晁遠(yuǎn)　李美波　宋安輝

【摘要】? 目的? ? 分析在宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌中P16蛋白表達(dá)水平與臨床意義。方法? ? 收集2019年5月—2020年12月惠州市第六人民醫(yī)院上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌、宮頸炎患者共142例，根據(jù)疾病類型分組，宮頸炎組21例、宮頸癌組63例、宮頸上皮內(nèi)瘤變組58例，經(jīng)免疫組化染色，檢測(cè)所有受試者P16水平，分析P16表達(dá)水平與宮頸病變的關(guān)系。結(jié)果? ? 本組142例受試者中，P16陽(yáng)性檢出97例（68.31%），陰性檢出45例（31.69%）；宮頸炎組患者P16陽(yáng)性檢出率0.00%，顯著低于CIN組的70.69%、宮頸癌組的88.89%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CINⅠ級(jí)患者P16陽(yáng)性檢出率52.94%，顯著低于CINⅡ級(jí)組（68.75%）與CINⅢ級(jí)組（84.00%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。隨著HR-HPV載量等級(jí)升高，P16蛋白陽(yáng)性表達(dá)率越高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HR-HPV載量陽(yáng)性表達(dá)在宮頸炎組中占28.57%，顯著低于CINⅠ級(jí)組（70.59%）、CIN Ⅱ級(jí)組與Ⅲ級(jí)組（80.49%）、宮頸癌組（95.24%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Spearman分析，在宮頸炎、CIN Ⅰ級(jí)組中HR-HPV載量與P16呈正相關(guān)（P<0.01）；而在宮頸癌、CINⅡ級(jí)與Ⅲ級(jí)組中，HR-HPV載量與P16表達(dá)并無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論? ? CIN病變程度、宮頸癌與病灶組織中P16蛋白表達(dá)存在相關(guān)性，P16可作為臨床診斷重要的生物學(xué)標(biāo)記。

【關(guān)鍵詞】 宮頸上皮內(nèi)瘤變；宮頸癌；P16蛋白；相關(guān)性

Expression and clinical significance of P16 protein in cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia

Chao Yuan，Li Meibo， Song Anhui. The Sixth People's Hospital of Huizhou City，Huizhou，Guangdong? 516000

【Abstract】? Objective? ? To analyze the expression level and clinical significance of P16 protein in cervical intraepithelial neoplasia and cervical cancer. Methods? ? This study collected a total of 142 patients with intraepithelial neoplasia， cervical cancer， and cervicitis admitted to our department from May 2019 to December 2020. According to the type of disease， 21 cases were in the cervicitis group， 63 cases in the cervical cancer group， and cervical epithelium. In 58 cases of internal neoplasia，the P16 level of all subjects was detected by immunohistochemical staining， and the relationship between P16 expression level and cervical lesions was analyzed. Results? ? Among the 142 subjects in this group， 97 cases （68.31%） were detected as positive for P16 and 45 cases （31.69%） were detected as negative. In the cervicitis group， P16 positive was 14.29%， which was significantly lower than CIN70.69. It was lower than 92.06% of cervical cancer， the difference was statistically significant （P<0.05）. The positive detection rate of P16 in CIN level Ⅰ patients was 52.94%， which was significantly lower than that of CIN level Ⅱ （68.75%） and CIN level Ⅲ （84.00%） patients， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The expression rate of P16 protein increased with the level of HR-HPV load， and the higher the positive expression， the difference was statistically significant （ P<0.05）. Spearman analysis showed that HR-HPV load was positively correlated with P16 in cervicitis and CIN grade Ⅰ tissues （P<0.01）; while in cervical cancer， CIN grade Ⅱ and grade Ⅲ tissues， HR-HPV load and P16 expression were not There is no obvious correlation （P>0.05）. Conclusion? ? There is a correlation between the degree of CIN lesions， cervical cancer and the expression of P16 protein in the lesion tissue. P16 can be used as an important biological marker for clinical diagnosis and is worthy of promotion.

