同位素稀釋-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定奶粉中五氯苯酚

綦 艷，李錦清，李 聰，許慶鵬

（廣東產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，廣東 順德 528300）

五氯苯酚（又名五氯酚）及其鈉鹽五氯酚鈉（又名五氯酚酸鈉）是持久性環(huán)境污染物[1]，常用作殺蟲(chóng)劑，皮革、木材防腐劑，農(nóng)業(yè)除草劑以及吸血蟲(chóng)中間宿主釘螺的滅殺等[2-4]。五氯苯酚及其鈉鹽化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，難降解，可在環(huán)境中擴(kuò)散傳播和在食物鏈中蓄積[5]，通過(guò)環(huán)境或食物鏈進(jìn)入動(dòng)植物和人體內(nèi)，當(dāng)人體內(nèi)五氯苯酚及其鈉鹽蓄積到一定量后可能會(huì)導(dǎo)致內(nèi)分泌紊亂、致癌、致畸和誘發(fā)人體器官病變等[6-8]。五氯苯酚及其鈉鹽已成為重點(diǎn)監(jiān)控的環(huán)境污染物之一，被多個(gè)國(guó)家禁用或限制使用[9]。環(huán)境中五氯苯酚及其鈉鹽的擴(kuò)散傳播可能造成的食品污染問(wèn)題也引起了人們的高度重視。我國(guó)國(guó)家食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則（2019年版）將水產(chǎn)品、畜禽肉及其副產(chǎn)品中五氯苯酚及其鈉鹽作為必檢項(xiàng)目，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第250號(hào)[10]規(guī)定食品動(dòng)物中不得檢出五氯苯酚及其鈉鹽。

五氯苯酚及其鈉鹽的檢測(cè)方法以氣相色譜法[11-13]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[14-19]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）法[20-23]為主。五氯苯酚沸點(diǎn)約為310 ℃，難氣化，分子結(jié)構(gòu)中5 個(gè)氯原子的作用使得酚羥基極性較強(qiáng)，在氣相色譜柱上保留能力強(qiáng)、難洗脫、色譜峰拖尾、峰形差、靈敏度低，一般采用乙酸酐將五氯苯酚衍生為五氯苯乙酸酯，然后用氣相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)，使之獲得較好的峰形和較高的檢測(cè)靈敏度，但衍生化操作繁瑣，衍生條件難控制，而且由于五氯苯酚的酚羥基兩邊有氯基團(tuán)，對(duì)衍生化起阻礙作用，不利于衍生化。LCMS/MS測(cè)定五氯苯酚及其鈉鹽無(wú)需衍生化，方法簡(jiǎn)單、靈敏度高，但容易受到基質(zhì)抑制作用影響，導(dǎo)致定量結(jié)果不準(zhǔn)確。為降低基質(zhì)抑制作用，需對(duì)樣品進(jìn)行凈化，常用的凈化方法有陰離子交換固相萃取法或QuEChERS法。陰離子交換固相萃取法步驟多、較繁瑣、效率低，不利于大批量樣品快速檢測(cè)，而QuEChERS法具有簡(jiǎn)單、快速、經(jīng)濟(jì)、高效等優(yōu)點(diǎn)，適用于大批量樣品快速檢測(cè)，廣泛應(yīng)用于食品中農(nóng)藥殘留和獸藥殘留檢測(cè)。

奶粉是由液體牛奶經(jīng)濃縮、干燥等加工步驟制成，使牛奶中可能存在的痕量五氯苯酚及其鈉鹽被濃縮富集，對(duì)人體的危害性更大。目前鮮見(jiàn)有針對(duì)奶粉中五氯苯酚殘留量檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)或文獻(xiàn)報(bào)道，相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)尚未開(kāi)展，因此建立奶粉中五氯苯酚的檢測(cè)方法十分必要。GB 23200.92—2016《動(dòng)物源性食品中五氯酚殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜法》[24]為食品中五氯苯酚的檢測(cè)提供了依據(jù)，然而該方法存在前處理步驟繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)、易受復(fù)雜基質(zhì)干擾，回收率低等不足，而且該方法適用范圍未包括奶粉基質(zhì)。因此，本研究建立QuEChERS萃取，Captiva EMR-Lipid脂質(zhì)去除凈化柱凈化，基質(zhì)匹配-同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法結(jié)合LC-MS/MS法測(cè)定奶粉中五氯苯酚的分析方法，縮短樣品前處理時(shí)間、簡(jiǎn)化樣品前處理過(guò)程、降低基質(zhì)效應(yīng)、提高大批量樣品的檢測(cè)效率，彌補(bǔ)奶粉基質(zhì)中五氯苯酚檢測(cè)方法缺失，以期為開(kāi)展相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

