柱前衍生-高效液相色譜法測定冷飲中的甜蜜素

◎ 毛小慶，方 猛，孫 涓

（馬鞍山市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，安徽 馬鞍山 243000）

甜蜜素又稱環(huán)己基氨基磺酸鈉，其甜度是蔗糖的30 ～40 倍[1]，因價格低廉、穩(wěn)定性較好，常作為甜味劑用于食品生產(chǎn)中?！妒称钒踩珖覙藴?食品添加劑使用標準》（GB 2760—2014）[2]中規(guī)定了冷凍飲品等19 類食品中甜蜜素的最大使用量。目前，對甜蜜素檢驗的色譜方法有氣相色譜法[3-6]、液相色譜法[7-8]、液質(zhì)聯(lián)用法[9-10]。其中，氣相色譜法樣品衍生化時需冰浴30 min，且目標峰較難分開；液質(zhì)聯(lián)用法只適用于各種酒類的檢測，適用范圍較窄，檢測成本較高。因此，本文用次氯酸鈉衍生化甜蜜素，經(jīng)正庚烷萃取后，采用高效液相色譜法測定，方法干擾小、定量準確。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

冷飲樣品：綠色心情，70 g/支，購于本地市場；甜蜜素標準品，純度為99%，Dr. Ehrenstorfer 公司。

1.2 儀器與設(shè)備

1200 高效液相色譜儀，美國安捷倫公司；WH-3 渦旋振蕩器，上海滬西分析儀器廠有限公司；CQ-300B-S 超聲波清洗機，上海躍進醫(yī)用光學器械廠；AL204 電子天平，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；Direct-Pure 型超純水機，上海樂楓生物科技有限公司；HC-3018R 離心機，安徽中科中佳科學儀器有限公司。

1.3 溶液的配制

硫酸溶液（1 ∶1，V∶V）：量取50 mL 硫酸，邊倒邊攪拌，倒入50 mL 水中，冷卻備用。碳酸氫鈉溶液（50 g·L-1）：稱取碳酸氫鈉50 g，加入少量水溶解，稀釋至1 000 mL。硫酸鋅溶液（300 g·L-1）：稱取硫酸鋅30 g 溶于水中，稀釋至100 mL。亞鐵氰化鉀溶液（150 g·L-1）：稱取亞鐵氰化鉀15 g，加入少量水溶解，稀釋至100 mL。

1.4 實驗方法

1.4.1 標準工作溶液的配制

準確稱取0.280 6 g 甜蜜素標準品溶于水中并定容至50 mL，得到濃度為5.00 mg·mL-1的甜蜜度標準儲備液。準確移取標準儲備液10.0 mL至50 mL容量瓶中，用水稀釋并定容，得到濃度為1.00 mg·mL-1的甜蜜素標準中間液。將標準中間液用水稀釋為10.0 μg·mL-1、20.0 μg·mL-1、50.0 μg·mL-1、100 μg·mL-1、200 μg·mL-1的標準工作濃度。

1.4.2 樣品提取

稱取冷飲5 g 至50 mL 離心管中，加入約30 mL水，混勻，分別加入2 mL 硫酸鋅溶液、亞鐵氰化鉀溶液作為沉淀劑，混勻并超聲30 min，離心3 min（3 000 r·min-1），將上清液轉(zhuǎn)移至50 mL 容量瓶中，重復(fù)上述操作，合并上清液，定容。

1.4.3 衍生化

移取上述試樣溶液10.0 mL 至50 mL 離心管中，分別加入硫酸溶液2.0 mL、正庚烷5.0 mL、次氯酸鈉溶液1.0 mL，劇烈振蕩2 min，靜置分層。除去下面水層后，加入碳酸氫鈉溶液25 mL，振蕩約1 min，以調(diào)節(jié)溶液pH 值。靜置分層，取上層有機相過膜，待上機。標準工作溶液的衍生化同試樣溶液。

1.4.4 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水=70 ∶30；進樣量：10 μL；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測器是DAD；檢測波長：314 nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

2.1.1 檢測波長的優(yōu)化

取衍生后的甜蜜素標準溶液，濃度為100 μg·mL-1，使用紫外分光光度計在200～350 nm處進行掃描測定。結(jié)果顯示，在314 nm 處吸收峰值較優(yōu)且無干擾峰，因此確定檢測波長為314 nm。

2.1.2 流動相比例的優(yōu)化

考察不同流動相比例（乙腈-水=90 ∶10、乙腈- 水=80 ∶20、乙 腈- 水=70 ∶30、乙 腈- 水=60 ∶40）對檢測結(jié)果的影響。結(jié)果顯示，流動相為乙腈-水=70 ∶30 時基線較穩(wěn)定且雜質(zhì)干擾小，標準品衍生物的保留時間為7.952 min，峰形良好，色譜圖見圖1。

圖1 甜蜜素標準品色譜圖（濃度：50 μg·mL-1）

2.2 標準曲線

對甜蜜素標準工作溶液進行測定，以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，如圖2 所示。甜蜜素的線性回歸方程為y=2.289 9x-1.449 4，R2=0.999 9。

圖2 甜蜜素標準曲線圖

2.3 回收率與精密度實驗

對衍生后的冷飲樣品進行測定，得出冷飲中甜蜜素的含量為0.109 g·kg-1。分別向冷飲樣品中添加0.05 g·kg-1、0.15 g·kg-1、0.20 g·kg-1的甜蜜素標準品，測定回收率和RSD，結(jié)果見表1。甜蜜度的加標回收率為96.33%～99.83%，RSD 為0.73%～0.96%，方法的回收率和RSD 均滿足實驗要求。

表1 回收率和精密度實驗結(jié)果表（n=6）

2.4 實際樣品的檢測

在本地市場上購買冷飲樣品，采用本方法進行測定，色譜圖見圖3。冷飲中甜蜜素的含量為0.108 g·kg-1，滿足GB 2760—2014 的限量要求。

圖3 冷飲中甜蜜素的色譜圖

3 結(jié)論

本文建立了冷飲中甜蜜素的高效液相色譜檢測方法，對色譜條件進行了優(yōu)化。該方法在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，準確度和精密度均滿足檢測要求，具有前處理操作簡單、抗干擾能力強等優(yōu)點，可用于測定冷飲中的甜蜜素含量。