基于生物信息學(xué)分析人TXNDC12基因在肝細(xì)胞癌的預(yù)后價(jià)值和作用機(jī)制

楊彩婷　姜慧杰　王雨晴　來(lái)明名　陳艷　劉永新　王曉旋

【摘要】目的探討人硫氧還原蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白12（thioredoxin domain-containing 12，TXNDC12）基因在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)情況、臨床價(jià)值以及TXNDC12參與肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制。方法基于TIMER2.0和GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析TXNDC12在肝細(xì)胞癌組織和正常組織的表達(dá)差異；選用GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)、TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析TXNDC12表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者病理分期和生存預(yù)后的關(guān)系；選用Linked Omics數(shù)據(jù)庫(kù)分析TXNDC12在 TCGA-LIHC 中共表達(dá)基因；進(jìn)一步探究TXNDC12在肝細(xì)胞癌中發(fā)生、發(fā)展的上游調(diào)控機(jī)制，分析TCGA-LIHC中TXNDC12的甲基化探針與基因表達(dá)水平和患者臨床預(yù)后的相關(guān)性。再選用TCGA-LIHC分析TXNDC12與免疫細(xì)胞的相關(guān)性。結(jié)果生物信息學(xué)分析表明TXNDC12在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)顯著高于正常組織。隨著腫瘤分期的進(jìn)展，TXNDC12的表達(dá)量明顯升高，在肝細(xì)胞癌患者中TXNDC12高表達(dá)患者總體生存期明顯低于低表達(dá)患者，且預(yù)后模型具有顯著的預(yù)測(cè)效果。與TXNDC12正相關(guān)的差異性表達(dá)基因有PPIH、MAGOH和BTF3L4等，與TXNDC12負(fù)相關(guān)的差異性表達(dá)基因有IRF6、LOC100130093和GPR17等。在肝細(xì)胞癌中，TXNDC12的高表達(dá)可能與TXNDC12基因啟動(dòng)子區(qū)內(nèi)的甲基化水平低相關(guān)，TXNDC12的表達(dá)與腫瘤的免疫細(xì)胞浸潤(rùn)有關(guān)。結(jié)論TXNDC12可作為肝細(xì)胞癌預(yù)后不良的標(biāo)志物，TXNDC12在肝細(xì)胞癌中的高表達(dá)與甲基化有關(guān)，并且其可能通過(guò)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)調(diào)控肝細(xì)胞癌的發(fā)生與發(fā)展。

【關(guān)鍵詞】硫氧還原蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白12；肝細(xì)胞癌；預(yù)后標(biāo)志物；甲基化；免疫浸潤(rùn)

中圖分類號(hào)：R735.7文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2023.08.003

Analysis of prognostic value and mechanism of human TXNDC12 gene

in hepatocellular carcinoma based on bioinformatics

YANG Caiting1， JIANG Huijie1， 2， WANG Yuqing1，

LAI Mingming CHEN Yan LIU Yongxin WANG Xiaoxuan

（1. School of Basic Medicine， Dali University， Dali 671000， Yunnan， China; 2. Department of Pathology of Shenshan

Center， Sun Yat-sen Memorial Hospital of Sun Yat-sen University， Guangzhou 510120， Guangdong， China）

