扶正剔邪搜絡方對肺纖維化大鼠血氧分壓的影響*

練毅剛,鄭豐杰,張寧,溫笑薇,張山,閆玉琴,崔蘭鳳,蘇惠萍

1.北京中醫(yī)藥大學東直門醫(yī)院,北京 100700; 2.北京中醫(yī)藥大學,北京 100029; 3.北京市隆福醫(yī)院,北京 100700

間質(zhì)性肺疾病(interstitial lung disease,ILD)臨床以進行性加重的呼吸困難、通氣功能障礙伴彌散功能降低、低氧血癥為主要特征。間質(zhì)性肺疾病為一大類疾病,近年來發(fā)病呈上升趨勢,其種類有180多種[1-3],病因不明,臨床特征為漸進性呼吸困難、干咳、低氧血癥等,最終可導致雙肺纖維化,甚至危及生命。目前,關于間質(zhì)性肺疾病的有效治療方法有限,肺移植是ILD發(fā)展到終末期的有效治療手段,但費用高昂、供體器官缺乏以及移植后的排斥反應等導致難以廣泛開展[4-6]。研究發(fā)現(xiàn),蘇惠萍老師經(jīng)驗方劑扶正剔邪搜絡方治療博來霉素致肺纖維化大鼠療效顯著[7-9]?；诖?本研究擬觀察扶正剔邪搜絡方及吸氧條件下肺纖維化大鼠血氧分壓在不同時相的變化,為臨床改進治療方案提供實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 實驗動物健康清潔級雄性SD大鼠160只,體質(zhì)量(300±20)g,由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供,許可證編號:SCXK(京)2012-0001。將動物于SPF級動物房進行適應性飼養(yǎng)1周,環(huán)境溫度20～25 ℃,相對濕度50%～60%,自然節(jié)律采光,標準飼料喂養(yǎng),自由進食和飲水。

1.2 藥物與試劑注射用鹽酸博萊霉素(bleomycin hydrochloride for injection,規(guī)格:15 mg/瓶,日本化藥株式會社,批號:Y91450);扶正剔邪搜絡方(顆粒劑,規(guī)格:7.440 g/袋,康美藥業(yè)集團,批號:100829)。血氣生化多項測試卡片(干式電化學法,美國雅培公司,型號:G3+,標準編號:YZB/USA3421-2012)。

1.3 儀器JJ-12J型脫水機、JB-P5型包埋機(武漢俊杰電子有限公司);RM2016型病理切片機(上海徠卡儀器有限公司);DHG-9140A型烤箱(上?；厶﹥x器制造有限公司);NIKON DS-U3型全景組織顯微成像系統(tǒng)(日本尼康公司)。

2 方法

2.1 模型建立與分組采用隨機數(shù)字表法將160只大鼠分為假手術組、模型組、扶正剔邪搜絡方組、氧療組及扶正剔邪搜絡方+氧療組,每組32只。除假手術組外,按照參考文獻[10]方法建立肺纖維化大鼠模型,以50 mg·kg-1的劑量腹腔注射1%戊巴比妥鈉麻醉大鼠后,將大鼠固定,在輔助光源照射下提起大鼠舌頭,采用18號套管針經(jīng)口腔水平插入,達到咽喉部位后,將針尾壓低,使針頭抬高15°～30°,待插入氣管之后,將針芯拔出。使用棉球薄片檢驗套管針位置,將其置于套管針外口,如果套管針已在氣管,可見到薄片隨呼吸前后運動。然后快速經(jīng)氣管插管以2.5 mL·kg-1的劑量注射0.2%博來霉素溶液,之后快速經(jīng)氣管插管注射0.3 mL空氣,并立即直立旋轉(zhuǎn)大鼠,令藥液在雙肺內(nèi)得以均勻分布。假手術組大鼠注射相同容積的生理鹽水,其余操作同上。

2.2 給藥在造模24 h后,扶正剔邪搜絡方組及扶正剔邪搜絡方+氧療組大鼠灌胃給予0.67 g·kg-1扶正剔邪搜絡方顆粒劑溶液;吸氧組、假手術組和模型組大鼠灌胃給予相同體積的生理鹽水,每天1次,連續(xù)28 d。吸氧組和扶正剔邪搜絡方+氧療組大鼠放置在封閉的吸氧倉中,和外界用一個管道連接,該管道連接氧氣瓶,外部管道設置一個閥門,用來控制給氧流量,在倉內(nèi)放置氧濃度監(jiān)測裝置,然后通過調(diào)節(jié)氧流量,使得倉內(nèi)氧濃度保持在30%左右,每天吸氧2 h。

2.3 血氧分壓檢測放置大鼠于解剖臺,將腹部皮膚剪開,從腹主動脈采血,單片測試卡片要在室溫下放置5 min,排棄采血針第一滴血,迅速將血樣注入注樣口后,立即封閉注樣口,之后分析動脈血氣。

