月季分生組織培養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn)

任武婷

摘? ?要? ?以月季未萌發(fā)的腋芽為外植體，利用組織培養(yǎng)技術(shù)誘導(dǎo)出無(wú)菌芽，然后進(jìn)行增殖，復(fù)壯，生根，煉苗，移栽，能夠在短時(shí)間內(nèi)生產(chǎn)出大量品質(zhì)穩(wěn)定、無(wú)感染且保持母株優(yōu)良特性的月季種苗，滿足市場(chǎng)需求，優(yōu)化了月季組織培養(yǎng)快繁技術(shù)。

關(guān)鍵詞? ?月季；腋芽；組織培養(yǎng)

月季是薔薇科薔薇屬多年生木本植物，觀賞期長(zhǎng)，花色豐富，花朵碩大，帶有濃郁的香味。月季適應(yīng)性強(qiáng)，對(duì)土壤條件要求不嚴(yán)格，用途廣泛，在園林綠化、節(jié)日用花、城鄉(xiāng)道路旁、家庭小院等都有種植。月季常用的繁殖方法主要有扦插繁殖和壓條繁殖，月季枝條數(shù)量少，而且受季節(jié)影響，冬季修剪下來(lái)的枝條不能及時(shí)使用，要先沙藏保存，等到春季才可扦插，繁育周期長(zhǎng)，生產(chǎn)成本增高。

利用組織培養(yǎng)方法繁育月季，全年都能生產(chǎn)，不受季節(jié)影響，能保持母株的優(yōu)良性狀，又能在短期內(nèi)生產(chǎn)出大批量無(wú)毒苗。月季的組織培養(yǎng)外植體主要有莖尖、芽尖、莖節(jié)、普通腋芽、腋芽分生組織等。現(xiàn)將腋芽分生組織快繁技術(shù)總結(jié)如下。

1? ?準(zhǔn)備階段

準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所用的工具、器具，制備出適宜的培養(yǎng)基并經(jīng)高壓滅菌備用，配置出實(shí)驗(yàn)用的化學(xué)消毒劑（當(dāng)天配制，當(dāng)天用完），準(zhǔn)備一臺(tái)體視顯微鏡。

2? ?外植體的選擇及清洗

1）選擇。一般在晴天中午11：00或下午? 3：00前采取（忌陰雨天采?。＿x取生長(zhǎng)旺盛、沒(méi)有病蟲(chóng)害、品質(zhì)優(yōu)良、變異小的豐花月季，當(dāng)年新抽嫩枝頂尖部位（長(zhǎng)約4 cm）。剪取外植體時(shí)工具和手必須消毒，以防感染。最好在沒(méi)有開(kāi)花的月季植株上選取。

2）清洗。采回的外植體進(jìn)行修整，剪掉葉片、葉柄、莖刺等不需要的部分，在自來(lái)水下沖洗10～15分鐘，再用洗衣粉或洗潔精仔細(xì)刷洗，用流水沖洗干凈。

3? ?消毒

外植體清洗干凈后，放在消毒過(guò)的超凈工作臺(tái)上，用無(wú)菌的脫脂棉擦拭1遍外植體表面。

75％酒精消毒1分鐘，用無(wú)菌水沖洗1次；有效氯2%的NaClO溶液消毒20分鐘，用無(wú)菌水沖洗3次。最后加入0.1 mg/L Vc浸泡20分鐘。

4? ?接種及培養(yǎng)條件

刀用酒精燈灼燒滅菌，解剖刀、鑷子的先端在95%的酒精中蘸一下，再用酒精燈灼燒滅菌，置于刀架上冷卻，待用。用鑷子夾住蘸有酒精的脫脂棉點(diǎn)著，對(duì)接種盤里外進(jìn)行灼燒滅菌，滅菌好的接種盤放上濾紙。

把消毒好的外植體放在濾紙上，吸干表面水分，然后放在體視顯微鏡下，在葉腋處拔出分生組織（未萌發(fā)的腋芽）。接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L GA3+30 g/L糖，瓊脂6.5 g/L，pH值5.7。每個(gè)試管接種1個(gè)分生組織，蓋上試管，試管上標(biāo)明編號(hào)、日期、品種，培養(yǎng)基名稱，接種人員等，放入培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)。

培養(yǎng)室溫度25 ℃，光照時(shí)間16小時(shí)/天，光照強(qiáng)度800～1 000 lx，濕度50%。

接種1周后，在體視顯微鏡下觀察，有無(wú)污染（真菌、細(xì)菌）、死亡或干枯的分生組織，有則移出。每周在體視顯微鏡下觀察1次，4～6周后，只保留生長(zhǎng)旺盛且健康的、仍保持綠色的分生組織。大約兩個(gè)月后，芽陸續(xù)長(zhǎng)出，觀察芽的生長(zhǎng)情況，是否有異常癥狀出現(xiàn)。

5? ?增殖培養(yǎng)

將健康的芽切割下來(lái)，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基MS+0.3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA+30 g/L糖，瓊脂4.7 g/L，pH值5.8。

增殖階段改為玻璃瓶，每瓶放3個(gè)芽，放置培養(yǎng)室培養(yǎng)，溫度25 ℃，光照時(shí)間12小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1 500 lx。

