血細(xì)胞比對時校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整的方法研究

汪秀紅,譚啟友

廣西壯族自治區(qū)柳州市柳城縣婦幼保健院檢驗科,廣西柳州 545299

目前本院實驗室有2臺不同品牌的血細(xì)胞分析儀(希森美康500I、邁瑞5390),盡管儀器的參考區(qū)間相同[1-2],由于不同血細(xì)胞分析儀的檢驗原理和方法不盡相同,導(dǎo)致同一標(biāo)本在不同儀器上分析可能出現(xiàn)測定值的偏差,給評估和結(jié)果解釋及臨床動態(tài)監(jiān)測帶來困難。為保證不同血細(xì)胞分析儀檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性及可靠性,應(yīng)對本實驗室的不同血細(xì)胞分析儀檢驗結(jié)果進(jìn)行比對[3],以評價檢驗參數(shù)——白細(xì)胞計數(shù)(WBC)、紅細(xì)胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞平均體積(MCV)、血小板計數(shù)(PLT)的準(zhǔn)確性[4]和一致性[5]。參照美國臨床實驗室改進(jìn)修正案(CLIA′88)[6]能力比對檢驗質(zhì)量的要求,以其標(biāo)準(zhǔn)的1/2作為可接受誤差來判斷2臺或2臺以上血細(xì)胞分析儀檢驗結(jié)果的可比性[7]。本研究對血細(xì)胞比對時校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整的方法進(jìn)行了探索,現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 采用5份前來就診患者的新鮮EDTA-K2抗凝全血。標(biāo)本1是滿足WBC、RBC、Hb、MCV、PLT低值要求的標(biāo)本(低值標(biāo)本),標(biāo)本2是滿足WBC、RBC、Hb、MCV、PLT高值要求的標(biāo)本(高值標(biāo)本),標(biāo)本3、4、5是滿足WBC、RBC、Hb、MCV、PLT中值要求的標(biāo)本(中值標(biāo)本)。高、中、低值的劃分如下:WBC,<4×109/L為低值,(4～10)×109/L為中值,>10×109/L為高值;RBC,<3.5×1012/L為低值,(3.5～5.5)×1012/L為中值,>5.5×1012/L為高值;Hb,<110 g/L為低值,110～160 g/L為中值,>160 g/L為高值;PLT,<100×109/L為低值,(100～300)×109/L為中值,>300×109/L為高值;MCV,<80 fL為低值,80～100 fL為中值,>100 fL為高值。

1.2儀器及試劑 血細(xì)胞分析儀邁瑞5390、希森美康500I,均使用配套試劑。

1.3方法 采用全自動進(jìn)樣模式進(jìn)行血常規(guī)檢測,以參加廣西臨檢中心成績合格的血細(xì)胞分析儀(希森美康血細(xì)胞分析儀500I)作為基準(zhǔn)儀器(靶機)進(jìn)行血常規(guī)各項參數(shù)比對,比對標(biāo)準(zhǔn)按CLIA′88標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。每份標(biāo)本在每臺儀器檢測兩次,取兩次檢查結(jié)果的均值進(jìn)行比對。比對結(jié)果超出范圍的項目需要進(jìn)行人工校準(zhǔn)[8],則需要計算出與目標(biāo)值的相對偏差(偏倚度),計算出儀器新的校準(zhǔn)系數(shù),錄入新校準(zhǔn)系數(shù)后重新檢測比對,當(dāng)測定結(jié)果與靶值的偏差在1%～2%時可以將此標(biāo)本進(jìn)行5～10次檢測,計算均值,用均值來調(diào)整校準(zhǔn)系數(shù),以獲得偏差最小的系數(shù)為最佳調(diào)整系數(shù)。相對偏差=(需比對儀器測定值-基準(zhǔn)儀器測定值)/基準(zhǔn)儀器測定值,新校準(zhǔn)系數(shù)=舊系數(shù)±相對偏差%,儀器的舊校準(zhǔn)系數(shù)可以在儀器人工校準(zhǔn)界面讀取,邁瑞5390系數(shù)調(diào)整的允許范圍是75%～125%。

