基于SPE-GC-MS對(duì)白酒中6種長鏈游離脂肪酸的測(cè)定及差異性分析

胥鑫鈺，呂志遠(yuǎn)，劉玉濤，張夢(mèng)夢(mèng)，李小杰，秦炳偉，趙巧珍，李 強(qiáng)，邱振清，高紅波，蘇 靜*

（1.齊魯工業(yè)大學(xué)（山東省科學(xué)院）生物工程學(xué)院，山東 濟(jì)南 250353；2.濟(jì)南趵突泉釀酒有限責(zé)任公司 技術(shù)質(zhì)量部，山東 濟(jì)南 250115；3.中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院有限公司，北京 100027）

白酒作為中國銷量最高的酒精飲品，其獨(dú)特的釀造工藝使中國白酒含有豐富的活性物質(zhì)，如有機(jī)酸及其酯類、酚類、吡嗪類、呋喃類、萜烯類等。其中白酒中的游離脂肪酸（free fatty acids，F(xiàn)FAs）在白酒風(fēng)味和健康兩個(gè)領(lǐng)域中都起到舉足輕重的作用[1-2]。游離脂肪酸一方面是酒中主要香氣成分脂肪酸乙酯形成的前體物質(zhì)，對(duì)白酒香氣及白酒后味形成有著重要作用[3-4]；另一方面如亞油酸、亞麻酸這樣的多不飽和脂肪酸，被公認(rèn)為人體必需的健康物質(zhì)[5-6]。白酒中游離脂肪酸（FFAs）主要由以下兩種途徑產(chǎn)生：糧食中含有豐富的脂肪，由脂肪酶水解為甘油及脂肪酸，一部分長鏈脂肪酸受微生物的β-氧化作用，進(jìn)一步生成低級(jí)脂肪酸[7]。由酵母代謝產(chǎn)生，在其細(xì)胞質(zhì)中乙酰輔酶A（coenzyme A，CoA）通過脂肪酸合成途徑轉(zhuǎn)化為脂肪酸，有助于細(xì)胞生長和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的維持[8-9]。因此白酒中FFAs無論是對(duì)白酒香氣的形成，還是在白酒釀造過程中質(zhì)量控制都起到重要作用。

現(xiàn)階段白酒中FFAs的研究更關(guān)注中、短鏈等揮發(fā)性或半揮發(fā)性的游離脂肪酸以及其對(duì)白酒香氣的影響[7]，而長鏈的FFAs（通常碳鏈大于12個(gè)碳原子）由于其分子基團(tuán)大、導(dǎo)致其沸點(diǎn)高、性質(zhì)不穩(wěn)定，在白酒中提取、檢測(cè)困難，進(jìn)而研究較少。長鏈脂肪酸自身具有重要的生理活性，且適量的長鏈FFAs能夠使酒體香氣舒緩，回味悠長，不會(huì)出現(xiàn)爆香及后味寡淡的現(xiàn)象[11]。因此，檢測(cè)和控制白酒中的長鏈FFAs具有重要意義。然而，目前我國沒有專門針對(duì)白酒中長鏈FFAs的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，國家頒布的食品中的脂肪酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，即GB 5009.168—2016《食品中脂肪酸的測(cè)定》適用于脂肪酸含量較高的食品，如乳制品、動(dòng)植物油脂等，方法定量限為13～26 mg/L[24]，而酒類中FFAs含量一般低于10 mg/L，因此不適用于酒類中FFAs的檢測(cè)。相關(guān)酒類產(chǎn)品大都采用高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行分析檢測(cè)[11-12]，高效液相色譜質(zhì)譜儀價(jià)格高昂，普及率低，而氣相色譜質(zhì)譜（gas chro matography-mass spectrometer，GC-MS）具有譜庫成熟、綜合成本低的優(yōu)點(diǎn)，更適合于實(shí)際生產(chǎn)質(zhì)量控制。

