傳統(tǒng)茯苓酒對(duì)脾陽(yáng)虛模型大鼠的影響

王曉晴，康懷興，秦?zé)ㄔ?，趙祥君，溫 柔，孫允紅，趙方舒，侯 林*

（1.山東中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355；2.山東中醫(yī)藥大學(xué) 青島中醫(yī)藥科學(xué)院，山東 青島 266000）

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，脾是包含消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)在內(nèi)的多器官集合，而非西醫(yī)解剖學(xué)中所講的脾臟[1]。脾陽(yáng)虛多為飲食不節(jié)、情志失調(diào)、勞倦過(guò)度等因素導(dǎo)致的脾陽(yáng)虛衰，使脾失去溫運(yùn)，寒邪凝聚于內(nèi)所表現(xiàn)出大便糖泄、畏寒肢冷、食欲不振等虛弱證候[2]。脾陽(yáng)虛證形成過(guò)程緩慢，治療恢復(fù)也難以一蹴而就，因此選擇一種安全有效的藥物及劑型尤為重要。酒與醫(yī)素有不解之緣，繁體“醫(yī)”字從“酉”，酉者酒也。中藥酒劑，也稱(chēng)藥酒，是中藥的傳統(tǒng)劑型，使用歷史悠久?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》有“湯液醪醴論篇”，專(zhuān)門(mén)討論用藥之道，“醪醴”即為藥酒[3]。藥酒種類(lèi)繁多，《本草綱目》按功效將藥酒分為三類(lèi)，分別為補(bǔ)益藥酒、驅(qū)邪藥酒和預(yù)防藥酒。其中，補(bǔ)益類(lèi)藥酒具有營(yíng)養(yǎng)保健的功能，可長(zhǎng)期食用，其在治療脾陽(yáng)虛等慢性病方面具有優(yōu)勢(shì)[4]。

茯苓為多孔菌科真菌茯苓（Poria cocos（Schw）Wolf）的干燥菌核，是我國(guó)藥食同源的傳統(tǒng)中藥材，享有“十方九茯苓”和“藥膳白銀”的美譽(yù)，其味甘、淡，性平，具有利水滲濕、健脾、寧心的功效[5]。研究表明，茯苓總?cè)?、茯苓多糖等茯苓中的不同部位均有較好的健脾作用[6]。羅心遙[7]研究發(fā)現(xiàn)，茯苓水提液可以通過(guò)上調(diào)脾虛大鼠血清中的總蛋白（total protein，TP）、胃動(dòng)素（motilin，MTL）、胃泌素（gastrin，GAS）水平，下調(diào)血管活性腸肽（vasoactive intestinal peptide，VIP）、胃組織5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）水平，保護(hù)脾虛造成的大鼠胃腸損傷。張丹丹等[8]通過(guò)代謝組學(xué)與腸道菌群相結(jié)合的技術(shù)探討茯苓水提液的健脾機(jī)制，結(jié)果表明，其可能與茯苓水提液能夠調(diào)節(jié)脾虛大鼠的腸道菌群，調(diào)控精氨酸（arginine，Arg）-脯氨酸（proline，Pro）代謝、煙酸（nicotinic acid，NA）-煙酰胺（nicotinamide，NIC）代謝通路有關(guān)。黃酒味苦、甘、辛，具有補(bǔ)益、除濕等功效，能夠作為藥引用于寒濕攻脾所至胃腸不適的治療[9]。茯苓入酒的歷史悠久，《太平圣惠方》、《飲膳正要》、《本草綱目》等醫(yī)學(xué)典籍中均有茯苓酒的記載。進(jìn)入現(xiàn)代，茯苓酒也是茯苓產(chǎn)品研發(fā)的熱點(diǎn)，多種茯苓酒類(lèi)產(chǎn)品不斷涌出，如薏米茯苓酒[10]、茯苓糯米酒[11]、茯苓菌絲發(fā)酵酒[12]等，然而目前研究集中于發(fā)酵工藝的優(yōu)化和功能性成分的測(cè)定，尚缺少茯苓酒藥效作用的研究報(bào)道。

