低;且高氧1、4 h組細(xì)胞ATPase活性受到抑制(q=9.435,P<0.001;q=11.230,P<0.001),ATP含量降低(q=5.615,P=0.007;q=5.029,P=0.005);而高氧2、3 h組細(xì)胞ATPase活性(q=0.156,P=0.914;q=3.197,P=0.116)及ATP含量(q=0.859,P=0.557;q=1.273,P=0.652)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組細(xì)胞線粒體膜電位之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.303,P=0.869)。結(jié)論 短時(shí)間高氧會(huì)抑制呼吸鏈復(fù)合體核心亞基表達(dá)并降低ATPase活性,導(dǎo)致肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞能量代謝障礙。

    關(guān)鍵詞:高氧;線粒體;肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞;能量代謝

    中圖分類號(hào): R614.2+7? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A? 文章編號(hào):1000-503X(2023)01-0009-07

    DOI:10.3881/j.issn.1000-503X.15096

    Excess Oxygen Supply for Different Time Periods Affect Energy Metabolism in Rat Alveolar Epithelial Type Ⅱ Cells

    HUANG Rongrong1,QU Shanshan1,GUO Hong1,CHEN Suheng1,YANG Chuanqi1,ZHANG Junmei1,LI Yulan2

    1The First School of Clinical Medical,Lanzhou University,Lanzhou 730000,China

    2Department of Anesthesiology,the First Hospital of Lanzhou University,Lanzhou 730000,China

    Corresponding author:LI Yulan Tel:13519625065,E-mail:jasm@sina.com

    ABSTRACT:Objective To observe the effect of excess oxygen supply for different time periods on the mitochondrial energy metabolism in alveolar epithelial type Ⅱ cells.Methods Rat RLE-6TN cells were assigned into a control group (21% O2 for 4 h) and excess oxygen supply groups (95% O2 for 1,2,3,and 4 h,res-pectively).The content of adenosine triphosphate (ATP),the activity of mitochondrial respiratory chain complex V,and the mitochondrial membrane potential were determined by luciferase assay,micro-assay,and fluorescent probe JC-1,respectively.Real-time fluorescence quantitative PCR was employed to determine the mRNA levels of NADH dehydrogenase subunit 1 (ND1),cytochrome b (Cytb),cytochrome C oxidase subunit I (COXI),and adenosine triphosphatase 6 (ATPase6) in the core subunits of mitochondrial respiratory chain complexes Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ,and Ⅴ,respectively.Results Compared with the control group,excess oxygen supply for 1,2,3,and 4 h down-regulated the mRNA levels of ND1 (q=24.800,P<0.001;q=13.650,P<0.001;q=9.869,P<0.001;q=20.700,P<0.001),COXI (q=16.750,P<0.001;q=10.120,P<0.001;q=8.476,P<0.001;q=14.060,P<0.001),and ATPase6 (q=22.770,P<0.001;q=15.540,P<0.001;q=12.870,P<0.001;q=18.160,P<0.001).Moreover,excess oxygen supply for 1 h and 4 h decreased the ATPase activity (q=9.435,P<0.001;q=11.230,P<0.001) and ATP content (q=5.615,P=0.007;q=5.029,P=0.005).The excess oxygen supply for 2 h and 3 h did not cause significant changes in ATPase activity (q=0.156,P=0.914;q=3.197,P=0.116) and ATP content (q=0.859,P=0.557;q=1.273,P=0.652).There was no significant difference in mitochondrial membrane potential among the groups (F=0.303,P=0.869).Conclusion Short-term excess oxygen supply down-regulates the expression of the core subunits of mitochondrial respiratory chain complexes and reduces the activity of ATPase,leading to the energy metabolism disorder of alveolar epithelial type Ⅱ cells.

