補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠胃腸功能及腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響

王欣，史磊磊，張雨涵，李溪，張雪航，曾憲軍，劉繼平*

1.陜西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712046

2.西安天一秦昆制藥有限責(zé)任公司，陜西 西安 710077

小兒厭食癥是常見(jiàn)的脾胃系統(tǒng)疾病，其主要癥狀為長(zhǎng)時(shí)間食欲不振，甚至厭惡進(jìn)食，多發(fā)于1～6歲兒童，發(fā)病率為12%～34%，并有逐年增長(zhǎng)的趨勢(shì)[1]。長(zhǎng)期厭食會(huì)影響小兒生長(zhǎng)發(fā)育，導(dǎo)致貧血、營(yíng)養(yǎng)不良，并可造成機(jī)體免疫力下降，危害兒童身體健康[2]。小兒脾胃虛弱臟腑嬌嫩，若飲食不節(jié)，或喂養(yǎng)無(wú)度，極易引發(fā)厭食癥，其根本病位在于脾胃，脾胃不和為基本病機(jī)。小兒厭食癥證型多樣，包括脾失健運(yùn)、脾胃氣虛、肝胃不和、胃陰不足、飲食積滯、脾胃濕熱、脾胃虛寒、及脾虛蟲(chóng)積等[3]。《證治匯補(bǔ)·卷二》載：“不能食有虛有實(shí)，實(shí)則心下痞滿，惡心口苦，宜消導(dǎo)；虛則倦怠，面色萎黃，必心下軟和，實(shí)則飲食積滯中焦，壅遏脾胃運(yùn)化，虛則脾胃虛損，運(yùn)化無(wú)力”，因此基于“補(bǔ)”“通”兩法論治，可暢通中焦氣機(jī)，促進(jìn)氣血運(yùn)行和生化和順并補(bǔ)益脾胃之虛損，恢復(fù)其正常的生理功能，化生精氣、濡養(yǎng)五臟。

補(bǔ)脾消積口服液由水紅花子、山楂、雞內(nèi)金等9 味中藥組成，為淡紅色至黃棕色液體，具有健脾燥濕、益氣消積的功效，用于小兒積滯、厭食，疳癥等屬脾虛夾有食積者。本品臨床療效確切，但缺乏實(shí)驗(yàn)研究數(shù)據(jù)支撐，作用機(jī)制不明晰。因此本實(shí)驗(yàn)采用冰水及豬油灌胃聯(lián)合飲食失節(jié)方法制備脾虛食積小鼠模型，給予補(bǔ)脾消積口服液進(jìn)行干預(yù)，探究補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積癥胃腸功能及腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響，為該藥的臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要材料與儀器

SPF 級(jí)昆明種小鼠，體質(zhì)量（20±2）g，購(gòu)自于成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)為SCXK（川）2020-030。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理實(shí)驗(yàn)室，室溫控制在（23±3）℃，飼養(yǎng)動(dòng)物期間給予正常飲水飲食。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（SUCMDL20220515001）。補(bǔ)脾消積口服液由西安天一秦昆制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，規(guī)格10 mL/支，產(chǎn)品批號(hào)220 422098；小兒健脾丸由北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠生產(chǎn)，規(guī)格3 g/丸，產(chǎn)品批號(hào)22010013?；钚蕴坑商旖蚴锌泼軞W化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)Q/12HB 5029-2015。小鼠胃泌素（GAS）、胃動(dòng)素（MTL）、血管活性腸肽（VIP）酶聯(lián)免疫法測(cè)定試劑盒購(gòu)自江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司。