氣相色譜-質(zhì)譜法具有譜庫成熟、綜合成本低，實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用普遍的優(yōu)點(diǎn)，其應(yīng)用的前提是需要探究一套針對(duì)白酒產(chǎn)品中長鏈FFAs的高效提取方法。目前酒類物質(zhì)中FFAs的提取方法主要有液液萃取法（liquid-liquid extraction，LLE）[10，13-14，17]、固相萃取法（solid-phase extraction，SPE）[15-16]、固相微萃取法（solid phase micro extraction，SPME）[18]、磁力攪拌吸附法（stir bar sorptive extraction，SBSE）[19]。其中固相微萃取法（SPME）及磁力攪拌吸附法（SBSE）雖不需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，但僅能檢測(cè)到白酒中易揮發(fā)或半揮發(fā)的中短鏈FFAs，如辛酸、癸酸，對(duì)長鏈FFAs的萃取效率較低[16]。液液萃取法和固相萃取法是目前酒類產(chǎn)品中提取長鏈FFAs常用的方法。本研究比較了液液萃取和固相萃取兩種脂肪酸提取方法，并探究長鏈FFAs的衍生試劑、優(yōu)化色譜條件，建立了氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用同時(shí)測(cè)定月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸共6種長鏈FFAs的檢測(cè)方法，并根據(jù)該方法定量檢測(cè)不同香型白酒中長鏈FFAs，全面地了解白酒中長鏈FFAs的構(gòu)成與量比，為白酒健康及白酒口感的研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、油酸、亞油酸、硬脂酸、十七烷酸、棕櫚酸乙酯、脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)品（色譜純）：西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司；正己烷（色譜純）、CH2Cl2（色譜純）、戊烷（分析純）、甲醇（色譜純）：天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司；無水硫酸鈉（優(yōu)級(jí)純）：天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司；三氟化硼（BF3）-甲醇（每100 mL甲醇中有14 g BF3）：上海麥克林生化科技有限公司；濃硫酸、濃鹽酸（分析純）：萊陽市康德化工有限公司。

52%vol濃香型白酒、54%vol芝麻香型白酒、53%vol清香型白酒、53%vol醬香型白酒、52%vol米香型白酒、42%vol鳳香型白酒、45%vol豉香型白酒：市售。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 7890A-5975C氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國安捷倫科技有限公司；RE-5220A型真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；LC-DCY-12G型氮吹儀、LC-SPE-12固相萃取儀：上海力辰儀器科技有限公司；C18固相萃取小柱：天津博納艾杰爾科技有限公司。

（1）當(dāng)#1主變失電時(shí)，10kV 1M無壓、無流，10kV 2AM和3M有壓，若512備自投充電完畢，經(jīng)3.0s延時(shí)后跳501開關(guān)，確認(rèn)501開關(guān)已于分位后，合512開關(guān)，跳501開關(guān)的同時(shí)聯(lián)跳502B開關(guān)，造成10kV 2BM無壓、無流，10 kV 3M有壓，523備自投裝置充電完畢，再經(jīng)3.0s延時(shí)確認(rèn)502B開關(guān)已于分位后，合523開關(guān)。備自投負(fù)荷均分過程完成，#2主變和#3主變分別帶2段母線。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品衍生試劑優(yōu)化

分別用BF3-甲醇法和甲醇-H2SO4法對(duì)脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行衍生化處理，具體方法為：1 mL脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品加入0.1 mLBF3-甲醇或2 mL甲醇和2滴濃H2SO4，在95 ℃條件下水浴20 min，酯化結(jié)束后加2 mL去離子和2 mL正己烷，收集有機(jī)相，氮?dú)獯蹈珊?，加? mL正己烷復(fù)溶，測(cè)定酯化率。

1.3.2 樣品前處理方法優(yōu)化

（1）液液萃取法

選取體積分?jǐn)?shù)14%的BF3-甲醇溶液和甲醇-H2SO4兩種衍生化試劑，對(duì)200 mg/L的脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行脂肪酸甲酯化效果比較，結(jié)果見表1。

機(jī)構(gòu)養(yǎng)老服務(wù)目前的投資主體是政府和非營利性服務(wù)機(jī)構(gòu)。養(yǎng)老機(jī)構(gòu)普遍存在兩種情況，一是“排隊(duì)等”二是“無人住”。