【Key Words】? Cervical neoplasia；Cervical cancer；P16protein；Cervicitis

中圖分類號(hào)：R683.42? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? 文章編號(hào)：1672-1721（2023）01-0081-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.01.027

宮頸癌約90%因人乳頭瘤病毒（HPV）感染引起，長(zhǎng)期持續(xù)高危HPV感染是造成高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）的關(guān)鍵因素，并隨著病情進(jìn)展，最終形成癌變，對(duì)患者生命安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅[1] 。P16基因具備負(fù)調(diào)控細(xì)胞周期作用，屬于細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）抑制因子；HR-HPV陽(yáng)性的CIN的進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)與P16蛋白異常表達(dá)存在相關(guān)性[2-3]。目前，P16蛋白在宮頸組織病理診斷中得到大力推廣，但在不同宮頸病變中的表達(dá)仍需要進(jìn)一步探索分析[4]。本研究選擇上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌、宮頸炎患者共142例，檢測(cè)各種病變組織中P16表達(dá)，報(bào)道如下。

1? ? 資料與方法

1.1? ? 一般資料? ? 收集2019年5月—2020年12月惠州市第六人民醫(yī)院CIN、宮頸癌、宮頸炎患者共142例，年齡20～75歲，平均年齡（48.65±11.34）歲，其中CIN 58例、宮頸癌63例、宮頸炎21例。本研究經(jīng)該院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）入選者對(duì)研究知情，自愿參與；（2）有性生活史；（3）無(wú)放化療、宮頸手術(shù)史；（4）患者年齡≥18歲；（5）無(wú)服用免疫抑制劑史，未注射過(guò)HPV疫苗。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）妊娠期、哺乳期女性；（2）合并有其他惡性疾病、腫瘤等；（3）心肝腎等臟器功能不全；（4）合并有陰道毛滴蟲(chóng)、外陰道假絲酵母菌等病原體感染；（5）接受全子宮切除術(shù)或?qū)m頸環(huán)切術(shù)。

1.2? ? 方法? ? 設(shè)備與試劑：采用福州邁新公司免疫組織化檢測(cè)試劑、抗P16鼠單克隆抗體試劑；日本OLYMPUS BX53生物顯微鏡；德國(guó)Leica RM2235 輪轉(zhuǎn)石蠟切片機(jī)；德國(guó)Leica CV5030全自動(dòng)染色機(jī)；全自動(dòng)密閉式組織脫水機(jī)（江蘇微凱 WQT-200）；德國(guó)萊斯康公司3ML LED光學(xué)電子陰道鏡。

經(jīng)陰道鏡切取受試者宮頸組織標(biāo)本，根據(jù)試劑盒操作方法進(jìn)行染色，制作切片，觀察。

1.3? ? 結(jié)果判斷? ? 通過(guò)免疫組化SP法檢測(cè)P16蛋白，陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞核、細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒。在40×10倍光鏡下，于病變細(xì)胞密集位置選取5個(gè)視野觀察，每個(gè)視野計(jì)數(shù)50個(gè)細(xì)胞，P16蛋白陽(yáng)性強(qiáng)度根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞分布、數(shù)量等評(píng)估，強(qiáng)陽(yáng)性（+++）陽(yáng)性細(xì)胞比例>50%；中等陽(yáng)性（++）陽(yáng)性細(xì)胞比例26%～50%，弱陽(yáng)性（+）陽(yáng)性細(xì)胞比例5%～25%；陰性（-）陽(yáng)性細(xì)胞比例不足5%[5]。

檢測(cè)HPV病毒載量：樣本檢測(cè)中HPV-DNA含量情況：根據(jù)樣本相對(duì)發(fā)光單位、與標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性參照臨界值比作為反映標(biāo)準(zhǔn)，采用第二代雜交捕獲法，可檢測(cè)出HR-HPV DNA病毒載量共13種，如HPV31，35等，當(dāng)兩者比值<1視為陰性，≥1視為陽(yáng)性，陽(yáng)性可將其分為>1 000、100～1 000、及1～100[6]。

1.4? ? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? ? 將數(shù)據(jù)納入SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件中進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ²檢驗(yàn)，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? ? 結(jié)果

2.1? ? 不同宮頸病變患者P16檢測(cè)結(jié)果比較? ? 142例患者中P16陽(yáng)性檢出97例（68.31%），陰性檢出45例（31.69%）；宮頸炎組患者P16陽(yáng)性檢出率為0.00%，顯著低于CIN組的70.69%、宮頸癌組的88.89%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2? ? CIN不同病變程度P16陽(yáng)性結(jié)果比較? ? CIN Ⅰ級(jí)組患者P16陽(yáng)性檢出率52.94%，顯著低于CIN Ⅱ級(jí)組（68.75%）與CIN Ⅲ級(jí)組（84.00%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.3? ? 不同宮頸病變組織中HR-HPV載量分布與P16表達(dá)比較? ? 隨著HR-HPV載量等級(jí)升高，P16蛋白陽(yáng)性表達(dá)率越高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ²=41.054，P<0.001）。HR-HPV載量陽(yáng)性表達(dá)在宮頸炎組占28.57%，顯著低于CINⅠ級(jí)組（70.59%）、CIN Ⅱ級(jí)組與Ⅲ級(jí)組（80.49%）、宮頸癌組（95.24%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ²=69.021，P<0.001），見(jiàn)表3。