BSA224S 型分析電子天平（北京賽多利）；UPHW-II-90T 型純水儀（成都超純科技）；1-15K 低溫高速離心機(jī)（美國(guó)Sigma）；Donatello 型脫水機(jī)（意大利Diapath）；JB-P5 型包埋機(jī)（武漢俊杰電子)；RM2016 型病理切片機(jī)、ICC50 W 型光學(xué)顯微鏡（德國(guó)徠卡儀器）；酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio Tek Instruments）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及造模 將50 只昆明小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d 后，按隨機(jī)數(shù)字表法分為5 組，分別為空白組、脾虛食積模型組、補(bǔ)脾消積口服液低劑量組（臨床等效劑量）和高劑量組（臨床2 倍劑量）、小兒健脾丸陽(yáng)性對(duì)照組，每組10 只。除空白組外，其余小鼠通過(guò)冰水及豬油ig 聯(lián)合飲食失節(jié)方法造成脾虛食積模型，第1 天小鼠自由進(jìn)食，以10 mL/kg ig 4 次冰水混合物，第2 天小鼠禁食不禁水，以10 mL/kg ig 4 次冰水混合物；第3 天小鼠以4 ℃ ig 冰氫氧化鈉0.3 mol/L，每只0.1 mL，并每日以10 mL/kg ig 豬油1 次[4-5]，每3 天為1 個(gè)周期。造模40 d后，根據(jù)臨床給藥劑量以人體質(zhì)量60 kg 換算補(bǔ)脾消積口服液小鼠等效劑量即低劑量為6 mL/kg，并據(jù)此設(shè)置臨床2 倍劑量組即高劑量為12 mL/kg，并根據(jù)陽(yáng)性藥臨床給藥劑量換算得出小兒健脾丸給藥劑量為2.7 g/kg，空白組和模型組每日ig 等體積生理鹽水1 次，連續(xù)給藥10 d。

1.2.2 各組小鼠腸推進(jìn)及胃排空測(cè)定 給予禁食不禁水24 h 的小鼠新鮮配制的5%炭末混懸液0.2 mL/10 g。20 min 后處死小鼠，取胃，濾紙拭干后稱全質(zhì)量，沿胃大彎剪開(kāi)胃體，預(yù)冷的生理鹽水洗去胃內(nèi)容物后擦干，稱凈質(zhì)量，計(jì)算胃內(nèi)殘留率。迅速取出小腸，剝離腸系膜后鋪平，測(cè)量小腸全長(zhǎng)與炭末混懸液從幽門括約肌推至小腸末端的距離，計(jì)算小腸推進(jìn)率。

胃內(nèi)殘留率=（胃全質(zhì)量－胃凈質(zhì)量）/灌服碳末混懸液質(zhì)量

小腸推進(jìn)率＝幽門至碳末混懸液前沿的距離/幽門至回盲部全長(zhǎng)

1.2.3 血清中胃泌素（GAS）、胃動(dòng)素（MTL）、血管活性腸肽（VIP）的檢測(cè) 末次給藥后，各組小鼠禁食不禁水24 h，眼球取血后于4 ℃離心機(jī)，3 000 r/min 離心15 min，取上層血清。采用酶聯(lián)免疫試劑盒，按照說(shuō)明書(shū)操作程序測(cè)定血清中胃腸激素水平。

1.2.4 胃腸組織形態(tài)的檢測(cè) 各組小鼠眼球取血后脫頸椎處死，取胃組織及距胃幽門1 cm 處的小腸1 cm，用生理鹽水沖洗胃腸組織表面后將其置入4%多聚甲醛固定液中固定。組織切片經(jīng)蘇木素-伊紅（HE）染色后，進(jìn)行顯微鏡觀察及圖像采集分析。

1.2.5 高通量測(cè)序技術(shù)測(cè)定腸道菌群結(jié)構(gòu) 末次ig 24 h 后，收集空白組、模型組、補(bǔ)脾消積口服液低劑量組及陽(yáng)性組小鼠盲腸內(nèi)容物，置于滅菌的EP 管中，-80 ℃凍存。采用SDS 方法對(duì)樣本的基因組DNA 進(jìn)行提取，之后利用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA 的純度和濃度，取適量的樣本DNA 于離心管中，使用無(wú)菌水稀釋樣本至1 ng/μL，以稀釋后的基因組DNA 為模板，根據(jù)16S V4 區(qū)引物（515F 和806R）進(jìn)行擴(kuò)增，使用帶Barcode 的特異引物，進(jìn)行PCR。PCR 產(chǎn)物使用2%濃度的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)；對(duì)檢測(cè)合格的PCR 產(chǎn)物進(jìn)行磁珠純化，采用酶標(biāo)定量，根據(jù)PCR 產(chǎn)物濃度進(jìn)行等量混樣，充分混勻后使用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR 產(chǎn)物，對(duì)目的條帶使用qiagen 公司提供的膠回收試劑盒回收產(chǎn)物，使用TruSeq?DNA PCR-Free Sample Preparation Kit 建庫(kù)試劑盒進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建，構(gòu)建好的文庫(kù)經(jīng)過(guò)Qubit 和Q-PCR 定量，文庫(kù)合格后，使用NovaSeq 6000進(jìn)行上機(jī)測(cè)序。采用Tukey和Kruskal-Wallis 秩和檢驗(yàn)，分析組間物種α 多樣性物種β 多樣性差異是否顯著。