【Abstract】ObjectiveTo explore the expression and clinical value of human thioredoxin domain-containing 12 （TXNDC12） in hepatocellular carcinoma， and the mechanism of TXNDC12 involved in the occurrence and development of hepatocellular carcinoma. MethodsThe expression difference of TXNDC12 in hepatocellular carcinoma tissues and normal tissues were analyzed based on TIMER2.0 and GEPIA database; GEPIA database and TCGA database were used to analyze relationship between TXNDC12 expression and pathological staging and survival prognosis of patients with hepatocellular carcinoma; Linked Omics database was used to analyze TXNDC12 co-expressed genes in TCGA-LIHC; the upstream regulatory mechanism of TXNDC12 in the occurrence and development of hepatocellular carcinoma was further explored， and correlation between TXNDC12 methylation probe and gene expression level in TCGA-LIHC and clinical prognosis of patients was analyzed. In addition， TCGA-LIHC was used to analyze correlation between TXNDC12 and immune cells. ResultsBioinformatics analysis showed that the expression of TXNDC12 in hepatocellular carcinoma tissues was significantly higher than that in normal tissues. With the progression of tumor staging， the expression of TXNDC12 significantly increased. Among patients with hepatocellular carcinoma， the overall survivals of patients with high TXNDC12 expressions were significantly lower than those of patients with low expressions， and prognosis model had significant predictive effect. Differentially expressed genes positively related to TXNDC12 included PPIH， MAGOH and BTF3L4， etc， and? differentially expressed genes negatively related to TXNDC12 included IRF6， LOC100130093 and GPR17， etc. In hepatocellular carcinoma， the high expression of TXNDC12 might be associated with low methylation level within the promoter region of the TXNDC12 gene， and TXNDC12 expression was associated with immune cell infiltration of the tumor. ConclusionTXNDC12 can be used as a poor prognostic marker of hepatocellular carcinoma. The high expression of TXNDC12 in hepatocellular carcinoma is related to methylation， and it may regulate the occurrence and development of hepatocellular carcinoma through immune cell infiltration.

【Key words】thioredoxin domain-containing 12 （TXNDC12）; hepatocellular carcinoma; prognostic markers; methylation; immune infiltration

肝癌是我國(guó)病死率居于第二位的惡性腫瘤，發(fā)病率和病死率隨年齡增加而不斷上升，已成為威脅人類生命健康的最主要的惡性腫瘤之一［1-2］。其中肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是肝癌的主要組織學(xué)亞型，約占原發(fā)性肝癌的90%。肝細(xì)胞癌的主要病因包括乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）感染、吸煙、飲酒及黃曲霉素B1感染等［3-9］。隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，手術(shù)、放化療等治療方式不斷提高，肝細(xì)胞癌的發(fā)展得到一定程度的控制，但總體效果仍不理想［10］。因此，研究肝細(xì)胞癌的分子機(jī)制、靶向治療肝細(xì)胞癌對(duì)于評(píng)估患病風(fēng)險(xiǎn)，指導(dǎo)臨床治療和提高患者遠(yuǎn)期生存率具有重要意義。

人硫氧還原蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白12（thioredoxin domain-containing 12，TXNDC12），又稱作ERp16、ERp18或hTLP19，是蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶（PDI）家族的一個(gè)成員，蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶家族蛋白被證實(shí)在致癌過(guò)程中發(fā)揮著重要作用［11-14］。目前，TXNDC12已被證實(shí)可以通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和侵襲來(lái)促進(jìn)人胃癌的發(fā)展［15］。在肺腺癌患者中，TXNDC12的表達(dá)可能與患者的生存預(yù)后相關(guān)［16］。此外，在Hela細(xì)胞中，TXNDC12的表達(dá)可以抑制布雷非德菌素A、衣霉素和二硫蘇糖醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡［17］，TXNDC12可作為判斷膠質(zhì)瘤病理分級(jí)的分子標(biāo)志物，且與膠質(zhì)瘤預(yù)后不良相關(guān)［18］。近年來(lái)，已有研究報(bào)道TXNDC12與肝癌之間的關(guān)系，但基于生物信息學(xué)分析TXNDC12在肝細(xì)胞癌預(yù)后價(jià)值和作用機(jī)制仍較為空白。因此，本研究通過(guò)生物信息學(xué)方法分析TXNDC12在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)、預(yù)后關(guān)系，并探討其調(diào)控肝細(xì)胞癌的可能機(jī)制，為肝細(xì)胞癌的臨床診治和預(yù)后提供新思路。

