基于指紋圖譜和4種指標(biāo)成分的經(jīng)典名方一貫煎基準(zhǔn)樣品量值傳遞分析

胡鈺熒，李淑萍，熱依木古麗·阿布都拉，阿吉艾克拜爾·艾薩，吳 濤*

基于指紋圖譜和4種指標(biāo)成分的經(jīng)典名方一貫煎基準(zhǔn)樣品量值傳遞分析

胡鈺熒1, 2，李淑萍1，熱依木古麗·阿布都拉1，阿吉艾克拜爾·艾薩1，吳 濤1*

1. 中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所 新疆特有藥用資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊 830011 2. 中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京 100049

建立經(jīng)典名方一貫煎（Yiguan Decoction）基準(zhǔn)樣品HPLC指紋圖譜，并對(duì)其指標(biāo)性成分（5-羥甲基糠醛、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、毛蕊花糖苷）進(jìn)行含量測(cè)定，研究一貫煎基準(zhǔn)樣品量值傳遞規(guī)律，為復(fù)方制劑研制奠定基礎(chǔ)。制備15批一貫煎基準(zhǔn)樣品，建立其HPLC指紋圖譜，明確并歸屬特征峰；對(duì)一貫煎基準(zhǔn)樣品中指標(biāo)性成分進(jìn)行含量測(cè)定，分析指標(biāo)性成分從飲片-基準(zhǔn)樣品的傳遞規(guī)律。15批一貫煎基準(zhǔn)樣品HPLC指紋圖譜相似度＞0.800，標(biāo)定了29個(gè)共有峰，并對(duì)各共有峰進(jìn)行藥材歸屬，其中1號(hào)峰為北沙參、麥冬、當(dāng)歸、生地黃、枸杞子共有峰，2號(hào)峰為北沙參、麥冬、當(dāng)歸、生地黃、枸杞子、川楝子共有峰，3號(hào)峰為北沙參、當(dāng)歸、生地黃、枸杞子共有峰，4、13號(hào)峰為生地黃、枸杞子共有峰，5號(hào)峰為北沙參、枸杞子、川楝子共有峰，6號(hào)峰為生地黃、川楝子共有峰，7、8、10、17、24號(hào)峰為當(dāng)歸、枸杞子共有峰，11、20號(hào)峰為當(dāng)歸、生地黃共有峰，12號(hào)峰為當(dāng)歸、枸杞子、川楝子共有峰，15號(hào)峰為枸杞子、川楝子共有峰，18號(hào)峰為北沙參、枸杞子共有峰，19號(hào)峰為麥冬、當(dāng)歸、枸杞子、川楝子共有峰，29號(hào)峰為當(dāng)歸、生地黃、枸杞子、川楝子共有峰，14、22、25～28號(hào)峰為當(dāng)歸專(zhuān)屬峰，23號(hào)峰為生地黃專(zhuān)屬峰，9、16、21號(hào)峰為枸杞子專(zhuān)屬峰。指標(biāo)性成分5-羥甲基糠醛、洋川芎內(nèi)酯I、阿魏酸、毛蕊花糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為90.3～144.1、75.6～166.2、105.4～200.3、149.9～293.3 μg/g，轉(zhuǎn)移率分別為15.53%～27.11%、38.36%～62.68%、16.23%～31.37%、31.41%～55.65%；測(cè)定15批一貫煎干膏率為42.95%～49.93%，傳遞率為84.39%～96.15%。采用指紋圖譜、指標(biāo)性成分含量測(cè)定及干膏率相結(jié)合的模式，對(duì)經(jīng)典名方一貫煎基準(zhǔn)樣品的量值傳遞過(guò)程進(jìn)行分析，可初步擬定一貫煎基準(zhǔn)樣品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為其后續(xù)新藥研發(fā)提供參考。

經(jīng)典名方；一貫煎；基準(zhǔn)樣品；量值傳遞；HPLC；指紋圖譜；5-羥甲基糠醛；阿魏酸；洋川芎內(nèi)酯I；毛蕊花糖苷；北沙參；麥冬；當(dāng)歸；地黃；枸杞子；川楝子；轉(zhuǎn)移率

經(jīng)典名方一貫煎系滋陰疏肝之良方，出自清代魏之琇《續(xù)名醫(yī)類(lèi)案·心胃痛門(mén)》[1]，由北沙參、麥冬、當(dāng)歸、生地黃、枸杞子、川楝子6味中藥組成，因其主治肝證有奇效而被收錄于《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》[2]和《古代經(jīng)典名方關(guān)鍵信息表（7首方劑）》[3]。其原方重用君藥生地滋陰養(yǎng)血、補(bǔ)益肝腎；當(dāng)歸、枸杞養(yǎng)血滋陰柔肝；北沙參、麥冬滋養(yǎng)肺胃，養(yǎng)陰生津，佐金平木，扶土制木；四藥共為臣藥，再以川楝子為佐藥，疏肝泄熱，理氣止痛，復(fù)其條達(dá)之性[4]；諸藥合用，共奏疏肝解郁、滋陰養(yǎng)血之功。由于滋陰疏肝系一貫煎傳統(tǒng)功效，沿用自古至今，因而一貫煎在臨床上多用于治療肝硬化、肝纖維化、慢性萎縮性胃炎、干燥綜合征等消化科、內(nèi)科疾病，應(yīng)用廣泛且具有顯著療效[4-5]。

劉昌孝院士提出了質(zhì)量標(biāo)志物（quality markers，Q-Marker）的概念用以作為中藥的質(zhì)控成分，并從質(zhì)量傳遞與溯源、成分特有性、成分有效性、復(fù)方配伍環(huán)境以及成分可測(cè)性5個(gè)方面對(duì)中藥Q-Marker的內(nèi)涵及其發(fā)現(xiàn)和確定思路及方法進(jìn)行了論述[6-8]。課題組前期基于質(zhì)量傳遞與溯源原則、成分特有性原則、成分有效性原則、復(fù)方配伍環(huán)境原則以及成分可測(cè)性原則5個(gè)方面，從一貫煎中預(yù)測(cè)分析到17個(gè)Q-Marker，其中包括有機(jī)酸類(lèi)成分阿魏酸、苯乙醇苷類(lèi)成分毛蕊花糖苷、香豆素類(lèi)成分佛手柑內(nèi)酯等[9]。