α 多樣性可以反映物種的豐富度和均勻度，Simpson 指數(shù)表征群落內(nèi)物種分布的多樣性和均勻度，Simpson 指數(shù)越大物種均勻度越好；Shannon 指數(shù)為樣品中的分類總數(shù)及其占比，Shannon 指數(shù)越大，群落多樣性越高，物種分布越均勻；Chao1 為估計(jì)群落樣品中包含的物種總數(shù)，ACE 為估計(jì)群落中OTU 數(shù)目。β 多樣性分析是對(duì)不同樣本的微生物群落構(gòu)成進(jìn)行比較分析，基于weighted-unifrac算法得到各組小鼠UPGMA 聚類樹(shù)狀圖。NMDS 是基于Bray-Curtis 距離來(lái)進(jìn)行分析的非線性模型，根據(jù)樣本中包含的物種信息，以點(diǎn)的形式反映在二維平面上。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 26.0 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)結(jié)果以表示，方差齊使用ANOVA 分析，不齊使用非參數(shù)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠腸推進(jìn)及胃排空的影響

與空白組相比，模型組小腸推進(jìn)率顯著降低（P＜0.05），胃內(nèi)殘留率顯著升高（P＜0.05）；與模型組相比，補(bǔ)脾消積口服液低劑量組及小兒健脾丸組小腸推進(jìn)率顯著升高（P＜0.01），胃內(nèi)殘留率顯著降低（P＜0.05、0.01），補(bǔ)脾消積口服液高劑量組小腸推進(jìn)率升高，胃內(nèi)殘留率降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明補(bǔ)脾消積口服液可顯著增強(qiáng)脾虛食積小鼠胃腸蠕動(dòng)能力，見(jiàn)表1。

表1 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠腸推進(jìn)和胃內(nèi)殘留率的影響（,n=10）Table 1 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on intestine impelling and gastric residual rate in spleen deficient dyspepsia mice (,n=10)

表1 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠腸推進(jìn)和胃內(nèi)殘留率的影響（,n=10）Table 1 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on intestine impelling and gastric residual rate in spleen deficient dyspepsia mice (,n=10)

與空白組比較：△P＜0.05；與模型組比較：*P＜0.05 **P＜0.01△P <0.05 vs blank group;*P <0.05 **P <0.01 vs model group

2.2 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠胃腸組織病理學(xué)變化的影響

由圖1 可見(jiàn)空白組小鼠胃黏膜組織結(jié)構(gòu)清楚，上皮細(xì)胞完整，腺體排列整齊；模型組胃黏膜基本完整，腺體排列紊亂，部分上皮細(xì)胞脫落破壞，胃腺體少量表層壞死，胃黏膜輕微充血；補(bǔ)脾消積口服液低劑量組胃黏膜較完整，腺體排列整齊，胃黏膜未見(jiàn)充血現(xiàn)象；補(bǔ)脾消積口服液高劑量組胃黏膜基本完整，腺體排列較紊亂，部分上皮細(xì)胞脫落破壞；小兒健脾丸組胃黏膜組織結(jié)構(gòu)清楚，上皮細(xì)胞完整，腺體排列較整齊。

圖1 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠胃組織形態(tài)的影響（HE 染色，×100）Fig.1 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on the morphology of gastric tissue in spleen deficient dyspepsia mice (HE,×100)

