小檗堿抗婦科腫瘤作用機制的研究進展

孫瑩，張明發(fā)，沈雅琴

1.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 國家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津 300381

2.上海美優(yōu)制藥有限公司，上海 201204

國際癌癥研究機構(gòu)報道全球2020 年女性癌癥新發(fā)病人數(shù)922.7 萬人，其中乳腺癌226.1 萬人、宮頸癌60.4 萬人、子宮體癌41.7 萬人、卵巢癌31.4萬人，分別占據(jù)女性10 大癌癥發(fā)病率的第1、4、6、8 位，且全球女性癌癥患者有1/4 以上死于婦科腫瘤[1]。2020 年中國女性癌癥新發(fā)病人數(shù)為209.3萬人，其中乳腺癌41.6 萬人、宮頸癌11.0 萬人、子宮體癌8.2 萬人、卵巢癌5.5 萬人，分別占第1、6、9、10 位?？梢妺D科腫瘤嚴重威脅女性的生命健康。目前婦科腫瘤的治療仍以手術(shù)和放療為主，并使用化療藥預(yù)防復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。為了尋找更有效且不良反應(yīng)小的治療藥物，越來越多的研究人員將視線轉(zhuǎn)向中藥。小檗堿在植物界中廣泛分布，最早是從小檗科植物小檗BerberisamurensisRupr.中提取分離得到的季銨生物堿，目前已能人工合成，成本較植物中提取低。小檗堿具有廣泛的生物活性，如抗炎、抗菌、抗病毒、抗腹瀉、抗高血壓、抗缺氧、降血糖、調(diào)血脂等[2]，同時作為非處方藥，小檗堿的不良反應(yīng)少。小檗堿能夠抑制腫瘤細胞生長、增殖，抑制腫瘤細胞遷移、侵襲，誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，并增加化療藥敏感性。本文總結(jié)了小檗堿抗乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌等婦科腫瘤作用機制的研究進展，以期將小檗堿開發(fā)為防治婦科腫瘤的新藥提供參考。

1 抑制腫瘤細胞生長、增殖

小檗堿可以抑制人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231 細胞，卵巢癌HO-8910、SKOV3 細胞，子宮內(nèi)膜癌Ishikawa、RL95-2 細胞以及宮頸癌CaSki 細胞的生長或增殖，其機制包括調(diào)控腫瘤抑制因子、阻滯細胞周期、抑制色氨酸-2,3 雙加氧酶（TDO）-Kyn-芳香烴受體（AhR）通路、下調(diào)磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄因子3（STAT3）信號通路。

1.1 調(diào)控腫瘤抑制因子

曾智豪等[3-4]報道皮下接種MCF-7 細胞制作乳腺癌成功的裸鼠，連續(xù)21 d ip 小檗堿10、20、25 mg/kg，能劑量相關(guān)地降低荷瘤小鼠的MCF-7 細胞移植瘤體積，促進癌細胞凋亡，使瘤組織結(jié)構(gòu)破壞，出現(xiàn)壞死細胞，其作用機制是下調(diào)腫瘤組織中的p53、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、表皮生長因子受體蛋白的過表達。動物離體實驗發(fā)現(xiàn)小檗堿5～40 mg/L 濃度和時間相關(guān)地抑制人乳腺癌MCF-7 細胞增殖，小檗堿40 mg/L 作用72 h 的增殖抑制率達60%，使MCF-7 細胞周期滯留在G0/G1期，S 期細胞數(shù)減少，也能濃度和時間相關(guān)地提高MCF-7 細胞的半胱天冬酶活性和下調(diào)B 細胞淋巴瘤/白血病基因2（Bcl-2）的表達[5]。也有報道小檗堿作用72 h 抑制MCF-7 細胞增殖的半數(shù)抑制濃度（IC50）為20 μmol/L[6]或20.6 μmol/L[7]，IC50的小檗堿使MCF-7 細胞減少31%、細胞周期滯留在G1/G2期[6]，并濃度相關(guān)地抑制乳腺癌細胞己糖激酶II 活性及其蛋白表達、抑制癌細胞的糖酵解、提高氧化型輔酶I/還原型輔酶I 比值、降低葡萄糖消耗、ATP和乳酸含量[7]。孫育等[8]報道小檗堿12.5、25.0、50.0、100.0 μmol/L 濃度相關(guān)地抑制人卵巢癌HO-8910 細胞活力，β-連環(huán)蛋白、細胞周期蛋白-D1 的基因和蛋白表達下調(diào)，p21 基因和蛋白表達上調(diào)。

可見，小檗堿通過調(diào)控腫瘤抑制因子半胱天冬酶、MMP、β-連環(huán)蛋白等活性，p53、Bcl-2 的表達，抑制人乳腺癌MCF-7 細胞和人卵巢癌HO-8910 的活力，從而抑制婦科腫瘤。

