糧食入庫中Charm ROSA 真菌毒素定量檢測系統(tǒng)應用驗證評價

付煜峰

（定西市國家糧食質量監(jiān)測站，甘肅定西 743000）

糧食安全是食品安全的基礎，也是國家安全的重要基礎。真菌毒素污染是全世界共同面臨的重要食品安全問題之一，其主要來源為糧食等農(nóng)作物的污染，直接影響糧食的質量和儲存安全，嚴重危害人體健康和生命安全[1]。糧食安全中較為常見的是真菌毒素污染，近年來科研人員都在研究控制、消除糧食中真菌毒素的方法[2]，如通過良好的田間管理從源頭上抑制真菌毒素的產(chǎn)生，研究培育抗真菌的糧食品種，增強糧食抗菌能力，對于已經(jīng)受到真菌污染的糧食或食品，研究通過物理去除及吸附、化學處理、生物降解等技術降低其危害的方法，但出于安全性和經(jīng)濟效益等原因，要實現(xiàn)大規(guī)模應用推廣，還有許多難題需要解決[3]。

目前我國對于霉變糧食的處理方法主要為封存、作為燃料或用作飼料、工業(yè)用糧等[4]。結合定西市2023 年調(diào)查農(nóng)戶存糧質量情況看，個別農(nóng)戶存儲的玉米中嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮兩項指標超出了國家限量標準，主要原因就是儲存方式不當。在采樣中觀察到，多數(shù)農(nóng)戶在玉米收獲完畢后，將未脫棒玉米在場院內(nèi)就地堆放，晾曬通風干燥不及時，而在脫粒后，大部分農(nóng)戶將玉米裝袋碼垛混存于陰暗潮濕的雜物間內(nèi)，由于這些儲存玉米的地方水分普遍較高、通風條件較差，造成了霉菌的持續(xù)生長[5]。

為了提高糧食質量監(jiān)測機構對真菌毒素的檢測分析能力，充分保障檢驗結果的真實性、準確性、科學性，也為積極服務糧食質量安全監(jiān)管，助推糧油產(chǎn)業(yè)高質量發(fā)展，近年來甘肅省在糧食檢測機構中配置了相應的省局統(tǒng)一招標的Charm ROSA 真菌毒素定量檢測系統(tǒng)[6]。本文參照我國糧食行業(yè)標準中設備和方法標準適用性驗證及結果評價的一般原則，為加快推進真菌毒素快速檢測技術的應用和推廣，進行如下Charm ROSA 真菌毒素定量檢測系統(tǒng)技術驗證，助力快檢設備在糧食入庫現(xiàn)場快速檢驗中的使用[7]。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

Charm ROSA 霉菌毒素檢測系統(tǒng)；實驗室用水為屈臣氏蒸餾水；甲醇（國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)）。黃曲霉毒素B1 快速定量檢測條、嘔吐毒素快速定量檢測條、玉米赤霉烯酮快速定量檢測條（2℃～8℃保存）、槍頭（20 ～200 μL、100 ～1000 μL）、50 mL 離心管、1.5 mL離心管、10 mL 離心管。粉碎機、天平（感量0.01g）、離心機、渦旋儀、孵育器、讀數(shù)儀。

1.2 方法

1.2.1檢測方法

依 據(jù)LS/T 6111-2015、LS/T 6112-2015、LS/T 6113-2015 行業(yè)標準進行檢測。

1.2.2檢出限及定量限

根據(jù)金艷妮等[8]的方法作適當改動。本試驗采用Charm ROSA 霉菌毒素檢測系統(tǒng)對包含黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素在內(nèi)的三種真菌毒素陰性樣品、以及定值的小麥標品分別測定20 次。

1.2.3準確性和臺間差測試

根據(jù)劉穎等[9]的方法作適當改動。本試驗采用2 組Charm ROSA 霉菌毒素檢測系統(tǒng)，分別進行6 個濃度梯度的雙試驗測定，2 組檢測系統(tǒng)測定值采用同一個樣品提取液進行讀數(shù)。

1.2.4重復性測試

根據(jù)何宇[10]的方法作適當改動。隨機選取1 組Charm ROSA 霉菌毒素檢測系統(tǒng)，對中等水平濃度的黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素分別獨立測定6 次進行讀數(shù)。

1.2.5穩(wěn)定性測試

根據(jù)梁楚容等[11]的方法作適當改動。隨機選取1 組Charm ROSA 霉菌毒素檢測系統(tǒng)對黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素的標準溶液進行連續(xù)24 小時測試，每2 小時測定一個數(shù)據(jù)，共測定13 個數(shù)據(jù)。

