外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子表達(dá)水平對PD-1/PD-L1抑制劑聯(lián)合化療治療NSCLC療效的預(yù)測效能分析

楊 榮,徐 瑩,季留連,夏月琴,張 林,焦愛民,董正宇

鹽城市第二人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科,江蘇鹽城 224000

近年來,免疫治療于肺癌領(lǐng)域取得突破性進(jìn)展,發(fā)現(xiàn)免疫檢查點(diǎn)抑制劑可為肺癌治療提供新途徑。程序性死亡因子1(PD-1)/程序性死亡因子配體1(PD-L1)為重要免疫檢查點(diǎn),可經(jīng)由逃避殺傷清除、抑制免疫反應(yīng)、免疫逃逸等途徑提升腫瘤微環(huán)境對正常免疫抵抗作用[1]。目前,PD-1/PD-L1抑制劑在多種種惡性腫瘤患者治療中取得了確切效果,近期其被進(jìn)入肺癌治療中,也顯示出了良好應(yīng)用前景,關(guān)于其療效預(yù)測標(biāo)志物已成為臨床關(guān)注的熱點(diǎn)課題[2]。國內(nèi)外研究證實(shí),外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子維持機(jī)體免疫功能中具有重要作用,且與腫瘤發(fā)生、進(jìn)展有關(guān)[3-5]。但對于外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子表達(dá)水平與PD-1/PD-L1抑制劑聯(lián)合化療治療非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)療效之間的關(guān)系研究報(bào)道較少。本研究嘗試分析外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子表達(dá)水平對PD-1/PD-L1抑制劑聯(lián)合化療治療NSCLC療效的預(yù)測效能,以期為臨床診治提供參考支持?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年5月至2021年4月在本院行PD-1/PD-L1抑制劑聯(lián)合化療治療的NSCLC患者48例作為研究對象。研究對象依據(jù)治療4個周期后的效果分為緩解組(22例)、未緩解(26例)。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為NSCLC,其中腺癌28例,鱗癌20例,腺癌患者經(jīng)基因檢測無敏感驅(qū)動基因突變;(2)臨床分期Ⅲb～Ⅳ期;(3)美國東部腫瘤協(xié)作組體力狀況評分0～2分;(4)既往未采取系統(tǒng)治療、未應(yīng)用影響機(jī)體免疫功能藥物;(5)存在客觀可測量腫瘤病灶;(6)預(yù)計(jì)生存時間>3個月;(7)患者知曉本研究,簽訂PD-1/PD-L1抑制劑治療同意書及超適應(yīng)證使用說明書;排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并自身免疫系統(tǒng)疾病、急性感染性疾病;(2)肝、腎等臟器出現(xiàn)器質(zhì)性疾病;(3)合并血液系統(tǒng)疾病、精神系統(tǒng)疾病;(4)合并肺間質(zhì)疾病;(5)存在全身免疫抑制反應(yīng);(6)對本研究應(yīng)用藥物過敏。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會同意。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測 治療前后分別采集患者清晨空腹靜脈血樣6 mL,取3 mL以流式細(xì)胞儀(美國BD公司,FACSCantoⅡ)測定外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)及PD-1水平;將另3 mL以3 000 r/min離心10 min,取血清,以化學(xué)免疫分析法測定血清糖類抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)水平,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測定血清細(xì)胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)水平,試劑盒均購于均購自上海太陽生物技術(shù)有限公司,操作嚴(yán)格按試劑盒說明書執(zhí)行。

1.2.2治療方法 所有患者均給予含鉑兩藥方案化療,腺癌患者采用培美曲塞+順鉑/卡鉑或白蛋白紫杉醇+順鉑;鱗癌患者采用吉西他濱+順鉑或白蛋白紫杉醇+順鉑。同時在此基礎(chǔ)上予以PD-1/PD-L1抑制劑治療,治療藥物涵蓋進(jìn)口藥物帕博利珠單抗、納武利尤單抗、阿特珠單抗及國產(chǎn)藥物卡瑞利珠單抗、信迪利單抗、特瑞普利單抗。治療3周為1個周期,持續(xù)治療4個周期。