目前，一貫煎的相關(guān)研究多集中在藥理作用、藥效機(jī)制及臨床應(yīng)用等方面，關(guān)于以基準(zhǔn)樣品量值傳遞為核心的質(zhì)量控制方面鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。因而，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)制備15批一貫煎基準(zhǔn)樣品，建立其HPLC指紋圖譜，進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)及特征峰歸屬分析，并結(jié)合5-羥甲基糠醛、洋川芎內(nèi)酯I、阿魏酸、毛蕊花糖苷4個(gè)指標(biāo)性成分含量、轉(zhuǎn)移率以及干膏率的傳遞關(guān)系，進(jìn)行飲片到基準(zhǔn)樣品的量值傳遞相關(guān)性質(zhì)量控制研究并深入分析，以期承載經(jīng)典名方的有效性和安全性，為后續(xù)復(fù)方制劑的開(kāi)發(fā)奠定實(shí)踐基礎(chǔ)并提供理論支撐。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Sartorius BT 25S型十萬(wàn)分之一電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；SK7210LHC型超聲清洗儀，上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司；FTS-10A型陶瓷煎藥鍋，廣東省一壺萬(wàn)里電器實(shí)業(yè)有限公司；SHB-III型循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；H22-X3型九陽(yáng)電陶爐，杭州九陽(yáng)生活電器有限公司；FD-2A型真空冷凍干燥機(jī)，北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；Agilent型高效液相色譜儀，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司，包含二極管陣列檢測(cè)器（DAD）和Chromeleon 7.2色譜工作站；LC-LX-H185C型臺(tái)式高速離心機(jī)，上海力辰科技有限公司。

1.2 藥材與試劑

北沙參、麥冬、當(dāng)歸、生地黃、枸杞子和川楝子藥材經(jīng)中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所劉戈宇研究員鑒定，分別為傘形科珊瑚菜屬植物珊瑚菜Fr. Schmidtex Miq.的干燥根、百合科沿階草屬植物麥冬(L. f) Ker-Gawl.的干燥塊根、傘形科當(dāng)歸屬植物當(dāng)歸(Oliv.) Diels的干燥根、玄參科地黃屬植物地黃Libosch.的新鮮或干燥塊根、茄科枸杞屬植物寧夏枸杞L.的干燥成熟果實(shí)和楝科楝屬植物川楝Sieb. et Zucc.的干燥成熟果實(shí)。

單味飲片質(zhì)量經(jīng)前期檢測(cè)均符合要求，產(chǎn)地信息見(jiàn)表1。

表1 一貫煎組方藥材來(lái)源信息

Table 1 Source information of Yiguan Decoction prescription medicinal materials

序號(hào)北沙參麥冬當(dāng)歸生地黃枸杞子川楝子 批號(hào)產(chǎn)地批號(hào)產(chǎn)地批號(hào)產(chǎn)地批號(hào)產(chǎn)地批號(hào)產(chǎn)地批號(hào)產(chǎn)地 1BSSCF01內(nèi)蒙古赤峰MDMY01四川綿陽(yáng)DGMX01甘肅岷縣SDHJZ01河南焦作GQZZN01寧夏中寧CLZJY01四川簡(jiǎn)陽(yáng) 2BSSCF02內(nèi)蒙古赤峰MDMY02四川綿陽(yáng)GSMX02甘肅岷縣SDHJZ02河南焦作GQZZN02寧夏中寧CLZJY02四川簡(jiǎn)陽(yáng) 3BSSCF03內(nèi)蒙古赤峰MDMY03四川綿陽(yáng)GSMX03甘肅岷縣SDHJZ03河南焦作GQZZN03寧夏中寧CLZJY03四川簡(jiǎn)陽(yáng) 4BSSCF04內(nèi)蒙古赤峰MDMY04四川綿陽(yáng)GSMX04甘肅岷縣SDHJZ04河南焦作GQZZN04寧夏中寧CLZJY04四川簡(jiǎn)陽(yáng) 5BSSCF05內(nèi)蒙古赤峰MDMY05四川綿陽(yáng)GSMX05甘肅岷縣SDHJZ05河南焦作GQZZN05寧夏中寧CLZJY05四川簡(jiǎn)陽(yáng) 6BSSAG01河北安國(guó)MDHZ01浙江杭州DGLJ01云南麗江SDHXY01陜西咸陽(yáng)GQZZW01寧夏中衛(wèi)CLZCD01四川成都 7BSSAG02河北安國(guó)MDHZ02浙江杭州DGLJ02云南麗江SDHXY02陜西咸陽(yáng)GQZZW02寧夏中衛(wèi)CLZCD02四川成都 8BSSAG03河北安國(guó)MDHZ03浙江杭州DGLJ03云南麗江SDHXY03陜西咸陽(yáng)GQZYS01青海玉樹(shù)CLZCD03四川成都 9BSSAG04河北安國(guó)MDHZ04浙江杭州DGLJ04云南麗江SDHXY04陜西咸陽(yáng)GQZYS02青海玉樹(shù)CLZCD04四川成都 10BSSAG05河北安國(guó)MDHZ05浙江杭州DGLJ05云南麗江SDHXY05陜西咸陽(yáng)GQZYS03青海玉樹(shù)CLZCD05四川成都 11BSSSD01山東萊陽(yáng)MDST01四川三臺(tái)DGDC01甘肅宕昌SDHBA01河南博愛(ài)GQZYS04青海玉樹(shù)CLZCQ01重慶 12BSSSD02山東萊陽(yáng)MDST02四川三臺(tái)GSDC02甘肅宕昌SDHBA02河南焦作GQZYM01甘肅玉門(mén)CLZCQ02重慶 13BSSSD03山東萊陽(yáng)MDST03四川三臺(tái)GSDC03甘肅宕昌SDHBA03河南焦作GQZYM02甘肅玉門(mén)CLZCQ03重慶 14BSSSD04山東萊陽(yáng)MDST04四川三臺(tái)GSDC04甘肅宕昌SDHBA04河南焦作GQZHB01河北安國(guó)CLZHB01湖北恩施 15BSSSD05山東萊陽(yáng)MDST05四川三臺(tái)GSDC05甘肅宕昌SDHBA05河南焦作GQZHB02河北安國(guó)CLZHB02湖北恩施

