廈門地區(qū)3～17歲兒童及青少年醛固酮、腎素活性化學(xué)發(fā)光法參考區(qū)間的建立*

肖秀香,林淑雯,詹偉武,徐錦,林建成(.廈門市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科,福建廈門36006;.復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心,上海00)

高血壓是導(dǎo)致全球死亡和致殘的主要危險(xiǎn)因素,2010年全國學(xué)生體質(zhì)調(diào)研報(bào)告[1]顯示我國中小學(xué)生高血壓患病率為14.5%,且在兒童、青少年以繼發(fā)性高血壓為主[2]。原發(fā)性醛固酮增多癥(primary hyperaldosteronism,PA)是繼發(fā)性高血壓最常見的類型,以高血壓、醛固酮(aldehyde ketones,ALD)增多、腎素(renin activity,PRA)抑制為主要特征,因此血漿ALD、PRA是診斷和鑒別兒童、青少年高血壓是遺傳性還是繼發(fā)性的重要指標(biāo)。1981年Hiramatsu等[3]首次采用ALD和PRA比值(aldosterone renin activity ratio,ARR)作為PA指標(biāo)篩查高血壓患者人群后,Mulatero等[4]利用ARR對(duì)正常血鉀水平的高血壓人群篩查,證實(shí)了ARR提高PA檢出率,中華醫(yī)學(xué)會(huì)內(nèi)分泌學(xué)分會(huì)制定PA診斷治療的專家共識(shí)(2020版)也推薦ARR作為PA的首選篩查指標(biāo)[5]。

目前,血漿ALD、PRA的參考區(qū)間基本來自行業(yè)指南或試劑說明書。本研究按照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)及國際臨床化學(xué)和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)(International Federation of Clinicial Chemistry and Laboratory Medicine,IFCC)聯(lián)合發(fā)布的C28-A3文件標(biāo)準(zhǔn),通過收集廈門地區(qū)健康兒童及青少年人群樣本,初步建立化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)廈門地區(qū)3～17歲健康兒童及青少年血漿ALD、PRA及ARR的參考區(qū)間。

1 材料與方法

1.1研究對(duì)象 選取2019年1月至2022年1月廈門市兒童醫(yī)院兒童保健中心體檢表觀健康3～17歲兒童及青少年人群。身高、體重、腰圍、臀圍、血壓測(cè)量均由專人進(jìn)行,高血壓判斷標(biāo)準(zhǔn)按照2018年中國3～17歲兒童和青少年高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。共納入滿足上述條件的915例健康志愿者,分3組:3～7歲:男152例、女142例;8～12歲:男139例、女158例;13～17歲:男184例、女140例。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)有以下疾病者:高血壓、冠心病、心肌炎、心力衰竭、腫瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌代謝性疾病、自身免疫病;肝功能(丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、總蛋白、清蛋白、總膽紅素、直接膽紅素)、腎功能(肌酐、尿素、尿酸)、血脂(總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇)、電解質(zhì)(鉀、鈉、氯、鈣)及C反應(yīng)蛋白異常人群;(2)身體發(fā)育異常者;(3)30 d內(nèi)使用過可能引起血壓波動(dòng)的藥物如止痛藥、中藥、生長激素、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、血管緊張素受體拮抗劑、鈣離子拮抗劑、促紅細(xì)胞生成素、類固醇激素等;(4)近一個(gè)月作息欠規(guī)則的個(gè)體以及近一周作息明顯紊亂的個(gè)體;(5)2周內(nèi)發(fā)熱、感冒或用抗生素者;(6)男性:收縮壓<100+2×年齡(歲)且舒張壓<65+年齡(歲),女性:收縮壓<100+1.5×年齡(歲)且舒張壓<65+年齡(歲)[7];(7)BMI≥25 kg/m2或≤18.5 kg/m2;BMI=體重(kg)/身高(m)的平方[8]。本研究經(jīng)廈門市兒童醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批準(zhǔn)文號(hào):廈兒科倫審[2021]36號(hào)),由接診醫(yī)生當(dāng)面告知兒童家長本研究的相關(guān)情況并簽署知情同意書。

