2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝患者血清CMKLR1、STAT3表達與肝纖維化的關系

陳利靈,鄭寬勇,王 亮,劉安寧

長江大學附屬仙桃市第一人民醫(yī)院內(nèi)分泌科,湖北仙桃 433000

非酒精性脂肪肝(NAFLD)常與高血壓、肥胖、高血脂及2型糖尿病等代謝性共病相關[1-2]。有研究顯示,僅有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和重度肝纖維化等少數(shù)NAFLD患者可能出現(xiàn)慢性肝病并發(fā)癥,其中重度肝纖維化已被證明是NAFLD患者病死率增加的主要驅(qū)動因素[3]。因此,目前2型糖尿病合并NAFLD疾病中的關鍵問題是重度肝纖維化的鑒別診斷。既往研究顯示,趨化因子樣受體1(CMKLR1)在NASH小鼠肝組織中高表達,而黃連素可通過調(diào)節(jié)CMKLR1信號通路減輕NASH[4]。有研究表明,四逆散可通過抑制酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信號轉(zhuǎn)導激活轉(zhuǎn)錄因子3(STAT3)信號通路改善NAFLD[5]。既往研究中CMKLR1、STAT3均與NAFLD疾病相關,但目前缺乏二者與2型糖尿病合并NAFLD的相關性研究?；诖?本研究通過檢測2型糖尿病合并NAFLD患者血清CMKLR1、STAT3水平,分析兩指標與2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年3月至2022年11月于本院接受治療的94例2型糖尿病合并NAFLD患者為觀察組,男65例,女29例,平均年齡為(50.60±9.86)歲,依據(jù)病理診斷確定觀察組患者肝纖維化分級為S0～S4級,其中S0～S2級為輕中度纖維化(輕中度組)52例,S3～S4級為重度纖維化(重度組)42例。另選取同期在本院收治的102例2型糖尿病患者為對照組,男69例,女33例,平均年齡為(50.65±10.71)歲?；颊弑救颂峁┲橥鈺?研究符合臨床倫理標準。納入標準:(1)NAFLD診斷符合診療指南[6],2型糖尿病符合《糖尿病分型診斷中國專家共識》[7];(2)首次確診,一般資料保存完整。排除標準:(1)近6個月內(nèi)有重大外傷史或感染史;(2)有惡性腫瘤或嚴重心腦血管疾病;(3)近6個月內(nèi)有護肝藥、降脂藥等藥物服用史;(4)有精神障礙疾病或語言溝通障礙;(5)酒精性脂肪肝或因藥物所致的脂肪肝。

1.2儀器與試劑 CMKLR1試劑盒購自上?；钌锟萍加邢薰?貨號:HBP32183R);STAT3試劑盒購自武漢菲恩生物科技有限公司(貨號:EH0602)。CLARIOstar PLUS全功能多功能酶標儀購自德國BMG LABTECH公司;LUmo化學發(fā)光免疫分析儀購自鄭州安圖生物工程股份有限公司。

1.3方法

1.3.1臨床資料收集 收集觀察組臨床資料,包括年齡、性別、體重指數(shù)(BMI)、2型糖尿病病程、糖尿病家族史、糖化血紅蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。

1.3.2血清CMKLR1、STAT3水平檢測 收集觀察組和對照組入組第2天清晨空腹靜脈血樣,3 000 r/min離心處理15 min后分離上層血清,分裝于干燥EP管中,置于-80 ℃條件保存,待測。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測血清CMKLR1、STAT3水平,檢測儀器為多功能酶標儀。

1.3.3肝纖維化指標檢測 采用化學發(fā)光法測定觀察組肝纖維化指標Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)、層黏連蛋白(LN)、Ⅳ型膠原(CⅣ)水平,檢測儀器為化學發(fā)光免疫分析儀。

2 結(jié) 果

2.1對照組、觀察組血清CMKLR1、STAT3水平比較 觀察組血清CMKLR1、STAT3水平均高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 對照組、觀察組血清CMKLR1、STAT3水平比較

2.22型糖尿病合并NAFLD患者不同肝纖維化程度組各指標比較 重度組CMKLR1、STAT3及肝纖維化指標PⅢP、LN、CⅣ均高于輕中度組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。輕中度組與重度組年齡、性別、BMI、2型糖尿病病程、糖尿病家族史、HbA1c、FPG、TG、TC、HDL-C、LDL-C比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 2型糖尿病合并NAFLD患者不同肝纖維化程度組各指標比較

2.32型糖尿病合并NAFLD患者血清CMKLR1、STAT3水平與肝纖維化指標的相關性 Pearson相關分析結(jié)果顯示,2型糖尿病合并NAFLD患者血清CMKLR1、STAT3水平與PⅢP、LN、CⅣ均呈正相關(P<0.05)。見表3。