分別采用液液萃取法、固相萃取法對(duì)同一白酒樣品進(jìn)行處理。結(jié)果見圖1。

按照文獻(xiàn)[10]改進(jìn)預(yù)處理方法，C18固相萃取小柱依次用2.5 mL甲醇和5 mL水進(jìn)行活化。取1 mL酒樣，加9 mL水和1 mL十七烷酸內(nèi)標(biāo)溶液，混勻后加樣到C18固相萃取小柱中，抽真空使試樣慢慢滲入固相萃取柱中，靜置10 min。先用酸化水（2.5 mL水中加1 mL 0.1 mol/L HCl）洗滌濾筒，隨后用2 mL二氯甲烷和2.5 mL戊烷以1 mL/min流速洗脫小柱，收集有機(jī)相，有機(jī)相經(jīng)無水Na2SO4除水后，在室溫下用氮?dú)饩従彺抵? mL，待酯化。

酯化方法：處理好的樣品加入0.1 mL的14%三氟化硼-甲醇溶液，在95 ℃水浴20 min，酯化結(jié)束后加2 mL去離子水和2 mL正己烷，最終收集有機(jī)相，氮?dú)獯蹈珊?，加? mL正己烷復(fù)溶，待測(cè)定。

由于入洗原煤中含有大量底板泥，增設(shè)煤泥浮選系統(tǒng)前，為了解煤泥可浮性，對(duì)煤泥采樣進(jìn)行可浮性實(shí)驗(yàn)。2010年1月至2011年5月煤泥平均灰分在44%左右。煤泥小篩分實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

1.3.3 GC-MS條件（1）色譜柱的優(yōu)化

試驗(yàn)設(shè)置兩種不同的色譜柱（CP-WAX和HP-5），確定分離長鏈FFAs的最佳色譜柱，其中WAX色譜柱為強(qiáng)極性柱，該色譜柱對(duì)低沸點(diǎn)分析物具有較高的分離度，如醇、脂肪酸甲酯等；HP-5柱為非極性高性能通用色譜柱，填料是（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷，其適用范圍廣，溫度上限高。二者均可用于長鏈FFAs甲酯的分離，在不同色譜柱對(duì)應(yīng)的條件下進(jìn)行測(cè)定，確定最佳色譜柱及分離長鏈脂肪酸酯的最佳條件。兩種色譜柱及對(duì)應(yīng)的色譜條件如下：

CP-WAX色譜柱（50 m×0.25 mm×0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度250 ℃；程序升溫：初始溫度60 ℃，0 min；15 ℃/min升至125 ℃保持2 min；5 ℃/min升至210 ℃保持10 min；載氣：氦氣（He）（純度≥99.9995%），恒定流量0.8 mL/min，進(jìn)樣模式：不分流進(jìn)樣。

目前，我國特色農(nóng)產(chǎn)品在進(jìn)行英語標(biāo)準(zhǔn)化翻譯時(shí)，不僅直譯過多，而且得不到企業(yè)應(yīng)有的重視，導(dǎo)致該問題始終得不到及時(shí)解決。研究發(fā)現(xiàn)，很多農(nóng)產(chǎn)品企業(yè)并不關(guān)注英語標(biāo)準(zhǔn)化翻譯問題，他們更為重視特色農(nóng)產(chǎn)品外包裝的設(shè)計(jì)，包括商標(biāo)的圖像、顏色等。出現(xiàn)這一現(xiàn)象的原因主要有：①企業(yè)認(rèn)為外包裝的新穎設(shè)計(jì)更能夠激起消費(fèi)者的購買欲望；②很多農(nóng)產(chǎn)品企業(yè)認(rèn)為對(duì)于農(nóng)產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)化翻譯相當(dāng)復(fù)雜，且企業(yè)缺乏相關(guān)人才，要提高翻譯質(zhì)量，就要增加這方面的人力和資金投入，這是一項(xiàng)較大的費(fèi)用支出，因而大多數(shù)企業(yè)不重視農(nóng)產(chǎn)品的英語標(biāo)準(zhǔn)化翻譯[3]。