1資料與方法

1.1數(shù)據(jù)獲取和篩選選用UCSC Xena（https：//xena.ucsc.edu/）數(shù)據(jù)庫(kù)下載TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)包含的樣本相關(guān)數(shù)據(jù)，其中包括：肝細(xì)胞癌（LIHC）RNA-seq的FPKM表達(dá)數(shù)據(jù)，Illumina Human Methylation 450 甲基化數(shù)據(jù)以及生存數(shù)據(jù)；選用TIMER2.0數(shù)據(jù)庫(kù)、GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析TXNDC12在肝細(xì)胞癌組織和正常組織的表達(dá)情況；通過(guò)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析TXNDC12表達(dá)水平與肝細(xì)胞癌患者臨床病理特征的關(guān)系；選用Linked Omics數(shù)據(jù)庫(kù)篩選共表達(dá)基因。

1.2分析TXNDC12在肝細(xì)胞癌和正常組織中的表達(dá)差異選用TIMER2.0（http：//timer.cistrome.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)Exploration模塊Gene-DE檢索 TXNDC12基因在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中所有腫瘤組織和正常組織中的表達(dá)情況。利用GEPIA（http：//gepia.cancer-pku.cn/）數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步驗(yàn)證TXNDC12在TCGA-GTEx-LIHC中的表達(dá)。設(shè)定篩選條件如下：|Log2FC| Cutoff：1，p-value Cutoff：0.05，LIHC，Match TCGA normal and GTEx data，得到369 例肝細(xì)胞癌組織樣品和160例正常組織樣品進(jìn)行表達(dá)差異分析。

1.3TXNDC12的表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者病理分期和預(yù)后相關(guān)性分析通過(guò)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析TXNDC12的表達(dá)與LIHC患者臨床病理分期和總體生存期的相關(guān)性。首先，選用Expression DIY-StagePlot模塊，通過(guò)logistic 回歸分析TXNDC12的表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者臨床分期的相關(guān)性。選用Survival Plots模塊，根據(jù)TXNDC12表達(dá)量的中位數(shù)，將肝細(xì)胞癌患者分為高表達(dá)組與低表達(dá)組，通過(guò) CoxPH 模型，計(jì)算危險(xiǎn)比（HR）和P值，繪制總體生存期（overall survival，OS）曲線。采用R（v3.5.3）軟件讀取TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中肝細(xì)胞癌樣本的基因表達(dá)數(shù)據(jù)及臨床數(shù)據(jù)，運(yùn)用“survival”包、“survminer”包以及“timeROC”包分別繪制總體生存曲線、ROC曲線以及COX回歸分析森林圖。

1.4肝細(xì)胞癌中與TXNDC12共表達(dá)基因的篩選登錄Linked Omics（http：//www.linkedomics.org/login.php）數(shù)據(jù)庫(kù)，設(shè)置過(guò)濾條件為：TCGA LIHC，Date Type：RNA seq，Statistical Method：Spearman Correlation test，可得到與TXNDC12表達(dá)呈正、負(fù)相關(guān)排名前50的基因。

1.5TXNDC12啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平與基因表達(dá)水平和肝細(xì)胞癌患者總體生存期的分析通過(guò)UCSC Xena數(shù)據(jù)庫(kù)下載Illumina Human Methylation 450 甲基化數(shù)據(jù)以及生存數(shù)據(jù)，采用R（v3.5.3）軟件的“plyr”包和“ggpubr”包篩選出TXNDC12啟動(dòng)子區(qū)甲基化β值最高的11個(gè)探針，并繪制柱狀圖。接下來(lái)，采用R（v3.5.3）軟件的“ggplot2”包、“ggpubr”包、“survival”包以及“survminer”包對(duì)甲基化β值最高的11個(gè)探針與基因表達(dá)水平和肝細(xì)胞癌患者總體生存期的相關(guān)性進(jìn)行分析。