2.4 電鏡觀察組織病理變化電鏡固定液固定后的肺組織用0.1 mol·L-1磷酸緩沖液漂洗,每次 15 min,共3次。用含1%鋨酸的0.1 mol·L-1磷酸緩沖液室溫固定2 h,0.1 mol·L-1磷酸緩沖液漂洗3次,每次15 min。上行酒精脫水(體積分數(shù)50%乙醇15 min→體積分數(shù)70%乙醇15 min→體積分數(shù)80%乙醇15 min→體積分數(shù)90%乙醇15 min→體積分數(shù)95%乙醇15 min→體積分數(shù)100%乙醇 15 min→體積分數(shù)100%乙醇15 min→體積分數(shù)100%丙酮15 min→體積分數(shù)100%丙酮15 min),滲透(丙酮與812包埋劑11滲透2 h→丙酮與812包埋劑12滲透過夜),包埋,60 ℃聚合48 h,超薄切片機切片,電子顯微鏡下采集圖像并分析。

3 結(jié)果

3.1 模型組大鼠肺組織電鏡病理結(jié)果電鏡病理結(jié)果顯示,模型組大鼠肺小動脈內(nèi)皮細胞腫脹,樹狀突起,凸向管腔,膜平滑肌增厚,內(nèi)彈力板粗細不均勻,第7天模型組大鼠肺組織內(nèi)皮細胞與基底膜相連處有大量空泡,局部肺泡纖維化,第14天模型組大鼠肺組織少量肺泡纖維化,第21、28天模型組大鼠肺組織肺泡纖維化嚴重,說明造模成功。

注:A:第7天;B:第14天;C:第21天;D:第28天。

3.2 各組大鼠血氧分壓比較與假手術組比較,第7、14、21、28天時,模型組大鼠血氧分壓均明顯降低(P<0.01);與模型組比較,第7、14、21、28天時,扶正剔邪搜絡方組大鼠血氧分壓均明顯改善(P<0.01);第14天時,氧療組大鼠血氧分壓明顯改善(P<0.01);第7、14、21天,扶正剔邪搜絡方+氧療組大鼠血氧分壓明顯改善(P<0.01或P<0.05)。

表1 各組大鼠不同時相血氧分壓結(jié)果

4 討論

肺絡指肺及肺系之絡脈,包括肺中的血管、細支氣管及淋巴管等[11-12]。與肺間質(zhì)纖維化病變部位相符,肺之絡脈又有血絡、氣絡之分,分行于內(nèi)外,即張介賓所說:“血脈在中,氣絡在外?！毖j起到行營血、濡養(yǎng)本臟的作用,可化生神氣;氣絡起到行氣津,溫養(yǎng)機體的作用[13-15]。肺間質(zhì)纖維化在其發(fā)病之初期,主要病變部位是在氣絡,隨著疾病進展,邪氣逐漸從淺表之氣絡向深部傳入終至血絡,肺炎期到纖維化期的發(fā)展過程亦是氣絡病向血絡病的發(fā)展過程[16-17],在肺氣虛、痰濁、瘀血共同作用下而致肺絡痹阻[18-20]。扶正剔邪搜絡方由人參、麥冬、五味子、浙貝母、皂角刺、水蛭、地龍、全蝎組成,其中人參、麥冬、五味子三藥共用,益氣養(yǎng)陰,潤燥生津;皂角刺搜絡剔痰;浙貝母清熱散結(jié)化痰;蟲類藥物地龍等搜剔經(jīng)絡,針對肺纖維化瘀血干結(jié)難破的特點,辛通、甘潤之品配伍應用,起到攻補兼施,祛瘀同時促進新血生成[21-22]。全方諸藥合用,益氣養(yǎng)陰化痰通絡,氣絡血絡同治,解氣郁,通血絡。

研究發(fā)現(xiàn),肺部纖維化與血管生成之間關系密切,多種刺激因素可引起肺血管再生[23-24],如缺氧、應激損失、細胞因子等,缺氧刺激促血管生成因子釋放,引起毛細血管代償性增生以適應組織代謝需要,同時炎性細胞釋放大量促血管生成因子促進血管生成及重構[25-27],血管的過度生成及重構導致無效通氣的增加。與模型組比較,各不同時相中藥組血氧分壓均明顯改善,其作用機制可能與調(diào)節(jié)過度血管生成及重構有關[28]。氧療組只在第14天時對大鼠血氧分壓起到改善作用,而中藥加氧療組在第7、14、21天時大鼠血氧分壓均改善明顯,亦說明中藥具有改善大鼠血氧分壓的作用[29]。

本次實驗氧療組第7、21、28天時對大鼠血氧分壓的改善作用不明顯,而中藥加氧療組對血氧分壓改善效果亦不如單用中藥,在第28天時對于血氧分壓改善已無統(tǒng)計學意義,說明在肺泡炎癥期到肺纖維化形成的過程中給予氧療最終未起到改善氧合的作用,推測可能與給氧濃度、給氧時間及肺部血管再生產(chǎn)生無效血管灌注相關,需要進一步實驗驗證。