矢志方激活Sirt1-Foxo1 通路調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白改善高尿酸血癥小鼠腎損傷*

楊楓，王傳旭，吳志遠(yuǎn)，張栩銘，高建東

（上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)腎病研究所，上海中醫(yī)藥大學(xué)肝腎疾病病證教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海市中醫(yī)臨床重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201203）

高尿酸血癥（HUA）是由于嘌呤代謝紊亂導(dǎo)致血清尿酸（UA）升高的代謝綜合征，對(duì)人體心腦血管、關(guān)節(jié)、腎臟等器官造成損害[1-2]。隨著人們生活水平的提高，HUA 的發(fā)病率逐年升高，UA 長(zhǎng)期堆積在腎臟會(huì)引起腎小管間質(zhì)纖維化，從而引發(fā)UA 性腎病[3]。臨床一線降UA 藥物如黃嘌呤氧化酶抑制劑非布司他、別嘌呤醇，促進(jìn)UA 排泄藥物苯溴馬隆等，長(zhǎng)期服用存在一定副作用、血清UA 控制不佳等問(wèn)題[4]。

沉默信息調(diào)節(jié)因子1（Sirt1）/叉頭轉(zhuǎn)錄因子1（Foxo1）信號(hào)通路與腎臟病理生理發(fā)展密切相關(guān)。Sirt1 在腎臟中廣泛存在，激活Sirt1 可抑制Foxo1 乙酰化水平，對(duì)腎臟起保護(hù)作用。Sirt1 表達(dá)增加可減輕草酸鈣晶體誘導(dǎo)的腎損傷[5]，緩解脂多糖所導(dǎo)致的氧化應(yīng)激引起的腎損傷[6]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）是維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)的重要細(xì)胞器，腎小管上皮細(xì)胞損傷是一種病理和生理的改變，在HUA 早期和進(jìn)展期發(fā)揮關(guān)鍵作用[7]。在正常情況下，適度ERS 能保護(hù)細(xì)胞活性，如果長(zhǎng)時(shí)間高UA 刺激則會(huì)超出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)代償能力，造成細(xì)胞損傷[8]。

矢志方是上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院腎病科臨床經(jīng)驗(yàn)方。臨床療效較好，能顯著降低痰濁瘀阻型HUA 的UA 水平[9]。前期大量基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究表明，矢志方能降低HUA 小鼠和HUA 大鼠UA 水平、改善HUA 小鼠和HUA 大鼠腎功能[10-13]?；诒菊n題組前期研究基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立HUA 小鼠模型，觀察基于Sirt1-Foxo1 通路矢志方對(duì)HUA 小鼠腎組織和高UA 誘導(dǎo)HK2 細(xì)胞ERS 相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，以期為矢志方的臨床應(yīng)用提供更多實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 選取32 只8 周齡SPF 級(jí)雄性BALB/c小鼠，體質(zhì)量12～22 g，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（滬）2017-0005，倫理證號(hào)PZSHUTCM211227011。在上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)，溫度25 ℃左右，濕度45%左右，12 h 光照，普通飲食飲水喂養(yǎng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞 人腎小管上皮細(xì)胞HK2，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物 動(dòng)物用藥：矢志方（車(chē)前子30 g，芥子15 g，王不留行15 g，冬葵子15 g），飲片購(gòu)自上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院，并委托國(guó)家中藥制藥工程技術(shù)研究中心制備成中藥復(fù)方顆粒劑（1 g 顆粒相當(dāng)于原方20 g），用蒸餾水配制成70 mg/mL 藥液。非布司他片，40 mg/片，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)H20130081，用蒸餾水配制成0.75 mg/mL藥液。

矢志方凍干粉制作流程：稱(chēng)取炒王不留行、炒芥子各3.6 kg，炒車(chē)前子7.2 kg，冬葵子3.6 kg，混合均勻，打粉，粉碎后加入藥材10 倍體積純凈水包煎，先煮1 h，過(guò)濾，再加8 倍水浸泡1 h，加熱回流提取2 次，每次1 h。最終得到凍干粉0.9 kg。