1.6肝細(xì)胞癌中TXNDC12與免疫細(xì)胞的相關(guān)性分析為了探究TXNDC12與肝細(xì)胞癌腫瘤微環(huán)境中腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞（tumor-infiltrating immune cells， TIICs）的關(guān)系，通過(guò)CIBERSORT分析工具分析TIICs在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中肝細(xì)胞癌TXNDC12高表達(dá)組和低表達(dá)組的表達(dá)差異，以小提琴圖顯示，并采用R（v3.5.3）軟件的“ggplot2”“ggpubr”“ggExtra”包分析TIICs與TXNDC12表達(dá)水平的相關(guān)性。

2結(jié)果

2.1TXNDC12在腫瘤中的表達(dá)水平選用TIMER2.0數(shù)據(jù)庫(kù)分析人TXNDC12基因在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)39種腫瘤中的表達(dá)情況，結(jié)果如圖1A所示，TXNDC12在18種腫瘤組織和正常組織中存在差異表達(dá)，其中在乳腺癌、肝細(xì)胞癌以及肺細(xì)胞癌等腫瘤中顯著高表達(dá)。在371例肝細(xì)胞癌組織中TXNDC12表達(dá)水平顯著高于50例正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）?；贕EPIA數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步驗(yàn)證TXNDC12在TCGA-GTEx 369例肝細(xì)胞癌組織和160例正常組織中的表達(dá)情況，結(jié)果如圖1B所示，TXNDC12在LIHC中的表達(dá)量顯著高于正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2TXNDC12表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者臨床病理特征和生存預(yù)后的關(guān)系為了探究TXNDC12表達(dá)水平與肝細(xì)胞癌患者臨床病理特征的關(guān)系，我們選用GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析TXNDC12與肝細(xì)胞癌患者腫瘤分期的關(guān)系，結(jié)果如圖2A所示，隨著腫瘤分期的進(jìn)展，TXNDC12的表達(dá)量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［F=4.85，Pr（＞F）=0.00257］。接下來(lái)，通過(guò)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)得到各182例TXNDC12高表達(dá)與低表達(dá)患者的OS曲線。結(jié)果如圖2B所示，在肝癌患者中TXNDC12高表達(dá)患者總體生存期明顯低于低表達(dá)患者［logrank P=0.0041，HR（high）=1.7，P（HR）=0.0045］。根據(jù)TXNDC12表達(dá)量將TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中肝細(xì)胞癌患者分為高、低表達(dá)兩組，繪制肝細(xì)胞癌患者的總體生存期曲線。結(jié)果如圖2C所示，在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中TXNDC12的表達(dá)量與肝細(xì)胞癌患者的總體生存期顯著相關(guān)，高表達(dá)TXNDC12患者的總體生存期顯著低于低表達(dá)患者（P＜0.05） 。我們?cè)俑鶕?jù)TCGA肝細(xì)胞癌樣本繪制ROC曲線，其橫坐標(biāo)代表假陽(yáng)性率，縱坐標(biāo)代表真陽(yáng)性率，結(jié)果如圖2D所示，其1年、3年和5年的AUC值分別為0.630、0.620和0.637，說(shuō)明通過(guò)TXNDC12的表達(dá)對(duì)患者預(yù)后水平的預(yù)測(cè)具有較強(qiáng)的準(zhǔn)確性，其5年預(yù)測(cè)水平準(zhǔn)確性最高。進(jìn)一步對(duì)影響肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的因素進(jìn)行單因素和多因素Cox分析，單因素 Cox分析結(jié)果如圖2E所示，患者腫瘤分級(jí)和TXNDC12表達(dá)水平均可能影響肝細(xì)胞癌患者的預(yù)后（P＜0.001）。并將上述臨床指標(biāo)納入多因素回歸分析，結(jié)果如圖2F所示，患者腫瘤分級(jí)和TXNDC12高表達(dá)是影響肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.01）。以上結(jié)果提示TXNDC12表達(dá)量的增加可能導(dǎo)致肝細(xì)胞癌患者的不良預(yù)后。

