亞臨床肝性腦病患者腸道菌群和炎癥因子水平變化及黃連素的干預(yù)作用*

徐華棟 張玉婷

肝性腦病是一種精神異常綜合征，預(yù)后不佳，病死率高，是威脅肝硬化患者生命安全的重要危險(xiǎn)因素之一[1-2]。亞臨床肝性腦?。╯ubclinical hepatic encephalopathy，SHE）是指肝硬化患者雖沒有肝性腦病臨床表現(xiàn)癥狀，甚至部分患者代謝良好，可以照常工作，但系統(tǒng)性神經(jīng)心理操作測試會提示檢查結(jié)果異常[3]。機(jī)體內(nèi)腸道菌群失去平衡，腸道屏障受損，一些有害物質(zhì)包括氨、內(nèi)毒素等會通過破壞屏障進(jìn)入人體，從而誘發(fā)肝性腦病出現(xiàn)。近年來也有學(xué)者認(rèn)為炎癥反應(yīng)是引發(fā)肝硬化相關(guān)肝性腦病發(fā)生的原因之一，炎癥因子對星形細(xì)胞生理功能的調(diào)節(jié)具有重要作用，促炎因子表達(dá)水平升高會加劇對生理功能的損害，會讓疾病治療更加復(fù)雜[4]。因此，在疾病治療時需要加強(qiáng)對患者腸道菌群的觀察，還需要關(guān)注機(jī)體炎癥因子表達(dá)水平的變化。針對該疾病，目前尚無特效藥，主要以肝功能調(diào)節(jié)、抗感染等治療為主。黃連素也被稱之為小檗堿，是從含有小檗堿的植物藥物黃連、黃柏等中提煉的生物堿，其不僅具有清熱解毒功效，還能調(diào)節(jié)機(jī)體腸道菌群[5-6]。鑒于此，本文分析SHE 患者腸道菌群及血清炎癥因子的變化，并探討黃連素的應(yīng)用價(jià)值，具體內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021 年3 月—2023 年2 月宜春市人民醫(yī)院收治的78 例SHE 患者作為病例組，并以同期進(jìn)行健康體檢的50 名志愿者作為對照組。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①入院檢查時病例組患者確診為SHE；②年齡30～65 歲，性別不限；③具備良好認(rèn)知及語言表達(dá)能力；④配合完成整個療程治療。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①檢查結(jié)果提示病例組疾病已發(fā)展為臨床型肝性腦病；②合并神經(jīng)及精神系統(tǒng)疾?。虎鄄±M對象入組治療前已經(jīng)使用鎮(zhèn)靜劑治療。本次研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)審核同意。研究對象及家屬對本次研究內(nèi)容充分知情，并自愿簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 腸道菌群測定：無菌采集新鮮糞便約2 g，放入無菌離心管，使用脫氧核糖酸提取試劑盒（上海躍騰生物技術(shù)有限公司，KB019-100T）提取標(biāo)準(zhǔn)菌株脫氧核糖酸，測定其濃度，并計(jì)算標(biāo) 準(zhǔn) 品 聚 合 酶 鏈 反 應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）片段拷貝數(shù)，并采取相同方法提取細(xì)菌總脫氧核糖酸，采用自行設(shè)計(jì)的引物對糞便細(xì)菌脫氧核糖酸進(jìn)行熒光定量PCR 檢查，而后根據(jù)反應(yīng)后的擴(kuò)增曲線計(jì)算細(xì)菌拷貝數(shù)。血清炎癥因子測定：患者血液檢測前保持空腹?fàn)顟B(tài)，遵循無菌操作原則抽取靜脈血3 mL，離心條件為：3 000 r/min，離心半徑5 cm，離心處理10 min 后，使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白細(xì)胞介素-8（interleukin-8，IL-8），所有檢測試劑盒均購自上海恒源生物科技有限公司。

