血清HMGB1、IL-33與再生障礙性貧血患兒病情嚴(yán)重程度及免疫狀態(tài)的相關(guān)性分析

杜葉子,楊皓瑩,段 璠

三二〇一醫(yī)院輸血科,陜西漢中 723000

再生障礙性貧血是臨床常見(jiàn)的血液系統(tǒng)疾病,同時(shí)也是兒童常見(jiàn)的難治性血液病,該疾病表現(xiàn)多樣化且無(wú)特異性,目前臨床治療困難,特別是重型再生障礙性貧血患兒,其病情較重,病死率也高,已嚴(yán)重威脅我國(guó)兒童身體健康與生命安全[1-2]。目前早期診斷再生障礙性貧血患兒是改善預(yù)后、提高治療效果的關(guān)鍵。高遷移率族蛋白B1(HMGB1)作為一種晚期炎癥介質(zhì),可參與炎癥性疾病發(fā)生、發(fā)展過(guò)程,同時(shí)也可作為一種免疫“預(yù)警信號(hào)”調(diào)控機(jī)體免疫反應(yīng),在人體骨髓細(xì)胞增殖中也具有一定的作用[3-4]。白細(xì)胞介素(IL)-33是一種新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子,研究發(fā)現(xiàn)其在機(jī)體免疫和炎癥反應(yīng)中具有重要作用[5]。例如,IL-33在急性呼吸窘迫綜合征中可促進(jìn)機(jī)體的炎癥反應(yīng),加重肺部損傷[6]。目前對(duì)于血清HMGB1、IL-33與再生障礙性貧血患兒的關(guān)系研究報(bào)道較少。因此,本研究擬探討再生障礙性貧血患兒血清HMGB1、IL-33水平及其與病情、細(xì)胞免疫障礙的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年6月至2022年6月經(jīng)三二〇一醫(yī)院收治的102例再生障礙性貧血患兒作為研究組,其中男性52例,女性50例;年齡1.0～12.0歲,平均(6.20±1.27)歲;研究組包括重型[骨髓造血細(xì)胞成分<25%+任意兩條血常規(guī)條件:血小板計(jì)數(shù)(PLT)<20×109/L、中性粒細(xì)胞<0.5×109/L、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)<20×109/L]再生障礙性貧血患兒42例、輕型(非重型)再生障礙性貧血患兒60例。根據(jù)患兒治療后有無(wú)發(fā)生細(xì)胞免疫功能障礙分為發(fā)生組38例與未發(fā)生組64例。另選取同期在本院體檢健康且無(wú)感染性或血液性疾病的78例健康兒童作為對(duì)照組,男性40例,女性38例;年齡1.5～13.0歲,平均(6.85±1.44)歲。兩組年齡、性別比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合再生障礙性貧血診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],均經(jīng)臨床檢查、骨髓病理檢查確證;(2)患兒及家屬已簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并心、肝、腎功能衰竭;(2)合并惡性腫瘤疾病及其他類(lèi)型免疫系統(tǒng)性疾病;(3)在入院前有使用相關(guān)治療藥物;(4)使用影響免疫功能藥物;(5)臨床資料不全;(6)依從性差,無(wú)法完全配合治療。本研究已獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(倫理批號(hào):院倫理審〔2023〕011號(hào))。

1.2研究方法

1.2.1血清HMGB1、IL-33檢測(cè) 收集患者入院后24 h內(nèi)的外周靜脈血5 mL送檢,室溫下經(jīng)3 000 r/min離心15 min(離心半徑12 cm),取上清液并貯存于不含抗凝劑或防腐劑的試管內(nèi),最后放置于-70 ℃冰箱中保存。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)血清HMGB1、IL-33水平。采用邁瑞XE-500血細(xì)胞自動(dòng)分析儀(產(chǎn)自美國(guó)貝克曼公司)檢測(cè)患兒PLT情況,同時(shí)入院后進(jìn)行骨髓穿刺及涂片檢查,選取厚薄合適的骨髓片在常規(guī)瑞氏染色后由檢驗(yàn)科人員進(jìn)行巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)(MK)。本研究所有試劑盒購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司,批號(hào)為2205229,具體步驟嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.2細(xì)胞免疫功能 全部患兒均接受半年環(huán)孢菌素A+抗胸腺/淋巴細(xì)胞球蛋白聯(lián)合促造血治療。細(xì)胞免疫功能障礙參照文獻(xiàn)[8]進(jìn)行評(píng)估,在治療半年后采用多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群:(1)外周血T淋巴細(xì)胞亞群分布異常,CD4+/CD8+倒置;(2)IL-8活力增高;(3)自然殺傷細(xì)胞活性下降。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清HMGB1、IL-33水平比較 研究組血清HMGB1水平高于對(duì)照組,血清IL-33水平低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 研究組、對(duì)照組血清HMGB1、IL-33水平比較

