地中海貧血患者輸注不同Rh抗原匹配紅細(xì)胞后的血清學(xué)特征及免疫功能變化

簡曉毅　胡靜美　梁少清

【摘要】? 目的? ? 調(diào)查地中海貧血患者輸注不同Rh抗原匹配紅細(xì)胞（RBC）后的血清學(xué)特征及免疫功能變化。方法? ? 選取中山市博愛醫(yī)院2020年1月—2021年6月收治的地中海貧血患者200例為研究對象，輸注不同Rh抗原匹配紅細(xì)胞，按照受試者Rh抗原與獻(xiàn)血者Rh抗原匹配程度，分為Rh抗原完全匹配型（n=67）、部分匹配型（n=90）和Rh抗原隨機(jī)組（n=43）。比較不同Rh抗原抗體匹配程度組的不規(guī)則抗體陽性率、直接抗人球蛋白試驗（DAT）陽性率、不良輸血反應(yīng)率和輸血有效率；比較不同Rh抗原抗體匹配程度組輸血后免疫功能指標(biāo)（白細(xì)胞介素-2、IgM、CD₄⁺、CD₈⁺、CD₄⁺/CD₈⁺）。結(jié)果? ? 3組間的DAT陽性率和不規(guī)則抗體陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），隨機(jī)組的DAT陽性率和不規(guī)則抗體陽性率最高；3組間的輸血效果有效率和不良反應(yīng)發(fā)生率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），完全匹配組的輸血效果有效率最高，隨機(jī)組的不良輸血反應(yīng)發(fā)生率最高。3組患者輸血后白細(xì)胞介素-2、IgM均升高，CD₄⁺、CD₈⁺和CD₄⁺/CD₈⁺均降低，且隨機(jī)組白細(xì)胞介素-2、IgM最高，CD₄⁺、CD₈⁺和CD₄⁺/CD₈⁺最低（P<0.05）。結(jié)論? ? 在臨床工作中，應(yīng)盡量選擇與受試者Rh抗原相匹配的紅細(xì)胞輸注，減少不規(guī)則抗體產(chǎn)生和反復(fù)輸血對免疫功能的損傷，提高輸血有效率。

【關(guān)鍵詞】? 地中海貧血； Rh抗原； 紅細(xì)胞； 不規(guī)則抗體陽性率

中圖分類號：R556? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1672-1721（2023）20-0093-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.20.031

地中海貧血是一類單基因遺傳性溶血性血液疾病，全世界中有1%～5%的人口是地中海貧血基因攜帶者，我國廣西地區(qū)有24.5%的人口攜帶地中海貧血基因[1]。骨髓干細(xì)胞移植是唯一可徹底治愈地中海貧血的方法，但配型困難且治療費(fèi)用高昂，因此臨床上主要采用反復(fù)輸注紅細(xì)胞血制品維持患者機(jī)體血紅細(xì)胞的濃度，避免機(jī)體缺氧。地中海貧血往往需要終生輸血治療，長期反復(fù)的輸血治療可引起不規(guī)則抗體產(chǎn)生，隨著輸血次數(shù)的增加，該抗體的含量也相應(yīng)上升，導(dǎo)致患者難以找到配血相合的紅細(xì)胞血制品，對后期治療造成嚴(yán)重不良影響[2]。目前，地中海貧血患者的紅細(xì)胞制品輸注治療主要依靠受試者Rh抗原與獻(xiàn)血者Rh抗原匹配程度來進(jìn)行，可分為Rh抗原完全匹配、部分匹配和Rh抗原隨機(jī)。本研究擬對3種Rh抗原抗體匹配程度患者的血清學(xué)特征及其免疫功能變化進(jìn)行分析，明確何種受試者Rh抗原與獻(xiàn)血者Rh抗原匹配程度更為安全、有效。