對(duì)照品毛蕊花糖苷（批號(hào)21123001）、藁本內(nèi)酯（批號(hào)22031804）、咖啡酸（批號(hào)20110501），均購(gòu)自成都普菲德生物科技有限公司；對(duì)照品阿魏酸（批號(hào)110773-201313）、槲皮素（批號(hào)100081-201610）、5-羥甲基糠醛（批號(hào)111626-202114）、東莨菪內(nèi)酯（批號(hào)110768-200504），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；對(duì)照品洋川芎內(nèi)酯I（批號(hào)21012505）、綠原酸（批號(hào)15060713）、傘形花內(nèi)酯（批號(hào)17042603）均購(gòu)自上海純優(yōu)生物科技有限公司；各對(duì)照品質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥94%。乙腈、甲酸，色譜純，購(gòu)自Fisher公司；甲醇，分析純，購(gòu)自北京化工廠；怡寶純凈水，購(gòu)自華潤(rùn)怡寶飲料（中國(guó)）有限公司；其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 一貫煎基準(zhǔn)樣品的制備

《醫(yī)方絜度》[10]記載一貫煎處方為“北沙參、麥冬、當(dāng)歸各一錢(qián)五分，枸杞、生地各三錢(qián)，川楝子二錢(qián)?！薄豆糯?jīng)典名方關(guān)鍵信息表（7首方劑）》[3]明確處方劑量與制法如下：北沙參、麥冬、當(dāng)歸各5.60 g，生地黃、枸杞子各11.19 g，川楝子7.46 g，水煎服。因《按古代經(jīng)典名方目錄管理的中藥復(fù)方制劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》[11]明確水煎服應(yīng)參照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥煎藥室管理規(guī)范》[12]的相關(guān)規(guī)定，即藥材浸泡30 min以上、加水量應(yīng)沒(méi)過(guò)藥材1.0～1.5 cm為宜，滋補(bǔ)類(lèi)藥材應(yīng)煎煮40～60 min，并結(jié)合具體情況加以優(yōu)化。

本課題組前期以5-羥甲基糠醛、阿魏酸、毛蕊花糖苷和洋川芎內(nèi)酯I含量和干膏率為參考指標(biāo)，賦以權(quán)重系數(shù)對(duì)一貫煎基準(zhǔn)樣品制備工藝進(jìn)行綜合評(píng)分，通過(guò)料液比、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)、提取方式、干燥方式等單因素篩選，最終確定一貫煎基準(zhǔn)樣品制備方法：處方藥材加12倍量，浸泡30 min，煎煮2次，武火加熱煮沸后，文火煎煮60 min，采用100目紗布濾過(guò)，合并濾液，濃縮至400 mL，即為一貫煎標(biāo)準(zhǔn)煎液；精密移取一貫煎標(biāo)準(zhǔn)煎液5 mL于25 mL西林瓶中，置于?80 ℃預(yù)冷2 h的冷凍干燥機(jī)，凍干溫度?80 ℃，真空度（4±1）Pa，冷凍干燥24 h，取出壓蓋密塞，即得一貫煎基準(zhǔn)樣品（一貫煎凍干粉）。將北沙參、麥冬、當(dāng)歸、生地黃、枸杞子、川楝子各15批飲片采用隨機(jī)數(shù)表法組合，編號(hào)為S1～S15，具體組合信息見(jiàn)表2。按上述工藝制備15批一貫煎基準(zhǔn)樣品以及單味飲片、單味飲片陰性樣品。

表2 15批一貫煎基準(zhǔn)樣品隨機(jī)組合信息

Table 2 Random combination information of 15 batches of Yiguan Decoction benchmark samples

序號(hào)飲片批號(hào) 北沙參麥冬當(dāng)歸生地黃枸杞子川楝子 S1BSSCF01MDST04DGDC05SDHXY02GQZZN05CLZCQ01 S2BSSAG01MDMY04DGDC02SDHJZ03GQZYS02CLZCD01 S3BSSSD02MDHZ02DGDC04SDHJZ05GQZZN03CLZJY02 S4BSSSD05MDHZ05DGLJ01SDHBA02GQZHB01CLZCD04 S5BSSCF05MDMY05DGMX05SDHJZ01GQZZN04CLZJY05 S6BSSCF04MDMY02DGMX01SDHXY01GQZYM02CLZCQ03 S7BSSAG02MDHZ04DGLJ03SDHBA04GQZZW01CLZHB01 S8BSSCF03MDST01DGDC01SDHXY05GQZYS01CLZCD02 S9BSSAG04MDMY01DGLJ05SDHXY03GQZZW02CLZCD05 S10BSSAG05MDHZ01DGMX02SDHBA03GQZHB02CLZJY04 S11BSSSD04MDST02DGDC03SDHXY04GQZYS04CLZHB02 S12BSSSD01MDHZ03DGMX03SDHJZ04GQZNY02CLZJY01 S13BSSAG03MDST05DGLJ04SDHJZ02GQZYS03CLZCQ02 S14BSSCF02MDST03DGMX04SDHBA05GQZYM01CLZJY03 S15BSSSD03MDMY03DGLJ02SDHBA01GQZZN01CLZCD03

2.2 一貫煎基準(zhǔn)樣品指紋圖譜的建立

2.2.1 色譜條件 SunFire?C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫：0～30 min，4%～10%乙腈；30～36 min，10%～16%乙腈；36～51 min，16%～62%乙腈；51～52 min，62%～90%乙腈；52～57 min，90%乙腈；體積流量1 mL/min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)280、321 nm；進(jìn)樣量10 μL。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱(chēng)定一貫煎基準(zhǔn)樣品凍干粉約1 g，精密加入10 mL 50%甲醇溶液，超聲30 min，于13 000 r/min離心5 min（離心半徑6 cm），取上清液過(guò)0.22 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 取5-羥甲基糠醛、綠原酸、咖啡酸、傘形花內(nèi)酯、東莨菪內(nèi)酯、阿魏酸、毛蕊花糖苷、洋川芎內(nèi)酯I、藁本內(nèi)酯、槲皮素對(duì)照品適量，以50%甲醇溶液制成質(zhì)量濃度均為40 μg/mL的混合對(duì)照品溶液，即得。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 取編號(hào)為S1的一貫煎基準(zhǔn)樣品1份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，以6號(hào)峰（5-羥甲基糠醛）為參照（參照峰選擇依據(jù)：以峰形對(duì)稱(chēng)，分離度優(yōu)，無(wú)拖尾現(xiàn)象，且峰面積穩(wěn)定為選擇依據(jù)，選定5-羥甲基糠醛作為參照峰），計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均＜0.58%，相對(duì)峰面積的RSD均＜0.02%，表明儀器精密度良好。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取編號(hào)為S1的一貫煎基準(zhǔn)樣品1份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，以6號(hào)峰（5-羥甲基糠醛）為參照，計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均＜0.08%，相對(duì)峰面積的RSD均＜0.07%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取編號(hào)為S1的一貫煎基準(zhǔn)樣品1份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件分別在制備后0、3、6、9、12、18、24 h進(jìn)樣，以6號(hào)峰（5-羥甲基糠醛）為參照，計(jì)算各共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均＜0.12%，相對(duì)峰面積的RSD均＜0.09%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 指紋圖譜建立及相似度評(píng)價(jià) 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備15批一貫煎基準(zhǔn)樣品的供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，將15批一貫煎基準(zhǔn)樣品色譜圖導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版），以S1為參照?qǐng)D譜，采用中位數(shù)法，時(shí)間窗設(shè)為0.1 min，S1～S15的HPLC指紋圖譜見(jiàn)圖1。15批一貫煎基準(zhǔn)樣品（S1～S15）指紋圖譜相似度分別為0.957、0.826、0.934、0.904、0.866、0.965、0.948、0.922、0.970、0.849、0.862、0.850、0.853、0.910、0.926，結(jié)果見(jiàn)表3。除S2、S5、S10～S13，其余批次基準(zhǔn)樣品相似度均在0.900以上，結(jié)果表明藥材的產(chǎn)地會(huì)直接影響一貫煎基準(zhǔn)樣品指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)，道地產(chǎn)區(qū)藥材和主產(chǎn)區(qū)藥材存在一定差異性。