乙腈（色譜純）美國(guó)Thermo Fisher公司；甲醇（色譜純）美國(guó)Tedia公司；甲酸、乙酸銨（均為色譜純）上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；無(wú)水硫酸鎂（分析純）天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；氫氧化鉀、氫氧化鈉（均為分析純）上海阿拉丁生化科技股份有限公司；實(shí)驗(yàn)室用一級(jí)水符合GB/T 6682—2008《分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》要求；五氯苯酚的甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（質(zhì)量濃度為1000 μg/mL）、五氯苯酚-13C6標(biāo)準(zhǔn)品（純度98.0%）北京曼哈格生物科技有限公司；Captiva EMR-Lipid脂質(zhì)去除凈化柱（300 mg/3 mL）、聚四氟乙烯針式濾頭（polytetrafluoroethylene，PTFE，規(guī)格0.22 μm/13 mm）美國(guó)Agilent公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Exion LC AD/SCIEX Triple Quad 4500 LC-MS/MS儀（配電噴霧離子源（electrospray ionization，ESI））美國(guó)AB SCIEX公司；5804R高速冷凍離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf公司；MV-3000多位渦旋振蕩器 廣東晉元科技有限公司；FV64全自動(dòng)智能氮吹儀 廣州得泰儀器科技有限公司；Milli-Q去離子水發(fā)生器 美國(guó)Millipore公司；JJ500Y電子天平（精度0.01 g）福州華志科學(xué)儀器有限公司；MS105DU電子天平（精度0.1 mg）梅特勒-托利多科技（中國(guó)）有限公司；JP-C300超聲波清洗機(jī) 廣州吉普超聲波電子設(shè)備有限公司；可調(diào)單道移液器 美國(guó)Thermo Fisher公司。

1.3 方法

1.3.1 同位素標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取五氯苯酚-13C6標(biāo)準(zhǔn)品約5 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配得五氯苯酚-13C6儲(chǔ)備液質(zhì)量濃度為500 μg/mL，-16～-20 ℃條件下保存。吸取1.00 mL五氯苯酚-13C6儲(chǔ)備液置于100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，配得標(biāo)準(zhǔn)品中間液質(zhì)量濃度為5 μg/mL，-16～-20 ℃條件下保存。吸取1.00 mL五氯苯酚-13C6標(biāo)準(zhǔn)品中間液置于10 mL容量瓶中用甲醇稀釋至刻度，配得五氯苯酚-13C6的標(biāo)準(zhǔn)品使用液質(zhì)量濃度為0.5 μg/mL，-16～-20 ℃條件下保存。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制

用甲醇將質(zhì)量濃度為1000 μg/mL的五氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級(jí)稀釋，配制質(zhì)量濃度為1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品中間液和質(zhì)量濃度分別為0.1、0.01 μg/mL的五氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)品使用液，-16～-20 ℃條件下保存。精密吸取適量五氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)品中間液或標(biāo)準(zhǔn)品使用液以及五氯苯酚-13C6標(biāo)準(zhǔn)品使用液，用空白奶粉基質(zhì)提取液稀釋，配成五氯苯酚-13C6質(zhì)量濃度均為5 μg/L以及質(zhì)量濃度范圍為0.2～150 μg/L的五氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用LC-MS/MS測(cè)定。

1.3.3 樣品提取

稱取經(jīng)混合均勻的奶粉樣品2 g（精確至0.01 g）置于50 mL聚丙烯離心管中，加入100 μL質(zhì)量濃度為0.5 μg/mL的五氯苯酚-13C6標(biāo)準(zhǔn)工作液，加入10 mL一級(jí)水充分溶解奶粉，然后加入200 μL質(zhì)量濃度為5 g/100 mL的氫氧化鉀溶液或氫氧化鈉溶液，搖勻后置于40～50 ℃水浴振蕩器中振蕩水解30 min，冷卻后加入5.0 mL乙腈，用多位渦旋振蕩器以2200 r/min渦旋振蕩5 min，加入500 μL甲酸，搖勻，靜置10 min，加入1 g無(wú)水硫酸鎂后立即搖勻，繼續(xù)用多位渦旋振蕩器以2200 r/min渦旋10 min，以8000 r/min離心3 min，收集上層清液（乙腈層）作為待凈化液。