1.2 阻滯細胞周期

曾智豪等[3-4]報道皮下接種MCF-7 細胞制作乳腺癌成功的裸鼠，連續(xù)21 d ip 小檗堿10、20、25 mg/kg，使瘤組織結(jié)構(gòu)破壞，出現(xiàn)壞死細胞，劑量相關(guān)地使MCF-7 細胞周期滯留在G0/G1期，減少S 期和G2/M 期細胞數(shù)。小檗堿10 μmol/L（IC50）作用72 h 可使人三陰性乳腺癌MDA-MB-231 細胞減少12%，并使細胞周期滯留在S 期[7]。李軍等[9-10]報道小檗堿5～80 mg/L 濃度和時間相關(guān)地抑制雌激素依賴性人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa 細胞增殖，作用48 h的IC50為40 mg/L，當濃度高于80 mg/L 時，抑制增殖作用出現(xiàn)平臺現(xiàn)象；作用72 h 后使癌細胞全部固縮死亡；使細胞周期滯留在G0/G1期，S 期和G2/M期細胞數(shù)減少。王玉[11]報道小檗堿10～80 μmol/L能濃度和時間相關(guān)地抑制雌激素依賴性人子宮內(nèi)膜癌RL95-2 細胞和非雌激素依賴性人HEC-1A 細胞增殖，使細胞周期滯留在G1/G0期，S 期和G2/M期細胞數(shù)減少，線粒體膜電位下降，葡萄糖消耗量和乳酸生成增加。劉明珠[12]報道小檗堿5、10、15、20 μmol/L 作用48 h 抑制人宮頸癌CaSki 細胞和Siha 細胞增殖的IC50分別為21.86、16.84 μmol/L，小檗堿5、20、40 mg/L 濃度和時間相關(guān)地抑制CaSki細胞和Siha 細胞增殖，使細胞周期滯留在G2/M 期。

可見，小檗堿通過阻滯細胞周期，抑制人乳腺癌MCF-7 細胞、三陰性乳腺癌MDA-MB-231 細胞、子宮內(nèi)膜癌RL95-2 細胞、宮頸癌CaSki 細胞和Siha細胞的增殖。

1.3 抑制TDO-Kyn-AhR 通路

卵巢癌SKOV3 細胞是髓樣分化因子-88 陽性卵巢癌細胞，屬紫杉醇抵抗型（即I 型）卵巢癌，A2780 細胞是髓樣分化因子-88 陰性卵巢癌細胞，屬紫杉醇敏感型（II 型）。趙云平[13]報道小檗堿可濃度和時間相關(guān)地抑制SKOV3 細胞和A2780 細胞生長，作用72 h 的IC50分別為2.48、2.41 μmol/L；也能濃度和時間相關(guān)地抑制這2 種卵巢癌細胞高表達AhR基因，并降低癌細胞上清色氨酸的消耗及其代謝物Kyn 產(chǎn)量。而Kyn 是AhR 的配體，激活A(yù)hR后可導(dǎo)致癌細胞處于免疫抑制狀態(tài)而逃避免疫。

吲哚胺-2,3 雙加氧酶（IDO）和TDO 都是色氨酸沿Kyn 途徑代謝的主要限速酶。SKOV3 細胞高表達IDO、TDO基因，而A2780 細胞高表達TDO基因，不表達IDO基因。小檗堿對TDO、IDO基因表達均有抑制作用[13-14]。孟囿園[15]進一步研究發(fā)現(xiàn)SKOV3 細胞和A2780 細胞均高表達程序性死亡分子配體-1（PD-L1）基因不表達或極低表達程序性死亡分子-1（PD-1）基因，小檗堿2.5 μmol/L 作用6 h 對A2780 細胞的PD-L1基因表達下調(diào)倍數(shù)達790倍，對SKOV3 細胞的PD-L1基因表達倍數(shù)更高，達10 萬倍以上，認為小檗堿主要是通過抑制TDO基因表達減少卵巢癌細胞Kyn 代謝物產(chǎn)生，下調(diào)AhR 的蛋白表達，即通過抑制TDO-Kyn-AhR 通路去除卵巢癌的免疫抑制狀態(tài)，因此小檗堿對I 型和II 型卵巢癌均有效。

1.4 下調(diào)STAT3 信號通路

劉明珠[12]報道小檗堿5、10、15、20 μmol/L 作用48 h 抑制人宮頸癌CaSki 細胞和Siha 細胞增殖的IC50分別為21.86、16.84 μmol/L，小檗堿5、20、40 mg/L 濃度和時間相關(guān)地抑制CaSki 細胞和Siha細胞增殖，上調(diào)裂解的半胱天冬酶-3 表達，下調(diào)細胞周期蛋白-B1、細胞周期蛋白依賴性激酶-1 和STAT3 的表達，因此小檗堿是通過抑制STAT3 信號通路抑制癌細胞增殖；17 μmol/L 小檗堿能提高Siha細胞對X 線放射敏感性，放射增敏比為1.55。