2 結(jié) 果

2.12臺儀器5份標(biāo)本W(wǎng)BC、RBC、Hb、MCV、PLT檢測結(jié)果比對 WBC在5份標(biāo)本的偏差絕對值均>7.5,結(jié)論為不合格;RBC在5份標(biāo)本的偏差絕對值均>3.0,結(jié)論為不合格;PLT在標(biāo)本1、2、4的偏差絕對值均>12.5,結(jié)論為不合格;MCV在5份標(biāo)本的偏差絕對值均<3.0,結(jié)論為合格。WBC、RBC、PLT檢測結(jié)果超出允許誤差,需要進(jìn)行人工校準(zhǔn)。見表1。

表1 2臺儀器5份標(biāo)本W(wǎng)BC、RBC、Hb、MCV、PLT檢測結(jié)果比對

2.2失控項目的第一次新校準(zhǔn)系數(shù) 以標(biāo)本1(低值標(biāo)本)、標(biāo)本2(高值標(biāo)本)、標(biāo)本5(中值標(biāo)本)進(jìn)行調(diào)整,計算失控的WBC、RBC、PLT的第一次新校準(zhǔn)系數(shù)。見表2。

2.3根據(jù)第一次新校準(zhǔn)系數(shù)重新檢測比對

2.3.1WBC參數(shù) 從表3中可以看出,用標(biāo)本2(高值標(biāo)本)計算的第一次WBC新校準(zhǔn)系數(shù)錄入后5份標(biāo)本結(jié)果偏差絕對值均>7.5,結(jié)論為不合格。從表4中可以看出,用標(biāo)本5(中值標(biāo)本)計算的第一次WBC新校準(zhǔn)系數(shù)錄入后5份標(biāo)本結(jié)果偏差絕對值均>7.5,結(jié)論為不合格。從表5中可以看出,用標(biāo)本1(低值標(biāo)本)計算的第一次WBC新校準(zhǔn)系數(shù)錄入后,標(biāo)本1、4、5測定結(jié)果的偏差絕對值>7.5,標(biāo)本2、3測定結(jié)果的偏差絕對值<7.5,結(jié)論為不合格。WBC在用標(biāo)本1(低值標(biāo)本)計算的新校準(zhǔn)系數(shù)錄入后檢測的結(jié)果更靠近靶值。WBC還需繼續(xù)進(jìn)行人工校準(zhǔn)。

表3 以標(biāo)本2(高值標(biāo)本)計算的第一次新校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整后2臺儀器5份標(biāo)本W(wǎng)BC、RBC、PLT檢測結(jié)果的比對

表4 以標(biāo)本5(中值標(biāo)本)計算的第一次新校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整后2臺儀器5份標(biāo)本W(wǎng)BC、RBC、PLT檢測結(jié)果的比對

表5 以標(biāo)本1(低值標(biāo)本)計算的第一次新校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整后2臺儀器5份標(biāo)本W(wǎng)BC、RBC、PLT檢測結(jié)果的比對

2.3.2RBC參數(shù) 從表3中可以看出,用標(biāo)本2(高值標(biāo)本)計算的第一次RBC新校準(zhǔn)系數(shù)錄入后,5份標(biāo)本結(jié)果偏差絕對值均>3.0,結(jié)論為不合格。從表4中可以看出,用標(biāo)本5(中值標(biāo)本)計算的第一次RBC新校準(zhǔn)系數(shù)錄入后,有5份標(biāo)本結(jié)果偏差絕對值>3.0,結(jié)論為不合格。從表5中可以看出,用標(biāo)本1(低值標(biāo)本)計算的第一次RBC新校準(zhǔn)系數(shù)錄入后,標(biāo)本1～5測得的結(jié)果偏差為-4.50%、-3.58%、-7.40%、-4.36%、-2.96%,絕對值均接近3.0,結(jié)論為不合格。RBC用標(biāo)本5(中值標(biāo)本)計算出的新校準(zhǔn)系數(shù)錄入后檢測的結(jié)果總體更靠近靶值。RBC還需繼續(xù)進(jìn)行人工校準(zhǔn)。