細(xì)胞用藥矢志方溶液配制：50 mL 試管中加入10 mL 含10%胎牛血清（FBS）、1%P/S 的F12/DMEM完全培養(yǎng)基，稱(chēng)取矢志方干粉600 mg，加入到試管中，細(xì)胞裂解儀30%功率5 min 促進(jìn)干粉溶解，矢志方溶液終濃度為60 mg/mL。

UA 配置：稱(chēng)取100 mg UA 加入10 mL 雙蒸水，震蕩混勻充分溶解后濾過(guò)使用，UA 溶液終濃度為10 mg/mL。

1.4 主要試劑與儀器 氧嗪酸鉀、羧甲基纖維素鈉（CMCC-Na），上海麥克林生化科技有限公司，貨號(hào)分別為P831461、C10097951；UA，美國(guó)Sigma 公司，貨號(hào)u2875-5 g；Sirt1，美國(guó)CST 公司（貨號(hào)8469s）；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)跨膜蛋白肌醇酶1α（IRE1α），美國(guó)CST 公司（貨號(hào)3294s）、武漢Abclonal 公司（貨號(hào)A17940）；天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶（Caspase）12，美國(guó)Signalway Antibody 公司（貨號(hào)48277）、武漢Abclonal 公司（貨號(hào)A22864）；增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白（Chop），美國(guó)CST 公司（貨號(hào)2895s）、武漢Abclonal 公司（貨號(hào)A113466）；Foxo1，美國(guó)CST 公司（貨號(hào)2880s）；GAPDH，美國(guó)Proteintech 公司（貨號(hào)60004-I-Ig）；α-Tubulin，上海碧云天公司，貨號(hào)AF2827；HRP 標(biāo)記山羊抗小鼠IgG、HRP 標(biāo)記山羊抗兔IgG，上海碧云天公司，貨號(hào)分別為A0216、A0208；PVDF 膜，美國(guó)Millipore 公司，貨號(hào)IPVH00005。離心機(jī)，美國(guó)Beckman 公司，型號(hào)Avanti J-E；凝膠成像系統(tǒng)，上海天能生命科學(xué)有限公司，型號(hào)Tanon-5200；生物組織冷凍包埋機(jī)，浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司，型號(hào)KD-BM；烘片機(jī)，浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司，型號(hào)KD-H；酶標(biāo)儀，美國(guó)BioTek 公司，型號(hào)Synergy 2；組織勻漿器，上海凈信科技有限公司，型號(hào)JY-24；顯微鏡，日本奧林巴斯公司，型號(hào)CX33。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組、造模與給藥 造模及給藥方法參考文獻(xiàn)[8]，32 只小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，隨機(jī)分為正常組、模型組、非布司他組和矢志方組，每組8 只。正常組用同等體積生理鹽水灌胃，其余各組采用250 mg/kg 氧嗪酸鉀溶液灌胃建立HUA 小鼠模型。4 h 后給予藥物干預(yù)即非布司他組灌胃非布司他藥液6 mg/kg，矢志方組灌胃矢志方藥液562.5 mg/kg，參考《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》的人與小鼠藥物換算方式和本課題組前期實(shí)驗(yàn)，每只小鼠每10 g 灌胃0.2 mL，每日1 次，正常組和模型組予等體積生理鹽水灌胃，造模與給藥同時(shí)進(jìn)行，連續(xù)2 周。

2.2 細(xì)胞培養(yǎng)與造模方法 將HK2 細(xì)胞用含10%FBS 和1%雙抗的DMEM/F12 培養(yǎng)基于5%CO2、37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞密度為90%時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞鋪板，細(xì)胞貼壁后用含0.5%FBS 的DMEM/F12 培養(yǎng)基饑餓處理12 h，再進(jìn)行相應(yīng)干預(yù)，干預(yù)24 h 后處理細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞分為正常組，模型組（200 μg/mL UA），中藥組（200 μg/mL UA＋300 μg/mL 失志方）。

