結(jié)核性漿膜炎患者應(yīng)用T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)、腺苷脫氨酶檢測(cè)的診斷價(jià)值

閆 坤，任立軍，劉 薇，楊媛媛，張 欣

（1.包鋼集團(tuán)第三職工醫(yī)院感染疾病科；2.包鋼集團(tuán)第三職工醫(yī)院急診科，內(nèi)蒙古 包頭 014010）

結(jié)核性漿膜炎起病隱匿，多與肝硬化、肺炎等因素所致的漿膜腔積液混淆，痰結(jié)合分歧桿菌培養(yǎng)為診斷結(jié)核性漿膜炎的金標(biāo)準(zhǔn)，但該診斷方式的培養(yǎng)周期相對(duì)較長(zhǎng)[1]。腺苷脫氨酶（ADA）是參與嘌呤核苷代謝的一種酶，在淋巴細(xì)胞內(nèi)含量最多，其活性增強(qiáng)則表示機(jī)體局部細(xì)胞出現(xiàn)免疫活化，發(fā)生結(jié)核性漿膜炎時(shí)因細(xì)胞受刺激漿膜腔積液中淋巴細(xì)胞明顯增多，但在其他導(dǎo)致免疫功能障礙的疾病中也可出現(xiàn)升高現(xiàn)象[2]。結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-SPOT.TB）是將酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)作為檢測(cè)原理，主要檢測(cè)結(jié)核桿菌特異性抗原早期分泌抗原靶6 和培養(yǎng)濾過(guò)蛋白刺激T 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的γ-干擾素，有著簡(jiǎn)便快捷、檢測(cè)效率高等優(yōu)勢(shì)[3]?；诖耍狙芯繉⑨槍?duì)結(jié)核性漿膜炎患者應(yīng)用T-SPOT.TB 檢測(cè)、ADA 檢測(cè)的診斷價(jià)值進(jìn)行探討與分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2020 年10 月至2022 年10 月包鋼集團(tuán)第三職工醫(yī)院所收治的160 例漿膜腔積液患者，進(jìn)行前瞻性研究，根據(jù)痰結(jié)核分歧桿菌培養(yǎng)檢查結(jié)果分為非結(jié)核性漿膜炎組（87 例）和結(jié)核性漿膜炎組（73 例）。非結(jié)核性漿膜炎組患者年齡26~70 歲，平均（41.35±3.20）歲；男性48 例，女性39 例。結(jié)核性漿膜炎組患者年齡25~70 歲，平均（41.37±3.22）歲；男性49 例，女性24 例。對(duì)比兩組患者一般資料，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《漿膜積液細(xì)胞圖譜新解及病例分析》[4]中漿膜腔積液的診斷標(biāo)準(zhǔn)；影像學(xué)檢查結(jié)果顯示漿膜腔有明顯積液者；結(jié)核性漿膜炎組患者同時(shí)經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷為胸腔積液結(jié)核桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性，有發(fā)熱、盜汗、胸痛等相應(yīng)臨床表現(xiàn)；非結(jié)核漿膜炎組患者已確診為其他疾病，隨訪(fǎng)1~3 個(gè)月無(wú)結(jié)核病表現(xiàn)等。排除標(biāo)準(zhǔn)：近3 個(gè)月有胸部手術(shù)、創(chuàng)傷史者；病因診斷不明確者；接受過(guò)抗結(jié)核治療者等。本研究已經(jīng)院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且患者均自愿簽署知情同意書(shū)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 痰結(jié)核分歧桿菌培養(yǎng) 采集兩組患者痰液樣本約4 mL，放入適合結(jié)核桿菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，將培養(yǎng)基呈傾斜狀態(tài)放置，形成斜面，若無(wú)菌落生長(zhǎng)則為陰性，菌落生長(zhǎng)于斜面則為陽(yáng)性。