1.3.4 樣品凈化

吸取待凈化液約3 mL轉(zhuǎn)移至Captiva EMR-Lipid脂質(zhì)去除凈化柱中，控制待凈化液流出速率約為1 mL/min，棄去前1.5 mL流出液，收集后段流出液，吸取500 μL流出液置于離心管中，然后加入500 μL一級(jí)水，渦旋混勻，用PTFE過(guò)濾，供LC-MS/MS檢測(cè)。

1.3.5 色譜條件

色譜柱：Waters ACQUITY BEHC18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流動(dòng)相A：甲醇；流動(dòng)相B：5 mmol/L乙酸銨溶液（含0.05%甲酸）；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：15 μL。梯度洗脫程序：0～1.5 min，55% A、45% B；1.5～2.0 min，55%～85% A、45%～15% B；2.0～8.0 min，85% A、15% B；8.0～9.0 min，85%～55% A、15%～45% B；9.0～10.0 min，55% A、45% B。

1.3.6 質(zhì)譜條件

電離源ESI-；數(shù)據(jù)采集：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reaction monition，MRM）模式；電噴霧電壓-4500 V；脫溶劑溫度550 ℃；氣簾氣壓力30 psi；霧化氣壓力45 psi；干燥氣壓力45 psi?；衔锉Ａ魰r(shí)間、離子對(duì)、去簇電壓、碰撞能量、駐留時(shí)間見(jiàn)表1。

表1 五氯苯酚和五氯苯酚-13C6質(zhì)譜參數(shù)Table 1 MS parameters of pentachlorophenol and pentachlorophenol-13C6

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜方法優(yōu)化

五氯苯酚分子中氯原子存在35Cl和37Cl同位數(shù)，在ESI-下，五氯苯酚和五氯苯酚-13C6分別監(jiān)測(cè)到m/z相差為2的多個(gè)母離子（Q1）峰，如圖1、2所示。五氯苯酚母離子質(zhì)量數(shù)分別為262.8、264.8、266.8、268.8、270.8；五氯苯酚-13C6母離子質(zhì)量數(shù)分別為268.8、270.8、272.8、274.8、276.8。對(duì)上述各個(gè)母離子進(jìn)行碎裂，均未監(jiān)測(cè)到任何子離子（Q3）碎片，分析其原因可能是五氯苯酚和五氯苯酚-13C6分子結(jié)構(gòu)對(duì)稱（圖1、2），共軛性強(qiáng)，結(jié)構(gòu)十分穩(wěn)定，難以碎裂產(chǎn)生特征子離子碎片。

圖1 五氯苯酚母離子（Q1）圖譜Fig.1 Parent ion (Q1) spectrum of pentachlorophenol

圖2 五氯苯酚-13C6母離子（Q1）圖譜Fig.2 Parent ion (Q1) spectrum of pentachlorophenol-13C6

有文獻(xiàn)報(bào)道[25]，五氯苯酚碎裂后產(chǎn)生質(zhì)量數(shù)為35的氯離子碎片，但氯離子質(zhì)量數(shù)低，容易受雜質(zhì)離子干擾，同時(shí)也難以保證氯離子碎片在每次檢測(cè)中都具有穩(wěn)定的重復(fù)性。本實(shí)驗(yàn)選擇離子對(duì)m/z262.8/262.8、264.8/264.8、266.8/266.8、268.8/268.8作為五氯苯酚監(jiān)測(cè)離子，與田春霞等[26]的研究和GB 23200.92—2016一致。通過(guò)優(yōu)化錐孔電壓和碰撞能量后m/z264.8/264.8響應(yīng)最高，但實(shí)際樣品檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)該離子MRM圖顯示雜峰較多，m/z262.8/262.8雜峰最少，如圖3所示。因此，選擇m/z262.8/262.8作為定量離子對(duì)，其余離子作為定性離子，符合歐盟EC657/2002對(duì)串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜進(jìn)行化合物定性鑒別要求。由于五氯苯酚和內(nèi)標(biāo)五氯苯酚-13C6存在相同質(zhì)量數(shù)的母離子m/z268.8、270.8，為避免干擾定量，五氯苯酚-13C6選擇m/z272.8/272.8離子對(duì)的峰面積參與計(jì)算，其余離子作為定性離子。優(yōu)化后的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