根據(jù)15批一貫煎基準(zhǔn)樣品，擬合出對(duì)照指紋圖譜（R）。從中共標(biāo)定了29個(gè)共有峰，通過(guò)與對(duì)照品比對(duì)，指認(rèn)了其中10個(gè)共有峰，分別為6號(hào)峰5-羥甲基糠醛、16號(hào)峰綠原酸、18號(hào)峰咖啡酸、20號(hào)峰傘形花內(nèi)酯、21號(hào)峰東莨菪內(nèi)酯、22號(hào)峰阿魏酸、23號(hào)峰毛蕊花糖苷、24號(hào)峰槲皮素、26號(hào)峰洋川芎內(nèi)酯I、28號(hào)峰藁本內(nèi)酯，一貫煎基準(zhǔn)樣品對(duì)照指紋圖譜及混合對(duì)照品HPLC圖譜見(jiàn)圖2。

圖1 15批一貫煎基準(zhǔn)樣品的HPLC指紋圖譜

表3 15批一貫煎基準(zhǔn)樣品指紋圖譜相似度

Table 3 Fingerprint similarities of 15 batches of benchmark samples of Yiguan Decoction

樣品編號(hào)相似度 S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10S11S12S13S14S15R S11.0000.8200.9520.8340.7630.9370.8130.9040.9390.8900.8340.8200.7760.9660.8550.957 S20.8201.0000.7600.7660.5780.8380.8460.8100.8160.6510.6450.8740.6650.7850.6570.826 S30.9520.7601.0000.8400.8220.7290.8010.8960.9370.8070.8110.7920.8170.9540.8920.934 S40.8340.7660.8401.0000.9230.8400.8810.7320.8330.6430.6670.7830.7170.8720.7740.904 S50.7630.5780.8220.9231.0000.8220.8350.6670.8190.6650.6810.6060.6950.8470.8310.866 S60.9370.8380.7290.8400.8221.0000.8960.7350.9370.8070.8110.7920.8170.9540.8920.965 S70.8130.8460.8010.8810.8350.8961.0000.8440.9200.7950.8190.7880.7840.9440.8530.948 S80.9040.8100.8960.7320.6670.7350.8441.0000.9150.7810.7960.8670.9170.9090.7950.922 S90.9390.8160.9370.8330.8190.9370.9200.9151.0000.8310.8470.7980.8480.9620.8890.970 S100.8900.6510.8070.6430.6650.8070.7950.7810.8311.0000.9660.5960.6760.8280.9440.849 S110.8340.6450.8110.6670.6810.8110.8190.7960.8470.9661.0000.6080.7090.8490.9370.862 S120.8200.8740.7920.7830.6060.7920.7880.8670.7980.5960.6081.0000.8650.8090.6160.850 S130.7760.6650.8170.7170.6950.8170.7840.9170.8480.6760.7090.8651.0000.8270.7230.853 S140.9660.7850.9540.8720.8470.9540.9440.9090.9620.8280.8490.8090.8271.0000.8960.910 S150.8550.6570.8920.7740.8310.8920.8530.7950.8890.9440.9370.6160.7230.8961.0000.926 R0.9570.8260.9340.9040.8660.9650.9480.9220.9700.8490.8620.8500.8530.9100.9261.000

2.2.8 飲片-基準(zhǔn)樣品指紋圖譜峰歸屬關(guān)系分析與傳遞 分別取北沙參、麥冬、當(dāng)歸、生地黃、枸杞子和川楝子飲片凍干粉約1 g，按照“2.2.2”方法制備飲片供試品溶液，同法制備各飲片陰性樣品供試品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，建立北沙參、麥冬、當(dāng)歸、生地黃、枸杞子和川楝子單味飲片及單味飲片陰性樣品的指紋圖譜。通過(guò)比對(duì)一貫煎基準(zhǔn)樣品與單味飲片、單味飲片陰性樣品的HPLC圖譜，發(fā)現(xiàn)單味飲片的特征峰均可傳遞到基準(zhǔn)樣品的對(duì)照?qǐng)D譜中，結(jié)果見(jiàn)圖3。圖譜中14、22（阿魏酸）、25、26（洋川芎內(nèi)酯I）、27、28號(hào)峰（藁本內(nèi)酯）為當(dāng)歸專(zhuān)屬峰，23號(hào)峰（毛蕊花糖苷）為生地黃專(zhuān)屬峰，9、16（綠原酸）、21號(hào)峰為枸杞子專(zhuān)屬峰；此外，1號(hào)峰歸屬于北沙參、麥冬、當(dāng)歸、生地黃、枸杞子，2號(hào)峰屬于北沙參、麥冬、當(dāng)歸、生地黃、枸杞子、川楝子，3號(hào)峰歸屬于北沙參、當(dāng)歸、生地黃、枸杞子，4、13號(hào)峰歸屬于生地黃、枸杞子，5號(hào)峰屬于北沙參、枸杞子、川楝子，6號(hào)峰（5-羥甲基糠醛）屬于生地黃、川楝子，7、8、10、17、24號(hào)峰屬于當(dāng)歸、枸杞子，11、20號(hào)峰屬于當(dāng)歸、生地黃，12號(hào)峰屬于當(dāng)歸、枸杞子、川楝子，15號(hào)峰屬于枸杞子、川楝子，18號(hào)峰歸屬于北沙參、枸杞子，19號(hào)峰歸屬于麥冬、當(dāng)歸、枸杞子、川楝子，29號(hào)峰歸屬于當(dāng)歸、生地黃、枸杞子、川楝子。