2.3.3PLT參數(shù) 從表3中可以看出,用標(biāo)本2(高值標(biāo)本)計算的第一次PLT新校準(zhǔn)系數(shù)錄入后,有2份標(biāo)本結(jié)果偏差絕對值<12.5,3份標(biāo)本結(jié)果偏差絕對值>12.5,結(jié)論為不合格。從表4中可以看出,用標(biāo)本5(中值標(biāo)本)計算的第一次PLT新校準(zhǔn)系數(shù)錄入后,標(biāo)本1～5測定結(jié)果的偏差絕對值<12.5,結(jié)論為合格。從表5中可以看出,用標(biāo)本1(低值標(biāo)本)計算的第一次PLT新校準(zhǔn)系數(shù)錄入后,標(biāo)本1、2測定結(jié)果的偏差絕對值>12.5,標(biāo)本3、4、5測定結(jié)果的偏差絕對值<12.5,結(jié)論為不合格。PLT用標(biāo)本5(中值標(biāo)本)計算出的新校準(zhǔn)系數(shù)錄入后檢測的結(jié)果更靠近靶值,結(jié)果在控,保留此校準(zhǔn)參數(shù)。PLT不需繼續(xù)進(jìn)行人工校準(zhǔn)。

2.4多次校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整后2臺儀器5份標(biāo)本W(wǎng)BC、RBC、Hb、MCV、PLT重新檢測的結(jié)果比對 在第一次新校準(zhǔn)系數(shù)的基礎(chǔ)上進(jìn)行測試后,以偏離最遠(yuǎn)的那個濃度的標(biāo)本再次進(jìn)行相應(yīng)校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整。經(jīng)過反復(fù)調(diào)整,當(dāng)WBC的校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整到104.40、RBC的校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整到100.20、PLT的校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整到103.03時進(jìn)行5份標(biāo)本檢測。結(jié)果顯示:WBC測定結(jié)果的偏差絕對值均≤7.5,結(jié)論合格;RBC測定結(jié)果的偏差絕對值均≤3.0,結(jié)論為合格;Hb的測定結(jié)果的偏差絕對值均≤3.5,結(jié)論為合格;MCV測定結(jié)果的偏差絕對值均≤3.0,結(jié)論為合格;PLT測定結(jié)果的偏差絕對值均<12.5,結(jié)論為合格。見表6。

表6 多次校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整后2臺儀器5份標(biāo)本W(wǎng)BC、RBC、Hb、MCV、PLT檢測結(jié)果的比對

3 討 論

大部分血細(xì)胞分析儀檢測WBC的原理多采用電阻抗法、化學(xué)染色法、熒光染色法,但不同血細(xì)胞分析儀的檢驗原理和方法不盡相同,其檢驗結(jié)果存在一定偏差。本實驗室有2種不同品牌的血細(xì)胞分析儀,由于品牌和型號的不同將會導(dǎo)致同一標(biāo)本在不同儀器上分析可能出現(xiàn)測定值的偏差,給評估和結(jié)果解釋及臨床動態(tài)監(jiān)測帶來困難。為保證不同血細(xì)胞分析儀檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性及可靠性,應(yīng)對同一實驗室的不同血細(xì)胞分析儀檢驗結(jié)果進(jìn)行比對,以評價檢驗項目WBC、RBC、Hb、HCT、PLT的準(zhǔn)確性和一致性。參照CLIA′88的要求對本實驗室邁瑞5390及希森美康500I兩種不同品牌的血細(xì)胞分析儀進(jìn)行比對,用5份有不同的高、低、中值標(biāo)本進(jìn)行2臺儀器測試,確定在控的項目,已經(jīng)在控的項目不需要進(jìn)行系數(shù)校準(zhǔn),對不在控的項目要計算出相對偏倚度(偏差),通過偏倚度(偏差)來進(jìn)行儀器校準(zhǔn)[9]。本試驗5份標(biāo)本比對后Hb、MCV均在控,WBC、Hb、PLT不在控,計算出WBC、Hb、PLT不同水平的偏倚度及新校準(zhǔn)系數(shù),錄入儀器后重新檢測。以標(biāo)本2(高值標(biāo)本)計算的新系數(shù)后錄入儀器后重新測定得到的結(jié)果,WBC、Hb、PLT的偏倚度均超出CLIA′88的允許總誤差,因此不能接受用高值標(biāo)本計算的校準(zhǔn)系數(shù);以標(biāo)本5(中值標(biāo)本)計算偏差進(jìn)行調(diào)整儀器系數(shù)后重新檢測標(biāo)本,PLT的偏倚度在控,可以接受此次PLT的校準(zhǔn)系數(shù);WBC、RBC的結(jié)果靠近靶值但仍然失控因此不能完全接受由中值標(biāo)本計算的校準(zhǔn)系數(shù);以標(biāo)本1(低值標(biāo)本)計算的新系數(shù)后錄入儀器后重新測定得到WBC、RBC的結(jié)果靠近靶值,但仍然失控因此不能接受由低值標(biāo)本計算的校準(zhǔn)系數(shù)。通過觀察3組數(shù)據(jù)中標(biāo)本1(低值標(biāo)本)計算出的校準(zhǔn)系數(shù),WBC檢測結(jié)果更靠近靶值,因此暫時接受此系數(shù)并且在此基礎(chǔ)上再次進(jìn)行儀器的校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整,以偏離最遠(yuǎn)的那個濃度的標(biāo)本進(jìn)行相應(yīng)校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整,針對中值的失控則選取5號標(biāo)本進(jìn)行計算;RBC則以中值標(biāo)本計算的校準(zhǔn)系數(shù)為基礎(chǔ)進(jìn)行下一步的調(diào)整。最后得到WBC的校準(zhǔn)系數(shù)為104.40、RBC的校準(zhǔn)系數(shù)為100.20、PLT 的校準(zhǔn)系數(shù)為103.03時,WBC、RBC、PLT的檢測結(jié)果均在允許范圍內(nèi)[10]。