    Key words:excess oxygen supply;mitochondria;alveolar epithelial type Ⅱ cell;energy metabolism

    Acta Acad Med Sin,2023,45(1):9-15

    在全身麻醉過(guò)程中,患者高氧血癥的發(fā)生率可達(dá)83%[1]。相關(guān)研究表明,長(zhǎng)時(shí)間暴露于超生理水平氧分壓下會(huì)導(dǎo)致肺組織的氧化應(yīng)激損傷[2-4]。肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(alveolar epithelial type Ⅱ cell,AEC Ⅱ)是高氧介導(dǎo)肺損傷的關(guān)鍵靶點(diǎn)[5],同時(shí)也是AEC Ⅰ的祖細(xì)胞[6],在肺發(fā)育和損傷修復(fù)過(guò)程中具有重要作用[7]。線粒體是細(xì)胞能量代謝的核心,AEC Ⅱ能量代謝異常可能影響其合成、修復(fù)功能,參與肺組織損傷的病理過(guò)程。有研究發(fā)現(xiàn)高氧4 h后小鼠肺泡上皮細(xì)胞呼吸鏈復(fù)合體酶活性及氧化磷酸化水平降低,三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)合成減少[8];高氧6 h后肺血管內(nèi)皮細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)紊亂[9]。但Farrow等[10]研究發(fā)現(xiàn),在95%的高氧條件下,肺血管內(nèi)皮細(xì)胞線粒體基質(zhì)內(nèi)活性氧在15 min內(nèi)顯著增加,30 min時(shí)達(dá)到最大[10],可見(jiàn)線粒體對(duì)高氧非常敏感,而高氧4 h內(nèi)是否影響AEC Ⅱ 的能量代謝尚不清楚。因此,本研究體外培養(yǎng)大鼠AEC Ⅱ 建立高氧細(xì)胞模型,檢測(cè)4 h內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞線粒體呼吸鏈復(fù)合體和能量代謝變化趨勢(shì),探究高氧肺損傷的形成機(jī)制。

    材料和方法

    材料 細(xì)胞株RLE-6TN購(gòu)自北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院,為永生化大鼠AEC Ⅱ。RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清、鏈霉素、青霉素、0.25%胰酶均購(gòu)自上海逍鵬生物科技有限公司;MolPure Cell/Tissue Total RNA試劑盒購(gòu)自翌圣生物科技(上海)股份有限公司;實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)試劑盒購(gòu)自南京諾唯贊生物科技股份有限公司;線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential,MMP)檢測(cè)試劑盒(JC-1)、線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ活性檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司;ATP檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物科技有限公司。

    細(xì)胞培養(yǎng)及分組 RLE-6TN細(xì)胞用含10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基,置于37 ℃、5% CO2的常規(guī)培養(yǎng)箱中培養(yǎng),待細(xì)胞覆蓋培養(yǎng)瓶80%~90%時(shí),用胰酶消化并傳代,一般2~3 d傳代1次,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶中,培養(yǎng)48 h后采用隨機(jī)數(shù)字表法將細(xì)胞分為對(duì)照組(21% O2常規(guī)培養(yǎng)4 h)、高氧1、2、3、4 h組(95% O2分別培養(yǎng)1、2、3、4 h)。

    ATP含量檢測(cè) 收集各組細(xì)胞加入200 μl ATP裂解液,冰上裂解10 min,4 ℃、12 000 g離心5 min取上清液;黑色96孔板中加入100 μl ATP檢測(cè)液,靜止3~5 min后每孔加20 μl樣品或標(biāo)準(zhǔn)品,采用多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定樣品中ATP的濃度,最后計(jì)算ATP濃度與BCA法檢測(cè)樣品蛋白濃度的比值,以μmol/mg表示。

    線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ活性檢測(cè) 收集各組細(xì)胞以800 r/min(r=6 cm)的速率離心3 min,棄掉上清液,隨后采用微量法按照線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定各組細(xì)胞ATP酶(ATP synthase,ATPase)的活性,同時(shí)測(cè)定各組細(xì)胞的蛋白濃度,以消除由于樣本中蛋白量的差異而造成的誤差。最后根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)公式計(jì)算ATPase的濃度,以U/mg prot表示。