6-5-羥甲基糠醛 16-綠原酸 18-咖啡酸 20-傘形花內(nèi)酯 21-東莨菪內(nèi)酯 22-阿魏酸 23-毛蕊花糖苷 24-槲皮素 26-洋川芎內(nèi)酯I 28-藁本內(nèi)酯

確定單味飲片和基準(zhǔn)樣品的特征峰歸屬，計(jì)算單味飲片和基準(zhǔn)樣品的特征峰相對(duì)峰面積并進(jìn)行分析比較，結(jié)果見(jiàn)表4、5。飲片-基準(zhǔn)樣品指紋圖譜的傳遞在特征峰個(gè)數(shù)與峰面積方面是比較穩(wěn)定的，標(biāo)定的各單味藥飲片的主要物質(zhì)群均能完整傳遞到基準(zhǔn)樣品，表明一貫煎基準(zhǔn)樣品制備工藝和供試品溶液制備方法未造成飲片主要物質(zhì)群丟失。由此可見(jiàn)，大部分一貫煎基準(zhǔn)樣品特征峰和主要物質(zhì)群在飲片與基準(zhǔn)樣品間傳遞較為穩(wěn)定，歸屬關(guān)系清晰。

2.3 一貫煎基準(zhǔn)樣品多成分含量測(cè)定

根據(jù)“2.2.8”項(xiàng)研究結(jié)果，選擇5-羥甲基糠醛（生地黃、川楝子），洋川芎內(nèi)酯I和阿魏酸（當(dāng)歸），毛蕊花糖苷（生地黃）為指標(biāo)性成分，建立了一貫煎基準(zhǔn)樣品的含量測(cè)定方法。

2.3.1 色譜條件 SunFire?C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫：0～6 min，2%～4%乙腈；6～36 min，4%～16%乙腈；36～51 min，16%～62%乙腈；51～52 min，62%～90%乙腈；52～57 min，90%乙腈；體積流量1 mL/min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)280、321 nm；進(jìn)樣量10 μL。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 取5-羥甲基糠醛、洋川芎內(nèi)酯I、阿魏酸、毛蕊花糖苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50%甲醇溶液制成質(zhì)量濃度分別為158.4、82.4、142.4、103.2 μg/mL的混合對(duì)照品溶液，備用。

圖3 一貫煎基準(zhǔn)樣品的特征峰歸屬

2.3.3 供試品溶液的制備 與“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法一致。

表4 飲片-基準(zhǔn)樣品中特征峰的歸屬

Table4 Attributionof characteristic peaks in decoction pieces and benchmark samples

峰號(hào)特征峰歸屬峰號(hào)特征峰歸屬 北沙參麥冬當(dāng)歸生地黃枸杞子川楝子北沙參麥冬當(dāng)歸生地黃枸杞子川楝子 1+++++?16????+? 2++++++17??+?+? 3+?+++?18+???+? 4???++?19?++?++ 5+???++20??++?? 6???+?+21????+? 7??+?+?22??+??? 8??+?+?23???+?? 9????+?24??+?+? 10??+?+?25??+??? 11??++??26??+??? 12??+?++27??+??? 13???++?28??+??? 14??+???29??++++ 15????++

表5 飲片-基準(zhǔn)樣品中特征峰相對(duì)峰面積的傳遞

Table5 Transmission of relative peak area of characteristic peaks in decoction pieces and benchmark samples

峰號(hào)相對(duì)峰面積峰號(hào)相對(duì)峰面積 北沙參麥冬當(dāng)歸生地黃枸杞子川楝子基準(zhǔn)樣品北沙參麥冬當(dāng)歸生地黃枸杞子川楝子基準(zhǔn)樣品 10.200.400.100.510.25?0.4316????0.10?0.10 21.001.000.321.001.000.482.9117??0.04?0.12?0.15 30.28?0.120.340.75?0.55180.06???0.13?0.12 4???0.160.46?0.2919?0.390.12?0.440.030.38 50.18???0.570.190.6720??0.180.13??0.24 6???0.86?1.001.0021????0.22?0.06 7??0.35?0.21?0.2022??1.00???0.81 8??0.06?0.17?0.1123???0.08??0.05 9????0.80?0.1224??0.06?0.18?0.03 10??0.03?0.86?0.7625??0.09???0.05 11??0.150.04??0.2326??0.45???0.48 12??0.02?0.160.510.2227??0.18???0.16 13???0.060.22?0.2928??0.09???0.05 14??0.35???0.3129??0.020.140.180.210.18 15????0.280.030.31

2.3.4 線性關(guān)系考察 取不同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，以進(jìn)樣質(zhì)量為橫坐標(biāo)（），峰面積為縱坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算回歸方程，結(jié)果分別為5-羥甲基糠醛＝74.795－81.621，＝0.999 8，線性范圍1.2～158.4 μg/mL；洋川芎內(nèi)酯I＝41.866－69.877，＝0.999 1，線性范圍4.7～82.4 μg/mL；阿魏酸＝33.342＋7.366 1，＝0.999 2，線性范圍2.2～142.4 μg/mL；毛蕊花糖苷＝3.709 2＋68.882，＝0.999 0，線性范圍2.1～103.2 μg/mL。

2.3.5 精密度考察 取一貫煎基準(zhǔn)樣品（S1）供試品溶液1份，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算各指標(biāo)性成分峰面積的RSD值，結(jié)果5-羥甲基糠醛、洋川芎內(nèi)酯I、阿魏酸、毛蕊花糖苷峰面積的RSD分別為0.49%、0.37%、0.37%、0.37%，表明儀器精密度良好。

