17%烯草酮·乙羧氟草醚乳油高效液相色譜分析

王國強(qiáng)，李彥飛，張凱，馮澤騰，張小軍

(中農(nóng)立華生物科技股份有限公司，北京 100052)

烯草酮(clethodim)是由日本住友化學(xué)公司和美國Chevron 公司在1987 年聯(lián)合開發(fā)研制的一種高效、安全、高選擇性的環(huán)己烯酮類除草劑[1]，可用于防除大多數(shù)一年生及多年生的禾本科雜草，且對雙子葉作物安全。施藥后，禾本科雜草莖葉會將該除草劑迅速吸收并傳導(dǎo)至分生組織及莖尖，分生組織的活性被抑制，細(xì)胞被破壞分裂，最終導(dǎo)致雜草死亡[2]。烯草酮主要登記用于棉花、花生、大豆、煙草、油菜及果園等闊葉田防除硬草、早熟禾、馬唐、看麥娘、牛筋草、狗尾草、野燕麥和稗草等一年生禾本科雜草[3]。乙羧氟草醚(benzofluorfen)是由美國羅姆-哈斯公司開發(fā)的一種三氟甲基二苯醚類除草劑，具有殺草譜廣、活性高、毒性低等特點(diǎn)[4]，施藥后，被雜草吸收進(jìn)入植物細(xì)胞內(nèi)，在光照條件下，與細(xì)胞內(nèi)的分子氯反應(yīng)，生成對細(xì)胞具有毒性的化合物四吡咯，積聚后會使植物細(xì)胞膜完全消失，然后引起細(xì)胞內(nèi)含物滲漏，最終導(dǎo)致雜草死亡。乙羧氟草醚主要登記用于小麥、大麥、花生、大豆、甘蔗及稻田防除婆婆納、繁縷、苘麻、豬秧秧和薺菜等闊葉雜草[5]。

近年來，烯草酮與乙羧氟草醚的復(fù)配，彌補(bǔ)了單劑的缺陷，降低了農(nóng)民的使用成本，得到各公司廣泛推廣使用，但有關(guān)復(fù)配劑中2 者有效成分同時(shí)測定的方法未見報(bào)道[6-9]?；诖?，本文采用高效液相色譜法開展了正、反相2 種同時(shí)檢測17%烯草酮·乙羧氟草醚乳油中烯草酮和乙羧氟草醚的定量方法研究，旨在為該混配制劑提供一定的技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

AL204 型電子分析天平(精度為0.000 1 g，梅特勒-托利多儀器有限公司)；TU-1901 型紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；Agilent 1220 型高效液相色譜儀配紫外檢測器和色譜工作站(安捷倫科技有限公司)；KQ-500DE 型數(shù)控超聲波儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

冰乙酸和丙酮(分析純)，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；二氯甲烷和正己烷(HPLC 級)，西班牙薩勞Scharlau 有限公司；超純水，實(shí)驗(yàn)室自制；乙腈(HPLC 級)，賽默飛世爾科技有限公司；烯草酮鋰鹽標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.1%)和乙羧氟草醚標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.5%)，北京勤誠亦信科技開發(fā)有限公司；17%烯草酮·乙羧氟草醚乳油(12%烯草酮+5%乙羧氟草醚)，實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2 色譜條件

正向色譜法：液相色譜柱：Syncronis Silica 不銹鋼柱(150 mm×4.6 mm，內(nèi)裝5 μm C18填充物)(賽默飛世爾科技有限公司)；流動(dòng)相：二氯甲烷-正己烷-冰乙酸(28∶70∶2，體積比)；流量：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：230 nm；進(jìn)樣體積：5.0μL。在上述色譜操作條件下，乙羧氟草醚和烯草酮的保留時(shí)間分別約為5.9、18.2 min(圖1)。

圖1 混標(biāo)及試樣的高效液相色譜圖

反相色譜法：液相色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18不銹鋼柱(250 mm×4.6 mm，內(nèi)裝5 μm C18填充物)(美國安捷倫科技公司)；流動(dòng)相：乙腈-1%冰乙酸水溶液(80∶20，體積比)；流量：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：230nm；進(jìn)樣體積：5.0μL。在上述色譜操作條件下，乙羧氟草醚和烯草酮的保留時(shí)間分別約為11.9、13.9 min(圖1)。

1.3 溶液的配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取烯草酮鋰鹽標(biāo)樣各0.05 g(精確至0.000 2 g)，乙羧氟草醚標(biāo)樣各0.02 g(精確至0.000 2 g)，分別置于50 mL 容量瓶中，正相方法用流動(dòng)相溶解并定容至刻度，反相方法用先用3 滴冰乙酸和少量丙酮溶液振搖使之溶解后，再用丙酮溶液定容至刻度，然后均搖勻，脫氣后備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取17%烯草酮·乙羧氟草醚乳油各0.4 g(精確至0.000 2 g)，分別置于50 mL 容量瓶中，正相方法用流動(dòng)相溶解并定容至刻度，反相方法用丙酮溶解并定容至刻度，然后均搖勻，脫氣后備用。

1.4 測定

在上述操作條件下，正相方法和反相方法均待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)進(jìn)樣數(shù)針標(biāo)樣溶液，當(dāng)相鄰2 針標(biāo)樣峰面積的相對變化小于1.5%時(shí)，按照進(jìn)樣次序?yàn)闃?biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行分離和測定。