接種3天后檢查芽感染情況，并及時(shí)清理。大約培養(yǎng)20天左右，萌發(fā)出2～3片葉子。兩個(gè)月后，月季芽長(zhǎng)到一定高度，形成單個(gè)芽或多個(gè)芽簇狀。剪掉葉片，剪成 1.5 cm長(zhǎng)帶有芽（1～2個(gè)）的莖段，進(jìn)行繼代培養(yǎng)。每個(gè)月繼代1次，以后每月大約可以5倍的速度繁育，1年內(nèi)就可以形成大量的植株。

檢查增殖過(guò)程中穩(wěn)定性，對(duì)增殖進(jìn)行評(píng)估， 4～6周進(jìn)行1次為準(zhǔn)。檢查是否芽過(guò)度分化、玻璃化、植株矮化、老齡化、植株發(fā)黃、褐化、壞死、喪失芽分化能力等問(wèn)題。如果出現(xiàn)上述問(wèn)題，則要進(jìn)行培養(yǎng)基調(diào)整。

如果芽過(guò)度分化，應(yīng)降低6-BA濃度，如減半添加；減少硝酸銨的添加量，可按1/4 的量使用；減少蔗糖添加量，可由30 g降到20 g；減少每個(gè)植株帶芽數(shù)量，從帶2～3個(gè)芽減少為只帶1個(gè)芽；增加瓊脂添加量。

如果老化，喪失芽分化能力，可增加6-BA濃度，增加蔗糖添加量，減少瓊脂用量，轉(zhuǎn)接時(shí)不要分株，整個(gè)植株一塊轉(zhuǎn)。

出現(xiàn)以上情況，嘗試重建一個(gè)穩(wěn)定的增殖體系。

6? ?復(fù)壯培養(yǎng)

只有當(dāng)增殖體系穩(wěn)定，達(dá)到一定的數(shù)量時(shí)，才可進(jìn)行壯苗培養(yǎng)。選取無(wú)病菌、 帶3～4片葉、長(zhǎng)度約2 cm的芽，轉(zhuǎn)接到壯苗培養(yǎng)基MS+30 g/L糖， 瓊脂4.7 g/L，pH值5.8。壯苗和生根階段每瓶接種16個(gè)芽苗，剩余莖段，繼續(xù)接到繼代培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)。

轉(zhuǎn)接后放在光照12小時(shí)/天、光照強(qiáng)度? ? ?2 000 lx、溫度26 ℃、濕度50%的培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)。

7? ?生根培養(yǎng)

月季芽苗生長(zhǎng)到一定高度時(shí)，選擇健壯無(wú)傷口、帶3～4片葉、長(zhǎng)度約2 cm的芽（轉(zhuǎn)接時(shí)不要傷葉片或莖部）。用消毒過(guò)的剪刀剪下來(lái)，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基1/4MS+0.1 mg/L NAA+30 g/L糖，瓊脂4.7 g/L，pH值5.8。大約20天左右長(zhǎng)出根來(lái)，根長(zhǎng)約0.5 cm，3～4條，這時(shí)把瓶苗移到溫室進(jìn)行馴化煉苗。

8? ?馴化及移栽

從培養(yǎng)室移到溫室的瓶苗，在移栽前必須進(jìn)行馴化，需15～20天。先用遮陰網(wǎng)把瓶苗全部蓋住，白天溫度23～27 ℃，晚上20～23 ℃，濕度70%左右，使瓶苗逐漸適應(yīng)溫室環(huán)境。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的鍛煉，幼苗葉片由嫩綠色變深綠色，萌發(fā)新葉，莖變粗壯，幼苗整體長(zhǎng)高，并生出新根，表明幼苗已經(jīng)適應(yīng)外界環(huán)境。選擇陰天或晴天早上移栽。

出瓶前1天，打開(kāi)瓶塞，蓋上報(bào)紙，使瓶?jī)?nèi)濕度與溫室濕度接近，用高錳酸鉀對(duì)花盆、苗盤滅菌。準(zhǔn)備好所需的基質(zhì)，堆肥與珍珠巖按比例混合（60 ∶ 40），并用多菌靈消毒備用。

用鑷子從瓶里將幼苗取出，注意不要弄傷葉片和根部。剪掉黃葉，扔掉爛根的、死亡的、一條根的苗，選擇生長(zhǎng)健壯，根系發(fā)達(dá)、條數(shù)多的幼苗，用純凈水洗掉雜質(zhì)和培養(yǎng)基，放入10%多菌靈溶液中消毒60秒。移栽至120 mm花盆中，基質(zhì)要壓實(shí)一些，根系要充分展開(kāi)，避免根部損傷，深度適中，以免造成幼苗爛根。

栽好后，按品種擺放在苗床上，標(biāo)注品種、日期。幼苗移栽后不能直接澆水，先用噴霧器噴霧，打濕基質(zhì)表面，注意噴霧太多容易造成幼苗腐爛，噴霧不及時(shí)，幼苗葉片發(fā)黃、萎蔫、干枯，甚至死亡。天晴溫度高時(shí)，要不定時(shí)查看幼苗生長(zhǎng)情況，根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整噴霧次數(shù)，光照強(qiáng)要適當(dāng)遮陰。定期噴施殺菌劑，防止病害發(fā)生。