圖3 基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)品（10 μg/L）的提取離子色譜圖Fig.3 Extracted ion chromatogram of matrix matching standard solution (10 μg/L)

2.2 前處理方法選擇與優(yōu)化

2.2.1 提取條件優(yōu)化

五氯苯酚含酚羥基呈酸性，其pKa值為4.93，在酸性條件下呈分子態(tài)，易溶于甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑；在堿性條件下呈離子態(tài)，溶于甲醇、乙腈，更易溶于水[27]，因此，利用五氯苯酚與五氯苯酚鈉可相互轉(zhuǎn)化的性質(zhì)可提高萃取回收率。由于有機(jī)試劑不能溶解奶粉樣品，無(wú)法形成分散性好的溶液，因此，只能萃取樣品表面的五氯苯酚，無(wú)法有效萃取奶粉顆粒內(nèi)部的五氯苯酚，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。本實(shí)驗(yàn)先以5 倍于奶粉質(zhì)量的水體積充分溶解奶粉，破壞奶粉顆粒，釋放奶粉中可能存在的待測(cè)化合物，然后通過(guò)酸水解法或堿水解法使可能以結(jié)合態(tài)形式存在的待測(cè)化合物轉(zhuǎn)化為游離態(tài)，再進(jìn)一步用有機(jī)試劑提取，使檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確。甲醇或乙腈均可作為提取試劑和蛋白沉淀劑，但乙腈的萃取回收率和蛋白沉淀效果優(yōu)于甲醇，因此，本實(shí)驗(yàn)選擇乙腈作為提取試劑和蛋白沉淀劑。

為避免同位素稀釋法經(jīng)內(nèi)標(biāo)折算后不能體現(xiàn)方法的回收率差異，除特殊說(shuō)明外，本實(shí)驗(yàn)涉及的回收率比較均采用基質(zhì)匹配外標(biāo)法定量，以此確定最佳的實(shí)驗(yàn)條件，最終形成最優(yōu)的同位素稀釋樣品前處理方法。

采用空白奶粉樣品添加五氯苯酚5 μg/kg，比較酸水解法和堿水解法的回收率差異。酸水解法是用甲酸替代氫氧化鉀或氫氧化鈉溶液，其余步驟按1.3.3節(jié)操作；堿水解法完全按1.3.3節(jié)操作。結(jié)果表明，堿水解法比酸水解法回收率高約25%～35%，且重復(fù)性更好。其原因可能是部分五氯苯酚與奶粉中含有羧基（—COOH）或氨基（—NH2）的物質(zhì)相互作用[28]，形成了結(jié)合態(tài)，堿水解法可以將結(jié)合態(tài)、分子態(tài)等形式存在的待測(cè)化合物充分轉(zhuǎn)化為易溶于水的五氯苯酚鈉，有利于充分提取，回收率更高，重復(fù)性更好；酸水解法對(duì)結(jié)合態(tài)存在的待測(cè)化合物作用不明顯，回收率偏低。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇堿水解法。

2.2.2 QuEChERS方法優(yōu)化

QuEChERS法[29]萃取與固相萃取法相比，更簡(jiǎn)單、更高效、成本更低、重復(fù)性更好，同時(shí)具備萃取和初步凈化樣品作用，避免了固相萃取法步驟繁瑣[30]、耗時(shí)長(zhǎng)、堵塞柱子以及重復(fù)性不穩(wěn)定等缺點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)優(yōu)先選擇QuEChERS法萃取，適用于大批量樣品快速檢測(cè)。