1.2.2 T-SPOT.TB 檢測(cè) ①外周血T-SPOT.TB 檢測(cè)：采集患者空腹外周血大約3 mL，并將其置于抗凝管中，在6 h 內(nèi)送檢，利用RPMI 1640 培養(yǎng)液、Ficoll 淋巴細(xì)胞分離液，以密度梯度離心法提取血液中的單個(gè)核細(xì)胞，分離完成后通過(guò)AIM-V 培養(yǎng)液將單個(gè)核細(xì)胞濃度調(diào)整至2.5×105個(gè)/mL。在T-SPOT.TB 試劑盒微孔板上各孔分別注入50 μL AIM-V 培養(yǎng)液（陰性對(duì)照）、50 μL 植物血凝素（陽(yáng)性對(duì)照）、50 μL 結(jié)核分歧桿菌特異抗原ESAT-6（A孔）、50 μL 抗原CEP-10（B 孔），然后各微孔分別統(tǒng)一注入100 μL 標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為2.5×105個(gè)/mL 的單個(gè)核細(xì)胞工作液），然后將微孔板放置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱，16~20 h 后取出，采用磷酸鹽緩沖溶液洗板，重復(fù)4 次后，各微孔中加入由堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗（γ-干擾素抗體），于2~8 ℃的條件下孵育60 min，再次進(jìn)行4 次洗板，注入底物顯色溶液并以正常室溫避光孵育7 min，采用去離子水重復(fù)沖洗直至反應(yīng)終止，于室溫下干燥2~3 h 后，利用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)分析儀[ 復(fù)星診斷科技（長(zhǎng)沙）有限公司，型號(hào)：ES-15]計(jì)數(shù)斑點(diǎn)形成細(xì)胞數(shù)（SFC），一個(gè)斑點(diǎn)代表1 個(gè)效應(yīng)T 細(xì)胞。②漿膜腔T-SPOT.TB 檢測(cè)：抽取兩組患者約50 mL 漿膜腔積液放置于肝素抗凝管中，其余操作同外周血T-SPOT.TB 檢測(cè)。③陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：使用斑點(diǎn)計(jì)數(shù)法判斷，陰性對(duì)照斑點(diǎn)數(shù)為0~5 個(gè)，若測(cè)試孔A 或B 斑點(diǎn)數(shù)減去陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)≥ 6 個(gè)，或陰性對(duì)照斑點(diǎn)數(shù)≥ 6 個(gè)，測(cè)試孔A 或B 斑點(diǎn)數(shù)≥ 2 倍陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)則為陽(yáng)性[5]。

表1 兩組患者外周血、漿膜腔積液SFC及漿膜腔積液ADA 水平比較(±s)

表1 兩組患者外周血、漿膜腔積液SFC及漿膜腔積液ADA 水平比較(±s)

注：與外周血T-SPOT.TB 檢測(cè)比，*P＜0.05。SFC：斑點(diǎn)形成細(xì)胞數(shù)；T-SPOT.TB：結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)；ADA：腺苷脫氨酶。

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1.2.3 ADA 檢測(cè) 抽取兩組患者約5 mL 漿膜腔積液，離心（5 000 r/min，10 min）后，取上清液，通過(guò)生化分析儀（浙江普施康生物科技有限公司，型號(hào)：MS200）檢測(cè)ADA，若ADA＞30 U/L 則為陽(yáng)性[6]。

1.3 觀(guān)察指標(biāo)①統(tǒng)計(jì)兩組患者外周血、漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測(cè)的SFC，以及漿膜腔積液ADA 水平。②比較3 種檢測(cè)方法診斷結(jié)核性漿膜炎的檢測(cè)結(jié)果比較。③比較3 種檢測(cè)方法診斷結(jié)核性漿膜炎的診斷效能。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析本研究所有數(shù)據(jù)，計(jì)量資料均使用S-W 法檢驗(yàn)證實(shí)服從正態(tài)分布，以(±s)表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[ 例(%)]表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)，3 組間比較采用χ2趨勢(shì)檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者外周血、漿膜腔積液SFC 及漿膜腔積液ADA 水平比較結(jié)核性漿膜炎組外周血、漿膜腔積液SFC 及漿膜腔積液ADA 水平均顯著高于非結(jié)核性漿膜炎組；且漿膜炎積液SFC 較外周血更高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2 3 種檢測(cè)方法診斷結(jié)核性漿膜炎的檢測(cè)結(jié)果比較外周血T-SPOT.TB、漿膜腔積液T-SPOT.TB、漿膜腔積液ADA 檢測(cè)診斷結(jié)核性漿膜炎的陽(yáng)性率分別為56.25%（90/160）、60.62%（97/160）、53.75%（86/160），3 種檢測(cè)方法的陽(yáng)性率及兩者間兩兩比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 3 種檢測(cè)方法診斷結(jié)核性漿膜炎的檢測(cè)結(jié)果比較(例)

2.3 3 種檢測(cè)方法診斷結(jié)核性漿膜炎的診斷效能比較漿膜腔積液T-SPOT.TB、外周血T-SPOT.TB 診斷結(jié)核性漿膜炎的靈敏度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均顯著高于A(yíng)DA 檢測(cè)，且漿膜腔積液T-SPOT.TB 診斷顯著高于外周血T-SPOT.TB，漿膜腔積液T-SPOT.TB 診斷結(jié)核性漿膜炎的特異度顯著高于A(yíng)DA 檢測(cè)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 3 種檢測(cè)方法診斷結(jié)核性漿膜炎的診斷效能比較

