湖北地區(qū)4 819例HPV感染亞型分布及差異分析

白 樺,申復(fù)進(jìn),姜樹(shù)朋,鄭紅云△

武漢大學(xué)人民醫(yī)院:1.檢驗(yàn)科;2.婦產(chǎn)科,湖北武漢430060

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種嗜人體皮膚和黏膜組織細(xì)胞的DNA病毒,可廣泛感染人類(lèi)皮膚及生殖道 、呼吸道上皮組織,與多種良惡性腫瘤密切相關(guān)。其感染廣泛存在于不同性別和年齡的人群中。目前已經(jīng)從臨床活檢中檢測(cè)出了大約130種HPV類(lèi)型[1]。HPV是導(dǎo)致女性罹患宮頸上皮增生和宮頸癌的危險(xiǎn)因素之一。HPV不僅是子宮頸的致癌物,而且一部分外陰癌、陰道癌等都可歸因于高危HPV感染。男性中與HPV感染有關(guān)的疾病有尖銳濕疣、尿道感染等,甚至有研究表明 HPV感染可能降低男性精液質(zhì)量,是引起男性不育的危險(xiǎn)因素之一[2-3]。不同型別的HPV致病能力差異較大,根據(jù)不同基因型與癌發(fā)生危險(xiǎn)性的高低可分為高危型HPV和低危型HPV,低危型HPV與外生殖器、肛周皮膚尖銳濕疣和低度宮頸上皮內(nèi)瘤等良性病變有關(guān);高危型HPV與皮膚和黏膜惡性腫瘤相關(guān),如宮頸癌、外陰癌、陰道癌、肛門(mén)癌和陰莖癌及頭頸部癌等[4]。HPV疫苗的預(yù)防性接種顯著降低了宮頸癌的發(fā)生率。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2022年2-12月在武漢大學(xué)人民醫(yī)院就診并進(jìn)行脫落細(xì)胞標(biāo)本HPV 27種基因分型檢測(cè)的患者共4 819例患者,其中男性277例,女性4 542例,男性年齡18～86歲,女性年齡16～85歲。采用流式熒光雜交分型檢測(cè)方法對(duì)其進(jìn)行17種高危型HPV和10種低危型HPV檢測(cè)。

1.2儀器與試劑 Eppendorf基因擴(kuò)增儀;美國(guó)Luminex200多功能流式點(diǎn)陣儀,上海透景生命科技有限公司高危型人乳頭瘤病毒核酸分型檢測(cè)試劑盒(流式熒光雜交法),可檢測(cè)27種亞型(高危型HPV16、26、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、82,低危型HPV6、11、40、42、43、44、55、61、81、83)。

1.3方法 (1)標(biāo)本采集:婦科醫(yī)師采用專(zhuān)用采樣拭子在女性患者的宮頸處反復(fù)刷取并采集脫落細(xì)胞;經(jīng)培訓(xùn)的同一名男科醫(yī)師采用專(zhuān)用采樣拭子在男性患者的陰莖冠狀溝或疣體部位反復(fù)刷取,并采集脫落細(xì)胞。(2)標(biāo)本處理:在標(biāo)本處理室,參照核酸提取試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本的核酸釋放。(3)PCR試劑配制和PCR擴(kuò)增:按試劑盒進(jìn)行PCR反應(yīng)體系的配制,然后向所設(shè)定的n個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入處理過(guò)的標(biāo)本5 μL,開(kāi)始進(jìn)行PCR擴(kuò)增。(4)雜交檢測(cè):微球雜交混合PCR擴(kuò)增產(chǎn)物后加入鏈霉親和素和藻紅蛋白,48 ℃孵育15 min。(5)結(jié)果判讀:Luminex200多功能流式點(diǎn)陣儀讀取微球編碼及其對(duì)應(yīng)熒光強(qiáng)弱信號(hào),經(jīng)配套計(jì)算軟件判讀檢測(cè)結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS26.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)和百分比表示,HPV各型別感染率的組間差異采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1不同性別 HPV感染情況及各HPV亞型感染情況 男性HPV感染率最高的5種HPV類(lèi)型分別為HPV6(35.38%)、HPV11(15.52%)、HPV52(14.08%)、HPV16(11.91%)、HPV59(7.94%);女性HPV感染率最高的5種HPV類(lèi)型分別為HPV52(20.50%)、HPV58(12.55%)、HPV16(12.48%)、HPV53(11.65%)、HPV81(8.65%),有2種高感染率HPV亞型(HPV16、52)與男性重合。男性HPV感染率最高的5種HPV亞型中,有3種高危分型(HPV16、52、59),2種低危分型(HPV6、11);女性HPV感染率最高的5種HPV亞型中,有4種高危分型(16、52、53、58),1種低危分型(HPV81)。見(jiàn)表1。