HP-5色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度280℃；程序升溫：初始溫度50 ℃，2 min；10 ℃/min升至200℃，0 min；5 ℃/min升至290 ℃保持5 min；載氣：He（純度≥99.9995%），恒定流量1 mL/min，進(jìn)樣模式：不分流進(jìn)樣。

（2）質(zhì)譜條件

水利工程建設(shè)時(shí)空跨度大，在不同階段面臨的問題并不一致。如露天高空作業(yè)和水下工程作業(yè)就面臨完全不一樣的施工環(huán)境，因此，加強(qiáng)現(xiàn)場(chǎng)管理的階段性定位設(shè)計(jì)非常必要。再加上多種工種作業(yè)，人員流動(dòng)大，存在事故隱患，因此應(yīng)通過綜合性控制手段對(duì)工程的質(zhì)量、安全、成本、工期等分別建立不同階段的控制目標(biāo)，加強(qiáng)施工現(xiàn)場(chǎng)管理。

電子電離（electron ionization，EI）源；離子源溫度230 ℃；四級(jí)桿溫度150 ℃；電子能量70 eV；接口溫度250 ℃；質(zhì)量掃描范圍50～550 m/z；掃描方式為選擇離子模式；溶劑延遲5 min。

“進(jìn)博會(huì)彰顯了中國政府對(duì)貿(mào)易自由化和經(jīng)濟(jì)全球化的堅(jiān)定支持以及主動(dòng)向世界開放市場(chǎng)的決心?！蓖呖思瘓F(tuán)董事賀達(dá)博士從德國總部趕來參加進(jìn)博會(huì)并表示，“作為一家積極支持自由貿(mào)易和經(jīng)濟(jì)全球化的公司，我們是最早決定參展的幾家德國公司之一。中國是瓦克全球最大的單一市場(chǎng)，公司在華12億歐元銷售額中的一半來自進(jìn)口產(chǎn)品，與此同時(shí)，瓦克在華生產(chǎn)的產(chǎn)品中20%也會(huì)出口國際市場(chǎng)，自由貿(mào)易對(duì)瓦克來說意義重大?！?/p>

（3）定性定量方法

武陵地區(qū)是一個(gè)多民族聚居區(qū)，在渝、鄂、湘、黔交匯地區(qū)，聚居著土家族、苗族、回族等30多個(gè)民族，是我國最大的少數(shù)民族聚居地。歷史上各民族在這里繁衍生息，交流融合，形成了典型的武陵文化特質(zhì)，而這里各種類型的傳統(tǒng)聚落則成為民族文化演化的重要?dú)v史見證。聚落通過不同的空間形態(tài)、布局、建筑樣式以及裝飾反映了當(dāng)?shù)馗髅褡迦嗣竦纳顮顩r、風(fēng)土人情、民族心理以及特殊審美追求。

每學(xué)期初，我都要求學(xué)生明確本學(xué)期的奮斗目標(biāo)，引導(dǎo)學(xué)生把學(xué)校、班級(jí)的教育目標(biāo)整合起來，形成一個(gè)切實(shí)可行的自主管理努力目標(biāo)。由于目標(biāo)經(jīng)過學(xué)生整合后切合學(xué)生的需要，使學(xué)生目標(biāo)明，方向清，管得主動(dòng)。因此，目標(biāo)的設(shè)置能夠滿足學(xué)生的需要和符合他們價(jià)值觀，適合學(xué)生的經(jīng)驗(yàn)條件和環(huán)境條件，使之具有實(shí)現(xiàn)的可能性，使學(xué)生踮踮腳就能摘到果子處在不斷進(jìn)步的狀態(tài)。

由于酒樣酒精度為52%vol，稀釋后約為5%vol，為了模擬酒體，采用5%vol的酒精水溶液配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，將6種長鏈FFAs的標(biāo)準(zhǔn)品用5%的酒精水溶液稀釋至不同梯度，對(duì)長鏈FFAs標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行同酒樣一致的固相萃取法提取，BF3-甲醇衍生化，GC-MS分析，以質(zhì)量濃度-峰面積進(jìn)行線性回歸，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。檢出限為3倍信噪比時(shí)物質(zhì)的質(zhì)量濃度；定量限為10倍信噪比時(shí)物質(zhì)的質(zhì)量濃度。