小檗堿除了調(diào)控半胱天冬酶-3、細胞周期蛋白-B1 等機制，還下調(diào)STAT3 表達，抑制人宮頸癌CaSki、Siha 細胞增殖，且能提高Siha 細胞對X 線放射敏感性，其在放療、化療方面都對抗腫瘤細胞有益。

2 抑制腫瘤細胞遷移、侵襲

小檗堿可抑制人乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231細胞，宮頸癌CaSki、HeLa、AN3CA 細胞和HEC-1A，卵巢癌SKOV3 細胞的遷移和侵襲，其機制包括調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）信號通路、MMP-2 通路、激活蛋白-1（AP-1）通路、組蛋白去乙?；?4、鞘氨醇-1-磷酸/鞘氨醇-1-磷酸受體-1 通路。

2.1 調(diào)控EMT 信號通路

高小炎[16]報道小檗堿抑制正常氧環(huán)境下和缺氧環(huán)境下的MCF-7 細胞增殖的IC50分別為10.26、26.53 μmol/L，MCF-7 細胞在缺氧環(huán)境時對小檗堿敏感性下降；小檗堿可促進正常氧環(huán)境和缺氧環(huán)境時的MCF-7 細胞的缺氧誘導(dǎo)因子-1α 的基因表達，但都下調(diào)缺氧誘導(dǎo)因子-1α 的蛋白表達，還能下調(diào)正常氧環(huán)境時的MCF-7 細胞的上皮-鈣黏蛋白和β-連環(huán)蛋白的蛋白表達，并抑制正常氧環(huán)境和缺氧環(huán)境時的MCF-7 細胞遷移和侵襲，認為小檗堿是通過促進缺氧誘導(dǎo)因子-1α 蛋白的降解抑制EMT 的信號通路發(fā)揮抑制乳腺癌生長和轉(zhuǎn)移。

與MCF-7 細胞相比，人乳腺癌MDA-MB-231細胞對小檗堿更敏感：作用72 h 抑制增殖的IC50分別為20、10 μmol/L[6]和20.6、15.2 μmol/L[7]，作用48 h 的IC50分別為106、85 μmol/L[17]。高小炎[16]報道在正常氧環(huán)境下，小檗堿作用MCF-7 細胞和三陰性乳腺癌MDA-MB-231 細胞48 h 的IC50分別為10.26、5.33 μmol/L，在缺氧環(huán)境下作用48 h 的IC50分別為26.53、4.14 μmol/L；抑制這兩種乳腺癌細胞在正常氧環(huán)境和缺氧時的遷移和侵襲；三陰性乳腺癌細胞在缺氧時對小檗堿更敏感，原因是與正常氧環(huán)境時比較，在抑制缺氧誘導(dǎo)因子-1α 蛋白表達的同時并不促進缺氧誘導(dǎo)因子-1α 的基因表達。提示小檗堿是通過促進缺氧誘導(dǎo)因子-1α 蛋白的降解和上調(diào)上皮-鈣黏蛋白和β-連環(huán)蛋白的基因和蛋白表達，抑制EMT 的信號通路發(fā)揮抑制三陰性乳腺癌細胞生長和轉(zhuǎn)移。

劉嵐等[18]報道給裸鼠腋下接種人三陰性乳腺癌MDA-MB-231 細胞，待腫瘤體積長到約100 mm3后ip 小檗堿25 mg/kg，連續(xù)7 d，3 次/d，可顯著減緩腫瘤生長，腫瘤體積明顯減?。浑x體實驗發(fā)現(xiàn)小檗堿25、50、100 μmol/L 濃度相關(guān)地抑制MDAMN-231 細胞增殖、遷移和侵襲，上調(diào)上皮-鈣黏蛋白和叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子（FOXO）-3a 的表達和p38絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）的磷酸化，下調(diào)蝸牛狀蛋白、波形蛋白、神經(jīng)-鈣黏蛋白的表達，認為小檗堿是通過激活p38MAPK/FOXO3a 信號通路，抑制MDA-MB-231 細胞增殖和EMT，阻滯癌細胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移。

劉明珠[12]報道小檗堿5、20、40 mg/L 濃度和時間相關(guān)地降低人宮頸癌CaSki 細胞的侵襲遷移能力。肖華等[19]給裸鼠皮下接種CaSki 細胞，5 d 后連續(xù)14 d 隔天1 次ip 小檗堿10 mg/kg，可顯著抑制腫瘤體積和質(zhì)量的增長，并能上調(diào)腫瘤組織內(nèi)的miR-145-5p 表達；離體實驗發(fā)現(xiàn)小檗堿能夠顯著抑制CaSki 細胞增殖、遷移、侵襲和集落形成能力，促進谷氨酰胺消耗、減少ATP 和α-酮戊二酸生成，并顯著上調(diào)miR-145-5p、上皮-鈣黏蛋白，下調(diào)神經(jīng)-鈣黏蛋白、波形蛋白、MMP-9 的表達，提示小檗堿是通過上調(diào)miR-145-5p 的表達，消耗癌細胞內(nèi)谷氨酰胺和ATP 并阻滯EMT，抑制宮頸癌CaSki細胞增殖、遷移和侵襲。