2.3.6 重復(fù)性考察 取一貫煎基準(zhǔn)樣品（S1），按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算各指標(biāo)性成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD值，結(jié)果5-羥甲基糠醛、洋川芎內(nèi)酯I、阿魏酸、毛蕊花糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD分別為0.32%、0.34%、0.34%、0.34%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.7 穩(wěn)定性考察 取一貫煎基準(zhǔn)樣品（S1）供試品溶液1份，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件分別在制備后0、3、6、9、12、18、24 h進(jìn)樣，計(jì)算各指標(biāo)性成分峰面積的RSD值，結(jié)果5-羥甲基糠醛、洋川芎內(nèi)酯I、阿魏酸、毛蕊花糖苷峰面積的RSD分別為0.42%、0.60%、0.44%、0.44%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.8 加樣回收率考察 精密稱(chēng)定已測(cè)知指標(biāo)性成分含量的一貫煎基準(zhǔn)樣品適量，共6份，分別加入一定量的對(duì)照品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算4種指標(biāo)性成分的加樣回收率及RSD值，結(jié)果5-羥甲基糠醛、洋川芎內(nèi)酯I、阿魏酸、毛蕊花糖苷平均加樣回收率分別為88.78%、94.86%，94.25%、96.53%，RSD分別為2.02%、1.62%、2.71%、2.94%，表明該方法加樣回收率良好。

2.3.9 4種指標(biāo)性成分含量測(cè)定與量值傳遞分析 取15批一貫煎基準(zhǔn)樣品、當(dāng)歸、生地黃和川楝子單飲片凍干粉，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)行指標(biāo)成分含量測(cè)定，計(jì)算指標(biāo)成分從飲片-一貫煎基準(zhǔn)樣品的轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見(jiàn)表6。

結(jié)果表明，15批基準(zhǔn)樣品（S1～S15）中5-羥甲基糠醛質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90.3～144.1 μg/g，洋川芎內(nèi)酯I質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75.6～166.2 μg/g，阿魏酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為105.4～200.3 μg/g，毛蕊花糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為149.9～293.3 μg/g；5-羥甲基糠醛、洋川芎內(nèi)酯I、阿魏酸、毛蕊花糖苷的轉(zhuǎn)移率分別為15.53%～27.11%、38.36%～62.68%、16.23%～31.37%、31.41%～55.65%。結(jié)果5-羥甲基糠醛、洋川芎內(nèi)酯I、阿魏酸、毛蕊花糖苷4個(gè)指標(biāo)成分的含量和轉(zhuǎn)移率大都位于其均值的±30%范圍內(nèi)，說(shuō)明基準(zhǔn)樣品的制備工藝相對(duì)穩(wěn)定可行，指標(biāo)成分可穩(wěn)定從飲片傳遞至基準(zhǔn)樣品中。

表6 15批一貫煎基準(zhǔn)樣品指標(biāo)性成分含量測(cè)定及轉(zhuǎn)移率

Table6 Content determination and transfer rate of indicator components in 15 batches of Yiguan Decoction benchmark samples

編號(hào)5-羥甲基糠醛/(μg?g?1)洋川芎內(nèi)酯I/(μg?g?1)阿魏酸/(μg?g?1)毛蕊花糖苷/(μg?g?1) 飲片基準(zhǔn)樣品轉(zhuǎn)移率/%飲片基準(zhǔn)樣品轉(zhuǎn)移率/%飲片基準(zhǔn)樣品轉(zhuǎn)移率/%飲片基準(zhǔn)樣品轉(zhuǎn)移率/% S1368.090.324.54230.8100.443.50647.7105.416.27395.5189.447.89 S2549.6123.422.45247.6109.444.18417.5121.929.20547.6292.453.40 S3725.1112.615.53232.4107.646.30627.4129.720.67505.9272.053.77 S4695.3117.516.90210.598.346.70951.3154.416.23523.1279.853.49 S5623.7110.217.67378.7166.243.89601.7144.123.95809.8278.234.35 S6531.1102.019.21263.4125.847.76484.4115.423.82413.4204.749.52 S7647.6116.217.94174.694.253.95765.0151.819.84662.9263.139.69 S8401.5100.825.11233.0103.444.38410.3128.731.37459.1255.555.65 S9353.795.927.11147.192.262.681 009.3200.319.85448.7245.854.78 S10453.6111.224.51374.6143.738.36618.7124.520.12798.5274.834.41 S11534.6107.020.01181.299.755.02693.2130.718.85329.6149.945.48 S12613.1114.018.59300.9131.943.84709.8144.620.37466.5245.852.69 S13702.0144.120.53177.396.554.43963.3156.516.25588.2262.744.66 S14725.2120.116.56257.2115.444.87694.8128.718.52893.1280.531.41 S15629.8125.619.94144.175.652.46721.6147.920.50893.1293.332.84 均值570.3112.720.44236.9110.748.15687.7139.021.05582.3252.542.05

S1～S15中S5和S15的洋川芎內(nèi)酯I、S9的阿魏酸和S11的毛蕊花糖苷含量略超出其均值的70%～130%，但也在范圍邊緣相差并不是很大，其原因可能與藥材的產(chǎn)地相關(guān)。研究表明，岷當(dāng)歸中苯酞類(lèi)成分洋川芎內(nèi)酯I、云當(dāng)歸阿魏酸和懷地黃毛蕊花糖苷含量均高于其他產(chǎn)區(qū)[13-17]，S5中當(dāng)歸來(lái)自甘肅岷縣，S9、S15中當(dāng)歸來(lái)自云南麗江，S11中地黃來(lái)自陜西咸陽(yáng)，受產(chǎn)地影響S5和S15中洋川芎內(nèi)酯I、S9中阿魏酸和S11中毛蕊花糖苷含量略超出均值的±30%。

2.4 干膏率的測(cè)定及傳遞關(guān)系分析

取“2.1”項(xiàng)中制備的一貫煎標(biāo)準(zhǔn)煎液和一貫煎各單味飲片標(biāo)準(zhǔn)煎液，精密量取標(biāo)準(zhǔn)煎液25 mL，置于已干燥至恒定質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，恒溫水浴干燥后，105 ℃干燥3 h，后置于干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱(chēng)定質(zhì)量，計(jì)算15批一貫煎基準(zhǔn)樣品和一貫煎各單味飲片的干膏率。

干膏率＝/

表示所得干膏質(zhì)量，表示煎液總體積，表示取樣體積，表示處方飲片質(zhì)量

理論干膏率=∑(單味飲片干膏率×單味飲片質(zhì)量/全方飲片總質(zhì)量）

干膏轉(zhuǎn)移率＝干膏率/理論干膏率

根據(jù)上述公式計(jì)算干膏率、理論干膏率和干膏率轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見(jiàn)表7。結(jié)果表明，15批一貫煎干膏率為42.95%～49.93%，平均干膏率為46.03%，理論干膏率為44.67%～55.06%，平均理論干膏率為50.16%，干膏傳遞率為84.39%～96.15%，平均干膏率傳遞率為91.84%，各批次一貫煎干膏率、理論干膏率和干膏傳遞率均位于均值的90%～110%，表明飲片中成分可穩(wěn)定傳遞至基準(zhǔn)樣品。