1? ? 資料與方法

1.1? ? 一般資料? ? 選取中山市博愛醫(yī)院2020年1月—2021年6月收治的地中海貧血患者200例為研究對象，輸注不同Rh抗原匹配紅細(xì)胞。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合地中海貧血的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；自愿行輸注不同Rh抗原匹配紅細(xì)胞治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：研究期間轉(zhuǎn)院治療、終止輸血治療的患者。按照受試者Rh抗原與獻(xiàn)血者Rh抗原匹配程度，分為Rh抗原完全匹配型（n=67）、部分匹配型（n=90）和Rh抗原隨機(jī)組（n=43）。其中Rh抗原完全匹配型（n=67）：男性30例，女性37例，年齡2～20歲，平均年齡（14.15±4.71）歲；部分匹配型（n=90）：男性43例，女性47例，年齡1～19歲，平均年齡（13.30±4.43）歲；Rh抗原隨機(jī)組（n=43）：男性23例，女性20例，年齡3～18歲，平均年齡（13.58±3.69）歲。3組患者一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2? ? 研究方法? ? 所有患者在輸注不同Rh抗原匹配紅細(xì)胞后48 h抽取靜脈血，進(jìn)行血常規(guī)、直接抗人球蛋白試驗（DAT）、不規(guī)則抗體鑒定，檢測血清白細(xì)胞介素-2、IgM、T淋巴細(xì)胞表面分子CD₄⁺、CD₈⁺的含量并計算CD₄⁺/CD₈⁺比值，統(tǒng)計所有患者從血液輸注日期至結(jié)束后的28 d內(nèi)發(fā)生的不良反應(yīng)例數(shù)和種類。

1.3? ? 觀察指標(biāo)? ? 比較不同Rh抗原抗體匹配程度組的不規(guī)則抗體陽性率、直接DAT陽性率、不良輸血反應(yīng)率和輸血有效率；比較不同Rh抗原抗體匹配程度組輸血后免疫功能指標(biāo)（白細(xì)胞介素-2、IgM、CD₄⁺、CD₈⁺、CD₄⁺/CD₈⁺）。

1.3.1? ? 不規(guī)則抗體的篩查和鑒定? ? 采用全自動血型儀（瑞士Bio-Rad公司，型號IH-1000）及其配套的低離子抗人球蛋白卡對不規(guī)則抗體進(jìn)行篩查；對不規(guī)則抗體陽性的標(biāo)本采用微柱凝膠法和試管法（長春博德生物技術(shù)有限公司）進(jìn)行鑒定，并與譜細(xì)胞（廣東營安生物科技有限公司）反應(yīng)格局進(jìn)行對比，明確RBC對應(yīng)抗原和不規(guī)則抗體的類別。由同一位具有10年以上不規(guī)則抗體鑒定檢驗的輸血科醫(yī)師，嚴(yán)格按照使用說明書進(jìn)行操作和鑒定。

1.3.2? ? DAT陽性率? ? 首先用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次，再采用低離子介質(zhì)將洗滌過的紅細(xì)胞配制成0.8%的紅細(xì)胞懸液，取50 μL紅細(xì)胞懸液到微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡中，專用離心機(jī)（亞達(dá)美公司，轉(zhuǎn)速1 030 r/min，10 min），觀察結(jié)果。由于抗原抗體凝集反應(yīng)，紅細(xì)胞凝集，分子量增大，不能通過微柱管中的凝膠介質(zhì)，停留在其中上部，由此可鑒定為DAT陽性。

1.3.3? ? 免疫功能? ? 白細(xì)胞介素-2、IgM采用酶聯(lián)免疫法（南京建成生物技術(shù)有限公司）進(jìn)行檢測；CD₄⁺、CD₈⁺采用流式細(xì)胞儀（美國Beckman公司）檢測。

1.3.4? ? 輸血有效率? ? 輸血后的血紅蛋白（Hb）含量采用全自動血細(xì)胞分析儀（深圳邁瑞醫(yī)療生物有限公司，型號BC-6900）進(jìn)行檢測，輸血后Hb升高值≥Hb升高預(yù)計值的80%為有效，其余為無效。Hb升高預(yù)計值（g/L）=供血者的Hb含量（g/L）×輸入量（L）/患者的體質(zhì)量（kg）×90%（輸入量需要以全血量為標(biāo)準(zhǔn)，將各種紅細(xì)胞制劑折算為其相對應(yīng)的全血量；供血者若為兒童，按照0.09 L/kg進(jìn)行計算；其中90%為檢驗誤差）。

1.4? ? 統(tǒng)計學(xué)方法? ? 采用SPSS 24.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以x±s表示，行t檢驗和單因素方差分析，計數(shù)資料以百分比表示，行χ²檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2? ? 結(jié)果

2.1? ? 地中海貧血患者血清學(xué)特征? ? 3組間的DAT陽性率（χ²=18.785，P<0.001）和不規(guī)則抗體陽性率（χ²=25.624，P<0.001）差異有統(tǒng)計學(xué)意義，隨機(jī)組的DAT陽性率和不規(guī)則抗體陽性率最高，具體不規(guī)則抗體類型見表1。

2.2? ? 地中海貧血患者輸血效果和不良輸血反應(yīng)發(fā)生情況? ? 3組間的輸血效果有效率（χ²=12.585，P=0.001）和不良反應(yīng)發(fā)生率（χ²=18.775，P<0.001）差異有統(tǒng)計學(xué)意義，完全匹配組的輸血有效率最高，隨機(jī)組的不良輸血反應(yīng)發(fā)生率最高，具體不良輸血反應(yīng)類型見表2。