1.5 計(jì)算

試樣中烯草酮(或乙羧氟草醚)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)按下式計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中烯草酮鋰鹽(或乙羧氟草醚)平均峰面積值；A2為試樣溶液中烯草酮(或乙羧氟草醚)平均峰面積值；m1為烯草酮鋰鹽(或乙羧氟草醚)標(biāo)樣的質(zhì)量(g)；m2為試樣的質(zhì)量(g)；P為標(biāo)樣中烯草酮鋰鹽(或乙羧氟草醚)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)；烯草酮鋰鹽折算為烯草酮的系數(shù)為0.983；

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相的選擇

在17%烯草酮·乙羧氟草醚乳油有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測中，正相方法和反相方法分別通過不斷的調(diào)整流動(dòng)相中二氯甲烷、正己烷、冰乙酸和甲醇、乙腈、0.1%冰乙酸水溶液的不同配制比例，觀察樣品峰型變化和保留時(shí)間，依次進(jìn)行篩選。最終檢測結(jié)果表明，正相檢測在流速1.0 mL/min，二氯甲烷-正己烷-冰乙酸的體積比為28∶70∶2 時(shí)；反相檢測在流速1.0 mL/min，乙腈-1%乙酸水溶液的體積比為80∶20 時(shí)，烯草酮和乙羧氟草醚的出峰時(shí)間相對適中，出峰峰型尖銳對稱無拖尾，分離效果好且能較好的滿足分析要求。

2.2 檢測波長的選擇

利用紫外可見分光光度計(jì)分別對乙羧氟草醚和烯草酮鋰鹽標(biāo)樣溶液在190～400 nm 波長下進(jìn)行紫外掃描，得到關(guān)于乙羧氟草醚和烯草酮鋰鹽的最大吸收波長與相關(guān)濃度響應(yīng)值的紫外吸收光譜圖(圖2)。經(jīng)驗(yàn)證，乙羧氟草醚和烯草酮鋰鹽在波長為230 nm 時(shí)均有較大紫外吸收，得到較好的峰型且能夠使主峰與雜質(zhì)峰更好的分離。因此，最后選定本分析方法的檢測波長為230 nm。

圖2 烯草酮鋰鹽及乙羧氟草醚的紫外吸收譜圖

2.3 分析方法的線性相關(guān)性

根據(jù)1.3 節(jié)方法分別配制系列質(zhì)量濃度烯草酮鋰鹽和乙羧氟草醚標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用上述2 種方法分別測定峰面積，每個(gè)質(zhì)量濃度樣品進(jìn)樣3 次。以烯草酮鋰鹽(或乙羧氟草醚)的進(jìn)樣質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，以烯草酮鋰鹽(或乙羧氟草醚)的峰面積(y)為縱坐標(biāo)做圖，得烯草酮鋰鹽(或乙羧氟草醚)的線性相關(guān)曲線。其正相線性方程分別為：y烯草酮鋰鹽=5 276.7x+480.21，y乙羧氟草醚=7 072.1x+38.402；相關(guān)系數(shù)分別為：r2烯草酮鋰鹽=0.999 5，r2乙羧氟草醚=0.999 5；其反相線性方程分別為：y烯草酮鋰鹽=5 433.4x+318.53，y乙羧氟草醚=7 699.6x+21.846；相關(guān)系數(shù)分別為：r2烯草酮鋰鹽=0.999 5，r2乙羧氟草醚=0.999 3，說明2 種方法在測定范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性范圍。

2.4 方法的精密度

從同一批17%的烯草酮·乙羧氟草醚乳油樣品中分別準(zhǔn)確連續(xù)稱取5 個(gè)試樣，分別采用上述2 種方法進(jìn)行分析，結(jié)果見表1。正相檢測中烯草酮和乙羧氟草醚標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.02 和0.04，變異系數(shù)分別為0.18%、0.76%；反相檢測烯草酮和乙羧氟草醚標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.03 和0.01，變異系數(shù)分別為0.29%、0.14%。說明2 種方法的精密度都能很好滿足工業(yè)分析的定量要求。

表1 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.5 方法的準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確稱取5 個(gè)17%烯草酮·乙羧氟草醚乳油試樣，均加入一定量的烯草酮鋰鹽標(biāo)樣和乙羧氟草醚標(biāo)樣，按照上述條件進(jìn)樣分析，并計(jì)算其回收率，結(jié)果見表2。正反相結(jié)果均顯示烯草酮和乙羧氟草醚的平均回收率均較高，符合分析標(biāo)準(zhǔn)。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié) 論

本文采用高效液相色譜法建立了2 種能夠同時(shí)測定烯草酮和乙羧氟草醚混配制劑中的有效成分的定量分析方法。2 種檢測方法各有優(yōu)劣，其中正相譜圖與反相譜圖相比雜峰更少一些；而反相條件下，計(jì)算所得的烯草酮的含量結(jié)果偏低，但均在允許范圍內(nèi)。2 種方法分離效果良好，方法的準(zhǔn)確度和精密度均較高，且簡單高效易操作，因此均可用于烯草酮和乙羧氟草醚復(fù)配制劑的質(zhì)量控制，具有較強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值和可行性。