表7 15批一貫煎基準(zhǔn)樣品干膏率及傳遞率

Table7 Dry extract yield and transfer rate of 15 batches of Yiguan Decoction benchmark samples

編號(hào)干膏率/%傳遞率/% 北沙參麥冬當(dāng)歸生地黃枸杞子川楝子理論值實(shí)際值 S119.8220.5647.7060.1847.3159.0645.8143.0693.99 S220.5316.9053.0462.8443.5451.8044.6742.9596.15 S320.1616.5744.2965.0662.4353.8848.9344.9591.87 S414.3415.4447.1367.2463.5458.3149.9345.9492.00 S525.4913.8044.0172.0172.6461.8954.6049.9391.44 S626.1017.8746.9162.7966.6258.6351.3447.9793.43 S714.0415.5753.7369.7350.7059.9548.4844.2591.26 S825.7710.6349.3473.6969.7064.7955.0646.4684.39 S918.3411.3953.0471.9661.9350.7150.1745.6891.05 S1023.1713.3651.1070.5460.5461.7351.8448.8794.27 S1122.6421.9955.0369.9558.2445.3249.9745.9591.97 S1215.9915.9952.6367.6163.4163.9251.8147.2291.14 S1316.3116.3144.5766.6063.1649.6748.3443.0789.09 S1423.2916.1450.6470.1160.7442.6449.0245.2492.27 S1518.6313.1645.1665.2770.0966.8052.4048.9093.32 均值20.3115.7149.2267.7060.9750.6150.1646.0391.84

3 討論

經(jīng)典名方基準(zhǔn)樣品作為后續(xù)復(fù)方制劑研究及質(zhì)量控制的參照，其指標(biāo)性成分的選擇在基準(zhǔn)樣品質(zhì)量控制中具有重要意義。一貫煎處方中生地黃為君藥，能夠滋陰養(yǎng)血、補(bǔ)益肝腎；當(dāng)歸、枸杞、北沙參、麥冬四藥共為臣藥，具有養(yǎng)血滋陰柔肝、滋養(yǎng)肺胃、養(yǎng)陰生津的功效；川楝子為佐藥，疏肝泄熱，理氣止痛。諸藥合用，共奏疏肝解郁、滋陰養(yǎng)血之功。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，當(dāng)歸中阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I均能夠抑制促炎細(xì)胞因子的分泌，激活抗氧化反應(yīng)元件調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄，改善肝臟病理狀態(tài)，從而起到保護(hù)肝臟的作用[18-20]。

生地黃和川楝子共有的5-羥甲基糠醛可通過(guò)抑制肝臟促炎因子腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的產(chǎn)生，避免或緩解肝氧化損傷，從而起到一定的肝臟保護(hù)作用[21]。研究還發(fā)現(xiàn)，生地黃中毛蕊花糖苷能夠保護(hù)肝損傷，降低丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的活性和肝指數(shù)[22-23]。因此，基于指標(biāo)成分與藥效關(guān)聯(lián)性分析，故選擇5-羥甲基糠醛、阿魏酸、毛蕊花糖苷、洋川芎內(nèi)酯I作為含量測(cè)定中一貫煎的指標(biāo)性成分。

本實(shí)驗(yàn)以指紋圖譜、指標(biāo)成分和干膏率的傳遞為核心，探討飲片-一貫煎基準(zhǔn)樣品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性的傳遞規(guī)律。結(jié)果表明，15批一貫煎基準(zhǔn)樣品歸屬了29個(gè)共有峰，確定了其中10個(gè)成分并明確藥材歸屬，分別為6號(hào)峰5-羥甲基糠醛、16號(hào)峰綠原酸、18號(hào)峰咖啡酸、20號(hào)峰傘形花內(nèi)酯、21號(hào)峰東莨菪內(nèi)酯、22號(hào)峰阿魏酸、23號(hào)峰毛蕊花糖苷、24號(hào)峰槲皮素、26號(hào)峰洋川芎內(nèi)酯I和28號(hào)峰藁本內(nèi)酯。

但《中國(guó)藥典》2020年版上記載的藥材質(zhì)控成分并未被囊括于29個(gè)特征峰中，其原因?yàn)辂湺恤斔箍稍碥赵痪邆銱PLC-UV檢測(cè)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，地黃中梓醇和地黃苷D、枸杞子中甜菜堿以及川楝子中川楝素在低波段方才能被檢出，而低波段存在倒峰、末端吸收、基線漂移和氨基酸、多糖超高吸收等干擾。而當(dāng)歸中洋川芎內(nèi)酯I、地黃與川楝子共有的5-羥甲基糠醛在280 nm下吸收較大且峰形和分離度良好，當(dāng)歸中阿魏酸、藁本內(nèi)酯和地黃毛蕊花糖苷在321 nm下吸收較高且峰形與分離度均能滿足檢測(cè)要求。

另外，定性的綠原酸、咖啡酸、傘形花內(nèi)酯、東莨菪內(nèi)酯和槲皮素也可在280、321 nm下順利檢出，因此，指紋圖譜和成分含量測(cè)定檢測(cè)波長(zhǎng)選定為280、321 nm。對(duì)于上述不足之處，本課題組今后將進(jìn)一步深入研究，結(jié)合HPLC-ELSD方法對(duì)一貫煎非UV成分（甾體皂苷類(lèi)和氨基酸類(lèi)成分）展開(kāi)指紋圖譜研究和含量測(cè)定方，應(yīng)用LC-MS（低波段下吸收較大的成分）進(jìn)行全面質(zhì)量控制，力求一貫煎質(zhì)控指標(biāo)包含《中國(guó)藥典》2020年版[24]單味藥項(xiàng)下規(guī)定的指標(biāo)性成分，為一貫煎基準(zhǔn)樣品質(zhì)量評(píng)價(jià)提供更加全面的理論依據(jù)。