2.3 取材 第14 日給藥結(jié)束后，0.8%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉小鼠，摘取雙側(cè)腎臟分別用于病理觀察、蛋白免疫印跡法（Western blot）實(shí)驗(yàn)和免疫熒光染色。

2.4 病理觀察 小鼠腎臟組織經(jīng)4%多聚甲醛組織固定液固定24 h，梯度脫水、浸蠟、包埋，4 μm 厚度切片，37 ℃烤片12 h，然后進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色、Masson 染色，中性樹(shù)脂封片，顯微鏡下觀察小鼠腎臟組織病理形態(tài)。

2.5 Western blot 檢測(cè) 取20 mg 小鼠腎組織，加入RIPA 裂解液200 μL，勻漿機(jī)65 Hz 勻漿1 min，4 ℃、12 000 rpm 離心15 min，離心半徑6 cm。BCA 法測(cè)定蛋白濃度，加入上樣緩沖液和生理鹽水配制成濃度為40 μg/μL 的等量蛋白樣品。上樣，120 V 電泳1 h，300 mA、1 h 30 min 轉(zhuǎn)至PVDF 膜，5%脫脂奶粉室溫封閉1 h，分別加入IRE1α 一抗（1∶1 000）、Sirt1一抗（1∶1 000）、Foxo1 一抗（1∶1 000）、Caspase 12 一抗（1∶1 000）、Chop 一抗（1∶1 000）、α-Tubulin 一抗（1∶1 000）、GAPDH 一抗（1∶5 000），4 ℃孵育過(guò)夜；PBST 洗膜3 次，加入HRP 標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG（1∶1 000）、山羊抗兔IgG（1∶1 000），室溫孵育1 h；PBST 洗膜3 次，ECL 化學(xué)發(fā)光法顯影，凝膠成像系統(tǒng)拍攝。以GAPDH 和α-Tubulin 為內(nèi)參，計(jì)算目的蛋白相對(duì)表達(dá)量。

2.6 免疫熒光染色 細(xì)胞經(jīng)爬片、干預(yù)結(jié)束后，4%多聚甲醛室溫固定爬片細(xì)胞30 min，室溫通透細(xì)胞20 min，加入1%BSA 室溫封閉60 min，加入稀釋的IRE1α 一抗（1∶200）、Sirt1 一抗（1∶1 000）、Foxo1 一抗（1∶1 000）、Caspase 12 一抗（1∶400）、Chop 一抗（1∶400），4 ℃孵育過(guò)夜；加入熒光二抗（1∶500），避光孵育1 h，加入DAPI 染細(xì)胞核5 min，甘油封片，熒光顯微鏡下觀察。

2.7 免疫組化染色 腎組織石蠟切片脫蠟至水，抗原修復(fù)，3%牛血清白蛋白溶液（BSA）室溫封閉30min，加入IRE1α 一抗（1∶100）、Sirt1 一抗（1∶100）、Foxo1一抗（1∶100）、Caspase12 一抗（1∶100）、Chop 一抗（1∶100）。4 ℃孵育過(guò)夜，加二抗室溫孵育50 min，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，中性樹(shù)脂封片，光鏡下觀察，以棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)軟件和Image J 1.8 軟件進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多重比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA）。P<0.05 表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 矢志方對(duì)模型小鼠腎組織病理形態(tài)的影響 與正常組比較，模型組小鼠腎組織結(jié)構(gòu)紊亂，腎小管管腔擴(kuò)張、管壁變薄，腎間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，大量藍(lán)色膠原纖維沉積；與模型組比較，矢志方組和非布司他組小鼠腎小管管腔擴(kuò)張、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、藍(lán)色膠原纖維集聚程度減少。見(jiàn)圖1。