以上說明,針對不合格的血細(xì)胞分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整時可以用高、中、低值標(biāo)本進(jìn)行初次的校準(zhǔn)系數(shù)調(diào)整,接受最佳的校準(zhǔn)系數(shù)(即失控最少的);再以失控較多的水平進(jìn)行二次調(diào)整;最后重新進(jìn)行高、中、低值標(biāo)本的測試,觀察結(jié)果是否在目標(biāo)偏倚度內(nèi),偏倚度越接近0越好,如果全部結(jié)果都在控則接受此次的系數(shù)調(diào)整;在沒有低值標(biāo)本的情況下各項參數(shù)的校準(zhǔn)可以先以中值進(jìn)行比對,計算出相對偏差及新校準(zhǔn)系數(shù)錄入血細(xì)胞分析儀,再進(jìn)行第2次比對;逐次調(diào)整系數(shù)。每個項目的調(diào)整都以傾向于靶值的校準(zhǔn)系數(shù)為基礎(chǔ)進(jìn)行下一步調(diào)整;但是也不會立即達(dá)到最佳系數(shù)狀態(tài),還要進(jìn)行2次、3次或多次的中值標(biāo)本調(diào)試,才能將失控的儀器調(diào)整到在控狀態(tài),使比對儀器檢驗結(jié)果具有較好的可比性、準(zhǔn)確性、一致性[11]。

在工作中血細(xì)胞分析儀每年需要進(jìn)行兩次校準(zhǔn)[12]及比對,以確保及時發(fā)現(xiàn)和調(diào)整系統(tǒng)誤差,確保檢驗科室內(nèi)各類型血細(xì)胞分析儀的可比性;在更換試劑批號后要觀察室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果記錄,變異系數(shù)越小說明其性能穩(wěn)定精密度[13]越好;經(jīng)過調(diào)整的校準(zhǔn)系數(shù)[14]一般不再變更,除非比對不合格需要重新校準(zhǔn)。實驗室有多臺血細(xì)胞分析儀時應(yīng)選擇一臺性能較好的儀器作為基準(zhǔn)儀器,其條件需滿足:(1)使用原廠配套試劑;(2)每年用配套校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn);(3)規(guī)范開展室內(nèi)質(zhì)控[15],參加室間質(zhì)評成績優(yōu)良。以此臺基準(zhǔn)儀器為標(biāo)準(zhǔn)開展不同廠家血細(xì)胞分析儀和不同型號血細(xì)胞分析儀的比對和校準(zhǔn),使所有儀器的檢測結(jié)果非常接近,可解決儀器的可比性問題。