2.3TXNDC12在肝細(xì)胞癌中的共表達(dá)基因篩選為進(jìn)一步探究TXNDC12基因參與肝細(xì)胞癌進(jìn)程的潛在機(jī)制。我們選用Linked Omics數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選出與該基因具有正負(fù)相關(guān)性的50個(gè)共表達(dá)基因，并以可視化熱圖形式展示。結(jié)果表明：PPIH、MAGOH和BTF3L4等基因與TXNDC12基因表達(dá)呈正相關(guān)程度自上而下依次排列（圖3A）；而IRF6、LOC100130093和GPR17等基因與TXNDC12基因表達(dá)呈負(fù)相關(guān)程度自上而下依次排列（圖3B）。

2.4TXNDC12啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平與基因表達(dá)相關(guān)性的分析采用R（v3.5.3）軟件的“ggpubr”和“plyr”包對(duì)Illumina Human Methylation 450 甲基化芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，鑒定出肝細(xì)胞癌TXNDC12基因啟動(dòng)子區(qū)內(nèi)的甲基化位點(diǎn)。結(jié)果如圖4所示，橫坐標(biāo)代表甲基化位點(diǎn)，縱坐標(biāo)代表甲基化程度的β值。在肝細(xì)胞癌中，TXNDC12基因啟動(dòng)子區(qū)內(nèi)共有11個(gè)位點(diǎn)，分別是cg20125159、cg11666690、cg09178844、cg04349311、cg27168976、cg1056592、cg10887547、cg25745713、cg26010095、cg05794325、cg00463885，這些位點(diǎn)甲基化水平的β值均小于0.2，處于完全未甲基化。接下來(lái)，我們進(jìn)一步分析在肝細(xì)胞癌內(nèi)，TXNDC12基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化位點(diǎn)與TXNDC12基因表達(dá)的相關(guān)性，結(jié)果如圖5A-K所示，橫坐標(biāo)代表基因的甲基化水平，縱坐標(biāo)代表基因的表達(dá)水平，在篩選出的11個(gè)探針中，cg09178844（R=-0.24，P=3e-06）、cg04349311（R=-0.14，P=0.0079）、cg1056592（R=-0.11，P=0.036）、cg25745713（R=-0.13，P=0.012）、cg26010095（R=-0.15，P=0.0044）、cg05794325（R=-0.17，P=7e-04）探針的甲基化β值和TXNDC12表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。

2.5TXNDC12基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化位點(diǎn)與肝細(xì)胞癌患者生存預(yù)后的關(guān)系為了探究TXNDC12基因啟動(dòng)子區(qū)內(nèi)的甲基化位點(diǎn)是否參與肝細(xì)胞癌的調(diào)控，我們對(duì)TXNDC12啟動(dòng)子區(qū)內(nèi)的甲基化位點(diǎn)進(jìn)行生存預(yù)后分析。根據(jù)TXNDC12甲基化位點(diǎn)表達(dá)量將TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中肝細(xì)胞癌患者分為高、低表達(dá)兩組，繪制肝細(xì)胞癌患者的總體生存期曲線。結(jié)果如圖6A-K所示，在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)的肝細(xì)胞癌患者中cg09178844、cg04349311、cg10887547、cg25745713、cg26010095甲基化位點(diǎn)與總體生存期顯著相關(guān)，其中高表達(dá)cg10887547患者的總體生存期顯著低于低表達(dá)患者，而高表達(dá)cg09178844、cg04349311、cg25745713、cg26010095患者總體生存期顯著高于低表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.6TXNDC12的表達(dá)與免疫細(xì)胞浸潤(rùn)的關(guān)系為了進(jìn)一步探究TXNDC12可能調(diào)控肝細(xì)胞癌發(fā)生的機(jī)制，我們根據(jù)TXNDC12在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)肝細(xì)胞癌患者中的表達(dá)量將患者分為高、低表達(dá)兩組，然后對(duì)高、低表達(dá)兩組中的免疫細(xì)胞表達(dá)水平進(jìn)行比較。結(jié)果如圖7所示，幼稚B細(xì)胞、記憶B細(xì)胞、被激活的CD4記憶T細(xì)胞、濾泡輔助性T細(xì)胞、M0型巨噬細(xì)胞在TXNDC12高、低TXNDC12表達(dá)組內(nèi)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。為了進(jìn)一步驗(yàn)證TXNDC12與免疫細(xì)胞的相關(guān)性，我們將TXNDC12與免疫細(xì)胞之間的表達(dá)量進(jìn)行分析。結(jié)果如圖8A-G所示，TXNDC12基因的表達(dá)水平與記憶B細(xì)胞、M0巨噬細(xì)胞、被激活的CD4記憶T細(xì)胞、濾泡輔助性T細(xì)胞呈正相關(guān)（P＜0.05）；TXNDC12與幼稚B細(xì)胞、靜息肥大細(xì)胞以及靜息記憶CD4 T細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。以上結(jié)果表明TXNDC12可能通過(guò)影響免疫細(xì)胞來(lái)調(diào)控肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展。