QuEChERS萃取常用的鹽析試劑有無(wú)水硫酸鎂、無(wú)水硫酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，比較無(wú)水硫酸鎂、無(wú)水硫酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉對(duì)五氯苯酚萃取回收率的影響，以基質(zhì)匹配外標(biāo)法定量計(jì)算回收率，結(jié)果表明，無(wú)水硫酸鎂作鹽析試劑時(shí)，回收率最高。進(jìn)一步比較無(wú)水硫酸鎂添加量為1、2、3、4 g對(duì)回收率的影響。結(jié)果表明，當(dāng)溶解奶粉的水與無(wú)水硫酸鎂添加量比例為5∶1（mL/g）時(shí)，回收率最佳；當(dāng)無(wú)水硫酸鎂添加量超過(guò)該比例時(shí)，回收率有所下降，這可能是由于過(guò)量無(wú)水硫酸鎂加入瞬間局部水分被迅速吸收，形成的顆粒物吸附五氯苯酚。

多次萃取可提高目標(biāo)化合物的回收率，但前處理耗時(shí)長(zhǎng)，需要消耗更多有機(jī)試劑。本實(shí)驗(yàn)使用同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法檢測(cè)，僅需QuEChERS法萃取一次，回收率達(dá)到90%以上，操作簡(jiǎn)單、顯著縮短樣品前處理時(shí)間，有利于大批量樣品快速檢測(cè)。

2.2.3 樣品凈化

奶粉樣品含有大量蛋白質(zhì)、約16%脂肪以及約1%～3%磷脂。QuEChERS法同時(shí)起到萃取和去除無(wú)機(jī)鹽、水溶性雜質(zhì)等凈化作用，但脂肪和磷脂也會(huì)被乙腈提取出來(lái)，這些雜質(zhì)對(duì)五氯苯酚檢測(cè)起基質(zhì)抑制作用，需進(jìn)一步凈化。Captiva EMR-Lipid脂質(zhì)去除凈化柱[31]可同時(shí)去除乙腈提取液中脂肪和磷脂，有效降低基質(zhì)抑制，與GB 23200.92—2016的MAX固相萃取柱凈化相比，整個(gè)凈化過(guò)程省略了活化、淋洗、洗脫等步驟，簡(jiǎn)化凈化流程，直接收集流出液即完成凈化操作，顯著提高前處理效率，且樣品加標(biāo)絕對(duì)回收率比GB 23200.92—2016高約10%～15%，因此，選擇采用Captiva EMR-Lipid脂質(zhì)去除凈化柱對(duì)樣品提取液作進(jìn)一步凈化。

用空白基質(zhì)提取液配制相同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別用尼龍66（材質(zhì)為聚己二酰己二胺）和聚四氟乙烯材質(zhì)的有機(jī)系針式濾頭過(guò)濾，比較不同材質(zhì)濾頭對(duì)五氯苯酚的吸附作用。結(jié)果表明，尼龍66有機(jī)系針式濾頭對(duì)五氯苯酚有吸附，五氯苯酚損失約30%～35%；聚四氟乙烯有機(jī)系針式濾頭對(duì)五氯苯酚無(wú)吸附。其原因可能是尼龍66濾膜材質(zhì)的胺基（—NH—）與五氯苯酚的酚羥基結(jié)合，使部分五氯苯酚保留在濾膜上，導(dǎo)致五氯苯酚損失，但將過(guò)濾后的濾液用同一個(gè)濾頭再過(guò)濾一次，損失率下降至10%左右，可能是由于再次過(guò)濾能將保留在濾膜上的五氯苯酚洗脫下來(lái)；聚四氟乙烯不存在與五氯苯酚發(fā)生反應(yīng)的基團(tuán)，所以五氯苯酚無(wú)損失。因此，選擇使用PTFE材質(zhì)的有機(jī)系針式濾頭過(guò)濾。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 基質(zhì)效應(yīng)

除不加同位素內(nèi)標(biāo)外，按照優(yōu)化的前處理方法對(duì)添加五氯苯酚3 μg/kg的奶粉樣品進(jìn)行6 個(gè)平行測(cè)定，制得樣品待測(cè)液，考察基質(zhì)效應(yīng)。分別用乙腈、甲醇、空白基質(zhì)提取液配制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，分別對(duì)樣品待測(cè)液進(jìn)行外標(biāo)法定量，計(jì)算平均回收率，見(jiàn)表2。結(jié)果表明，以乙腈、甲醇配制的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線定量的平均回收率分別為33%、25%；以空白基質(zhì)提取液配制的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線定量（基質(zhì)匹配外標(biāo)法定量）的回收率為63%；表明存在較強(qiáng)的基質(zhì)抑制作用。為降低或消除基質(zhì)抑制作用，本實(shí)驗(yàn)采用空白基質(zhì)提取液與同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法相結(jié)合配制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線進(jìn)行定量，平均回收率為90%，有效降低基質(zhì)抑制作用，使定量結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠。由于五氯苯酚未能碎裂形成子離子碎片，實(shí)際樣品的提取離子色譜圖顯示雜峰較多（圖4），采用同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法可提高定性鑒別準(zhǔn)確度。