    MMP檢測(cè) 收集各組細(xì)胞加入1 ml培養(yǎng)液和1 ml JC-1染色工作液,充分混勻,置于37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育20 min;吸除上清液,用JC-1染色緩沖液洗滌2次,加入2 ml培養(yǎng)液,在倒置熒光顯微鏡下觀察。MMP較高時(shí),JC-1聚集在線粒體基質(zhì)中形成聚合物,產(chǎn)生紅色熒光;MMP較低時(shí),JC-1不能聚集在線粒體基質(zhì)中,以單體形式存在,產(chǎn)生綠色熒光。采用Image J分析平均熒光強(qiáng)度,計(jì)算紅色平均熒光強(qiáng)度/綠色平均熒光強(qiáng)度的比值來(lái)反應(yīng)MMP變化。

    qRT-PCR檢測(cè) 收集各組細(xì)胞,采用MolPure Cell/Tissue Total RNA試劑盒提取總RNA并測(cè)定濃度,HiScript Ⅱ Q RT SuperMix試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix試劑盒進(jìn)行qRT-PCR測(cè)定。以GAPDH作為內(nèi)參,擴(kuò)增基因?yàn)镹ADH脫氫酶亞基1(NADH dehydrogenase subunit 1,ND1)、細(xì)胞色素b(cytochrome b,Cytb)、細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅰ(cytochrome C oxidase subunit Ⅰ,COXI)、ATPase6。反應(yīng)程序:95 ℃ 30 s、95 ℃ 5 s和60 ℃ 30 s,40個(gè)循環(huán),95 ℃ 15 s、60 ℃ 60 s、95 ℃ 15 s。采用2-ΔΔCt法計(jì)算mRNA的相對(duì)表達(dá)量。qRT-PCR引物序列見(jiàn)表1。

    統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用GraphPad Prism 9軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用單因素方差分析,方差齊兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)。所有實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)3次。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié)? 果

    細(xì)胞內(nèi)ATP含量 對(duì)照組,高氧1、2、3、4 h組細(xì)胞ATP含量分別為(0.44±0.02)、(0.37±0.01)、(0.45±0.03)、(0.46±0.03)、(0.38±0.01)μmol/mg,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=11.170,P=0.001)。與對(duì)照組比較,高氧1、4 h組細(xì)胞ATP含量明顯降低(q=5.615,P=0.007;q=5.029,P=0.005),而2、3 h組細(xì)胞ATP含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=0.859,P=0.557;q=1.273,P=0.652);與高氧1 h組比較,高氧2、3 h組細(xì)胞ATP含量明顯升高(q=6.474,P=0.005;q=6.888,P=0.005),而4 h組細(xì)胞ATP含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=0.586,P=0.687);與高氧4 h組比較,高氧2、3 h組細(xì)胞ATP含量明顯升高(q=5.888, P=0.005;q=6.302,P=0.006)。

    線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ活性 對(duì)照組,高氧1、2、3、4 h組細(xì)胞ATPase活性分別為(148.10±7.36)、(109.40±10.57)、(148.70±4.16)、(135.00±8.32)、(102.00±1.32)U/mg prot,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=28.240,P<0.001)。與對(duì)照組比較,高氧1、4 h組細(xì)胞ATPase活性明顯降低(q=9.435,P<0.001;q=11.230,P<0.001),而2、3 h組細(xì)胞ATPase活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=0.156,P=0.914;q=3.197,P=0.116);與高氧1 h組比較,高氧2、3 h組細(xì)胞ATP含量明顯升高(q=11.230,P<0.001;q=9.591,P=0.001),而高氧4 h組細(xì)胞ATP含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=1.793,P=0.234);與高氧4 h組比較,高氧2、3 h組細(xì)胞ATPase活性明顯升高(q=11.380,P<0.001;q=8.032,P<0.001)。

    熒光探針檢測(cè)MMP變化 熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示,對(duì)照組及高氧1、2、3、4 h組細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度比值分別為4.320±0.641、4.149±1.023、4.371±0.599、4.585±0.397、4.649±0.260,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.303,P=0.869)(圖1)。