可見，小檗堿通過抑制EMT 信號通路抑制人乳腺癌MCF-7 細胞、乳腺癌MDA-MB-231 細胞、宮頸癌CaSki 細胞、人宮頸癌CaSki 細胞的侵襲和遷移；小檗堿是通過激活p38MAPK/FOXO-3a 信號通路抑制MDA-MB-231 細胞增殖和EMT，阻滯癌細胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移。

2.2 調(diào)控MMP-2 通路

MMP-2 被認為是腫瘤侵襲中的關(guān)鍵蛋白水解酶，STAT3 可通過調(diào)節(jié)MMP-2 的表達在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[20]。來麗娜等[21-22]報道小檗堿可引起B(yǎng)ax 表達上調(diào)、Bcl-2 表達下調(diào)；使基質(zhì)MMP-2 陽性表達細胞數(shù)減少、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-2 陽性表達細胞數(shù)增多，降低HeLa 細胞的黏附和遷移能力；也能濃度和時間相關(guān)地抑制人臍靜脈內(nèi)皮細胞的增殖和抑制HeLa 細胞的血管內(nèi)皮生長因子的表達，即小檗堿可能是上調(diào)Bax 和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-2 的表達，下調(diào)Bcl-2、MMP-2 和血管內(nèi)皮生長因子的表達，抑制HeLa 細胞黏附和轉(zhuǎn)移，并誘導(dǎo)細胞凋亡。

2.3 上調(diào)AP-1 表達、下調(diào)組蛋白去乙?；?4 表達

王玉[11]報道小檗堿10～160 μmol/L 濃度和時間相關(guān)地抑制低分化人宮頸癌AN3CA 細胞和HEC-1A 細胞增殖、集落形成、遷移、侵襲能力；小檗堿在過表達環(huán)氧化酶-2（COX-2）的HEC-1A 細胞中抑制增殖、遷移、侵襲的能力被削弱，并認為小檗堿是通過誘導(dǎo)AP-1 表達，促進miR-101 表達而下調(diào)COX-2 表達；整體動物實驗發(fā)現(xiàn)給裸鼠皮下接種HEC-1A 細胞移植成功后或靜脈注射HEC-1A 細胞制作肺轉(zhuǎn)移成功后，連續(xù)4 周ig 小檗堿50、100 mg/kg 均能抑制皮下移植瘤生長和顯著減少肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)，說明小檗堿能夠防治子宮內(nèi)膜癌和防治癌轉(zhuǎn)移。

趙文佳[23]報道小檗堿濃度和時間相關(guān)地抑制人三陰性乳腺癌MDA-MB-231 細胞增殖、腫瘤壞死因子-α 和白細胞介素-8 的分泌及其組蛋白去乙酰化酶-4 的表達，上調(diào)p21，認為小檗堿抗乳腺癌細胞增殖的可能機制是：下調(diào)組蛋白去乙?；?4表達和上調(diào)p21 的表達，抑制乳腺癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。姜玉婷等[24]報道小檗堿20、40 μmol/L 作用48 h 使宮頸癌AN3CA 細胞穿過膜的平均細胞數(shù)由對照組的139.7 個分別減少到110.0、56.7 個，即小檗堿也能夠濃度相關(guān)地降低宮頸癌AN3CA 細胞在體外的侵襲能力。

小檗堿通過誘導(dǎo)AP-1 表達，抑制宮頸癌HEC-1A 細胞增殖，治療子宮內(nèi)膜癌和防治癌轉(zhuǎn)移；下調(diào)組蛋白去乙?；?4 的表達和上調(diào)p21 的表達，抑制乳腺癌MDA-MB-231 細胞的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。

2.4 下調(diào)鞘氨醇-1-磷酸/鞘氨醇-1-磷酸受體-1 通路

智多等[25]認為小檗堿可通過抑制長鏈非編碼RNA 肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子-1 的表達，誘導(dǎo)卵巢癌SKOV3 細胞凋亡，并降低其遷移和侵襲能力。金芙蓉等[26]認為小檗堿是通過下調(diào)鞘氨醇-1-磷酸/鞘氨醇-1-磷酸受體-1 通路相關(guān)蛋白的表達抑制SKOV3 細胞侵襲、遷移和血管形成。目前關(guān)于小檗堿調(diào)控鞘氨醇-1-磷酸/鞘氨醇-1-磷酸受體-1 通路的實驗研究還比較少，以后可多設(shè)計該通路的動物研究，以進一步闡明作用機制和靶點。