3 討論

結(jié)核性漿膜炎屬于一類(lèi)較為常見(jiàn)的肺外結(jié)核類(lèi)型，目前臨床上多采用痰培養(yǎng)檢查診斷該疾病，雖然靈敏度高，但送檢不及時(shí)、留取方式錯(cuò)誤等均會(huì)影響痰標(biāo)本檢測(cè)的陽(yáng)性率，導(dǎo)致陽(yáng)性率較低，且檢測(cè)周期較長(zhǎng)，可能貽誤治療[7]。

SPOT.TB 可記錄機(jī)體中每個(gè)活化的結(jié)核特異效應(yīng)T 細(xì)胞，并通過(guò)對(duì)結(jié)核特異效應(yīng)T 細(xì)胞的檢測(cè)判斷患者體內(nèi)是否出現(xiàn)結(jié)核桿菌感染，且敏感度相對(duì)較高[8]。ADA 是一類(lèi)可參與嘌呤核苷代謝的酶類(lèi)物質(zhì)，其可催化腺嘌呤核苷降解為次黃嘌呤核苷，而后經(jīng)核苷磷酸化酶催化成次黃嘌呤。ADA 主要存在于淋巴細(xì)胞中，其水平與淋巴細(xì)胞的激活和分化有關(guān)，當(dāng)患者發(fā)生結(jié)核性漿膜炎時(shí)，由于機(jī)體受到結(jié)核分歧桿菌的刺激，淋巴細(xì)胞可有不同程度的分化、激活，漿膜腔積液中淋巴細(xì)胞明顯增多，導(dǎo)致ADA 含量也顯著增多，從而可診斷為結(jié)核感染[9]。

雖然T-SPOT.TB 檢測(cè)可通過(guò)結(jié)合效應(yīng)T 細(xì)胞來(lái)診斷患者是否出現(xiàn)結(jié)核感染，但當(dāng)患者外周血中淋巴細(xì)胞減少時(shí)，仍有不確定結(jié)果或假陰性等情況出現(xiàn)，其診斷效能可隨之降低。漿膜炎積液T-SPOT.TB 檢測(cè)是從患者局部病灶直接獲取結(jié)核特異效應(yīng)T 淋巴細(xì)胞，由于結(jié)核性漿膜炎患者結(jié)核桿菌可誘導(dǎo)機(jī)體淋巴細(xì)胞聚集于局部的炎癥反應(yīng)，各類(lèi)積液中淋巴細(xì)胞數(shù)量增多，遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于外周血，因此漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測(cè)價(jià)值更高，可避免由于患者處于潛伏期或病情好轉(zhuǎn)時(shí)期而出現(xiàn)漏診、誤診[10]。由于漿膜腔積液患者本身已處于疾病狀態(tài)，其體內(nèi)可能存在多種致病菌，且T-SPOT.TB 檢測(cè)雖對(duì)結(jié)核分歧桿菌存在較高的敏感性，但仍可檢出患者體內(nèi)的非結(jié)核分歧桿菌，存在一定的陽(yáng)性誤差。ADA 基本在淋巴細(xì)胞和淋巴組織中表達(dá)，但當(dāng)患有淋巴瘤、感染性疾病等疾病時(shí)，漿膜腔積液中ADA 水平也會(huì)升高，因此診斷結(jié)核性漿膜炎的效能較差。本研究中，結(jié)核性胸膜炎漿膜炎組外周血、漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測(cè)出的SFC 及ADA 均顯著高于非結(jié)核性胸膜炎漿膜炎組，漿膜炎積液T-SPOT.TB 檢測(cè)出的SFC 均較外周血T-SPOT.TB 檢測(cè)更高，同時(shí)漿膜腔積液T-SPOT.TB、外周血T-SPOT.TB 診斷結(jié)核性漿膜炎的診斷效能均顯著高于A(yíng)DA 檢測(cè)，且漿膜腔積液T-SPOT.TB 診斷顯著高于外周血T-SPOT.TB，漿膜腔積液T-SPOT.TB 診斷結(jié)核性漿膜炎的特異度顯著高于A(yíng)DA 檢測(cè)，表示外周血、漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測(cè)及漿膜腔積液ADA 水平可診斷結(jié)核性漿膜炎，且漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測(cè)的診斷價(jià)值較高。

綜上，外周血、漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測(cè)及漿膜腔積液ADA 水平可診斷結(jié)核性漿膜炎，但T-SPOT.TB 檢測(cè)的診斷價(jià)值高于漿膜腔積液ADA 檢測(cè)，且漿膜腔積液T-SPOT.TB 檢測(cè)的診斷價(jià)值最高，可對(duì)結(jié)核性漿膜炎患者的病情診斷及預(yù)后評(píng)估起到一定的參考價(jià)值。