本研究將無(wú)特定病原體動(dòng)物（specificpathogenfree，SPF）級(jí)SD大鼠分為對(duì)照組和模型組，采用飲食不節(jié)、疲倦過(guò)度、苦寒瀉下三因素建立大鼠脾陽(yáng)虛模型，將造模成功的大鼠分為模型組、茯苓浸漬酒組及傳統(tǒng)茯苓酒低、中、高劑量組，比較大鼠體質(zhì)量、肛溫，并進(jìn)行一般行為學(xué)觀(guān)察，考察血清中D-木糖、胃泌素（GAS）含量、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）、干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）水平及脾臟病理變化。探討傳統(tǒng)茯苓酒對(duì)脾陽(yáng)虛大鼠的健脾作用，旨在豐富保健藥酒種類(lèi)，提高茯苓附加值，開(kāi)發(fā)健脾和胃產(chǎn)品，為藥食同源中藥茯苓的開(kāi)發(fā)和利用拓寬思路。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料

黍米：十月稻田農(nóng)業(yè)科技有限公司；茯苓：青島天成中藥飲片有限公司；黃酒酵母：安琪酵母股份有限公司；大黃：青島天成中藥飲片有限公司；42%vol蒸餾白酒：北京紅星股份有限公司。

8周齡無(wú)特定病原體（specific pathogen free，SPF）級(jí)SD雄性大鼠50只，體質(zhì)量180～220 g，由濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（魯）20190003；由山東中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心常規(guī)飼養(yǎng)，許可證：SYAK（魯）20170022，飼養(yǎng)條件為溫度20～26 ℃，濕度40%～70%，晝夜交替。

1.1.2 試劑

水合氯醛：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；D-木糖試劑盒：南京建成生物工程研究所；大鼠胃泌素（GAS）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒：江蘇晶美生物科技有限公司；大鼠白介素-6（IL-6）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、干擾素-γ（INF-γ）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）試劑盒：上海酶聯(lián)生物科技有限公司；堿性磷酸酶（ALP）檢測(cè)試劑盒、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）檢測(cè)試劑盒：山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司；多聚甲醛固定液：武漢塞維爾生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Specctra Max M5酶標(biāo)儀：美國(guó)Molecular Devices公司；YP6001N電子天平：上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；DW-86L626醫(yī)用低溫保存箱：青島海爾生物醫(yī)療股份有限公司；BK-280全自動(dòng)生化分析儀：山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司；CR21N高速冷凍離心機(jī)：德國(guó)Eppendorf公司；FT3400動(dòng)物體溫計(jì)：南京卡爾文生物科技有限公司；DK-S16電熱恒溫水浴鍋：中儀國(guó)科（北京）科技有限公司；UV-2700紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)：日本島津?qū)嶒?yàn)器材有限公司；PANNORAMIC DESK全景切片掃描儀：匈牙利3DHISTECH公司。

1.3 方法

1.3.1 傳統(tǒng)茯苓酒的加工工藝流程及操作要點(diǎn)[13]

操作要點(diǎn)：

原料的篩選：篩選出顆粒飽滿(mǎn)、大小均勻、顏色鮮黃的黍米和經(jīng)專(zhuān)業(yè)人員鑒定為正品的茯苓藥材。

原料的預(yù)處理：用中藥材粉碎機(jī)將茯苓粉碎為粗粉（全部通過(guò)24目篩，混有通過(guò)65目篩的粉末不超過(guò)40%），獲得茯苓粗粉，待用。黍米經(jīng)清洗后，于室溫條件下浸泡24 h。浸漬完畢的黍米緩慢加入100 ℃熱水燙至60 ℃，此時(shí)攪拌1次，10 min后再攪拌1次，放置攤晾，待溫度降至40 ℃后加清水至浸沒(méi)黍米，繼續(xù)浸漬24 h。

煮糜：鍋中加入原料2倍質(zhì)量的清水，加熱煮沸，將經(jīng)過(guò)預(yù)處理的1 000 g黍米與150 g茯苓粗粉于鍋中加熱煮糜，先武火加熱約10 min至鍋內(nèi)黍米吸水變粘，后改為文火加熱約1 h至黍米中的淀粉徹底糊化、產(chǎn)生獨(dú)特的焦香味[14]。

糖化：煮糜完畢后，攤晾至60 ℃，加入原料質(zhì)量8%的麥曲，繼續(xù)于60 ℃糖化40 min。

發(fā)酵：糖化完畢后，糖化液冷水浴降溫至28 ℃，加入原料質(zhì)量0.2%的活化酵母（黃酒酵母加入至10倍質(zhì)量的2%葡萄糖溶液中，于35 ℃保持30 min活化），攪拌均勻后裝壇發(fā)酵7 d。