1.2.2 治療方法 病例組治療：在保持低鹽飲食及護(hù)肝治療基礎(chǔ)上，服用黃連素（生產(chǎn)廠家：太極集團(tuán)四川綿陽制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z51020212，規(guī)格：每片含鹽酸小檗堿30 mg）進(jìn)行治療，每日3 次，每次2 片，連續(xù)治療1 個月。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）腸道菌群：病例組治療前，對比觀察兩組腸桿菌、梭菌、糞腸球菌、雙歧桿菌、乳桿菌菌落數(shù)值。（2）血清炎癥因子：病例組治療前，對比觀察兩組血清炎癥因子指標(biāo)數(shù)據(jù)，包括IL-6、IL-8、TNF-α。（3）腸道菌群、炎癥因子變化：對比觀察病例組患者治療前后腸道菌群、血清炎癥因子指標(biāo)變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對研究對象腸道菌群檢測結(jié)果等數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用（±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

對照組男29 例，女21 例；年齡30～65 歲，平均（48.63±3.14）歲。病例組男45 例，女33 例；年齡30～64 歲，平均（48.64±3.28）歲；肝硬化病史1～9 年，平均（4.26±0.48）年。兩組性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

2.2 兩組腸道菌群數(shù)量差異比較

病例組腸桿菌、梭菌、糞腸球菌均高于對照組，雙歧桿菌、乳桿菌均低于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組腸道菌群數(shù)量差異比較[lg CFU/g，（±s）]

表1 兩組腸道菌群數(shù)量差異比較[lg CFU/g，（±s）]

組別 腸桿菌 梭菌 糞腸球菌 雙歧桿菌 乳桿菌對照組（n=50） 7.05±0.16 5.75±0.16 7.15±0.13 9.17±1.46 9.46±1.28病例組（n=78） 10.25±1.26 9.78±1.26 9.12±1.48 7.26±0.43 7.53±0.49 t 值 17.841 22.469 9.376 10.863 12.033 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 兩組血清炎癥因子表達(dá)水平比較

病例組炎癥因子表達(dá)水平均高于對照組（P＜0.05），見表2。

表2 兩組血清炎癥因子表達(dá)水平比較[ng/L，（±s）]

表2 兩組血清炎癥因子表達(dá)水平比較[ng/L，（±s）]

組別 IL-6 IL-8 TNF-α對照組（n=50） 0.45±0.11 40.26±3.45 1.22±0.22病例組（n=78） 1.42±0.18 74.26±7.26 2.37±0.49 t 值 34.203 30.921 15.601 P 值 0.000 0.000 0.000

2.4 病例組患者治療前后腸道菌群、炎癥因子比較

治療后病例組患者腸桿菌、梭菌、糞腸球菌均低于治療前，雙歧桿菌、乳桿菌均高于治療前，炎癥因子表達(dá)水平均低于治療前（P＜0.05），見表3。

表3 病例組78例患者治療前后腸道菌群、炎癥因子水平比較（±s）

表3 病例組78例患者治療前后腸道菌群、炎癥因子水平比較（±s）

TNF-α（ng/L）治療前 10.25±1.26 9.78±1.26 9.12±1.48 7.26±0.43 7.53±0.49 1.42±0.18 74.26±7.26 2.37±0.49治療后 7.76±0.75 7.26±0.45 7.45±0.49 9.19±0.53 9.08±1.15 1.33±0.28 50.16±4.11 1.51±0.16 t 值 14.997 16.634 9.461 24.975 10.951 2.388 25.011 14.735 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.018 0.000 0.000時間 腸桿菌（lg CFU/g）梭菌（lg CFU/g）糞腸球菌（lg CFU/g）雙歧桿菌（lg CFU/g）乳桿菌（lg CFU/g）IL-6（ng/L）IL-8（ng/L）

3 討論

SHE 發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，其中以氨中毒最為常見。因患者肝臟不能正常運(yùn)作，會導(dǎo)致大量有害物質(zhì)不能在肝臟完成解毒作用，且肝臟受病情影響無法合成機(jī)體所需大量營養(yǎng)物質(zhì)，會出現(xiàn)一系列不同程度精神異常癥狀，需要加強(qiáng)對SHE 的重視，并選擇有效治療方式積極改善患者預(yù)后[7-8]。