1.3判斷治療療效標(biāo)準(zhǔn) 參照世界衛(wèi)生組織(WHO)實(shí)體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)(WHO雙徑測量法)進(jìn)行療效評定:(1)原有病灶消失,未出現(xiàn)新病灶,持續(xù)時間≥4周為完全緩解;(2)病灶縮小>50%,未出現(xiàn)新病灶,持續(xù)時間≥4周為部分緩解;(3)病灶縮小≤50%或增大≤25%,未出現(xiàn)新病灶,持續(xù)時間≥4周為穩(wěn)定;(4)病灶增大>25%或產(chǎn)生新病灶為進(jìn)展[6]。將完全緩解與部分緩解歸入緩解組,穩(wěn)定、進(jìn)展歸入未緩解組。

1.4觀察指標(biāo) (1)兩組一般資料[年齡、性別、體重指數(shù)(BMI)、飲酒史、吸煙史、合并癥(高脂血癥、高血壓、糖尿病、冠心病)、病理類型、臨床分期]比較;(2)兩組治療前、治療4個周期后外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子(CD3+、CD4+、CD8+、PD-1)、腫瘤標(biāo)志物(CA125、CEA、CYFRA21-1)水平比較;(3)NSCLC患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子與腫瘤標(biāo)志物相關(guān)性分析;(4)NSCLC患者療效影響因素分析;(5)分析外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子對治療NSCLC療效預(yù)測價值。

2 結(jié) 果

2.1兩組一般資料比較 兩組年齡、性別、BMI、飲酒史、吸煙史、合并癥、病理類型、臨床分期比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子、腫瘤標(biāo)志物水平比較 兩組治療前外周血CD3+、CD4+、CD8+、PD-1與血清CA125、CEA、CYFRA21-1水平相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);兩組治療4個周期后外周血CD3+、CD4+水平均較本組治療前提高,且緩解組高于未緩解組,外周血CD8+、PD-1、血清CA125、CEA、CYFRA21-1水平均較本組治療前降低,且緩解組低于未緩解組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子、腫瘤標(biāo)志物水平比較

2.3NSCLC患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子與腫瘤標(biāo)志物相關(guān)性分析 NSCLC患者治療4個周期后外周血CD3+、CD4+與血清CA125、CEA、CYFRA21-1水平呈負(fù)相關(guān),外周血CD8+、PD-1與血清CA125、CEA、CYFRA21-1水平呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 NSCLC患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子與腫瘤標(biāo)志物關(guān)系

2.4NSCLC患者療效影響因素分析 NSCLC患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、PD-1、血清CA125、CEA、CYFRA21-1水平以平均值為界,各指標(biāo)小于或等于平均值賦值1,大于平均值賦值2,納入Logistic回歸分析,NSCLC患者治療4個周期后外周血CD3+、CD4+、CD8+、PD-1與血清CA125、CEA、CYFRA21-1均與NSCLC患者療效密切相關(guān)(P<0.05)。見表4。

表4 NSCLC患者療效影響因素分析

2.5外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子對NSCLC患者療效的預(yù)測價值 NSCLC患者中以緩解組作為陰性樣本,未緩解組作為陽性樣本,ROC曲線分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),治療4個周期后外周血CD3+、CD4+、CD8+、PD-1單獨(dú)預(yù)測未緩解的AUC分別為0.780、0.670、0.837、0.862,對各單獨(dú)指標(biāo)采取二元擬合回歸,建立Logistic預(yù)測評估模型,獲取聯(lián)合檢測預(yù)測未緩解的AUC為0.938,預(yù)測靈敏度為80.00%,特異度為90.91%。見表5、圖1。

圖1 ROC曲線分析

表5 外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子對NSCLC療效的預(yù)測價值

3 討 論

目前,肺癌治療已進(jìn)入免疫治療時代,PD-1/PD-L1抑制劑為惡性腫瘤治療提供了新方向,可與機(jī)體中PD-1受體結(jié)合,阻止其與PD-L1、PD-L2相結(jié)合,解除PD-1通路所介導(dǎo)的免疫抑制效應(yīng),提升自身T細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞監(jiān)視作用,阻止腫瘤生長、侵襲,并促進(jìn)其衰亡,抑制癌癥進(jìn)展[7-8]。但并非所有患者均可通過免疫治療獲益,準(zhǔn)確篩查出可由免疫治療獲益的患者,才能達(dá)成更為精準(zhǔn)個體化免疫治療。故尋找有關(guān)免疫治療療效預(yù)測標(biāo)志物已成為臨床關(guān)注重點(diǎn)課題。