離心、過(guò)濾：發(fā)酵完成的醪液4 000 r/min離心20 min，取上清液過(guò)濾，得濾液。

殺菌：殺菌又稱(chēng)煎酒，是制備傳統(tǒng)茯苓酒的最后一道工序，將濾液于80 ℃中滅菌30 min，即得到傳統(tǒng)茯苓酒成品。

1.3.2 茯苓浸漬酒的制備

按傳統(tǒng)茯苓酒成品酒中茯苓占比（茯苓和黍米的比例為1.5∶10），將150 g茯苓粗粉于1 000 mL 42%vol蒸餾白酒中浸漬7 d得茯苓浸漬酒。

1.3.3 大黃水煎液的制備

稱(chēng)取適量大黃飲片于圓底燒瓶中，加8倍質(zhì)量水浸泡30 min，100 ℃加熱煮沸30 min，紗布過(guò)濾，藥液另器保存，藥渣繼續(xù)加4倍質(zhì)量水煎煮20 min，紗布過(guò)濾，合并兩次大黃煎煮液，加熱濃縮至其質(zhì)量濃度為1 g/mL。

1.3.4 分組、造模及給藥

分組、造模：50只適應(yīng)性飼養(yǎng)1周的雄性SD大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為2組，對(duì)照組6只，剩余44只為脾陽(yáng)虛造模組。采用飲食不節(jié)、苦寒瀉下、疲倦過(guò)度三因素相結(jié)合的方法建立大鼠脾陽(yáng)虛模型[15-16]。造模過(guò)程中，大鼠單日禁食，雙日給糧，自由飲水。同時(shí)造模大鼠每日上午按10 mL/kg灌胃大黃水煎液，下午置于（55×40×33）cm3的塑料箱中負(fù)重游泳至力竭（即大鼠四肢明顯失調(diào)，鼻尖沒(méi)入水下5 s，連續(xù)3次），每日造模持續(xù)15 d。造模完成后，將脾陽(yáng)虛模型復(fù)制成功的大鼠根據(jù)體質(zhì)量分為5組：模型組、茯苓浸漬酒組、傳統(tǒng)茯苓酒低、中、高劑量組。

給藥：根據(jù)2022版《中國(guó)居民膳食指南》中建議的成年人每日酒精攝入量不應(yīng)超過(guò)15 g，成人以60 kg計(jì)，設(shè)定成人每日飲用傳統(tǒng)茯苓酒100 mL為宜[17]。動(dòng)物分組后，設(shè)傳統(tǒng)茯苓酒低、中、高劑量組分別為5 mL/kg體質(zhì)量、10 mL/kg體質(zhì)量和20 mL/kg體質(zhì)量（分別相當(dāng)于人體推薦攝入量的3倍、6倍、12倍），由于大鼠最大灌胃量不宜超過(guò)10 mL/kg體質(zhì)量，為達(dá)到最佳灌胃效果，將傳統(tǒng)茯苓酒經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮2.5倍后，再用酒基調(diào)制成原濃度（最終酒精度均為12%vol），即分別按濃縮后的2 mL/kg體質(zhì)量、4 mL/kg體質(zhì)量和8 mL/kg體質(zhì)量灌胃；茯苓浸漬酒組濃縮相同倍數(shù)后用酒基調(diào)制回原濃度（最終酒精度為42%vol），并按濃縮后的8 mL/kg體質(zhì)量灌胃；對(duì)照組與模型組均按8 mL/kg體質(zhì)量灌胃蒸餾水。給藥過(guò)程中除對(duì)照組外，其余大鼠上午繼續(xù)按10 mL/kg體質(zhì)量灌胃大黃水煎液，隔日1次，連續(xù)21 d，對(duì)照組給予等體積蒸餾水。

1.3.5 大鼠體質(zhì)量、肛溫及行為學(xué)觀(guān)察

觀(guān)察模型建立前后大鼠體質(zhì)量與肛溫變化，觀(guān)察大鼠的一般體征以及藥物干預(yù)過(guò)程中各組大鼠體質(zhì)量變化（每3 d記錄一次大鼠體質(zhì)量），觀(guān)察每只大鼠的精神狀態(tài)、運(yùn)動(dòng)狀況、毛發(fā)光澤、大便形狀等體征[18]。