2.3? ? 輸血前后免疫功能變化? ? 3組患者輸血前白細(xì)胞介素-2、IgM、CD4+和CD8+差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；輸血后白細(xì)胞介素-2、IgM升高，CD₄⁺、CD₈⁺和CD₄⁺/CD₈⁺降低，且隨機(jī)組白細(xì)胞介素-2、IgM最高，CD₄⁺、CD₈⁺和CD₄⁺/CD₈⁺最低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表3。

3? ? 討論

不規(guī)則抗體是指患者血清中含有除抗-A、抗-B外的其他血型的抗體，大多數(shù)為IgG抗體，可由反復(fù)輸血、Rh陰性孕婦孕育Rh陽性胎兒等免疫刺激因素引發(fā)，后期可引起血型鑒定正反不符、新生兒溶血性疾病、血液輸注無效等嚴(yán)重不良后果[4]。目前，人類現(xiàn)存的36個紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中，Rh血型是除ABO血型之外的最重要、最復(fù)雜的血型之一，其中的E、e、C、c、D不僅是臨床上的常見血型，而且輸血不良反應(yīng)發(fā)生率也較高[5-6]。因此，對輸注不同Rh抗原匹配紅細(xì)胞后的地中海貧血患者的血清學(xué)特征進(jìn)行調(diào)查，對于日后輸血安全具有重要意義。

本研究中，不規(guī)則抗體陽性率為15%（30/200），其中Rh血型不規(guī)則抗原最高，其次為MNS血型，與洪毅等[7]研究報道一致。其中，隨機(jī)組的DAT陽性率和不規(guī)則抗體陽性率最高，完全匹配組的輸血效果有效率最高，隨機(jī)組的不良輸血反應(yīng)發(fā)生率最高，與賀峰等[8]研究報道一致。CD₄⁺和CD₈⁺是機(jī)體內(nèi)兩類重要的免疫細(xì)胞表面因子，而CD₄⁺/CD₈⁺比值的增高與降低可表示機(jī)體免疫功能的亢進(jìn)和低下。輸血后，3組患者白細(xì)胞介素-2、IgM升高，CD₄⁺、CD₈⁺和CD₄⁺/CD₈⁺比值降低，隨機(jī)組白細(xì)胞介素-2、IgM最高，CD₄⁺、CD₈⁺、CD₄⁺/CD₈⁺比值最低。這是因為反復(fù)輸血治療不僅可增加機(jī)體單核-巨噬細(xì)胞的負(fù)荷，使得巨噬細(xì)胞Ⅱ類抗原表達(dá)減少，促進(jìn)了白細(xì)胞介素-2和IgM的表達(dá)和釋放；而且可產(chǎn)生外源性沉淀產(chǎn)物，誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞凋亡，使得CD₄⁺、CD₈⁺比值降低，機(jī)體免疫功能被抑制，導(dǎo)致輸血效果降低[9-10]。在臨床工作中，有時可能達(dá)不到Rh抗原抗體完全相合的治療原則。有研究表明，即使在抗原抗體完全相合的情況下，患者每輸注1 U的異體紅細(xì)胞，有1.0%～1.6%的概率會產(chǎn)生不規(guī)則抗體[11]。因此，患者在首次輸血治療后有可能已經(jīng)產(chǎn)生了不規(guī)則抗體，隨機(jī)組產(chǎn)生不規(guī)則抗體的概率最高。首次產(chǎn)生的不規(guī)則抗體含量較低，并無特異的臨床表現(xiàn)，隨著輸血治療次數(shù)的增加，不規(guī)則抗體含量上升，可出現(xiàn)發(fā)熱、過敏，甚至嚴(yán)重溶血反應(yīng)，嚴(yán)重影響輸血效果。DAT陽性是由于患者自身抗體或機(jī)體接收異源紅細(xì)胞產(chǎn)生的免疫復(fù)合物黏附在紅細(xì)胞膜表面所導(dǎo)致的，IgG-紅細(xì)胞復(fù)合物更容易被巨噬細(xì)胞識別、吞噬，導(dǎo)致急慢性溶血反應(yīng)的發(fā)生[12]。

綜上所述，在臨床工作中，應(yīng)盡量選擇與受試者Rh抗原相匹配的紅細(xì)胞輸注，減少不規(guī)則抗體產(chǎn)生和反復(fù)輸血對免疫功能的損傷，提高輸血有效率。

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（收稿日期：2023-04-13）