2.2不同病情程度再生障礙性貧血患兒血清HMGB1、IL-33、PLT、MK比較 重型再生障礙性貧血患兒血清HMGB1水平高于輕型再生障礙性貧血患兒,血清IL-33及PLT、MK均低于輕型再生障礙性貧血患兒,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同病情程度再生障礙性貧血患兒血清HMGB1、IL-33、PLT、MK比較

2.3再生障礙性貧血患兒血清HMGB1、IL-33與PLT、MK的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析顯示,再生障礙性貧血患兒血清HMGB1與PLT、MK均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.441、-3.885,P<0.05),血清IL-33與PLT、MK均呈正相關(guān)(r=0.510、0.486,P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 生障礙性貧血患兒血清HMGB1、IL-33與PLT、MK的相關(guān)性

2.4發(fā)生組、未發(fā)生組血清HMGB1、IL-33水平比較 發(fā)生組血清HMGB1水平高于未發(fā)生組,血清IL-33水平低于未發(fā)生組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 發(fā)生組、未發(fā)生組患兒血清HMGB1、IL-33水平比較

2.5血清HMGB1、IL-33對(duì)再生障礙性貧血患兒細(xì)胞免疫功能障礙的診斷價(jià)值 ROC曲線(xiàn)分析顯示,血清HMGB1、IL-33診斷細(xì)胞再生障礙性貧血患兒免疫功能障礙的AUC分別為0.832、0.771,二者靈敏度較高;血清HMGB1聯(lián)合IL-33診斷再生障礙性貧血患兒細(xì)胞免疫功能障礙的AUC為0.906,靈敏度、特異度均衡,見(jiàn)表5、圖1。

圖1 血清HMGB1、IL-33診斷再生障礙性貧血患兒細(xì)胞免疫功能障礙的ROC曲線(xiàn)

表5 血清HMGB1、IL-33對(duì)再生障礙性貧血患兒細(xì)胞免疫功能障礙的診斷價(jià)值

3 討 論

再生障礙性貧血作為一種由多種原因引起的骨髓造血功能衰竭、全血細(xì)胞減少的病癥,是兒童群體常見(jiàn)且嚴(yán)重的血液病之一[9]。該疾病發(fā)病后可導(dǎo)致骨髓組織造血干細(xì)胞、造血微環(huán)境狀態(tài)及機(jī)體免疫系統(tǒng)出現(xiàn)異常,臨床多表現(xiàn)為貧血、出血和感染[10]。雖然目前我國(guó)乃至世界范圍內(nèi)再生障礙性貧血發(fā)病率較低,但重型臨床表現(xiàn)極為嚴(yán)重,不利于預(yù)后。因此,早期預(yù)測(cè)再生障礙性貧血患兒發(fā)生對(duì)改善預(yù)后具有重要價(jià)值。而本研究主要是探討再生障礙性貧血患兒血清HMGB1、IL-33水平及其與病情、免疫障礙的關(guān)系。