圖1 各組小鼠腎組織形態(tài)（×400）Fig.1 Pathological changes of mouse kidney tissue in each group（×400）

4.2 矢志方對(duì)高UA 小鼠腎組織和高UA 誘導(dǎo)HK2 細(xì)胞Sirt1、IRE1α、Foxo1、Caspase 12、Chop 蛋白表達(dá)的影響 Western blot 結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組小鼠腎組織IRE1α、Foxo1、Caspase12、Chop 蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.01 或P<0.001），Sirt1蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.001）；與模型組比較，非布司他組小鼠腎組織和矢志方組小鼠腎組織IRE1α、Foxo1、Caspase 12、Chop 蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.001），Sirt1 蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.001）。細(xì)胞Western blot 結(jié)果與HUA 小鼠腎組織Western blot結(jié)果趨勢(shì)一致，見(jiàn)圖2，圖3。

圖2 各組HK2 細(xì)胞Sirt1、IRE1α、Foxo1、Caspase 12、Chop 蛋白表達(dá)情況（±s）Fig.2 Protein expressions of Sirt1、IRE1α、Foxo1、Caspase 12、Chop in HK2 cells of each group（±s）

圖3 各組小鼠腎組織Sirt1、IRE1α、Foxo1、Caspase 12、Chop 蛋白表達(dá)情況（±s）Fig.3 Protein expressions of Sirt1、IRE1α、Foxo1、Caspase 12、Chop in mouse kidney tissue of each group（±s）

4.3 矢志方對(duì)高UA 小鼠小鼠腎組織Sirt1、IRE1α、Foxo1、Caspase 12、Chop 表達(dá)的影響 免疫組化染色結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組小鼠腎組織IRE1α、Foxo1、Caspase 12、Chop 表達(dá)顯著升高（P<0.01 或P<0.001），Sirt1 表達(dá)顯著降低（P<0.001）；與模型組比較，非布司他組和矢志方組小鼠腎組織IRE1α、Foxo1、Caspase 12、Chop 表達(dá)顯著降低（P<0.05，P<0.01 或P<0.001），Sirt1 表達(dá)顯著升高（P<0.05）。見(jiàn)圖4。

圖4 各組小鼠腎組織Sirt1、IRE1α、Foxo1、Caspase12、Chop 陽(yáng)性表達(dá)情況（免疫組化染色，×400）Fig.4 Postive expressions of Sirt1、IRE1α、Foxo1、Caspase12、Chop in mouse kidney tissue of each group（Immunohistochemical staining，×400）

4.4 矢志方對(duì)高UA 誘導(dǎo)HK2 細(xì)胞Sirt1、IRE1α、Foxo1、Caspase12、Chop 表達(dá)的影響 免疫熒光染色結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組細(xì)胞IRE1α、Foxo1、Caspase 12、Chop 表達(dá)顯著升高，Sirt1 表達(dá)顯著降低；與模型組比較，矢志方組細(xì)胞IRE1α、Foxo1、Caspase 12、Chop 表達(dá)顯著降低，Sirt1 表達(dá)顯著升高。見(jiàn)圖5-9。

圖5 各組HK2 細(xì)胞Sirt1 陽(yáng)性表達(dá)（免疫熒光染色，×400）Fig.5 Postive expressions of Sirt1 in HK2 cells of each group（Immunofluorescence staining，×400）

圖6 各組HK2 細(xì)胞IRE1α 陽(yáng)性表達(dá)（免疫熒光染色，×400）Fig.6 Postive expressions of IRE1α in HK2 cells of each group（Immunofluorescence staining，×400）

圖7 各組HK2 細(xì)胞Foxo1 陽(yáng)性表達(dá)（免疫熒光染色，×400）Fig.7 Postive expressions of Foxo1 in HK2 cells of each group（Immunofluorescence staining，×400）