PD-1/PD-L1抑制劑為免疫治療方法,若其生效,則機(jī)體有關(guān)免疫細(xì)胞及相關(guān)分子水平理論上應(yīng)有所變化。有關(guān)研究指出,T細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫為機(jī)體抗腫瘤重要方式,通過測定外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平可準(zhǔn)確、迅速地檢測機(jī)體免疫狀況[9-10]。CD3+、CD4+、CD8+均為T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo),其中CD3+可反映細(xì)胞免疫整體水平;CD4+T細(xì)胞為輔助性T細(xì)胞,可協(xié)助機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng);CD8+T細(xì)胞為抑制性T細(xì)胞,可抑制B細(xì)胞產(chǎn)生抗體,減弱T細(xì)胞免疫功能[11-12]。趙美淇等[13]研究指出,腫瘤細(xì)胞微環(huán)境內(nèi)存在許多可阻止CD3+、CD4+細(xì)胞成熟及分化的免疫抑制因子,且CD8+細(xì)胞比例增高,CD4+/CD8+值下降,導(dǎo)致機(jī)體進(jìn)入至免疫抑制狀態(tài),免疫功能產(chǎn)生紊亂,腫瘤細(xì)胞難以被正常清除,致使腫瘤細(xì)胞增殖,患者病情惡化。吳紅波等[14]研究報(bào)道,肺癌化療前T淋巴細(xì)胞亞群水平與腫瘤分期、分化程度密切相關(guān),低分化、Ⅲ～Ⅳ期患者CD4+/CD8+水平顯著低于高中分化、Ⅰ～Ⅱ期患者。本研究結(jié)果顯示,NSCLC患者治療4個周期后外周血CD3+、CD4+與血清CA125、CEA、CYFRA21-1水平呈負(fù)相關(guān),外周血CD8+、PD-1與血清CA125、CEA、CYFRA21-1水平呈正相關(guān)(P<0.05)。CA125、CEA、CYFRA21-1為臨床常用腫瘤標(biāo)志物,在健康人群中表達(dá)水平降低,一旦出現(xiàn)癌變其水平可顯著增高,與腫瘤惡性程度密切相關(guān)[15-17]。上述研究提示NSCLC患者T淋巴細(xì)胞亞群水平可能與腫瘤惡性程度密切相關(guān)。分析原因與腫瘤惡性程度越高,產(chǎn)生免疫抑制因子越多有關(guān)。本研究結(jié)果還顯示,NSCLC患者治療4個周期后外周血CD3+、CD4+、CD8+、PD-1與血清CA125、CEA、CYFRA21-1均與NSCLC患者療效密切相關(guān)(P<0.05),提示NSCLC患者T淋巴細(xì)胞亞群水平與PD-1/PD-L1抑制劑聯(lián)合化療治療效果有關(guān)。這可能歸因于PD-1/PD-L1抑制劑聯(lián)合化療可降低腫瘤負(fù)荷,減少由于腫瘤分泌的免疫抑制因子,減輕免疫抑制。本研究結(jié)果顯示,聯(lián)合檢測預(yù)測未緩解的AUC為0.938,預(yù)測靈敏度為80.00%,特異度為90.91%。T淋巴細(xì)胞亞群可為PD-1/PD-L1抑制劑聯(lián)合化療治療NSCLC療效的預(yù)測提供可靠依據(jù),有利于臨床精準(zhǔn)個體化免疫治療。

PD-1處于活化的T細(xì)胞表面,可與腫瘤細(xì)胞表面PD-L1相結(jié)合,促使PD-1/PD-L1信號通路激活,介導(dǎo)腫瘤特異性T細(xì)胞衰亡,腫瘤局部生成免疫抑制微環(huán)境[18]。有研究報(bào)道,在腫瘤微環(huán)境中T細(xì)胞表面共抑制分子PD-1等水平可致使殺傷腫瘤細(xì)胞功能降低,T細(xì)胞免疫監(jiān)視作用減弱,引起腫瘤免疫逃逸[19]。高鋒等[20]研究指出,PD-1表達(dá)與NSCLC患者病情進(jìn)展及預(yù)后生存期具有密切關(guān)系。PD-1/PD-L1抑制劑聯(lián)合化療可抑制PD-1表達(dá),減少T細(xì)胞衰亡,改善機(jī)體免疫功能,抑制腫瘤細(xì)胞生長并促使其凋亡。

綜上所述,采用PD-1/PD-L1抑制劑聯(lián)合化療治療NSCLC后外周血T淋巴細(xì)胞亞群及T細(xì)胞表面共抑制分子表達(dá)水平可出現(xiàn)顯著變化,且其表達(dá)與腫瘤惡性程度有關(guān),兩者聯(lián)合檢測可作為預(yù)測療效的有力參考。