1.2.6檢測時間的確定

根據(jù)郭瑞等[12]的方法作適當改動。從稱樣開始計時，到記錄數(shù)據(jù)結束，記錄下檢測一個單樣品的完整時間。

1.2.7檢驗樣品的制備

在取樣環(huán)節(jié)，針對真菌毒素分布不均、分布位置比較集中的特點，取樣點位力求做到均勻分布、位置合理、科學布點，在易發(fā)生霉變位置適當增加點位，確保取樣過程科學規(guī)范。制樣環(huán)節(jié)，嚴格采用四分法分樣，先研磨后分樣，粒度大小為20 目，保證樣品制備的均一性，提取的充分性。

1.3 數(shù)據(jù)處理

樣品的前處理，稱量應嚴格按照標準要求進行，試驗結果采用Microsoft Excel 2013 軟件計算平均值與標準偏差。

2 結果與分析

2.1 檢出限與定量限

本試驗檢出限采用20 個陰性樣品檢測值的均值，加上3 倍標準偏差進行計算。試驗定量限采用20 個陰性樣品檢測值的均值，加上10 倍標準偏差進行計算。實驗檢出限及定量限線性范圍見表1。

表1 檢出限及定量限試驗結果

2.2 準確性

試驗中驗證兩種結果存在顯著性差異的方法是利用測定的檢測數(shù)值與已知的檢測數(shù)值進行配對樣本T 檢驗。經(jīng)檢驗，測定值與定值無顯著性差異，Charm ROSA 真菌毒素定量檢測系統(tǒng)性能穩(wěn)定，讀數(shù)準確。準確性試驗結果見表2。

表2 準確性試驗結果

2.3 臺間差

本試驗中驗證兩種設備的測定結果是否存在顯著性差異的方法是利用已知的檢測均值進行配對樣本T 檢驗。經(jīng)檢驗，所使用的2 臺Charm ROSA 真菌毒素定量檢測系統(tǒng)性能穩(wěn)定，讀數(shù)接近。臺間差試驗結果見表3。

2.4 重復性

本試驗中驗證重復性試驗結果的方法是利用已知的檢測值進行X2檢驗。將國家標準方法中規(guī)定的重復性要求轉換成標準偏差，試驗結果的重復性標準偏差未超過標準方法中給定的標準偏差。實驗結果表明Charm ROSA 真菌毒素定量檢測系統(tǒng)重復性良好。重復性實驗結果見表4。

表4 重復性試驗結果

2.5 穩(wěn)定性

本試驗中驗證穩(wěn)定性試驗結果的方法是利用已知的檢測值進行X2檢驗。將國家標準方法中規(guī)定的穩(wěn)定性要求轉換成標準偏差，穩(wěn)定性標準偏差沒有超過標準方法中給定的標準偏差。實驗結論表明Charm ROSA 真菌毒素定量檢測系統(tǒng)穩(wěn)定性良好。穩(wěn)定性實驗結果見表5。

表5 穩(wěn)定性試驗結果

2.6 樣品檢測時間評價

在試驗中，取代表性樣品500 g 粉碎至全部通過20目篩，稱取10 g 試樣于100 mL 錐形瓶中，加入20 mL試樣提取液，密閉，用振蕩器振蕩1 分鐘，取1 ～2 mL混合液置于離心管中，使用離心機離心1 分鐘。取上清液100 μL 置于另一離心管中，加入1 mL 稀釋緩沖液，充分混勻后，取300 μL 加入檢測條在孵育器中孵育5 分鐘，用讀數(shù)儀讀取結果。在本試驗流程下完成單個樣品檢測的時間為12 分鐘。

3 結論

本次試驗根據(jù)各項數(shù)據(jù)檢測結果，按照評價規(guī)則和對應國家標準對每個項目的各項指標具體要求，參考操作的便捷性和時效性，最后對該真菌毒素快檢設備進行全面結果評價。經(jīng)驗證，Charm ROSA 真菌毒素定量檢測系統(tǒng)在靈敏度、準確度等各項檢測性能指標均達到檢測技術要求，適用于糧食安全質量控制。并且在糧庫收糧檢測時間評價實驗中，可以對樣品進行批量處理，通過多通道孵育器進行孵育，一次可以檢測多個樣品，大大提高了檢測效率，大量樣品流水操作還可以縮短檢測時間，極大地提高了收儲效率，適合在糧庫收糧時使用。