一般情況下，人體腸道菌群處于平衡狀態(tài)，且數(shù)量相對穩(wěn)定，能刺激腸蠕動，維持腸道生物屏障穩(wěn)定，在疾病治療、預(yù)防方面有重要作用[9-10]。不少研究提到，罹患肝臟疾病患者會有不同程度腸道菌群紊亂現(xiàn)象，分析原因主要是因肝臟結(jié)構(gòu)與腸道起源于同一胚層，存在一定功能上的聯(lián)系。當(dāng)肝臟發(fā)生病變時，受門靜脈高壓影響，會導(dǎo)致患者腸管壁呈充血水腫狀態(tài)，患者腸黏膜屏障功能進(jìn)一步受損，腸道清除異物能力下降，會導(dǎo)致諸多致病菌大量繁殖，腸道微生態(tài)失去平衡，進(jìn)一步引起腸源性毒素產(chǎn)生增多[11-12]。本研究結(jié)果指出，病例組腸桿菌、梭菌、糞腸球菌均高于對照組，雙歧桿菌、乳桿菌均低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），可見SHE 患者存在腸道菌群失衡情況。因SHE 患者腸道中致病菌較多，特別是革蘭氏陰性菌大量繁殖，會增加腸源性氨的含量，雙歧桿菌、乳桿菌明顯減少，腸腔內(nèi)pH 值升高，氨排出過程受阻，而肝臟對氨清除減少，會導(dǎo)致其透過血腦屏障進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)與谷氨酸結(jié)合，引發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞死亡，引起肝性腦病發(fā)生[13-14]。因此臨床在加強(qiáng)對SHE 患者降低血氨水平治療外還需要調(diào)節(jié)患者的腸道功能，調(diào)節(jié)腸道菌群。

SHE 患者消化道淤血水腫現(xiàn)象嚴(yán)重，會增加腸道黏膜的通透性，再加上SHE 患者腸道黏膜屏障功能受損嚴(yán)重，清除致病菌能力顯著降低，會為致病菌快速繁殖提供機(jī)會，進(jìn)而增加內(nèi)毒素血癥發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，肝細(xì)胞受炎癥刺激發(fā)生異位，進(jìn)入門靜脈，導(dǎo)致肝功能損傷加重，并極易形成惡性循環(huán)，因此血清炎癥因子與SHE 的發(fā)生密切相關(guān)[15-16]。本研究結(jié)果表示，病例組IL-6、IL-8、TNF-α 均高于對照組（P＜0.05）。SHE 的發(fā)生會形成內(nèi)毒素血癥，刺激肝細(xì)胞分泌大量炎癥因子，TNF-α、IL-6、IL-8表達(dá)水平升高會引起基質(zhì)金屬蛋白酶1 升高，破壞血腦屏障，還會誘導(dǎo)T 細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞產(chǎn)生γ干擾素，破壞中樞神經(jīng)系統(tǒng)小膠質(zhì)細(xì)胞，造成神經(jīng)元損傷，誘發(fā)免疫系統(tǒng)細(xì)胞毒性作用，加重病情[17]。

當(dāng)前針對該疾病主要以對癥支持治療為主。黃連素是從中藥黃連、黃柏中提取的異喹啉類生物堿，可有效抑制細(xì)菌核酸合成，能夠發(fā)揮抑菌作用[18]。此外其在腸道菌群中還具有調(diào)控作用，能有效影響有益菌與病原菌生長繁殖，可抑制大腸桿菌中色氨酸酶活性，促使菌體內(nèi)可利用的色氨酸減少，最終降低大腸桿菌活力，促使患者腸道菌群得到改善，而腸道益生菌生長能夠改善SHE 患者肝功能、腸道菌群，阻止氨等有害物質(zhì)的合成釋放[19-20]。因此給予患者黃連素治療，可到達(dá)較為顯著的臨床效果，有利于修復(fù)受損黏膜，從而有助于改善患者的生理功能。

本次研究存在一定不足，如研究樣本數(shù)量少，缺乏黃連素在SHE 中大量作用機(jī)制報(bào)道論述，今后將加以改進(jìn)，旨在控制SHE 病情進(jìn)展，改善患者預(yù)后。

綜上所述，SHE 患者診治過程中發(fā)現(xiàn)，患者存在腸道菌群紊亂及血清炎癥因子水平上升情況，予以患者黃連素治療能促使病情轉(zhuǎn)歸。