由圖2 可見(jiàn)空白組腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，黏膜肌層下層細(xì)胞排列整齊、層次清晰，腸絨毛排列整齊規(guī)則；模型組黏膜肌層變薄，腸絨毛變短且不規(guī)則、萎縮、缺失、脫落較嚴(yán)重并排列紊亂，絨毛數(shù)量減少，間距增寬；補(bǔ)脾消積口服液低劑量組腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，層次清晰，黏膜較厚，腸絨毛排列整齊；補(bǔ)脾消積口服液高劑量組黏膜肌層變薄，腸絨毛變短并排列紊亂，絨毛數(shù)量減少；小兒健脾丸組腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，層次清晰，黏膜較厚，腸絨毛排列整齊。

圖2 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠腸組織形態(tài)的影響（HE 染色，×40）Fig.2 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on the morphology of intestinal tissue in spleen deficient dyspepsia mice(HE,×40)

2.3 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠血清中GAS、MTL、VIP 的影響

與空白組相比，模型組小鼠血清中GAS與MTL水平顯著降低（P＜0.05），VIP 水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，補(bǔ)脾消積口服液低劑量組及小兒健脾丸組小鼠血清中GAS 和MTL 水平顯著升高（P＜0.05、0.01），VIP 水平顯著降低（P＜0.05），補(bǔ)脾消積口服液高劑量組小鼠血清中GAS 與MTL水平升高，VIP 水平降低，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠胃腸激素的影響（,n=10）Table 2 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on gastrointestinal hormones in spleen deficient dyspepsia mice (,n=10)

表2 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠胃腸激素的影響（,n=10）Table 2 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on gastrointestinal hormones in spleen deficient dyspepsia mice (,n=10)

與空白組比較：△P＜0.05 △△P＜0.01；與模型組比較：*P＜0.05 **P＜0.01△P <0.05 △△P <0.01 vs blank group;*P <0.05 **P <0.01 vs model group

2.4 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠體內(nèi)腸道菌群的影響

2.4.1 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)小鼠腸道菌群測(cè)序質(zhì)量評(píng)估結(jié)果 由圖3A 可知，各組小鼠稀釋曲線逐漸趨于平坦，提示測(cè)序數(shù)據(jù)量漸進(jìn)合理。由圖3B 可知，各組小鼠在水平方向上曲線在橫軸上的跨度越大，豐富度越高。

圖3 各樣本稀釋曲線圖（A）和等級(jí)聚類曲線圖（B）Fig.3 Rarefaction curve (A) and rank abundance (B) of each sample

2.4.2 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)小鼠腸道菌群多樣性及豐度影響

（1）α 多樣性分析：與空白組相比，模型組Simpson 指數(shù)、Shannon 指數(shù)顯著降低（P＜0.05），ACE 指數(shù)與Chao1 指數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比，補(bǔ)脾消積口服液低劑量組與小兒健脾丸組Simpson 指數(shù)、Shannon 指數(shù)、ACE 指數(shù)和Chao1指數(shù)均升高（P＜0.05、0.01），說(shuō)明補(bǔ)脾消積口服液可以改善脾虛食積小鼠腸道菌群的豐度和多樣性，見(jiàn)表3。

表3 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠腸道菌群多樣性指數(shù)的影響（,n=4）Table 3 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on Intestinal microbial population diversity index in spleen deficient dyspepsia mice (,n=4)

表3 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)脾虛食積小鼠腸道菌群多樣性指數(shù)的影響（,n=4）Table 3 Effect of Bupi Xiaoji Oral Liquid on Intestinal microbial population diversity index in spleen deficient dyspepsia mice (,n=4)

與空白組比較：△P＜0.05；與模型組比較：*P＜0.05 **P＜0.01△P <0.05 vs blank group;*P <0.05 **P <0.01 vs model group

（2）β 多樣性分析：由圖4A 可知，模型組與補(bǔ)脾消積口服液低劑量組及小兒健脾丸組差異最大。由圖4B 可知，空白組、補(bǔ)脾消積口服液低劑量組與小兒健脾丸組大部分樣本點(diǎn)聚在一起，并與模型組區(qū)分開(kāi)來(lái)，說(shuō)明脾虛食積小鼠的腸道群落結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，經(jīng)補(bǔ)脾消積口服液治療后改善了腸道群落結(jié)構(gòu)。