3 誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡

魯周南等[27]報道小檗堿作用24 h 能抑制癌細胞遷移和誘導(dǎo)凋亡，質(zhì)量濃度在12.5、25、50 mg/L誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌HEC-1A 細胞的凋亡率由對照組的8.40%分別提高到24.07%、29.84%、69.13%，使癌細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡、結(jié)構(gòu)破壞、裂解成碎片、貼壁細胞減少，并散在排列。

3.1 抑制磷脂酰肌醇-3 激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路

溫純潔[17]報道小檗堿20～160 μmol/L 濃度和時間相關(guān)地抑制MCF-7 細胞增殖，使細胞周期滯留在G1期，S 期細胞數(shù)減少，并誘導(dǎo)凋亡，抑制細胞克隆形成。張創(chuàng)[28]報道小檗堿作用24 h 抑制MCF-7 細胞增殖的IC50為36.277 μmol/L；采用基因芯片技術(shù)測定小檗堿處理MCF-7 細胞后的基因表達譜數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)小檗堿可能是熱休克蛋白-90 抑制劑、組蛋白去乙?；敢种苿┗蛲ㄟ^抑制PI3K/Akt/mTOR 通路促進腫瘤細胞凋亡。

錢潔等[29]報道小檗堿10～100 μmol/L 濃度和時間相關(guān)地抑制MDA-MB-231 細胞增殖，抑制24、48、72 h 細胞增殖的IC50分別為52.15、49.28、44.63 μmol/L，使MDA-MB-231 細胞呈現(xiàn)不規(guī)則形態(tài)、細胞皺縮、細胞質(zhì)濃縮、細胞外出現(xiàn)碎片、細胞間距變大、貼壁能力下降；小檗堿25、50、100 μmol/L作用24 h 后濃度相關(guān)地提高細胞總凋亡率，并誘導(dǎo)細胞自噬泡形成；上調(diào)癌細胞中自噬因子beclin1 表達和自噬相關(guān)蛋白輕鏈3II（LC3II）/輕鏈3I（LC3I）的表達量比，抑制Akt、mTOR 的磷酸化，而自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤能對抗小檗堿的上述作用，提示小檗堿是通過抑制Akt/mTOR 通路誘導(dǎo)癌細胞自噬和凋亡，產(chǎn)生抗腫瘤作用。

PI3K/Akt/mTOR 信號通路在腫瘤發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，小檗堿通過抑制PI3K/Akt/mTOR通路促進人乳腺癌MCF-7 細胞凋亡；抑制Akt/mTOR 通路，誘導(dǎo)三陰性乳腺癌MDA-MB-231 細胞凋亡。

3.2 調(diào)控相關(guān)蛋白和酶的表達

紀武等[30]在離體實驗發(fā)現(xiàn)小檗堿5、20、40 mg/L 可降低HeLa 細胞的侵襲遷移能力，并誘導(dǎo)癌細胞凋亡，40 mg/L 小檗堿作用48 h 使HeLa 細胞凋亡率達到45.36%；使細胞體積變大、內(nèi)有空泡樣改變、漂浮細胞增多，活細胞數(shù)減少，能濃度相關(guān)地抑制HeLa 細胞的Bcl-2、MMP-9、NF-κB p65 的蛋白表達，上調(diào)Bax 蛋白表達。

劉明珠[12]報道小檗堿5、20、40 mg/L 可誘導(dǎo)宮頸癌CaSki 細胞凋亡，40 mg/L 作用48 h 使CaSki細胞凋亡率達到42.47%，使細胞體積增大；內(nèi)有空泡樣改變、漂浮細胞增多、活細胞數(shù)減少。給裸鼠皮下接種CaSki 細胞的次日開始連續(xù)30 d ip 小檗堿10、30、50 mg/kg，能劑量相關(guān)地降低荷瘤小鼠的腫瘤體積，也能劑量相關(guān)地降低腫瘤組織的Bcl-2、MMP-9、NF-κB p65 的蛋白表達，上調(diào)Bax 的蛋白表達[30]。

來麗娜等[22]報道小檗堿5、20、40 mg/L 可誘導(dǎo)HeLa 細胞凋亡，作用48 h 后可見凋亡的DNA 降解形成的梯帶，且濃度相關(guān)地誘導(dǎo)細胞凋亡，并引起B(yǎng)ax 表達上調(diào)、Bcl-2 表達下調(diào)；使MMP-2 陽性表達的細胞數(shù)減少、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-2 陽性表達細胞數(shù)增多，提示小檗堿可能是上調(diào)Bax和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-2 的表達，下調(diào)Bcl-2、MMP-2 和血管內(nèi)皮生長因子的表達，誘導(dǎo)細胞凋亡。