1.3.6 樣品采集

給藥第21天后各組大鼠禁食不禁水12 h。次日早上稱(chēng)每組大鼠體質(zhì)量，并按10 mL/kg灌胃5%D-木糖溶液。灌胃1 h后，用水合氯醛麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，室溫靜置后，3 000 r/min、4 ℃離心15 min，分離血清存于-80 ℃冰箱備用。

1.3.7 血清中相關(guān)生化指標(biāo)測(cè)定

采用比色法，參照試劑盒說(shuō)明書(shū)上操作步驟測(cè)定大鼠血清中D-木糖水平。采用ELISA法，分別參照試劑盒說(shuō)明書(shū)上操作步驟測(cè)定大鼠血清中GAS、IFN-γ、IL6、MCP-1水平。采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)大鼠血清中ALP、ALT水平。

1.3.8 脾臟組織病理學(xué)觀(guān)察

取大鼠相同部位的脾臟組織于4%多聚甲醛中固定48 h，石蠟包埋，切片并進(jìn)行蘇木精-伊紅染色法（hematoxylineosin staining，HE）染色，觀(guān)察大鼠脾臟組織。

1.3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用Graphpad Prism 9.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05或P＜0.01有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，多組間比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠造模前后體質(zhì)量、肛溫及行為學(xué)考察

大鼠造模前后體質(zhì)量及肛溫檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，對(duì)照組大鼠的體質(zhì)量較造模前增加35.00%，造模組大鼠的體質(zhì)量較造模前下降26.21%，造模后兩組大鼠的體質(zhì)量差異具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)照組大鼠的肛溫造模前后變化不明顯，均穩(wěn)定在37.50 ℃左右，造模組大鼠的肛溫較造模前下降6.31%，造模后兩組大鼠的肛溫差異顯著（P＜0.05）。在行為學(xué)考察中，對(duì)照組大鼠反應(yīng)靈敏，毛發(fā)順滑，飲食正常，精神狀態(tài)良好，造模組大鼠出現(xiàn)雙眼無(wú)神，消瘦懶動(dòng)，毛發(fā)稀疏，弓背瞇眼，尾巴細(xì)瘦，大便溏泄等癥狀[19]。綜上，表明脾陽(yáng)虛大鼠模型建立成功。

表1 大鼠造模前后體質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果Table 1 Detection results of body mass of rats before and after modeling

2.2 給藥過(guò)程中各組大鼠體質(zhì)量變化

將造模完成的脾陽(yáng)虛大鼠按體質(zhì)量分組后進(jìn)行給藥，給藥過(guò)程中各組大鼠體質(zhì)量變化見(jiàn)圖1。

圖1 給藥過(guò)程中各組大鼠體質(zhì)量變化Fig.1 Changes of body mass of rats in each group during administration

由圖1可知，藥物干預(yù)后，各組大鼠精神狀態(tài)有所好轉(zhuǎn)，隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，各組大鼠毛發(fā)干枯、扎堆蜷縮、大便溏稀等癥狀減輕，靈敏度及活動(dòng)度趨向正常。給藥過(guò)程中，模型組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)較慢。與模型組相比，末次給藥時(shí)傳統(tǒng)茯苓酒中、高劑量組與茯苓浸漬酒組體質(zhì)量分別增長(zhǎng)8.56%、7.29%、10.16%。但茯苓浸漬酒組大鼠隨體質(zhì)量的增加，體態(tài)逐漸臃腫，以頸部和腹部最為明顯，且偶見(jiàn)后腿腫脹現(xiàn)象，猜測(cè)與長(zhǎng)期攝入大量酒精，致五臟陽(yáng)以竭，使蒸化陰液受阻，水邪充斥肌膚引發(fā)水腫有關(guān)[20]，而傳統(tǒng)茯苓酒組大鼠體型正常。

2.3 大鼠血清中D-木糖及GAS含量檢測(cè)結(jié)果

D-木糖經(jīng)口服進(jìn)入機(jī)體后，由小腸吸收入血，是反映腸道吸收能力的重要指標(biāo)。研究表明，多數(shù)脾虛證患者D-木糖吸收率明顯降低[21]。GAS是一種可以刺激胃酸及胃蛋白酶分泌的腸道激素，其分泌失調(diào)會(huì)引發(fā)胃腸道功能紊亂[22]，目前學(xué)術(shù)界對(duì)GAS含量與脾虛證的關(guān)系研究存在一定爭(zhēng)議，有學(xué)者認(rèn)為，脾虛證大鼠血清GAS水平有所降低[23]；亦有學(xué)者認(rèn)為慢性胃炎屬脾陽(yáng)虛證會(huì)造成GAS分泌增多[24]。大鼠血清中D-木糖及GAS含量的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 大鼠消化吸收功能指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果Table 2 Detection results of digestion and absorption function indexes of rats