3討論

肝細(xì)胞癌是我國(guó)發(fā)病率和病死率最高的腫瘤之一，也是威脅全球人類生命健康的重大危險(xiǎn)因素。因此，篩選出新的肝細(xì)胞癌預(yù)后標(biāo)志物對(duì)降低患者病死率，改善預(yù)后和實(shí)現(xiàn)個(gè)體化靶向治療具有重要的意義。TXNDC12屬于PDI的重要成員，目前已有報(bào)道表明，PDI家族成員在癌癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色，TXNDC5可以作為一種重要的應(yīng)激存活因子來(lái)維持缺氧條件下CRC細(xì)胞的腫瘤發(fā)生［19］，ERp5在淋巴結(jié)微環(huán)境中呈現(xiàn)高表達(dá)，通過(guò)阻斷霍奇金淋巴瘤中的NKG2D配體識(shí)別來(lái)促進(jìn)免疫逃逸［20］。而TXNDC12作為β-連環(huán)蛋白上游的一個(gè)新的調(diào)控因子，可能通過(guò)EMT參與肝細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移［11］。然而，基于生物信息學(xué)對(duì)TXNDC12在肝細(xì)胞癌中發(fā)生發(fā)展的報(bào)道，目前仍較為空白。

因此，本研究通過(guò)生物信息學(xué)對(duì)肝細(xì)胞癌的多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。基于TIMER2.0數(shù)據(jù)庫(kù)，分析TXNDC12在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中多種腫瘤的表達(dá)情況，結(jié)果顯示TXNDC12在TCGA 數(shù)據(jù)庫(kù)中18種腫瘤中均高表達(dá)，在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)具有極顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?；贕EPIA數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步驗(yàn)證TXNDC12在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)，TXNDC12在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)量顯著高于正常組織，與 TIMER2.0 數(shù)據(jù)相符。基于 GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)和TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析TXNDC12表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者病理分期及生存預(yù)后的相關(guān)性，顯示TXNDC12隨著腫瘤分期的進(jìn)展表現(xiàn)為升高趨勢(shì)，此外，TXNDC12高表達(dá)患者總體生存率顯著低于TXNDC12低表達(dá)患者，TXNDC12可作為判斷 LIHC 生存預(yù)后的指標(biāo)。為了進(jìn)一步探究TXNDC12在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的下游調(diào)控機(jī)制。我們選用LinkedOmics 數(shù)據(jù)庫(kù)分析TXNDC12在 TCGA-LIHC 表達(dá)的互作基因，顯示與TXNDC12存在互作的差異性表達(dá)基因有PPIH、MAGOH和BTF3L4 等，可為TXNDC12調(diào)控肝細(xì)胞癌的分子機(jī)制的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。接下來(lái)，為了探究TXNDC12在肝細(xì)胞癌中高表達(dá)的上游機(jī)制，我們對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)肝細(xì)胞癌中TXNDC12的甲基化探針進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，cg09178844、cg04349311、cg1056592、cg25745713、cg26010095、cg05794325這幾個(gè)位點(diǎn)的甲基化水平與TXNDC12表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，其中cg09178844、cg04349311、cg25745713、cg26010095與肝細(xì)胞癌患者總體生存期顯著相關(guān)。