1.3.4 酯化率計(jì)算公式

長葉山蘭發(fā)現(xiàn)于貴州雷公山，生境海拔1 988 m，生于路邊林下潮濕溝谷，伴生種有竹根七、樓梯草、水芹、黔川烏頭等。2015年9月20日引種保存于貴陽藥用植物園，2018年5月首次開花后進(jìn)行了鑒定，憑證標(biāo)本：HXQ2015092034HT。

1.3.5 方法學(xué)考察

根據(jù)配制的脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度和酯化后脂肪酸甲酯的含量進(jìn)行計(jì)算。

采用棕櫚酸、油酸、亞油酸、月桂酸、肉豆蔻酸和硬脂酸的各單標(biāo)進(jìn)行衍生確定每種組分的保留時(shí)間，然后根據(jù)6種脂肪酸的質(zhì)譜圖選擇響應(yīng)高、特征性高的離子作為選擇特征離子。

取適量長鏈FFAs標(biāo)準(zhǔn)品，配制成2.5 mg/L、5.0 mg/L和50.0 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，并對(duì)方法的加標(biāo)回收率、精密度進(jìn)行測(cè)定。

1.3.6 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析及表格制作采用Microsoft Excel 2019，圖片繪制采用Origin 9.5。

2 結(jié)果與分析

2.1 衍生試劑的優(yōu)化

二氯甲烷：戊烷提取法是根據(jù)文獻(xiàn)[13]改進(jìn)后的方法，具體樣品處理方法如下：取1 mL酒樣，加9 mL水，2 g NaCl，1 mL十七烷酸內(nèi)標(biāo)，0.2 mL濃鹽酸，連續(xù)采用5 mL、3 mL、3 mL二氯甲烷：戊烷（體積比為4∶5）溶液萃取3次，合并有機(jī)相后，連續(xù)用5 mL、3 mL、2 mL 50 g/L的Na2CO3溶液萃取3次；合并水相棄有機(jī)相，水相用6 mol/L HCl調(diào)節(jié)pH至2～3后，再次用5 mL、3 mL、3 mL二氯甲烷：戊烷溶液萃取3次，收集有機(jī)相，有機(jī)相經(jīng)無水Na2SO4除水后，濾入25mL梨形瓶，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1mL后，轉(zhuǎn)入酯化管，待酯化。

隨著科技的發(fā)展，汽車上塑料、橡膠及高分子合成材料等制品使用越來越多。現(xiàn)在每臺(tái)轎車塑料制品用量在60～100 kg，塑料制品在汽車車內(nèi)的使用更加廣泛，如汽車儀表臺(tái)、車門內(nèi)飾等。[2]很多種汽車非金屬制品都會(huì)緩慢釋放有毒有害物質(zhì)，特別是在夏季高溫時(shí)揮發(fā)更多，因此夏季汽車車內(nèi)污染更加嚴(yán)重。

表1 不同衍生化試劑的酯化效果比較Table 1 Comparison of esterification effects of different derivatization reagents

由表1可知，兩種衍生化方法酯化效果接近。BF3-甲醇法的酯化率在85%～91%之間，甲醇-H2SO4法的酯化率在84%～92%之間。甲醇-H2SO4反應(yīng)體系中，脂肪酸在酸性條件下與甲醇發(fā)生酯化反應(yīng)，而BF3-甲醇法是脂肪酸的羧基在BF3的誘導(dǎo)下發(fā)生親核取代反應(yīng)，進(jìn)而與甲醇進(jìn)行酯化[20]，其更適用于游離脂肪酸的衍生，而甲醇-H2SO4法可以衍生游離態(tài)脂肪酸及結(jié)合態(tài)脂肪酸。目前在啤酒、果酒等發(fā)酵酒的游離脂肪酸檢測(cè)中，由于酒體中含有大量微生物，若采用甲醇-H2SO4法衍生化，細(xì)胞膜中的磷脂等脂肪酸衍生物對(duì)結(jié)果產(chǎn)生干擾，因此大多采用BF3-甲醇法對(duì)酒中脂肪酸進(jìn)行衍生化及后續(xù)測(cè)定[16，19]。白酒屬于蒸餾酒，其本身雜質(zhì)較少，酒液清澈透明，綜合考慮BF3-甲醇法對(duì)游離脂肪酸衍生化相對(duì)專一性，而且操作更為方便，成本更加低廉，因此后續(xù)脂肪酸測(cè)量均采用BF3-甲醇法進(jìn)行衍生化。