由表2可知，大鼠口服D-木糖溶液1 h后，與對(duì)照組相比，模型組大鼠血清D-木糖含量極顯著降低（P＜0.01），血清GAS含量極顯著升高（P＜0.01），表明模型組大鼠胃腸消化功能受損。與模型組相比，傳統(tǒng)茯苓酒中、高劑量組血清D-木糖含量分別極顯著升高19.47%、28.32%（P＜0.01）。傳統(tǒng)茯苓酒低、中劑量組血清GAS含量分別顯著降低7.28%（P＜0.05）、極顯著降低9.54%（P＜0.01）。表明飲用不同劑量的傳統(tǒng)茯苓酒能夠不同程度改善脾陽(yáng)虛導(dǎo)致的胃腸功能紊亂，提高機(jī)體消化吸收能力。

2.4 大鼠血清中IL-6、MCP-1、IFN-γ含量檢測(cè)結(jié)果

脾臟是人體最大的免疫器官，脾陽(yáng)虛會(huì)造成機(jī)體免疫功能紊亂。IL-6是由Th2分泌的一種多功能細(xì)胞因子，具有免疫監(jiān)視的功能，當(dāng)疾病發(fā)生時(shí)其能活化漿細(xì)胞，引發(fā)炎癥反應(yīng)[25]。IFN-γ為T(mén)h1細(xì)胞分泌的一種特征性細(xì)胞因子，用于介導(dǎo)細(xì)胞免疫[26]。MCP-1是趨化性細(xì)胞因子亞家族成員之一，Th1/Th2失衡會(huì)引起的MCP-1表達(dá)異常[27]。大鼠血清中IL-6、MCP-1、IFN-γ含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 大鼠血清中IL-6、MCP-1及IFN-γ含量檢測(cè)結(jié)果Table 3 Detection results of IL-6、MCP-1, and IFN-γ contents in serum of rats

由表3可知，與對(duì)照組相比，模型組大鼠血清IL-6、MCP-1含量分別極顯著（P＜0.01）、顯著升高（P＜0.05）、IFN-γ含量極顯著降低（P＜0.01），表明模型組大鼠免疫功能失調(diào)。與模型組相比，傳統(tǒng)茯苓酒中劑量組大鼠血清IL-6含量極顯著降低12.57%（P＜0.01），茯苓浸漬酒組與傳統(tǒng)茯苓酒中劑量組MCP-1含量分別顯著降低12.06%（P＜0.05）、極顯著降低15.38%（P＜0.01），傳統(tǒng)茯苓酒中、高劑量組IFN-γ含量分別極顯著升高10.14%（P＜0.01）、顯著升高9.16%（P＜0.05）。與茯苓浸漬酒組相比，傳統(tǒng)茯苓酒組大鼠血清中IL-6及MCP-1含量差異不顯著，傳統(tǒng)茯苓酒中、高劑量組大鼠血清中IFN-γ含量分別極顯著增加10.64%（P＜0.01）、顯著增加9.66%（P＜0.05），可見(jiàn)茯苓浸漬酒雖能在一定程度上緩解脾陽(yáng)虛造成的免疫紊亂，但療效不及傳統(tǒng)茯苓酒。綜合來(lái)看，中劑量傳統(tǒng)茯苓酒對(duì)維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定有保護(hù)作用。

2.5 大鼠血清中ALP、ALT含量檢測(cè)結(jié)果

國(guó)家藥典規(guī)定國(guó)藥準(zhǔn)字藥酒為蒸餾酒提取制成的澄清液體制劑[28]，但高度蒸餾酒導(dǎo)致的安全性問(wèn)題卻嚴(yán)重制約著其在臨床的應(yīng)用。過(guò)量飲酒后，酒精及其中間代謝物進(jìn)入機(jī)體，80%～90%在肝內(nèi)代謝，會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化，改變細(xì)胞膜的通透性，影響肝臟微循環(huán)，造成肝細(xì)胞的變性壞死[29]，因此檢測(cè)藥酒是否會(huì)導(dǎo)致肝臟毒性也是評(píng)價(jià)其臨床安全的重要指標(biāo)。大鼠血清中ALP、ALT含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 大鼠血清中堿性磷酸酶（ALP）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）含量檢測(cè)結(jié)果Table 4 Detection results of alkaline phosphatase (ALP) and alanine aminotransferase (ALT) contents in serum of rats