目前暫未有文獻(xiàn)報(bào)道TXNDC12的表達(dá)是如何被調(diào)控，而它的家族成員：m6A甲基轉(zhuǎn)移酶METTL3通過(guò)介導(dǎo)TXNDC5甲基化促進(jìn)原發(fā)性肢端黑色素瘤的進(jìn)展［21］；TXNDC11基因高甲基化患者的預(yù)后優(yōu)于低甲基化患者［22］，而TXNDC12的表達(dá)是否受到甲基化水平的調(diào)控仍需做實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證。最后，我們對(duì)肝細(xì)胞癌中TXNDC12與免疫細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，TXNDC12高、低表達(dá)組中幼稚B細(xì)胞、記憶B細(xì)胞、被激活的CD4記憶T細(xì)胞、濾泡輔助性T細(xì)胞、M0型巨噬細(xì)胞存在顯著差異。此外，TXNDC12與記憶B細(xì)胞、M0巨噬細(xì)胞、被激活的CD4記憶T細(xì)胞、濾泡輔助性T細(xì)胞、幼稚B細(xì)胞、靜息肥大細(xì)胞以及靜息記憶CD4 T細(xì)胞呈顯著相關(guān)。提示調(diào)控腫瘤免疫反應(yīng)相關(guān)通路可能是TXNDC12促進(jìn)肝細(xì)胞癌進(jìn)展的重要機(jī)制之一，可能與肝細(xì)胞癌顯著的免疫炎癥驅(qū)動(dòng)有關(guān)。TXNDC12在免疫調(diào)控中的具體作用，以及是否能夠作為免疫治療的生物標(biāo)志物或聯(lián)合治療靶點(diǎn)有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，TXNDC12在肝細(xì)胞癌中呈高表達(dá)，可作為肝細(xì)胞癌預(yù)后不良的標(biāo)志物之一，并且為肝細(xì)胞癌的個(gè)體化診療提供新的治療方向。參考文獻(xiàn)［1］ CAO W，CHEN H D，YU Y W，et al.Changing profiles of cancer burden worldwide and in China：a secondary analysis of the global cancer statistics 2020［J］.Chin Med J，2021，134（7）：783-791.

［2］ 曹毛毛，李賀，孫殿欽，等.全球肝癌2020年流行病學(xué)現(xiàn)狀［J］.中華腫瘤防治雜志，2022，29（5）：322-328.

［3］ ZHANG K W，WANG D，CAI H，et al.IL-6 plays a crucial role in epithelial-mesenchymal transition and pro-metastasis induced by sorafenib in liver cancer［J］.Oncol Rep，2021，45（3）：1105-1117.

［4］ LI X，YUAN M，SONG L，et al.Silencing of microRNA-210 inhibits the progression of liver cancer and hepatitis B virus-associated liver cancer via targeting EGR3［J］.BMC Med Genet，2020，21（1）：48.

［5］ 郭蘭偉，張韶凱，劉曙正，等.河南省城市地區(qū)肝癌篩查依從性及其影響因素分析［J］.中華腫瘤雜志，2021，43（2）：233-237.

［6］ CHU Y J，YANG H I，WU H C，et al.Aflatoxin B1 exposure increases the risk of hepatocellular carcinoma associated with hepatitis C virus infection or alcohol consumption［J］.Eur J Cancer，2018，94：37-46.