圖4 各組小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的UPGMA 聚類樹(shù)狀圖（A）和NMDS 圖（B）Fig.4 UPGMA clustering tree (A) and NMDS (B) of intestinal microbes in mice from each group

2.4.3 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)小鼠腸道菌群門水平的影響 各組小鼠在厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidota）、變形桿菌門（Proteobacteria）為優(yōu)勢(shì)菌群，3 個(gè)門的總比例＞85%，各處理組菌群結(jié)構(gòu)相似，但菌群組成比例不同。與空白組相比，模型組小鼠腸道內(nèi)的有益菌擬桿菌門相對(duì)豐度下降，有害菌厚壁菌門相對(duì)豐度增加，但比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組相比，補(bǔ)脾消積口服液低劑量組及小兒健脾丸組擬桿菌門相對(duì)豐度有所增加，厚壁菌門相對(duì)豐度有下降趨勢(shì)（P＜0.05），提示補(bǔ)脾消積口服液可通過(guò)改善腸道菌群達(dá)到治療效果，見(jiàn)圖5。

圖5 各組小鼠腸道菌群在門水平下的群落組成Fig.5 Intestinal microbes community composition in mice from each group at level of phylum

2.4.4 補(bǔ)脾消積口服液對(duì)小鼠腸道菌群屬水平的影響 屬水平上優(yōu)勢(shì)菌為葡萄球菌屬Staphylococcus、杜氏桿菌屬Dubosiella、乳桿菌屬Lactobacillus。與空白組相比，模型組葡萄球菌屬豐度升高（P＜0.05），杜氏桿菌屬、乳酸桿菌屬豐度降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組比較，補(bǔ)脾消積口服液低劑量組葡萄球菌屬豐度降低（P＜0.01），杜氏桿菌屬及乳桿菌屬豐度升高；小兒健脾丸組葡萄球菌屬豐度降低（P＜0.05）、杜氏桿菌屬豐度降低，乳酸桿菌屬豐度升高，見(jiàn)圖6。

圖6 各組小鼠腸道菌群在屬水平下的群落組成Fig.6 The intestinal microbes community composition in mice from each group at level of genus

3 討論

根據(jù)小兒厭食癥的臨床特點(diǎn)，將之認(rèn)定在中醫(yī)學(xué)中的“疳證”“積滯”“不食”等范疇中[6]，中醫(yī)藥治療脾虛食積型小兒厭食癥有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，從病因病機(jī)的探討到施治均有理論指導(dǎo)，且中醫(yī)治法有較高的療效，不良反應(yīng)少[7]。補(bǔ)脾消積口服液中多味藥口味酸甜，相比中藥湯劑患兒更易接受，且方中諸藥已經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期中醫(yī)實(shí)踐的考察，安全性良好，對(duì)緩解脾虛食積型小兒厭食癥具有一定優(yōu)勢(shì)。

補(bǔ)脾消積口服液由水紅花子、山楂、雞內(nèi)金、六神曲、陳皮、檳榔、白術(shù)、白扁豆和大棗組成。方中各藥大多入脾胃經(jīng)發(fā)揮功效，為臨床治療脾胃虛弱常用藥物，各藥配伍可疏通氣機(jī)、消除氣滯、補(bǔ)氣健脾，全方補(bǔ)而不滯、滋而不膩，共奏益氣健脾和胃之功。本實(shí)驗(yàn)將小腸推進(jìn)率及胃內(nèi)殘留率作為補(bǔ)脾消積口服液的藥效評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果表明補(bǔ)脾消積口服液低劑量組可顯著增強(qiáng)脾虛食積小鼠胃腸蠕動(dòng)能力，改善胃腸動(dòng)力，高劑量組療效與模型組無(wú)顯著性差異，提示藥效為臨床等效劑量時(shí)，治療效果最優(yōu)。