以5-羥甲基糠醛、洋川芎內(nèi)酯I、阿魏酸和毛蕊花糖苷含量為參考指標(biāo)，通過(guò)比較不同提取溶劑及劑量、不同提取方式、不同提取時(shí)間，最終篩選得到一貫煎基準(zhǔn)樣品供試品溶液制備方法：精密稱(chēng)定一貫煎基準(zhǔn)樣品適量，以50%甲醇超聲提取，離心，即得。S5和S15的洋川芎內(nèi)酯I、S9的阿魏酸和S11的毛蕊花糖苷含量略超出均值的70%～130%，但也在范圍邊緣相差并不是很大，推測(cè)緣由可能與藥材的產(chǎn)地相關(guān)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，岷當(dāng)歸洋川芎內(nèi)酯I[13]、云當(dāng)歸阿魏酸[14]均為成分識(shí)別標(biāo)志，不同產(chǎn)區(qū)中岷當(dāng)歸苯酞類(lèi)成分含量最高[15]，云當(dāng)歸阿魏酸含量最高[16]，S5中當(dāng)歸來(lái)自甘肅岷縣，S9、S15中當(dāng)歸來(lái)自云南麗江，受產(chǎn)地影響S5中洋川芎內(nèi)酯I和S9中阿魏酸含量略超出均值的130%，S15中洋川芎內(nèi)酯I含量略低于均值的70%。研究表明，不同產(chǎn)區(qū)中河南產(chǎn)地黃中毛蕊花糖苷的含量普遍較高[17]，而河南為地黃道地產(chǎn)區(qū)，S11中地黃來(lái)自陜西咸陽(yáng)，并非道地產(chǎn)區(qū)藥材，受產(chǎn)地影響S11中地黃的毛蕊花糖苷含量略低于均值的70%。因此，在制備一貫煎基準(zhǔn)樣品期間，需考慮藥材產(chǎn)地以保證基準(zhǔn)樣品質(zhì)量穩(wěn)定性，并動(dòng)態(tài)監(jiān)控成分含量。

4 結(jié)論

一貫煎依托“理、法、方、藥”，組方嚴(yán)謹(jǐn)、用藥精煉，具有滋陰疏肝之功效，主治肝腎陰虛證。為保證經(jīng)典名方質(zhì)量療效一致，需以基準(zhǔn)樣品為核心，建立從飲片到中間體的質(zhì)量控制體系，而基準(zhǔn)樣品質(zhì)量穩(wěn)定的前提是處方所用飲片的質(zhì)量需均一、穩(wěn)定[25]。本實(shí)驗(yàn)采用指紋圖譜、指標(biāo)性成分含量測(cè)定及干膏率相結(jié)合的模式，對(duì)經(jīng)典名方一貫煎基準(zhǔn)樣品的量值傳遞過(guò)程進(jìn)行研究分析，初步建立了科學(xué)穩(wěn)定的基準(zhǔn)樣品質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，以期為經(jīng)典名方一貫煎的后續(xù)開(kāi)發(fā)及相關(guān)制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Quantitative value transfer analysis of benchmark sample of classical prescription Yiguan Decoction based on fingerprint chromatogram and four indicator components

HU Yu-ying1, 2, LI Shu-ping1, ABDULA Rahima1, AISA Hajiakber1, WU Tao1

1. State Key Laboratory of Xinjiang Indigenous Medicinal Plants Resource Utilization, Xinjiang Technical Institute of Physics and Chemistry, Chinese Academy of Sciences, Urumqi 830011, China 2. University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China

To establish the HPLC fingerprints of the benchmark samples of Yiguan Decoction (YD, 一貫煎), determine the contents of its index components (5-hydroxymethylfurfural, ferulic acid, senkyunolide I and verbascoside), and study the transfer pattern of YD benchmark samples, so as to lay the foundation for the development of compound formulations.Fifteen batches of YD benchmark samples were prepared, then their HPLC fingerprints were established and their characteristic peaks were identified and assigned. The contents of the index components in the YD benchmark samples were determined, and the transfer pattern of the indicator components from the decoction pieces to the benchmark samples was analyzed.The similarity of the fingerprints of the 15 batches of YD benchmark samples was greater than 0.800, and 29 common peaks were calibrated and the medicinal materials of each common peak were assigned. Among these peaks, peak 1 was the common peak of Beishashen (, GR), Maidong (, OR), Danggui (, ASR), Dihuang (, RR) and Gouqizi (, LF); Peak 2 was the common peak of GR, OR, ASR, RR, LF and Chuanlianzi (, TF); Peak 3 was the common peak of GR, ASR, RR and LF, peaks of 4 and 13 were the common peaks of RR and LF, peak 5 was the common peak of GR, LF and TF, peak 6 was the common peak of RR and TF, and peaks of 7, 8, 10, 17 and 24 were common peaks of ASR and LF, peaks of 11 and 20 were common peaks of ASR and RR, peak 12 was common peak of ASR, LF and TF, peak 15 was common peak of LF and TF, peak 18 was common peak of GR and LF, peak 19 was common peak of OR, ASR, LF and TF, and peak 29 was common peak of ASR, RR, LF and TF, peaks of 14, 22, 25—28 were exclusive to ASR, peak 23 was exclusive to RR, and peaks of 9, 16 and 21 were exclusive to LF. The mass fractions of 5-hydroxymethylfurfural, senkyunolide I, ferulic acid, and verbascoside ranged from 90.3 to 144.1 μg/g, 75.6 to 166.2 μg/g, 105.4 to 200.3 μg/g, 149.9 to 293.3 μg/g, respectively. The transfer rates ranged from 15.53% to 27.11%, 38.36% to 62.68%, 16.23% to 31.37%, 31.41% to 55.65%, respectively. The dry extract yield of the benchmark samples was in the range from 42.95% to 49.93%, and the transmission rate was in the range from 84.39% to 96.15%.The combination of fingerprinting, dry extract yield and determination of the content of the indicator components was used to analyze the quantitative transfer process of the benchmark samples of the classical formula YD, which can initially formulate the quality standard of the benchmark samples of YD and provide reference for its future development of new drugs.

classical prescription; Yiguan Decoction; benchmark sample; quantitative transfer; HPLC; fingerprints; 5-hydroxymethylfurfural; ferulic acid; senkyunolide I; verbascoside;;;;;;;transmission rate

R283.6

A

0253 - 2670(2023)18 - 5880 - 12

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.18.006

2023-03-21

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2020YFE0205600）；中國(guó)科學(xué)院青年創(chuàng)新促進(jìn)會(huì)優(yōu)秀會(huì)員項(xiàng)目（Y202086）；中國(guó)科學(xué)院青年創(chuàng)新促進(jìn)會(huì)會(huì)員項(xiàng)目（2022442）；王寬誠(chéng)教育基金會(huì)資助項(xiàng)目

胡鈺熒，碩士研究生，從事中藥質(zhì)量控制研究。E-mail: huyuying20@mails.ucas.ac.cn

吳 濤，研究員，博士生導(dǎo)師，從事中藥民族藥新藥研發(fā)。E-mail: wutao@ms.xjb.ac.cn

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]