［7］ JIAO Y，LI Y，JIA B，et al.The prognostic value of lncRNA SNHG4 and its potential mechanism in liver cancer［J］.Biosci Rep，2020，40（1）：BSR20190729.

［8］ PARK H，SHIN S K，JOO I，et al.Systematic review with meta-analysis：low-level alcohol consumption and the risk of liver cancer［J］.Gut Liver，2020，14（6）：792-807.

［9］ 于天怡，朱曉芹，劉志強(qiáng)，等.甘草次酸藥物代謝動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)及其抗肝細(xì)胞癌機(jī)制研究［J］.井岡山大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2021，42（5）：28-34.

［10］ SANCHEZ-MEJIAS A，KWON J，CHEW X H，et al.A novel SOCS5/miR-18/miR-25 axis promotes tumorigenesis in liver cancer［J］.Int J Cancer，2019，144（2）：311-321.

［11］ YUAN K F，XIE K L，LAN T，et al.TXNDC12 promotes EMT and metastasis of hepatocellular carcinoma cells via activation of β-catenin［J］.Cell Death Differ，2020，27（4）：1355-1368.

［12］ WANG M，KAUFMAN R J.The impact of the endoplasmic reticulum protein-folding environment on cancer development［J］.Nat Rev Cancer，2014，14（9）：581-597.

［13］ FERNANDO S R，KOTTAWATTA K S A，JIANG L H，et al.Differential expression of protein disulfide isomerase （PDI） in regulating endometrial receptivity in humans［J］.Reprod Biol，2021，21（2）：100498.

［14］ GUO L L，MA L L，LIU C，et al.ERp29 counteracts the suppression of malignancy mediated by endoplasmic reticulum stress and promotes the metastasis of colorectal cancer［J］.Oncol Rep，2019， 41（3）：1603-1615.

［15］ WU J，CHEN X H，WANG X Q，et al.ERp19 contributes to tumorigenicity in human gastric cancer by promoting cell growth，migration and invasion［J］.Oncotarget，2015，6（14）：11794-11805.

［16］ GALVAN A，F(xiàn)RULLANTI E，ANDERLINI M，et al.Gene expression signature of non-involved lung tissue associated with survival in lung adenocarcinoma patients［J］.Carcinogenesis，2013，34（12）：2767-2773.

［17］ JEONG W，LEE D Y，PARK S，et al.ERp16，an endoplasmic reticulum-resident thiol-disulfide oxidoreductase：biochemical properties and role in apoptosis induced by endoplasmic reticulum stress［J］.J Biol Chem，2008，283（37）：25557-25566.

［18］ WANG X，YANG Q，LIU N，et al.Clinical value of TXNDC12 combined with IDH and 1p19q as biomarkers for prognosis of glioma［J］.Pathol Oncol Res，2021，27：1609825.

［19］ TAN F B，ZHU H，HE X A，et al.Role of TXNDC5 in tumorigenesis of colorectal cancer cells：in vivo and in vitro evidence［J］.Int J Mol Med，2018，42（2）：935-945.

［20］ ZOCCHI M R，CATELLANI S，CANEVALI P，et al.High ERp5/ADAM10 expression in lymph node microenvironment and impaired NKG2D ligands recognition in Hodgkin lymphomas［J］.Blood，2012，119（6）：1479-1489.

［21］ YUE Z H，CAO M，HONG A L，et al.m6A methyltransferase METTL3 promotes the progression of primary acral melanoma via mediating TXNDC5 methylation［J］.Front Oncol，2022，11：770325.

［22］ PENG P，CHENG F L，DONG Y T，et al.High expression of TXNDC11 indicated unfavorable prognosis of glioma［J］.Transl Cancer Res TCR，2021，10（12）：5040-5051.

（收稿日期：2023-01-10修回日期：2023-03-21）

（編輯：梁明佩）