    ND1、Cytb、COXI和ATPase6的mRNA表達(dá) 對(duì)照組及高氧1、2、3、4 h組細(xì)胞ND1(F=93.650,P<0.001)、COXI(F=41.080,P<0.001)和ATPase6 mRNA(F=73.420,P<0.001)表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而Cytb mRNA表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.280,P=0.058)。與對(duì)照組比較,高氧1、2、3、4 h組細(xì)胞ND1(q=24.800,P<0.001;q=13.65,P<0.001;q=9.869,P<0.001;q=20.700,P<0.001)、COXI(q=16.750,P<0.001;q=10.120,P<0.001;q=8.476,P<0.001;q=14.060,P<0.001)及ATPase6 mRNA(q=22.770,P<0.001;q=15.540,P<0.001;q=12.870,P<0.001;q=18.160,P<0.001)表達(dá)水平明顯降低;與高氧1 h組比較,高氧2、3 h組細(xì)胞ND1(q=11.160,P<0.001;q=14.940,P<0.001)、COXI(q=6.625,P=0.002;q=8.273,P=0.001)和ATPase6 mRNA(q=7.225,P=0.001;q=9.897,P<0.001)表達(dá)水平明顯升高,高氧4 h組ND1(q=4.107,P=0.016)、ATPase6 mRNA(q=4.612,P=0.009)表達(dá)水平明顯升高,而COXI mRNA表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=2.688,P=0.087);與高氧4 h組比較,高氧2、3 h組細(xì)胞ND1(q=7.052,P<0.001;q=10.830,P<0.001)、COXI(q=3.938,P=0.019;q=5.585,P=0.007)及高氧3 h組ATPase6 mRNA(q=5.285,P=0.010)表達(dá)水平明顯增高,而高氧2 h組ATPase6 mRNA表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=2.613,P=0.094)(圖2)。

    討? 論

    長(zhǎng)時(shí)間高氧暴露會(huì)導(dǎo)致多器官損傷,尤其是肺損傷[11]。高氧性肺損傷的機(jī)制非常復(fù)雜,至今尚未完全清楚。Garcia等[8]研究表明,高氧4 h會(huì)引起線粒體動(dòng)力學(xué)、能量代謝等功能紊亂,但是4 h以內(nèi)高氧是否會(huì)影響線粒體功能尚不清楚。本研究基于外科常規(guī)手術(shù)時(shí)間[12-14]、既往研究[15-16]及預(yù)實(shí)驗(yàn)制備了高氧RLE-6TN細(xì)胞模型,探究4 h內(nèi)的高氧暴露對(duì)AEC Ⅱ能量代謝的影響,結(jié)果顯示高氧1 h AEC Ⅱ線粒體呼吸鏈復(fù)合體核心亞基ND1、COXI、ATPase6 mRNA表達(dá)水平明顯降低,細(xì)胞總ATP合成急劇減少,ATPase活性降低;高氧持續(xù)2~3 h線粒體功能和酶活性代償性增高;高氧4 h細(xì)胞ATP含量又進(jìn)一步下降,能量合成障礙,表明短時(shí)間高氧可抑制AEC Ⅱ的能量代謝,參與高氧肺損傷的發(fā)生。

    線粒體呼吸鏈?zhǔn)羌?xì)胞合成ATP的主要結(jié)構(gòu),ATP合成體系由2個(gè)電子載體(輔酶Q和Cytc)及位于線粒體內(nèi)膜上的復(fù)合體Ⅰ~Ⅴ組成,其中復(fù)合體Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ具有質(zhì)子泵功能,傳遞電子的同時(shí)驅(qū)動(dòng)質(zhì)子從線粒體基質(zhì)跨過(guò)內(nèi)膜進(jìn)入膜間隙,同時(shí)形成MMP。質(zhì)子通過(guò)線粒體復(fù)合體Ⅴ(ATPase)時(shí)驅(qū)動(dòng)二磷酸腺苷與Pi結(jié)合并釋放ATP。由線粒體DNA編碼的13條多肽中包括線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ上的核心亞基ND1、Cytb、COXI和ATPase6[17-18],是組成線粒體呼吸鏈復(fù)合體的主要成分,在電子傳遞及線粒體氧化磷酸化偶聯(lián)過(guò)程中起著重要作用,一旦受損可破壞呼吸鏈復(fù)合體的結(jié)構(gòu),從而導(dǎo)致氧化磷酸化解偶聯(lián)及ATP合成障礙[17]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),暴露于高氧的大鼠肺泡細(xì)胞線粒體耗氧量減少,復(fù)合體 Ⅰ 和 Ⅱ 的活性分別降低77%和63%,ATP合成減少[19-20];同樣,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)也顯示高氧降低了小鼠肺泡上皮細(xì)胞(MLE-12)對(duì)底物的利用率,抑制呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ功能,導(dǎo)致氧化磷酸化水平降低及ATP合成減少[8,21],提示線粒體氧化磷酸化在高氧狀態(tài)下受到顯著抑制。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),AEC Ⅱ細(xì)胞在高氧4 h以內(nèi)能量代謝呈雙向改變:高氧1 h能量代謝出現(xiàn)顯著“頓抑”現(xiàn)象,2~3 h有代償性增高,4 h再次出現(xiàn)降低;同時(shí),ATPase活性和線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ的核心亞基ND1、COXI、ATPase6 mRNA表達(dá)水平與ATP含量變化趨勢(shì)一致。由此可知短時(shí)間高氧暴露可引起線粒體能量代謝障礙,從而參與高氧肺損傷的病理過(guò)程。