胃腸道可分泌消化酶和吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)消化機(jī)體攝入的物質(zhì)，胃腸道的正常功能對(duì)于維持生命至關(guān)重要，當(dāng)胃腸道受到外界刺激超出自身負(fù)荷時(shí)，胃腸道屏障功能的動(dòng)態(tài)平衡會(huì)被打破，從而引發(fā)各種疾病[7]。腸道屏障由黏液層、上皮細(xì)胞以及黏膜免疫系統(tǒng)3 個(gè)部分組成，腸道屏障受損時(shí)，細(xì)菌、內(nèi)毒素會(huì)浸染機(jī)體，使胃腸道發(fā)生損傷，引起炎癥反應(yīng)等[8]。補(bǔ)脾消積口服液可明顯改善脾虛食積小鼠胃黏膜充血、腺體排列紊亂、小腸絨毛脫落、腸黏膜變短的現(xiàn)象，提示補(bǔ)脾消積口服液調(diào)節(jié)脾虛食積小鼠胃腸功能的機(jī)制可能與其改善胃腸組織形態(tài)相關(guān)。

胃腸激素是消化道內(nèi)分泌細(xì)胞和神經(jīng)元釋放的肽，目前已知30 多種激素基因在胃腸道中表達(dá)[9]。GAS 是胃腸道上皮發(fā)育和腫瘤轉(zhuǎn)化過(guò)程中的營(yíng)養(yǎng)因子，可刺激胃底黏膜的酸分泌和生長(zhǎng)，促進(jìn)消化功能[10]；MTL 為上腸黏膜的內(nèi)分泌細(xì)胞，是胃腸運(yùn)動(dòng)的重要調(diào)節(jié)劑，MTL 與GAS 均為興奮性胃腸激素，可促進(jìn)胃腸道運(yùn)動(dòng)，調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力。VIP 為抑制性胃腸激素，會(huì)使食管下括約肌松弛，當(dāng)VIP 表達(dá)增強(qiáng)后，食管下括約肌在行使其運(yùn)動(dòng)功能時(shí)會(huì)受到阻礙[11]。本實(shí)驗(yàn)表明補(bǔ)脾消積口服液可提高脾虛食積小鼠血清GAS、MTL 水平，降低VIP 水平，提示補(bǔ)脾消積口服液調(diào)節(jié)脾虛食積小鼠胃腸功能的機(jī)制可能與調(diào)節(jié)胃腸激素水平有關(guān)。

腸道是人體內(nèi)細(xì)菌存在的主要場(chǎng)所，這些復(fù)雜多樣的細(xì)菌形成了腸道菌群。人類腸道中有1 000多種細(xì)菌，腸道菌群的組成和比例與人體健康密切相關(guān)，擾亂腸道微生物平衡會(huì)導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)引發(fā)各種胃腸或全身性疾病[12]。研究表明，腸道菌群可能是中醫(yī)“脾”的物質(zhì)基礎(chǔ)，而“脾”亦可能是維持腸道菌群穩(wěn)態(tài)的重要前提，脾主運(yùn)化功能健旺與腸道菌群維持穩(wěn)態(tài)共同保障機(jī)體吸收、代謝營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，腸道菌群平衡是“脾氣健運(yùn)”的重要體現(xiàn)，腸道菌群紊亂是“脾失健運(yùn)”的病理體現(xiàn)。有研究證明，飲食結(jié)構(gòu)改變會(huì)影響腸道菌群結(jié)構(gòu)，如高脂肪高糖飲食小鼠腸道菌群中擬桿菌門的比例降低，厚壁菌門的比例增加，并降低了腸道菌群多樣性[13]。本實(shí)驗(yàn)表明補(bǔ)脾消積口服液可提升脾虛食積小鼠腸道菌群多樣性，增加擬桿菌門比例，降低厚壁菌門比例，改善腸道菌群結(jié)構(gòu)，提示補(bǔ)脾消積口服液調(diào)節(jié)脾虛食積小鼠胃腸功能的機(jī)制可能與其恢復(fù)腸道菌群結(jié)構(gòu)相關(guān)

本研究結(jié)果通過(guò)小鼠胃排空及腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)表明補(bǔ)脾消積口服液可顯著促進(jìn)脾虛食積小鼠胃腸功能，其機(jī)制可能與補(bǔ)脾消積口服液改善脾虛食積小鼠胃腸組織形態(tài)、調(diào)節(jié)胃腸激素水平及恢復(fù)腸道菌群結(jié)構(gòu)等相關(guān)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突