1.2儀器與試劑 日立7600-010全自動(dòng)生化分析儀)(日本日立公司)及肝功能、電解質(zhì)、血糖試劑(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社),腎功能、血脂試劑(瑞正善達(dá)科技公司);Autolumo A2000plus分析儀及配套ALD試劑(鄭州安圖公司),PETECK96-I化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套PRA試劑(博奧賽斯公司)。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集與處理 研究對(duì)象或其家屬填寫的問卷調(diào)查表核對(duì)無誤后,采集研究對(duì)象清晨空腹立位肘靜脈血,采血及量血壓前避免情緒緊張或激動(dòng),血液標(biāo)本采集后充分混勻,室溫靜置10～15 min,20 ℃以下離心10 min(離心力1 000×g),離心后肉眼觀察有溶血、脂血或黃疸為不合格標(biāo)本,分離血漿于-80 ℃保存,避免反復(fù)凍融[9]。

1.3.2指標(biāo)檢測(cè) 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作,在質(zhì)控在控情況下檢測(cè)樣本。儀器每年進(jìn)行一次校準(zhǔn),同時(shí)試劑更換批號(hào)或儀器校準(zhǔn)后進(jìn)行留樣復(fù)查及質(zhì)控品檢測(cè)。ARR用計(jì)算法。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 26. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。按照CLSI C28-A3文件,將各項(xiàng)目數(shù)據(jù)先按性別,再按年齡從小到大排列后,將數(shù)據(jù)與相鄰值的差值(D)和數(shù)據(jù)全距(R)相除,若D/R≥1/3則判定為離群值,予以剔除處理。采用K-S檢驗(yàn)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),判斷數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布,數(shù)據(jù)采用M(P25,P75)表示。數(shù)據(jù)經(jīng)過轉(zhuǎn)換后,組間比較采用單因素方差分析,若方差齊,采用Bonferroni法:若方差不齊,采用Dunette-t法,以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用百分位數(shù)法確定P2.5～P97.5作為參考區(qū)間。

2 結(jié)果

2.1不同性別組之間ALD、PRA檢測(cè)結(jié)果比較 見表1。不同性別組ALD水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),女性組整體高于男性組,PRA差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),ARR水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),女性組略高于男性組。

表1 不同性別組之間ALD、PRA水平比較[M(P25,P75)]

2.2不同性別不同年齡段之間ALD、PRA檢測(cè)結(jié)果比較 見表2。男性組中,8～12歲和13～17歲組ALD差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),各年齡組PRA、ARR差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。女性組中,3～7歲和8～12歲、13～17歲組ALD差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),8～12歲組和13～17歲組ALD差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),各年齡組間PRA、ARR差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 不同性別兒童中不同年齡段之間ALD、PRA水平的比較[M(P25,P75)]

表1數(shù)據(jù)顯示PRA男性和女性整體無顯著差異,但整體年齡段是否有差異還需要驗(yàn)證,故再分析整體分年齡段的PRA數(shù)據(jù)見表3。3～7歲組和8～12歲組差異不顯著(P>0.05),8～12歲組和13～17歲組差異不顯著(P>0.05),但3～7歲組和8～12歲組有顯著差異(P<0.05)。

表3 不同年齡段之間PRA水平的比較[M(P25,P75)]

2.3ALD、PRA、ARR項(xiàng)目的參考區(qū)間 綜合上述數(shù)據(jù)分析,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義組別匯總統(tǒng)計(jì),男性組3～7歲和8～12歲ALD差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,女性組8～12歲和13～17歲ALD差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;PRA項(xiàng)目男性和女性整體差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,不同年齡段中,相鄰年齡段差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但低齡組(3～7歲)和高齡組(13～17歲)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,故PRA區(qū)分年齡段進(jìn)行參考區(qū)間統(tǒng)計(jì)。ARR男性組和女性組中,不同年齡段差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,故ARR參考區(qū)間只區(qū)分男性組和女性組。采用百分位數(shù)法確定P2.5和P97.5得到3～17歲兒童和青少年血清ALD、PRA、ARR化學(xué)發(fā)光法的參考區(qū)間,見表4。