2.2 樣品前處理方法的比較

（2）固相萃取法

圖1 液液萃取法（A）及固相萃取法（B）處理樣品色譜圖Fig.1 Chromatogram of samples treated by liquid-liquid extraction(A)and solid phase extraction (B)

由圖1可知，樣品經(jīng)固相萃取處理后，分離效果明顯優(yōu)于液液萃取。固相萃取法處理樣品的色譜圖，雜峰少，峰形好，目標(biāo)峰清晰，且不會(huì)水解白酒中的脂肪酸乙酯。除此之外，液液萃取法的質(zhì)譜圖中出現(xiàn)了乙酯峰，補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)證明，在酸性條件下進(jìn)行脂肪酸提取，使白酒中的酯類發(fā)生不完全水解，部分脂肪酸乙酯水解生成脂肪酸和乙醇，脂肪酸再進(jìn)行衍生化，生成脂肪酸甲酯[21]。因此，固相萃取法適用于白酒中FFAs的提取。

2.3 色譜柱的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)分別采用長鏈脂肪酸酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別優(yōu)化HP-5（30m×0.25mm×0.25μm）及CP-WAX（50m×0.25mm×0.25μm）色譜柱載氣流速、初始溫度、升溫程序等，使兩種色譜柱在分離長鏈脂肪酸酯時(shí)處于最優(yōu)狀態(tài)。HP-5與CP-WAX兩種色譜柱對(duì)6種FFAs標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定的離子色譜圖見圖2。

圖2 CP-WAX色譜柱（A）及HP-5色譜柱（B）檢測(cè)6種FFAs標(biāo)準(zhǔn)品的離子色譜圖Fig.2 Ion chromatogram of 6 free fatty acids standards detected with CP-WAX column (A) and HP-5 column (B)

由圖2可知，在分析時(shí)間上來看，HP-5色譜柱的分析時(shí)間小于CP-WAX色譜柱，但是在分離效果上來看，CP-WAX測(cè)得6種脂肪酸可完全分離，峰形基本對(duì)稱，而HP-5在分離亞油酸、油酸和硬脂酸時(shí)，這三種脂肪酸未完全分離且峰形不好。因此本實(shí)驗(yàn)最終選擇CP-WAX（50 m×0.25 mm×0.25 μm）來分離6種FFAs。

40例頸部富血供包塊患者經(jīng)CT掃描診斷與MRI掃描診斷后發(fā)現(xiàn)，一共有5例患者存在炎性包塊，病灶具體表現(xiàn)為邊界模糊并且有包塊陰影，強(qiáng)化不均勻，但是強(qiáng)化程度的均值在67HU左右?；颊咧羞€出現(xiàn)1例機(jī)化血凝塊，內(nèi)部可以看見有明顯的條狀、片狀血管影，強(qiáng)化程度的均值為100HU。患者中有3例血管性包塊，2例頸動(dòng)脈體瘤，瘤體的位置在患者右側(cè)的頸動(dòng)脈分叉處，強(qiáng)化均值為100HU?；颊咧羞€有2例蔓狀血管瘤，瘤體的位置在患者左側(cè)的頸動(dòng)脈區(qū)，強(qiáng)化均值為62HU，邊界較為模糊。

2.4 白酒中長鏈FFAs的定性

將配制好的脂肪酸混標(biāo)溶液進(jìn)行衍生，通過GC-MS進(jìn)行測(cè)定，確定6種長鏈FFAs的保留時(shí)間及定性定量離子，具體見表2。