2.4? ? 不同宮頸病變HR-HPV載量與P16的相關(guān)性? ? 在宮頸炎組織中HR-HPV載量與P16表達(dá)水平呈正相關(guān)性（P<0.05）；CINⅠ級(jí)組中HR-HPV載量與P16呈正相關(guān)（P<0.05）；而在宮頸癌、CIN Ⅱ級(jí)與Ⅲ級(jí)組中，HR-HPV載量與P16表達(dá)并無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05），見(jiàn)表4。

3? ? 討論

CIN是臨床婦科常見(jiàn)疾病，屬于宮頸癌的癌前病變，及時(shí)發(fā)現(xiàn)癌前病變，早期干預(yù)是降低宮頸癌病死率的關(guān)鍵。大量研究證實(shí)，宮頸癌、CIN的發(fā)生發(fā)展，與HR-HPV反復(fù)感染存在明顯的相關(guān)性[7-9]。因此，可作為臨床診斷、治療宮頸癌、CIN的關(guān)鍵性依據(jù)。根據(jù)美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)（NCCN）指南，對(duì)于CINⅡ級(jí)、Ⅲ級(jí)患者采取手術(shù)治療，CIN Ⅰ級(jí)患者以隨訪觀察為主。但隨著臨床研究深入，有學(xué)者指出，CINⅡ級(jí)與CINⅠ級(jí)生物學(xué)行為更為相似，且最終癌變率相對(duì)較低[10]。因此，低于CIN Ⅱ級(jí)患者盲目采取手術(shù)切除治療，可能存在過(guò)度治療風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)預(yù)后造成不利影響。因此，需要尋求一種更為準(zhǔn)確、有效、簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法，提高手術(shù)治療合理性。

在宮頸癌發(fā)生中HR-HPV反復(fù)感染是其必要條件，但HR-HPV病毒載量與CIN之間關(guān)系仍存在爭(zhēng)議[11]。本研究顯示，隨著HR-HPV載量等級(jí)升高，P16蛋白陽(yáng)性表達(dá)率越高（P<0.05）。HR-HPV載量陽(yáng)性表達(dá)在宮頸炎組占28.57%，顯著低于CINⅠ組、CIN Ⅱ級(jí)與Ⅲ級(jí)組、宮頸癌組（P<0.05），說(shuō)明宮頸癌、CIN的發(fā)生進(jìn)展與HR-HPV感染密切相關(guān)，并隨著病情嚴(yán)重程度增加，HR-HPV感染陽(yáng)性率升高。此外也有研究報(bào)道，受到宿主DNA、病毒型別等因素影響，可能在宮頸癌早期HR-HPV病毒載量出現(xiàn)下降情況[12]。故將HR-HPV單獨(dú)作為預(yù)測(cè)指標(biāo)診斷宮頸癌、CIN病變可能存在一定誤差，需要進(jìn)一步證實(shí)。

本研究顯示，宮頸炎組患者P16陽(yáng)性檢出率0.00%，顯著低于CIN的70.69%、宮頸癌的88.89%（P<0.05）。同時(shí)，CINⅠ級(jí)患者P16陽(yáng)性檢出率52.94%，顯著低于CINⅡ級(jí)（68.75%）與CIN Ⅲ級(jí)（84.00%）（P<0.05）。說(shuō)明P16蛋白表達(dá)與宮頸組織病變嚴(yán)重程度存在相關(guān)性。P16基因可通過(guò)抑制CDK4活性，使Rb蛋白磷酸化阻斷，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖、分裂；P16基因位于人類染色體9P21，起到負(fù)調(diào)控細(xì)胞周期的作用。本次研究結(jié)果顯示，在宮頸炎組織、CINⅠ級(jí)組中HR-HPV載量與P16呈正相關(guān)（P<0.01）；而在宮頸癌、CIN Ⅱ級(jí)與Ⅲ級(jí)組織中，HR-HPV載量與P16表達(dá)并無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05），提示在宮頸病變組織中HR-HPV病毒高載量下，發(fā)病早期可引起宮頸部分免疫反應(yīng)，導(dǎo)致P16表達(dá)快速升高。

綜上所述，在宮頸癌、CIN病灶組織中P16表達(dá)顯著升高，其可作為臨床診斷重要的生物學(xué)標(biāo)記。

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（收稿日期：2022-10-19）