表4 3～17歲兒童及青少年血清ALD、PRA、ARR化學(xué)發(fā)光法的參考區(qū)間

3 討論

腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RASS)是人體內(nèi)分布最廣泛的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)系統(tǒng),RASS與繼發(fā)性高血壓疾病密切相關(guān)[10]。成人原發(fā)性高血壓多起源于青少年時(shí)期,血壓處于高百分位值的兒童易發(fā)展為成人高血壓,是兒童高血壓發(fā)展的“軌跡現(xiàn)象”[6,11]。與原發(fā)性高血壓相比,原發(fā)性醛固酮增多癥(PA)患者心臟、腎臟和腦等高血壓靶器官損害更為嚴(yán)重[12],損害靶器官及死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯高于原發(fā)性高血壓[13-14]。因此早期診斷及時(shí)治療PA具有重要意義。

目前各臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)ALD、PRA有多種不同方法,主要包括免疫分析法(RIA)、化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)、高效液相色譜法(HPLC)和質(zhì)譜分析法(LC-MS/MS)[15]。其中,RIA法難于自動(dòng)化、影響因素多、對(duì)環(huán)境有污染,HPLC法檢測(cè)費(fèi)時(shí)、工作量大,該兩種方法很少在臨床應(yīng)用。LC-MS/MS法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、測(cè)量范圍寬等優(yōu)勢(shì),是檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)[16],但該法需要用到的儀器價(jià)格昂貴,也很難在實(shí)驗(yàn)室普遍應(yīng)用。CLIA法目前在各實(shí)驗(yàn)室已普及使用,以其靈敏度高、重復(fù)性好及自動(dòng)化、快速等優(yōu)點(diǎn)已被指南推薦運(yùn)用[17]。

由于不同檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果之間存在差異,仍需要系統(tǒng)研究并建立滿足ISO15189性能要求的測(cè)量方法[15]。Yin等[18]采用Autolumo A2000plus與LC-MS/MS檢測(cè)ALD斯皮爾曼相關(guān)系數(shù)(spearman′s coefficient)為0.934,證實(shí)了兩種平臺(tái)檢測(cè)方法相關(guān)性良好。楊超一等[19]建立CLIA法檢測(cè)AngⅠ并計(jì)算腎素活性,經(jīng)方法學(xué)評(píng)價(jià)符合免疫分析的基本要求。賴鳳華等[20]采用CLIA與RIA兩種方法檢測(cè)ALD、PRA,具有良好相關(guān)性。杜超等[21]報(bào)道,4種品牌CLIA法檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)果一致性亟待提高,各實(shí)驗(yàn)室建立一個(gè)合理的參考區(qū)間十分必要。本實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格依據(jù)ISO15189性能要求進(jìn)行了驗(yàn)證,對(duì)使用試劑盒的精密度、正確度、線性范圍進(jìn)行評(píng)價(jià),均符合國家衛(wèi)健委臨床檢驗(yàn)中心NCCL-C-39-2021醛固酮和腎素計(jì)劃能力驗(yàn)證報(bào)告(2021)評(píng)價(jià)指標(biāo)要求。本研究建立3～17歲兒童及青少年人群外周血ALD、PRA、ARR參考區(qū)間,主要供本院及其他相同檢測(cè)系統(tǒng)使用,以幫助臨床對(duì)PA篩查的判定,但不同實(shí)驗(yàn)室采用相同的檢測(cè)系統(tǒng)使用該參考區(qū)間前需要進(jìn)行驗(yàn)證。