圖4 空白奶粉樣品添加15.0 μg/kg標(biāo)準(zhǔn)品的提取離子色譜圖Fig.4 Extracted ion chromatogram of spiked blank sample at 15.0 μg/kg

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制方法對(duì)回收率的影響Table 2 Influence of standard curve preparation methods on PCP recovery

2.3.2 線性關(guān)系、檢出限和定量限

五氯苯酚的空白基質(zhì)提取液-同位素稀釋內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線在質(zhì)量濃度0.2～150 μg/L范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系，線性方程為y＝0.24256x+0.04470，相關(guān)系數(shù)r＝0.9960。以不含五氯苯酚的奶粉樣品添加標(biāo)準(zhǔn)品的方式考察方法檢出限和定量限，分別以定量離子3 倍信噪比和10 倍信噪比響應(yīng)值對(duì)應(yīng)的含量作為方法檢出限和定量限，方法檢出限和定量限分別為0.5、1.5 μg/kg。在1.3.5節(jié)和1.3.6節(jié)條件下測(cè)定，獲得的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)品（10 μg/L）的提取離子色譜圖（圖3）。

2.3.3 回收率和精密度

在2 g（精確至0.01 g）不含五氯苯酚的奶粉樣品中分別添加質(zhì)量濃度為0.1 μg/mL五氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液30、60 μL，1 μg/mL五氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液30 μL（添加水平分別相當(dāng)于樣品中五氯苯酚含量為1.5、3.0、15.0 μg/kg），然后在每個(gè)樣品中添加100 μL質(zhì)量濃度為0.5 μg/mL的五氯苯酚-13C6標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)添加水平平行測(cè)定6 次，空白基質(zhì)提取液-同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法定量，考察方法回收率和精密度，結(jié)果見(jiàn)表3，平均回收率為90.3%～119.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）為5.8%～7.5%，回收率和精密度均符合GB/T 27404—2008附錄F之F.1回收率和F.3精密度要求，滿足奶粉中五氯苯酚殘留量檢測(cè)要求。1.3.5節(jié)和1.3.6節(jié)條件下測(cè)定，獲得的空白奶粉樣品添加15.0 μg/kg標(biāo)準(zhǔn)品的提取離子色譜圖。

2.4 實(shí)際樣品測(cè)定

采用建立的方法對(duì)45 批奶粉樣品（嬰幼兒配方奶粉1 段15 批次，2段10 批次，3段10 批次，中老年奶粉10 批次）進(jìn)行檢測(cè)，均未檢出五氯苯酚。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立QuEChERS萃取，Captiva EMR-Lipid脂質(zhì)去除凈化柱凈化，基質(zhì)匹配-同位素稀釋內(nèi)標(biāo)法結(jié)合LC-MS/MS測(cè)定奶粉中五氯苯酚的分析方法。在水浴加熱條件下，采用堿水解法將奶粉中可能以結(jié)合態(tài)、分子態(tài)形式存在的待測(cè)化合物充分轉(zhuǎn)化為易溶于水的五氯苯酚鈉，在乙腈存在條件下，用甲酸將五氯苯酚鈉轉(zhuǎn)化為不溶于水、易溶于乙腈的五氯苯酚，再以無(wú)水硫酸鎂為鹽析試劑的QuEChERS法萃取，用Captiva EMR-Lipid脂質(zhì)去除凈化柱對(duì)樣品提取液作進(jìn)一步凈化，凈化液與水按1∶1比例混合后，用LC-MS/MS測(cè)定，以基質(zhì)匹配-同位數(shù)稀釋內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線法定量，本方法具有操作簡(jiǎn)單、快速、回收率高、準(zhǔn)確可靠等優(yōu)點(diǎn)，彌補(bǔ)了奶粉中五氯苯酚殘留量檢測(cè)方法缺失，為開(kāi)展相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)提供技術(shù)支持。