血清ALP、ALT異常表達(dá)是肝臟損傷的早期標(biāo)志[30]。由表4可知，與對(duì)照組相比，模型組大鼠血清ALP、ALT水平有所升高，雖然不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但也從側(cè)面證明了“內(nèi)傷脾胃，百病由生”的觀(guān)點(diǎn)；茯苓浸漬酒組大鼠血清ALP、ALT水平分別極顯著增加34.33%、51.28%（P＜0.01），表明由高度蒸餾酒制得的茯苓浸漬酒有明顯的肝臟毒性。與茯苓浸漬酒組相比，傳統(tǒng)茯苓酒低、中劑量組大鼠血清ALP含量分別極顯著降低18.25%、25.48%（P＜0.01），傳統(tǒng)茯苓酒中劑量組血清ALT含量顯著降低32.51%（P＜0.05），說(shuō)明傳統(tǒng)茯苓酒對(duì)肝臟損傷較小。已有研究表明，茯苓多糖具有較好的保肝作用，能夠抑制細(xì)胞色素P450 2E1（cytochrome P450 2E1，CYP2E1）/活性氧（reactive oxygen species，ROS）/絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPKs）信號(hào)通路誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡和Toll樣受體4（tolllike receptor 4，TLR4）/核轉(zhuǎn)錄因子κB（nuclear factors-κB，NF-κB）信號(hào)通路誘導(dǎo)的肝臟炎癥，顯著改善酒精性肝損傷[31]。因此，猜測(cè)傳統(tǒng)茯苓酒較低的肝臟毒性，除了其為低醇制劑這個(gè)因素外，可能也與茯苓多糖的保肝作用有關(guān)。

2.6 大鼠脾臟組織病理學(xué)觀(guān)察

大鼠的脾臟組織病理學(xué)觀(guān)察結(jié)果見(jiàn)圖2。由圖2可知，對(duì)照組大鼠脾臟切片白髓結(jié)構(gòu)清晰，數(shù)量豐富，紅髓與白髓分界清楚。與對(duì)照組相比，模型組大鼠脾臟組織可見(jiàn)大量的白髓萎縮，體積減小，白髓內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，排列疏松，紅髓與白髓分界模糊。茯苓浸漬酒組大鼠脾臟組織白髓結(jié)構(gòu)清晰，淋巴細(xì)胞排列趨于緊密，但生發(fā)中心數(shù)目少于傳統(tǒng)茯苓酒組。傳統(tǒng)茯苓酒低劑量組大鼠脾臟組織白髓結(jié)構(gòu)趨向清晰，淋巴細(xì)胞數(shù)量有所增加，但紅髓和白髓界限較模糊。傳統(tǒng)茯苓酒中、高劑量組大鼠脾臟組織中紅髓和白髓界限更明確，淋巴細(xì)胞增多且排列緊密有序，接近于對(duì)照組。說(shuō)明傳統(tǒng)茯苓酒能夠顯著提升脾陽(yáng)虛大鼠的脾臟恢復(fù)能力。

圖2 大鼠脾臟組織病理學(xué)觀(guān)察結(jié)果（×200）Fig.2 Histopathological observation results of spleen in rats（×200）

3 結(jié)論

本研究表明，傳統(tǒng)茯苓酒中劑量能夠促進(jìn)脾陽(yáng)虛大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)，改善脾臟病變程度，極顯著升高脾陽(yáng)虛大鼠血清D-木糖含量（P＜0.01）和血清IFN-γ含量（P＜0.01），極顯著降低大鼠血清GAS、IL-6和MCP-1含量（P＜0.01）。與茯苓浸漬酒組相比，傳統(tǒng)茯苓酒中劑量組大鼠血清中ALP和ALT含量分別極顯著降低25.48%（P＜0.01）、顯著降低32.51%（P＜0.05），說(shuō)明適量的傳統(tǒng)茯苓酒飲用安全，能改善脾陽(yáng)虛造成的胃腸道紊亂，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫。