25%戊菌唑水乳劑在草莓上的殘留試驗(yàn)

秦蘭香 李秉衡

戊菌唑是一種兼具保護(hù)、治療和鏟除作用的內(nèi)吸性三唑類(lèi)殺菌劑，是甾醇脫甲基化抑制劑，具有毒性，使用量要控制得當(dāng)，因此檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中的戊菌唑具有重要意義。本研究中把25%戊菌唑水乳劑施用在供試作物上，采收后檢測(cè)其殘留及降解情況，結(jié)果表明，藥物殘留量低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

一、材料與設(shè)備

Agilent 1290-Ultivo超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；KQ-500B超聲波清洗器；SL-2000A多功能粉碎機(jī)；XW-80A微型旋渦混合儀；Scout電子天平（百分之一）；移液槍及各種玻璃儀器。

乙腈、水、甲酸，均為HPLC級(jí)；NaCl為分析純；Florisil選擇性吸附劑（60-100目）、石墨化碳黑；啶蟲(chóng)脒標(biāo)準(zhǔn)品（1000±20μg/mL），北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司。

草莓樣品，來(lái)自日照市東港區(qū)河山鎮(zhèn)范家官莊試驗(yàn)田的對(duì)照區(qū)。

二、試驗(yàn)與方法

1.田間試驗(yàn)。（1）試驗(yàn)地點(diǎn)。試驗(yàn)地點(diǎn)為山東省日照市高新區(qū)河山鎮(zhèn)范家官莊村，土壤類(lèi)型是棕壤，此地屬溫帶季風(fēng)氣候，四季分明，冬無(wú)嚴(yán)寒、夏無(wú)酷暑。年均氣溫12.7℃、年均濕度72%、無(wú)霜期223d、年平均日照2533h、年均降水量874mm。實(shí)驗(yàn)地塊的前茬作物為草莓，未曾施用過(guò)與試驗(yàn)藥劑性質(zhì)相似的農(nóng)藥。

（2）供試作物、品種及種植密度。供試作物為山東省日照市草莓，品種為甜寶，畦寬0.50m、畦長(zhǎng)48.0m、畦距0.40m、株距0.16m，每畦2排，每畦排距0.15m。

（3）施藥方法和器具。選擇背負(fù)式電動(dòng)噴霧器施藥，每畝兌水50L，對(duì)植株進(jìn)行均勻的噴霧處理。試驗(yàn)均在風(fēng)速小于3m/s、氣溫低于40℃、施藥后2h內(nèi)無(wú)降雨的情況下開(kāi)展。

（4）田間管理。試驗(yàn)期間，對(duì)供試作物的灌溉、施肥進(jìn)行常規(guī)化管理，必要時(shí)可進(jìn)行疏苗、疏花、疏果、耕作等操作。為確保供試作物的正常生長(zhǎng)必須使用其他農(nóng)藥時(shí)，應(yīng)在病蟲(chóng)害發(fā)生時(shí)同時(shí)在對(duì)照小區(qū)和處理小區(qū)使用劑量相同的同種農(nóng)藥，且該農(nóng)藥不能對(duì)被試農(nóng)藥造成分析干擾。觀(guān)察作物給藥后的生長(zhǎng)情況，若有藥害產(chǎn)生，需評(píng)估該次施藥對(duì)試驗(yàn)項(xiàng)目的影響。

（5）最終殘留量試驗(yàn)。①試驗(yàn)小區(qū)。試驗(yàn)地設(shè)計(jì)1個(gè)處理小區(qū)、1個(gè)對(duì)照小區(qū)，處理小區(qū)的面積為70m2，對(duì)照小區(qū)的面積為70m2，小區(qū)之間的隔離帶為5m。試驗(yàn)小區(qū)標(biāo)識(shí)明確，并繪制田間小區(qū)布置圖，同時(shí)記錄試驗(yàn)地點(diǎn)的地理位置信息等。

②施藥劑量、間隔、次數(shù)、時(shí)期和用水量。處理小區(qū)按照表1的信息施藥，采用其推薦劑量的最高值10mL/畝，每畝兌水50L，以植株均勻噴霧的方式施藥3次，施藥間隔7d。對(duì)照小區(qū)采用清水噴霧。第1次施藥時(shí)作物BBCH編碼為81，第2次施藥時(shí)作物BBCH編碼為85，第3次施藥時(shí)作物BBCH編碼為87。

③田間樣品采樣。每個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)在最后一次施藥后間隔5d、7d在處理小區(qū)分別采集2個(gè)草莓樣品，5d和7d時(shí)在對(duì)照小區(qū)分別采集1個(gè)草莓樣品。按試驗(yàn)計(jì)劃的采樣要求，戴一次性手套，小區(qū)邊行和每行兩邊0.5m不采樣，用對(duì)角線(xiàn)法在試驗(yàn)小區(qū)不少于12株草莓藤曼上至少采集1kg生長(zhǎng)正常、無(wú)病害、成熟的草莓果實(shí)，裝入自封袋。試驗(yàn)人員在采集現(xiàn)場(chǎng)對(duì)草莓樣品進(jìn)行簡(jiǎn)單的處理，去除果梗和附屬物。將采集的樣品獨(dú)立分開(kāi)裝入自封袋中，在樣品自封袋上加貼標(biāo)簽。標(biāo)簽內(nèi)容包括：項(xiàng)目編號(hào)、樣品編號(hào)、試驗(yàn)地點(diǎn)、樣品名稱(chēng)、采收間隔期、采收日期、田間試驗(yàn)單位和采樣人員。

2.樣品運(yùn)輸、制備與儲(chǔ)藏。采集的田間樣品在8h內(nèi)運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行樣品制備，冷凍保存（低于-18℃）。到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后不能立即檢測(cè)的樣品，應(yīng)在低于-18℃的條件下儲(chǔ)存，并連續(xù)監(jiān)控其溫度。將草莓樣品混合均勻后，取2份各150-250g的樣品貼好樣品標(biāo)簽，A樣用于檢測(cè)，B樣用于留樣。制備好的農(nóng)殘樣品在低于-18℃的冰箱中冷凍保存，并連續(xù)監(jiān)控溫度。試驗(yàn)結(jié)束后B樣在低于-18℃條件下至少保存半年。

3.殘留物檢測(cè)。（1）殘留物。根據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763-2019）的規(guī)定，殘留物為戊菌唑，戊菌唑在草莓上的最大殘留量為0.1mg/kg。

（2）檢測(cè)方法。檢測(cè)方法來(lái)自《戊菌唑在草莓上的殘留分析方法驗(yàn)證試驗(yàn)》（試驗(yàn)項(xiàng)目編號(hào)：FXS21003，試驗(yàn)報(bào)告編號(hào)：FXS21003R）。草莓樣品用乙腈提取，C18吸附劑凈化，用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定，定性離子和保留時(shí)間雙重定性，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)-外標(biāo)法定量。

（3）樣品檢測(cè)。①標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。以空白基質(zhì)溶液為定容介質(zhì)配制一系列質(zhì)量濃度分別為0.001mg/L、0.005mg/L、0.010mg/L、0.020mg/L、0.050mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在確定的方法條件下對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)濃度采集3個(gè)平行，以5個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

②檢測(cè)步驟。樣品的提取和凈化：取待測(cè)樣品，放入攪拌機(jī)制成勻漿，稱(chēng)取勻漿試樣（5±0.10）g（其質(zhì)量記作M）于具塞試管中，加入50mL乙腈提取劑（提取劑加入體積記作V），超聲提取15min，加入3g氯化鈉，渦旋混合30s，靜置后吸取2mL上清液，加入0.10g C18吸附劑，渦旋混合30s，靜置后取1.0mL上清液，過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜，測(cè)試。

質(zhì)控樣品的提取和凈化：取對(duì)照小區(qū)的空白樣品，放入攪拌機(jī)制成勻漿，稱(chēng)取勻漿試樣（5±0.10）g（其質(zhì)量記作M）于具塞試管中，添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)30min后，加入50mL乙腈提取劑（提取劑加入體積記作V），超聲提取15min，加入3g氯化鈉，渦旋混合30s，靜置后吸取2mL上清液，加入0.10g C18吸附劑，渦旋混合30s，靜置后取1mL上清液，過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜，測(cè)試。

儀器條件：儀器：Agilent 1290-Ultivo超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；色譜柱：Eclipse Plus C18，1.8μL，2.1mm×50mm；柱溫：35.0℃；進(jìn)樣量：5μL；流動(dòng)相預(yù)處理：超聲脫氣；流動(dòng)相A：0.1%甲酸緩沖液；流動(dòng)相B：乙腈；梯度洗脫條件見(jiàn)表2；離子源：AJS-ESI；掃描方式：MRM模式；氣體溫度：250℃；氣體流速：7.0L/min；鞘氣溫度：300℃；鞘氣流速：11.0L/min；MS2 Heater：65℃；MS1 Heater：65℃；噴霧：15.0psi；MRM質(zhì)譜條件見(jiàn)表3。

4.質(zhì)控樣品。將本試驗(yàn)2個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的農(nóng)殘樣品當(dāng)作一個(gè)批次進(jìn)行檢測(cè)，設(shè)置2個(gè)質(zhì)控樣品（理論添加濃度為0.05mg/kg），分別以2個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的對(duì)照小區(qū)的草莓樣品為基質(zhì)，加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，放置30min后，按照檢測(cè)步驟，同一批次上機(jī)進(jìn)行檢測(cè)。

5.定性和定量方法。采用保留時(shí)間（3min）及定性離子對(duì)（284.0/158.9）定性；采用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)-外標(biāo)法定量（定量離子對(duì)284.0/69.9）。

三、結(jié)果與討論

1.質(zhì)控樣品結(jié)果。質(zhì)控樣品戊菌唑的回收率為94%、92%。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)相關(guān)性和質(zhì)控樣品的回收率均符合殘留檢測(cè)要求，能滿(mǎn)足《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》（NY/T 788-2018）對(duì)殘留檢測(cè)方法的相關(guān)要求。

2.最終殘留量試驗(yàn)結(jié)果。2021年在山東省日照市的最終殘留試驗(yàn)結(jié)果中，用25%的戊菌唑水乳劑，10mL/畝的制劑量施藥3次，施藥間隔7d，安全間隔期5d。最終殘留樣品的采收間隔期為5d、7d，經(jīng)檢測(cè)，試驗(yàn)點(diǎn)草莓中戊菌唑平均殘留量為0.038mg/kg、0.018mg/kg，低于《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763-2019）規(guī)定的草莓上戊菌唑的MRL值（0.1mg/kg）。

作者簡(jiǎn)介：秦蘭香（1978-），女，漢族，山東日照人，高級(jí)工程師，大學(xué)本科，研究方向?yàn)榱謽I(yè)。