Raghav 等[31]報道小檗堿抑制HeLa 細胞增殖的IC50為18 μmol/L，此濃度小檗堿顯著誘導(dǎo)HeLa 細胞分裂間期和有絲分裂的微管發(fā)生解聚作用，使細胞周期滯留在G2/M 期，并阻止有絲分裂。小檗堿在低于11 μmol/L 就能抑制HeLa 細胞遷移，也能與微管蛋白結(jié)合，改變微管蛋白雜二聚體的構(gòu)象，一方面抑制微管蛋白裝配成微管，另一方面還能使微管解聚，這可能是小檗堿抑制HeLa 細胞有絲分裂、誘導(dǎo)凋亡的分子機制。

因此認為小檗堿通過下調(diào)Bcl-2、MMP-9、NFκB p65 蛋白的表達、上調(diào)Bax 蛋白的表達，誘導(dǎo)宮頸癌HeLa、CaSki 細胞的凋亡，這個作用通路值得深入研究，對開發(fā)抗宮頸癌新藥有現(xiàn)實意義。

3.3 提高機體免疫功能

馬雯鈺[32]報道小檗堿50、100、150 μmol/L 濃度和時間相關(guān)地抑制小鼠三陰性乳腺癌4T1 細胞生長和集落形成，并誘導(dǎo)凋亡。給小鼠乳房墊接種4T1細胞后連續(xù)20 d ig 小檗堿45、75、145 mg/kg，劑量相關(guān)地抑制4T1 細胞腫瘤體積和質(zhì)量增長，其中145 mg/kg 組的腫瘤體積平均為1 719 mm3，明顯低于對照組的2 102 mm3，引起腫瘤組織結(jié)構(gòu)改變、出血、炎性細胞浸潤；下調(diào)腫瘤組織中Bcl-2、X 連鎖凋亡抑制蛋白（XIAP）的蛋白表達和上調(diào)Bax、細胞色素C、半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-8、半胱天冬酶-9、Bid、Fas、Fas 相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白（FADD）的蛋白表達；使荷瘤小鼠血清免疫細胞標志物CD8、免疫抑制分子PD-L1 和調(diào)節(jié)性T 細胞的標志性分子叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子-P3（FOXP3）、炎性細胞因子白細胞介素-1β、白細胞介素-6、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）的基因表達上調(diào)，抗炎細胞因子白細胞介素-10 和上皮生長因子受體基因表達下調(diào)；使腫瘤組織和脾臟中自然殺傷細胞增多；使腫瘤組織中乙酸濃度升高、荷瘤小鼠糞便中乙酸、丙酸、丁酸短鏈脂肪酸濃度增高，這與小檗堿增加有益腸道微生物菌群豐度和多樣性相一致。說明小檗堿通過提高機體的免疫機制來抑制腫瘤的生長，但是目前類似的實驗研究還比較少，以后可以多開展其提高免疫作用的藥理實驗研究。

3.4 阻滯Toll 樣受體-4（TLR4）/核因子-κB（NFκB）通路

洪丹丹等[33]報道小檗堿可抑制HeLa 細胞和沉默TLR4 表達的HeLa 細胞這2 種癌細胞遷移和促進細胞凋亡，也能下調(diào)NF-κB p65、Bcl-2 和TLR4的基因和蛋白表達，而使TLR4 表達沉默可進一步增強小檗堿的上述作用，提示小檗堿是通過抑制TLR4/NF-κB 信號通路的機制誘導(dǎo)癌細胞凋亡的。但目前有關(guān)小檗堿調(diào)控TLR4/NF-κB 信號通路的抗婦科腫瘤的實驗研究比較少。

3.5 激活線粒體/半胱天冬酶通路

低質(zhì)量濃度小檗堿（50 mg/L）或順鉑（5 μmol/L）均不顯著引起HeLa 細胞凋亡、線粒體膜電位下降、細胞色素C 釋放，胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化物形成、活性氧產(chǎn)生，如果上述濃度的兩藥聯(lián)用，上述作用均被顯著增強，并使半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-9 活性顯著增強。而半胱天冬酶抑制劑z-DEVDFMK 能對抗兩藥聯(lián)用引起的細胞凋亡，提示兩藥聯(lián)用主要是激活線粒體/半胱天冬酶通路，誘導(dǎo)HeLa細胞凋亡，產(chǎn)生對癌細胞的毒性作用[28]。小檗堿聯(lián)用順鉑調(diào)控線粒體/半胱天冬酶通路誘導(dǎo)宮頸癌HeLa 細胞凋亡，對于提高化療療效有臨床應(yīng)用價值，但是目前的證據(jù)還比較少，應(yīng)繼續(xù)深入研究。

3.6 抗氧化應(yīng)激

宋霞[34]報道小檗堿抑制MCF-7 細胞增殖的IC50為93.69 mg/L，并誘導(dǎo)凋亡，促進半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-9、p53、鼠雙微基因-2（mdm2）、Bax、Bak、mTOR、4E 結(jié)合蛋白（4ebp）的基因表達，抑制Bcl-2、S6k、Akt基因表達，提示小檗堿是通過促進細胞活性氧生成引起的氧化應(yīng)激，降低線粒體膜電位誘導(dǎo)癌細胞凋亡?？梢娦￠迚A抗人乳腺癌MCF-7 細胞是通過多個通路、多種機制起作用的，如通過抗氧化應(yīng)激、調(diào)控腫瘤抑制因子與EMT信號通路、阻滯細胞周期、抑制PI3K/Akt/ mTOR 通路，進而促進MCF-7 細胞凋亡。

4 增加化療藥敏感性

4.1 減少乳腺癌細胞內(nèi)的雌激素

MCF-7 細胞屬于雌激素受體陽性乳腺癌細胞。小檗堿濃度和時間相關(guān)地誘導(dǎo)雌激素代謝酶細胞色素P4501A1（CYP1A1）的基因和蛋白表達，提示小檗堿可促進雌激素的分解代謝，也是小檗堿抗乳腺癌的作用機制之一。小檗堿20～160 μmol/L 濃度和時間相關(guān)地抑制MCF-7 細胞和他莫昔芬耐藥的MCF-7 細胞株（MCF-7/TAM）的細胞增殖。小檗堿與雌激素受體拮抗劑他莫昔芬聯(lián)用抗MCF-7 細胞和MCF-7/TAM 細胞作用（抑制增殖，誘導(dǎo)凋亡和p21、Bax 的蛋白表達，下調(diào)Bcl-2 蛋白表達）進一步增強，即小檗堿可通過減少乳腺癌細胞內(nèi)雌激素含量提高乳腺癌細胞對他莫昔芬的敏感性[17]。

4.2 抑制組蛋白去乙酰化酶-2（SIRT2）表達

李翀瑤[35]報道小檗堿或阿霉素均能濃度相關(guān)地抑制MDA-MB-231 細胞增殖，作用24 h 的IC50分別為78.87 μmol/L 和1.12 mg/L，二者聯(lián)用時的CI 均小于1，產(chǎn)生抑制協(xié)同作用，最佳聯(lián)用方案為小檗堿60 μmol/L＋阿霉素0.5 mg/L；阿霉素1 mg/L、小檗堿80 μmol/L 和最佳聯(lián)用方案作用24 h，均能使MDA-MB-231 細胞的遷移能力顯著下降，說明小檗堿本身對三陰性乳腺癌細胞的增殖和遷移均有抑制作用，與阿霉素聯(lián)用可產(chǎn)生協(xié)同作用，提示小檗堿是通過抑制SIRT2 表達和上調(diào)乙?；D(zhuǎn)移酶P300 和乙酰化組蛋白H3K56 的表達產(chǎn)生抗癌作用。

4.3 下調(diào)RAD51 表達

人卵巢癌屬免疫抑制型腫瘤，可逃避免疫系統(tǒng)監(jiān)控，因此易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，是婦科腫瘤死亡率最高的腫瘤。徐光偉[36]報道小檗堿使卵巢癌HEY 細胞和SKOV3 細胞周期滯留在G1期，并誘導(dǎo)凋亡，下調(diào)細胞周期蛋白-E、Bcl-2 的蛋白表達，上調(diào)p21 和Bax的蛋白表達；小檗堿10 μmol/L能顯著下調(diào)HEY細胞內(nèi)同源重組修復(fù)關(guān)鍵蛋白RAD51 的表達；小檗堿10 μmol/L 聯(lián)用順鉑1 μmol/L 可對抗順鉑誘導(dǎo)RAD51 表達上調(diào)，增強順鉑上調(diào)HEY 細胞和SKOV3 細胞的Bax 表達、下調(diào)Bcl-2 表達和誘導(dǎo)凋亡的作用，提示小檗堿可通過下調(diào)RAD51 表達抑制癌細胞的修復(fù)，增強癌細胞對化療藥的敏感性。

4.4 下調(diào)miR-21 的表達

Lin 等[37]報道小檗堿濃度和時間相關(guān)地抑制卵巢癌OVCAR3 細胞和3 例患者原發(fā)卵巢癌細胞增殖，使細胞周期滯留在G0/G1期，電鏡可見小檗堿或順鉑都能使大多數(shù)癌細胞出現(xiàn)典型的凋亡和壞死細胞的死亡形態(tài)，抑制增殖細胞核抗原（PCNA）和Ki67 的表達，促進與凋亡相關(guān)的半胱天冬酶通路、激活與壞死相關(guān)的RIPK3-MLKL 通路，提示小檗堿聯(lián)用順鉑抑制卵巢癌細胞增殖、誘導(dǎo)細胞凋亡和壞死的作用進一步增強。