    然而,本研究中呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ核心亞基Cytb的表達(dá)及MMP在高氧4 h內(nèi)均未發(fā)生明顯的變化,這與Garcia等[8]及Resseguie等[22]研究結(jié)果一致。Cytb表達(dá)可能與細(xì)胞類型、高氧暴露的時(shí)間及對(duì)氧化應(yīng)激刺激的敏感性不同有關(guān)。MMP是反映細(xì)胞內(nèi)線粒體功能狀態(tài)的重要指標(biāo)之一,是線粒體進(jìn)行氧化磷酸化、產(chǎn)生ATP的先決條件。Audi等[23]將大鼠暴露于95%的高氧48 h后發(fā)現(xiàn)肺組織線粒體發(fā)生去極化,即MMP降低;同樣Zhu等[24]發(fā)現(xiàn)高氧24 h顯著降低了人肺泡上皮細(xì)胞MMP。而本研究中MMP表達(dá)沒(méi)有明顯變化,這可能是因?yàn)槎虝r(shí)間高氧只影響了細(xì)胞的氧化磷酸化,并未對(duì)線粒體結(jié)構(gòu)造成廣泛損傷[8],或是線粒體在呼吸鏈損傷的狀態(tài)下通過(guò)糖酵解產(chǎn)生ATP來(lái)維持MMP[25]。

    Garcia等[8]在探究高氧4 h對(duì)MLE-12細(xì)胞線粒體功能的影響時(shí)發(fā)現(xiàn),在總的氧化磷酸化水平降低、ATP生成減少的同時(shí),線粒體內(nèi)、外膜融合蛋白轉(zhuǎn)錄增加,而線粒體分裂蛋白未發(fā)生改變,從而導(dǎo)致線粒體質(zhì)量增加。線粒體代謝學(xué)與動(dòng)力學(xué)關(guān)系密切,已有研究證實(shí)線粒體融合是對(duì)線粒體代謝失調(diào)的保護(hù)性反應(yīng)[26]。本研究中高氧2~3 h代償性增高的原因及機(jī)制是否與線粒體動(dòng)力學(xué)有關(guān),還需進(jìn)一步探究。

    AEC Ⅱ功能呈能量依賴性,AEC Ⅱ內(nèi)線粒體數(shù)量是Ⅰ型細(xì)胞的31倍,線粒體體積是其他肺組織細(xì)胞的3倍[27]。高氧引起的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激可誘導(dǎo)線粒體DNA突變或缺失[28],線粒體呼吸鏈酶活性降低,引起AEC Ⅱ 能量代謝失衡,從而造成肺表面活性物質(zhì)分泌不足,AEC Ⅱ 分化、修復(fù) Ⅰ 型細(xì)胞能力受損[29-30]。因此,高氧誘導(dǎo)線粒體功能障礙引起的AEC Ⅱ能量代謝紊亂,可能是造成高氧肺損傷的原因之一。

    綜上,本研究結(jié)果表明,短時(shí)間高氧雖然會(huì)出現(xiàn)損傷后代償效應(yīng),但代償后仍會(huì)導(dǎo)致線粒體呼吸鏈復(fù)合體核心亞基ND1、COXI及ATPase6的表達(dá)降低及線粒體ATPase的活性被抑制,進(jìn)而干擾AEC Ⅱ 能量代謝,參與高氧肺損傷的病理過(guò)程。但本研究未進(jìn)一步探究線粒體動(dòng)力學(xué)及其與能量代謝之間的關(guān)系,未來(lái)還需要對(duì)高氧肺損傷時(shí)線粒體功能相關(guān)表型和機(jī)制的變化進(jìn)行深入分析。

    參 考 文 獻(xiàn)

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    (收稿日期:2022-05-06)

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