圖8 各組HK2 細(xì)胞Caspase 12 陽(yáng)性表達(dá)（免疫熒光染色，×400）Fig.8 Postive expressions of Caspase 12 in HK2 cells of each group（Immunofluorescence staining，×400）

圖9 各組HK2 細(xì)胞Chop 陽(yáng)性表達(dá)（免疫熒光染色，×400）Fig.9 Postive expressions of Chop in HK2 cells of each group（Immunofluorescence staining，×400）

5 討論

HUA 引起腎損傷的機(jī)制十分復(fù)雜，主要包括氧化應(yīng)激、內(nèi)皮功能障礙、腎纖維化和炎癥[3]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)矢志方臨床療效顯著，前期基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究表明，矢志方能抑制白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）IL-1β 表達(dá)、促進(jìn)有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/3（OAT1/3）、肝細(xì)胞核因子1α/4α（HNF1α/4α）表達(dá)減輕HUA 小鼠腎臟損傷。ERS 與腎損傷密切相關(guān)[14-15]，本研究中發(fā)現(xiàn)ERS 的調(diào)節(jié)因子Sirt1 在HUA 小鼠腎組織中顯著下調(diào)，給予矢志方干預(yù)后能上調(diào)Sirt1 表達(dá)水平、矢志方還能抑制ERS、改善腎損傷和間質(zhì)纖維化。因此，Sirt1 和ERS 可能是HUA 誘導(dǎo)的腎間質(zhì)纖維化的潛在治療靶點(diǎn)。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是一個(gè)表型和功能多樣的傳感平臺(tái)，與調(diào)節(jié)蛋白沉積、脂質(zhì)代謝、糖異生和鈣信號(hào)傳導(dǎo)等多種細(xì)胞功能密切相關(guān)，是維持和恢復(fù)代謝健康的重要組成部分。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)的紊亂通常被稱(chēng)為ERS，ERS 是一種功能失衡狀態(tài)，通過(guò)激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（PERK）/真核起始因子2α（eIF2α）途徑中C/EBP同源蛋白（Chop）、IRE1α-凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1（ASK1）-c-Jun N 端激酶（JNK）通路、IRE1α-X 盒結(jié)合蛋白1（XBP1）-Chop 通路、激活Caspase 12 通路調(diào)控細(xì)胞凋亡。輕度ERS 時(shí)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可通過(guò)激活未折疊蛋白反應(yīng)途徑（UPR）啟動(dòng)自噬以恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)，促使細(xì)胞存活；當(dāng)ERS 刺激過(guò)強(qiáng)且持續(xù)存在時(shí)，會(huì)過(guò)度誘導(dǎo)自噬或激活凋亡途徑使細(xì)胞死亡。

UPR 包括重建內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)的途徑以及觸發(fā)凋亡的途徑，即轉(zhuǎn)錄因子依賴和Caspase 12 依賴的途徑[16]。在轉(zhuǎn)錄因子依賴的途徑中，葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）在ERS 激活時(shí)與IRE1 解離，IRE1α 的管腔結(jié)構(gòu)域感知未折疊蛋白的積累，從而導(dǎo)致其二聚化和自身磷酸化。這激活了其胞質(zhì)內(nèi)核糖核酸酶活性，啟動(dòng)了兩個(gè)獨(dú)立的事件來(lái)恢復(fù)蛋白沉積。一個(gè)是通過(guò)調(diào)節(jié)的IRE1 依賴性衰變（RIDD）降解mRNAs，通過(guò)IRE1α 切割并去穩(wěn)定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位的mRNAs，從而減少新合成的蛋白質(zhì)進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔所產(chǎn)生的折疊負(fù)擔(dān)。另一種是X 盒結(jié)合蛋白-1（XB P1）mRNA 的非規(guī)范特異性剪接[17]，XBP1s 還通過(guò)絲裂原活化蛋白激酶14（MAPK14）信號(hào)的磷酸化在蛋白質(zhì)水平上受到調(diào)節(jié)[18]。UPR 的IRE1α-XBP1 途徑是維持代謝穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵因素[19-22]。在Caspase 12 依賴性途徑中，鈣離子（Ca2+）從細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)存到胞質(zhì)溶膠，導(dǎo)致鈣蛋白酶轉(zhuǎn)移到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，使Caspase 12 活化，然后通過(guò)Caspase 9 的激活，誘導(dǎo)Caspase 3 依賴的凋亡途徑，以促進(jìn)細(xì)胞凋亡[23]。另外，IRE1 通過(guò)上調(diào)Chop 轉(zhuǎn)錄因子，一方面，活化的Chop 上調(diào)B 淋巴細(xì)胞瘤-2 基因（Bcl-2）家族促凋亡蛋白Bax 發(fā)揮促凋亡作用；另一方面，Chop 促進(jìn)TRAIL 受體2（DR5）的轉(zhuǎn)錄，活化Caspase 8 依賴的外源途徑的細(xì)胞凋亡。表明Chop 在靶向ERS 激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中發(fā)揮了關(guān)鍵作用[24]。本研究發(fā)現(xiàn)矢志方能在體內(nèi)體外下調(diào)IRE1α、Foxo1、Caspase 12、Chop 蛋白表達(dá)水平，表明矢志方能通過(guò)抑制ERS 緩解腎臟損傷。