表2 6種游離氨基酸的保留時(shí)間和特征離子Table 2 Retention time and characteristic ions of 6 free fatty acids

2.5 6種長鏈脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程及相關(guān)參數(shù)

長鏈FFAs的標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程、線性范圍、檢出限及定量限測(cè)定結(jié)果見表3。由表3可知，固相萃取法測(cè)定6種長鏈FFAs的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程相關(guān)系數(shù)R2均＞0.993，對(duì)于經(jīng)過前處理與衍生化的標(biāo)準(zhǔn)品而言，其在檢測(cè)濃度范圍內(nèi)線性均良好，滿足檢測(cè)要求。檢出限為0.002～0.009 mg/L，定量限為0.010～0.034 mg/L。

表3 6種游離氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限Table 3 Six kinds of free fatty acids standards linear range,correlation coefficient, precision, recovery rate,detection limit and quantitative limit

2.6 方法的回收率與精密度

方法的加標(biāo)回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果見表4。由表4可知，6種長鏈FFAs3個(gè)水平的加標(biāo)回收率為92%～112%，精密度試驗(yàn)結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）值為3.9%～9.3%，表明該方法精密度較高、回收率較好，表明本實(shí)驗(yàn)所建的方法能夠滿足檢測(cè)要求。

表4 長鏈游離氨基酸檢測(cè)方法的回收率與精密度（n=6）Table 4 Recovery and precision of detection methods for long-chain free fatty acids (n=6)

2.7 不同香型白酒中長鏈FFAs的檢測(cè)

采用固相萃取法結(jié)合GC-MS檢測(cè)市售不同香型白酒中FFAs，測(cè)定結(jié)果如表5所示。

表5 不同白酒樣品中長鏈游離氨基酸含量的測(cè)定結(jié)果Table 5 Determination results of long-chain free amino acid contents in different liquor samples mg/L

由表5可知，從長鏈FFAs種類上看，棕櫚酸是白酒中含量最高的長鏈FFAs，為7.91～29.16 mg/L，主要存在于濃香型白酒和芝麻香型白酒中，與文獻(xiàn)報(bào)道過的8.48～29.43 mg/L檢測(cè)結(jié)果相似[22]，醬香型白酒、鳳香型白酒中的含量分別為14.87 mg/L、12.63 mg/L，清香型白酒、米香型白酒和豉香型白酒中的棕櫚酸含量較低，分別為7.91 mg/L、6.81 mg/L、8.11 mg/L。其次為油酸和亞油酸，其中油酸在豉香型白酒中含量最高，為14.54 mg/L，油酸在豉香型白酒中含量較高應(yīng)與豉香型白酒浸肉工藝有關(guān)[23]，亞油酸在醬香型白酒中含量最高8.89 mg/L，其次是豉香型白酒6.39 mg/L。月桂酸在濃香型白酒中含量較高，為6.15 mg/L，其他香型白酒中含量較少。肉豆蔻酸在濃香型和米香型白酒中含量較高，分別為3.49 mg/L、1.29 mg/L。硬脂酸的含量在鳳香型白酒中較低，為0.87 mg/L。

從白酒中長鏈FFAs總量上看，濃香型白酒中長鏈FFAs含量最高，總量為46.55 mg/L，其次為豉香型白酒，總量為32.47 mg/L；再次為芝麻香型白酒，總量為31.69 mg/L，醬香型白酒30.83 mg/L，鳳香型白酒為19.77 mg/L，最少的為清香型白酒12.02 mg/L和米香型白酒15.68 mg/L。

2.8 不同香型白酒中長鏈FFAs差異性與共性分析

6種長鏈FFAs在7種不同香型酒中的分布情況見圖3。由圖3可知，棕櫚酸為白酒中含量最高的長鏈FFAs，月桂酸主要存在于濃香型白酒中，油酸主要存在于豉香型白酒中，亞油酸在醬香型白酒中含量較高。濃香型白酒與芝麻香型白酒的長鏈FFAs具有一定相似性，清香型白酒和米香型白酒中的長鏈FFAs具有一定相似性，而豉香型白酒、醬香型白酒和鳳香型白酒各有特點(diǎn)。