表3 2型糖尿病合并NAFLD患者血清CMKLR1、STAT3水平與肝纖維化指標的相關性

2.4血清CMKLR1、STAT3水平對2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化程度的預測效能 以血清CMKLR1、STAT3水平為檢驗變量,將2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化是否發(fā)展為重度作為狀態(tài)變量繪制ROC曲線,結(jié)果顯示,血清CMKLR1、STAT3水平單獨及聯(lián)合預測2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化發(fā)展為重度的曲線下面積(AUC)分別為0.867(95%CI:0.797～0.937)、0.818(95%CI:0.734～0.902)、0.922(95%CI:0.870～0.974),其中聯(lián)合預測AUC顯著高于CMKLR1、STAT3單獨預測AUC(Z=1.945、3.677,P<0.05),特異度分別為78.8%、80.8%、80.8%,靈敏度分別為78.6%、71.4%、88.1%,CMKLR1、STAT3的截斷值分別為60.42 μg/L、1.50 ng/mL。見圖1。

圖1 血清CMKLR1、STAT3水平預測2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化程度加重風險的ROC曲線

2.5影響2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化程度的多因素Logistic回歸分析 將2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化程度是否發(fā)展為重度作為因變量,以單因素分析中差異有統(tǒng)計學意義的CMKLR1、STAT3、PⅢP、LN、CⅣ為自變量進行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示CMKLR1、STAT3是影響2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化發(fā)展為重度的獨立危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化程度的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

NAFLD是一種多因素疾病,包括單純性脂肪變性、NASH、肝纖維化/肝硬化等病理狀況[8]。單純性脂肪變性向NASH和肝纖維化的進展與一系列肝臟損傷密切相關,這些損傷由脂肪毒性、氧化應激、氧化還原失衡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激、炎癥和凋亡等引起,可增強膠原和細胞外基質(zhì)(ECM)沉積[9-10]。肝活檢是鑒定肝纖維化的金標準,但其存在侵入性、可接受性差、采樣可變性及成本高等局限性[11]。因此,探究2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化的相關生物學指標對于臨床治療具有重要意義。

肝星狀細胞(HSC)激活被認為是肝纖維化的關鍵環(huán)節(jié),肝臟受損后HSC被激活并轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞,同時分泌大量ECM成分,導致ECM過度沉積,肝纖維化加重[12]。此外,HSC同時分泌多種趨化因子,引導表達CMKLR1的細胞向受損肝臟趨化和募集[13-14]。本研究結(jié)果中,2型糖尿病合并NAFLD重度纖維化患者血清CMKLR1水平較高,且CMKLR1升高是肝纖維化發(fā)展為重度的影響因素。分析認為2型糖尿病合并NAFLD早期患者肝臟受損,HSC細胞被激活后分泌大量ECM及多種趨化因子,趨化因子進一步誘導細胞在受損的肝臟組織附近產(chǎn)生CMKLR1,加重肝臟炎癥,同時趨化因子及其受體CMKLR1等進一步激活HSC細胞,導致肝纖維化加重。

STAT3是一種細胞質(zhì)信號轉(zhuǎn)錄因子,可參與JAK-STAT途徑,調(diào)節(jié)細胞增殖和凋亡,同時可調(diào)控肝損傷過程[15]。研究表明,許多纖維化組織中STAT3被激活,STAT3的持續(xù)激活可促進肝纖維化發(fā)生發(fā)展[16]。本研究結(jié)果表明,血清STAT3表達水平隨2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化程度加重而升高,STAT3是影響2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化加重的獨立危險因素。推測STAT3高表達參與2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化進展的可能機制:(1)STAT3高表達介導肝細胞凋亡,促進肝纖維化發(fā)生,促使NAFLD疾病進展,ZHU等[17]研究顯示,藍莓和益生菌組合可通過減少IL-22介導的JAK1/STAT3/BAX信號通路抑制肝細胞凋亡,從而減輕NAFLD,抑制肝纖維化的發(fā)生;(2)STAT3高表達促進肝內(nèi)促炎巨噬細胞功能并抑制抗炎巨噬細胞功能,加重肝臟炎癥微環(huán)境和肝臟損傷及肝纖維化程度。TIAN等[18]研究發(fā)現(xiàn),間充質(zhì)干細胞衍生的外泌體可通過miR-148a靶向Kruppel樣因子6,通過抑制STAT3途徑抑制促炎巨噬細胞并促進抗炎巨噬細胞,有效改善肝纖維化。進一步采用ROC曲線分析CMKLR1、STAT3的預測價值發(fā)現(xiàn),二者均可有效預測肝纖維化發(fā)展至重度,且聯(lián)合預測的AUC可達0.922,可為臨床評估提供一定參考。

綜上所述,血清CMKLR1、STAT3表達升高可能與2型糖尿病合并NAFLD患者肝纖維化程度加重有關,對重度肝纖維化有一定預測價值,并且血清指標檢測方法便捷、無創(chuàng),彌補了肝活檢的不足,可為臨床提供重要參考。但本研究實驗設計上未考慮肝纖維化不合并2型糖尿病的情況,未能明確CMKLR1、STAT3在不合并2型糖尿病的NAFLD患者中是否升高。今后將進一步開展大樣本研究對此研究結(jié)果進行進一步驗證。