Sirt1 是一種依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）的組蛋白去乙酰化酶，參與代謝、衰老、細(xì)胞存活、自噬和糖尿病的調(diào)節(jié)。Sirt1 通過(guò)去乙?；せ罡鞣N蛋白質(zhì)和轉(zhuǎn)錄因子。Foxo1 是其中一個(gè)被Sirt1 去乙酰化的轉(zhuǎn)錄因子，參與細(xì)胞的氧化應(yīng)激抵抗、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期阻滯、胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和代謝等[25]。有研究報(bào)道，Sirt1 存在于細(xì)胞核中，但它可以穿梭到細(xì)胞質(zhì)中，作為組蛋白的去乙?；?，以及許多非組蛋白靶點(diǎn)[26]。受Sirt11 調(diào)控的Foxo 轉(zhuǎn)錄因子的乙酰化狀態(tài)可以選擇性地將Foxos 定向到特定的靶點(diǎn)，是代謝和應(yīng)激反應(yīng)的另一個(gè)調(diào)控途徑[27]。進(jìn)一步的研究報(bào)道，F(xiàn)oxo1 被Sirt1 介導(dǎo)的賴氨酸242、245 和262 的脫乙?；せ頪28]。因?yàn)榈侥壳盀橹挂呀?jīng)證明Sirt1 通過(guò)調(diào)節(jié)Foxos 的表達(dá)來(lái)防止ROS 產(chǎn)生和氧化應(yīng)激，但是也已經(jīng)提出增加的氧化應(yīng)激可以反過(guò)來(lái)控制Sirt1 活性，但是Foxo 參與該活性的可能性還不清楚[29]。Sirt1 在調(diào)節(jié)ERS 方面發(fā)揮了重要作用，它可通過(guò)調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)分子PERK、GRP78 緩解ERS 減輕阿霉素引起的心臟毒性[30]。本研究結(jié)果表明Sirt1 在受高UA 刺激后表達(dá)降低，而矢志方能顯著激活Sirt1 水平，改善腎臟損傷，并且下調(diào)ERS 相關(guān)蛋白，說(shuō)明Sirt1 可通過(guò)調(diào)控ERS 減輕HUA 所導(dǎo)致的腎損傷。

綜上所述，矢志方可減輕HUA 小鼠腎臟損傷，其機(jī)制與激活Sirt1-Foxo1 通路抑制ERS 相關(guān)蛋白及下游Chop、Caspase 12 蛋白表達(dá)有關(guān)。然而，HUA引發(fā)ERS，以及進(jìn)一步導(dǎo)致腎損傷并沒(méi)有完全了解，還有待進(jìn)一步研究。