HMGB1作為一種高度保守的核蛋白,具有調(diào)控DNA穩(wěn)定、復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及翻譯等功能[11]。同時(shí)HMGB1也可作為一種重要的炎癥介質(zhì),參與感染、炎癥過(guò)程、免疫反應(yīng)、缺血再灌注損傷等多種病理生理學(xué)活動(dòng)[12]。已有相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),HMGB1對(duì)健康人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子分泌具有促進(jìn)作用[13],血清HMGB1水平升高是影響膿毒癥急性肺損傷發(fā)生的危險(xiǎn)因素[14]。因此本研究分析血清HMGB1發(fā)現(xiàn),研究組患兒血清HMGB1水平高于對(duì)照組,說(shuō)明血清HMGB1水平升高可能與再生障礙性貧血患兒發(fā)生密切有關(guān),與以上研究結(jié)論一致。本研究顯示,重型組再生障礙性貧血患兒血清HMGB1水平高于輕型組,且與PLT、MK均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),說(shuō)明隨著病情加重其血清HMGB1水平也逐漸升高,同時(shí)巨核細(xì)胞數(shù)量、血小板生成減少狀況更明顯。本研究顯示,發(fā)生組血清HMGB1水平高于未發(fā)生組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說(shuō)明血清HMGB1水平在細(xì)胞免疫功能障礙患兒中升高,可能參與其發(fā)生。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),血清HMGB1診斷再生障礙性貧血患兒細(xì)胞免疫功能障礙的AUC為0.832,靈敏度較高,提示HMGB1對(duì)再生障礙性貧血患兒細(xì)胞免疫功能障礙具有較好的診斷價(jià)值,因此可作為評(píng)估細(xì)胞免疫功能障礙發(fā)生的有效指標(biāo)。HMGB1作為一種重要的炎癥介質(zhì),不僅可通過(guò)活化后的巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等主動(dòng)分泌,同時(shí)又能夠從損傷壞死的細(xì)胞中被動(dòng)釋放出來(lái),因此當(dāng)HMGB1水平升高時(shí)可誘導(dǎo)機(jī)體釋放炎癥因子,加重疾病進(jìn)展[15]。而再生障礙性貧血發(fā)病后可導(dǎo)致體內(nèi)可釋放炎性因子,而此時(shí)其血清HMGB1水平異常升高,而隨著血清HMGB1水平升高又可進(jìn)一步誘導(dǎo)機(jī)體釋放炎癥因子,進(jìn)而可導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能障礙發(fā)生。

IL-33是來(lái)自IL-1家族的新成員,可通過(guò)與其受體結(jié)合的形式發(fā)揮作用[16]。目前IL-33具有細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子和細(xì)胞外細(xì)胞因子的雙重功能,作為細(xì)胞內(nèi)核因子具有調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄作用;作為前炎性細(xì)胞因子,可引起特異性免疫病理改變[17]。有研究顯示,血清IL-33水平在多發(fā)性骨髓瘤患者中降低[18],但I(xiàn)L-33在肺炎支原體肺炎患兒中表達(dá)水平顯著升高,且可以作為判別病癥嚴(yán)重程度的檢測(cè)標(biāo)志物[19]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),研究組血清IL-33水平低于對(duì)照組,重型再生障礙性貧血患兒血清IL-33及PLT、MK水平均低于輕型再生障礙性貧血患兒,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說(shuō)明血清IL-33參與再生障礙性貧血患兒發(fā)生、發(fā)展,與以上研究結(jié)論一致。本研究結(jié)果顯示,發(fā)生組血清IL-33水平低于未發(fā)生組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說(shuō)明血清IL-33可能參與免疫功能障礙的發(fā)生。ROC曲線(xiàn)分析發(fā)現(xiàn),IL-33診斷再生障礙性貧血患兒細(xì)胞免疫功能障礙的AUC為0.771,靈敏度較高,提示IL-33對(duì)再生障礙性貧血患兒細(xì)胞免疫功能障礙具有較好的診斷價(jià)值。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),再生障礙性貧血與Th17細(xì)胞數(shù)量增加及Treg細(xì)胞數(shù)量減少密切相關(guān)[20]。IL-33作為IL-1家族成員,其受體是ST2L,具有調(diào)節(jié)TH17/Treg細(xì)胞平衡作用,且當(dāng)IL-33與升高的sST2結(jié)合時(shí)可進(jìn)一步阻斷Treg細(xì)胞的IL-33/ST2信號(hào)通路,抑制Treg細(xì)胞增殖從而導(dǎo)致Th17/Treg失衡。而本研究再生障礙性貧血患兒血清IL-33水平降低顯著也可能導(dǎo)致Th17細(xì)胞數(shù)量增加,從而使Th17/Treg失衡,最終可引起細(xì)胞免疫功能障礙發(fā)生。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),血清HMGB1聯(lián)合IL-33診斷再生障礙性貧血患兒細(xì)胞免疫功能障礙的AUC為0.906,提示二者聯(lián)合應(yīng)用更有助于再生障礙性貧血患兒細(xì)胞免疫功能障礙的診斷,從而可為臨床及時(shí)采取積極有效的治療干預(yù)措施提供指導(dǎo)。

綜上所述,再生障礙性貧血患兒血清HMGB1水平升高,IL-33水平降低,且二者與病情、細(xì)胞免疫障礙密切相關(guān),有望作為評(píng)估患兒病情、細(xì)胞免疫功能障礙的有效指標(biāo)。本研究為單中心樣本分析,且僅納入單家醫(yī)院就診患者,缺乏代表性,可能存在選擇偏倚,因此后續(xù)研究中將增加樣本來(lái)源單位進(jìn)一步分析。