王婉等[38]報道小檗堿聯(lián)用順鉑可提高SKOV3細胞對順鉑的敏感性，認為小檗堿是通過誘導(dǎo)錯配修復(fù)基因（hMLH1）啟動子區(qū)CpG 島的去甲基化和增強hMLH1 的基因表達，提高hMLH1 的功能，誘導(dǎo)癌細胞凋亡；還可通過上調(diào)卵巢癌的抑癌基因程序性細胞死亡因子-4（PDCD4）和下調(diào)miR-21 的表達，提高癌細胞對順鉑的敏感性。

4.5 抑制乙醛脫氫酶-1 活性

宋濤濤等[39]報道小檗堿0.2、0.4、0.8、1.6 μmol/L濃度相關(guān)地抑制紫杉醇耐藥卵巢癌SKOV4/ DR 細胞的藥物轉(zhuǎn)運蛋白P-糖蛋白和乙醛脫氫酶-1 的表達；小檗堿0.8 μmol/L 顯著抑制SKOV3/DR 細胞增殖、遷移、侵襲，并誘導(dǎo)凋亡，使耐藥癌細胞裂解的半胱天冬酶、BAD、Bax 的表達顯著上調(diào)，Bcl-2、C-myc 和侵襲相關(guān)蛋白蝸牛狀蛋白、波形蛋白、神經(jīng)-鈣黏蛋白、MMP-3、MMP-9 的表達顯著下調(diào)；小檗堿聯(lián)用紫杉醇的上述作用進一步增強，提示小檗堿可通過抑制乙醛脫氫酶-1 活性下調(diào)了卵巢癌細胞的P-糖蛋白表達，從而逆轉(zhuǎn)對紫杉醇的耐藥性。

5 結(jié)語

小檗堿能防治乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、4T1 細胞，宮頸癌HeLa、CaSki 細胞和子宮內(nèi)膜癌HEC-1A 細胞移植瘤在小鼠體內(nèi)生長和肺轉(zhuǎn)移。離體實驗表明小檗堿能濃度相關(guān)地抑制乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、4T1 細胞，卵巢癌SKOV3、HEY、A2780、HO-8910 細胞，宮頸癌HeLa、CaSki、Siha細胞，子宮內(nèi)膜癌HEC-1A、RL95-2、AN3CA、Ishikawa 細胞的增殖，遷移、侵襲，并誘導(dǎo)癌細胞凋亡。小檗堿也能提高婦科腫瘤細胞對化療和放療的敏感性。Zhang 等[40]報道小檗堿和阿霉素抑制MDA-MB-231 細胞和4T1 細胞增殖的IC50分別為52.72、0.329 mg/L 和0.821、0.040 mg/L；小檗堿聯(lián)用阿霉素因濃度比不同可產(chǎn)生協(xié)同、相加和拮抗作用，只有當濃度比為7.8∶1、15.6∶1 時，可產(chǎn)生強大協(xié)同作用，因此在臨床上使用時選擇最佳劑量比很重要。

小檗堿抗婦科腫瘤的藥理機制是多方面的，涉及到上調(diào)miR-145-5p 表達，激活A(yù)P-1/miR-101 通路、MAPK/FOXO 通路，促進活性氧生成誘導(dǎo)氧化應(yīng)激性線粒體損傷、缺氧誘導(dǎo)因子的降解，抑制去乙酰化酶表達、表皮生長因子及其受體的表達、PI3K/Akt/mTOR 通路、TLR4/NF-κB 通路、STAT 通路、鞘氨醇-1-磷酸/鞘氨醇-1-磷酸受體通路、TDO/Kyn/AhR 通路，下調(diào)修復(fù)基因RAD5表達和上調(diào)錯配修復(fù)基因hMLH1表達等作用機制，因此具有比較廣譜抗婦科腫瘤作用，建議應(yīng)針對具體的作用靶點進行更深入的藥理研究，如防治卵巢癌和三陰性乳腺癌的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等。

小檗堿抗婦科腫瘤細胞的基礎(chǔ)研究已經(jīng)進行了比較多的實驗研究，臨床上也有人將其應(yīng)用于防治婦科腫瘤，Qin 等[41]報道60 例宮頸癌患者術(shù)后均進行每周1 次化療和盆骨放療，加服小檗堿300 mg，3 次/d，能顯著預(yù)防急性放射性直腸炎發(fā)生，提高生活質(zhì)量評分，使放療完成時間顯著縮短，說明小檗堿能預(yù)防宮頸癌患者放化療時的急性直腸炎發(fā)生，提高放化療時的生活質(zhì)量。但這樣的臨床研究比較少，多為短期治療，以后可以更多地開展設(shè)計嚴謹?shù)亩嘀行呐R床研究。腫瘤屬于慢性疾病、需要長期用藥治療，而小檗堿是不良反應(yīng)較低的OTC 藥物，臨床研究可考察小檗堿能否提高腫瘤患者5 年生存率，從基礎(chǔ)和臨床兩個方面加速新藥研發(fā)進程，使更多的婦科腫瘤患者受益。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突