為測(cè)試用戶操作軟件的性能，在泳池環(huán)境下進(jìn)行測(cè)試。圖5是泳池環(huán)境下的ROV，圖6是自動(dòng)檢測(cè)界面，圖7是主操作界面。

圖3 不同香型白酒中長鏈游離氨基酸的差異性與共性分析Fig.3 Differences and commonality analysis of long-chain free fatty acids in Baijiu of different aroma

不同香型白酒中長鏈FFAs含量的差異主要是與5種香型白酒的釀造工藝以及發(fā)酵容器的差異所導(dǎo)致的[7]，白酒中長鏈FFAs的產(chǎn)生，主要來源于微生物對(duì)原料的代謝，而微生物主要集中在窖泥中。濃香型白酒的發(fā)酵容器為泥窖，酒醅與窖泥接觸面積較大，因此濃香型白酒中微生物代謝產(chǎn)生的長鏈FFAs含量最高；芝麻香型白酒窖池為泥底磚窖，二者工藝具有相似之處，因此，芝麻香型白酒與濃香型白酒中長鏈FFAs具有共性，但芝麻香型長鏈FFAs整體含量低于濃香型白酒。鳳香型白酒采用新泥窖池發(fā)酵，雖然也是泥窖，但是其需要每年去掉窖池內(nèi)壁和底部的老窖泥，由于新窖泥中微生物含量較少，因此，由發(fā)酵產(chǎn)生的長鏈FFAs較少。但是鳳香型白酒采用酒海貯存，酒海采用荊條編織而成，其內(nèi)壁糊以麻紙，并以豬血和石灰做粘合劑，然后用蛋清、蜂蠟、熱菜籽油按比例配制成涂料，涂擦晾干后作為鳳香型白酒的貯酒容器[25]，因此鳳香型白酒中的長鏈FFAs大多是在貯酒期間產(chǎn)生。醬香型白酒由于其工藝特殊，產(chǎn)地獨(dú)特，因此其長鏈FFAs的含量與其他香型相比具有差異性。

清香型白酒和米香型白酒中長鏈FFAs具有一定共性，清香型白酒發(fā)酵容器為地缸，米香型白酒發(fā)酵容器為醅缸，兩者均沒有窖泥，因此其二者中的長鏈FFAs含量最少。豉香型白酒雖采用酒甕發(fā)酵，也沒有窖泥，但其用肥肉陳釀，因此其長鏈FFAs含量也較高。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了一種利用SPE-GC-MS結(jié)合衍生化法測(cè)定白酒中長鏈FFAs的研究方法，并優(yōu)化了試驗(yàn)條件。該方法中BF3-甲醇法衍生脂肪酸具有一定專一性，固相萃取法能夠避免白酒中脂肪酸乙酯水解，且該方法用時(shí)少、有毒試劑用量少，安全性高；CP-WAX色譜柱具有分離效率高的優(yōu)點(diǎn)。在該分析條件下建立定量校正曲線：6種長鏈FFAs在線性范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)R2均＞0.993，方法檢出限為0.002～0.009 mg/L，方法的精密度為3.9%～9.3%，平均加標(biāo)回收率為92%～112%。該方法準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)結(jié)果RSD良好，適合于白酒中月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸6種長鏈FFAs的定量檢測(cè)。

應(yīng)用該方法對(duì)不同香型白酒中的FFAs進(jìn)行定量分析，并通過熱圖的形式對(duì)7種不同香型白酒進(jìn)行差異性與共性分析，結(jié)果表明白酒中長鏈FFAs的含量與白酒發(fā)酵容器及發(fā)酵工藝息息相關(guān)，含量最高的為濃香型白酒，其次為豉香型白酒，再次為芝麻香型白酒，鳳香型白酒，最少的為清香型白酒和米香型白酒。上述結(jié)論可為白酒中長鏈FFAs的研究提供一定的數(shù)據(jù)支持。