表1 HPV分型結(jié)果及感染率[n(%)]

男性患者HPV6、11、42、52、53、58、61、68感染率與女性患者比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其中HPV6、11感染率高于女性患者(P<0.05),均為低危型HPV亞型;而 HPV42、52、53、58、61、68感染率低于女性患者 (P<0.05),其中HPV52、53、58、68為高危型HPV亞型,42、61為低危型HPV亞型。見(jiàn)表1。

2.2不同性別HPV單重多重感染情況比較 男性單純低危型HPV感染率、多重風(fēng)險(xiǎn)混合型HPV感染率明顯高于女性,而單重單純高危型HPV感染率、總單純高危型HPV感染率明顯低于女性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 男性與女性HPV單重多重感染情況比較[n(%)]

2.3不同年齡段患者 HPV單重多重感染情況比較 所有年齡段患者的總單純高危型HPV感染率高于單純低危型HPV感染率和多重風(fēng)險(xiǎn)混合型HPV感染率。30～<40歲HPV感染率(24.32%)最高,其次是40～<50歲(22.41%),50～<60歲(22.25%),其他年齡段HPV感染率均低于20%。40～<50歲單純低危型HPV感染率最高。見(jiàn)表3。單純高危型HPV感染和多重風(fēng)險(xiǎn)混合型HPV感染以中年人感染居多。

表3 不同年齡段患者HPV單重多重感染情況比較

3 討 論

宮頸癌是第四大最常診斷的癌癥,也是女性癌癥死亡的第四大原因,2020年全球估計(jì)有60.4萬(wàn)例新病例和34.2萬(wàn)例死亡[5]。宮頸癌治療方法主要有手術(shù)治療和放療[6],會(huì)對(duì)患者的正常生活帶來(lái)極大負(fù)擔(dān)。HPV感染是子宮頸癌發(fā)生的主要原因之一。HPV感染非常常見(jiàn),且大多數(shù)感染通常是短暫的、無(wú)癥狀的和自限性的,但少數(shù)高危型HPV感染在沒(méi)有及時(shí)篩查和干預(yù)的情況下會(huì)持續(xù)存在,并有進(jìn)展為2/3級(jí)宮頸上皮內(nèi)腫瘤并最終發(fā)展為宮頸浸潤(rùn)性癌的風(fēng)險(xiǎn)[7]。高危HPV感染宿主細(xì)胞后,促進(jìn)E6 和E7基因轉(zhuǎn)錄,產(chǎn)物通過(guò)結(jié)合和滅活腫瘤抑制蛋白、細(xì)胞周期蛋白和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶來(lái)解除其對(duì)宿主細(xì)胞生長(zhǎng)周期的調(diào)節(jié)從而導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生。除了病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞特性外,最新研究提示HPV感染的細(xì)胞積極地指導(dǎo)局部環(huán)境并創(chuàng)造一個(gè)支持性感染后微環(huán)境,這被認(rèn)為是病毒持久性、傳播和惡性進(jìn)展的關(guān)鍵因素[8]。HPV感染后微環(huán)境是通過(guò)病毒感染細(xì)胞、免疫細(xì)胞和宿主基質(zhì)及其衍生成分(包括趨化因子、細(xì)胞因子、細(xì)胞外囊泡和代謝物)之間的復(fù)雜相互作用啟動(dòng)和建立的。

國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)通過(guò)對(duì)全球數(shù)據(jù)分析得出結(jié)論[9],12種HPV類(lèi)型(HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58和HPV59)是宮頸癌的1A類(lèi)致癌物,可覆蓋全球96.5%的宮頸癌病例。8種HPV亞型HPV26、53、 66、 67、68、70、73和82,在某些罕見(jiàn)的宮頸癌病例中被鑒定為單一 HPV 感染,但其宮頸癌中的低患病率(每種≤1%)及在腫瘤組織中缺乏生物活性的證據(jù),被歸類(lèi)為可能高危HPV類(lèi)型,并被認(rèn)定為2A/2B類(lèi)致癌物[10]。目前預(yù)防性HPV疫苗的設(shè)計(jì)和生產(chǎn)主要是為了預(yù)防最常見(jiàn)的高危型HPV(16和18)感染,這兩種HPV導(dǎo)致約70%的宮頸癌病例。四價(jià)疫苗可預(yù)防HPV 6型、11型、16型和18型的初步感染。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局于2014年批準(zhǔn)了一種新的九價(jià)HPV疫苗,除了四價(jià)疫苗中發(fā)現(xiàn)的4種HPV亞型(6、11、16、18)外,它還包括5種額外的致癌HPV亞型(31、33、45、52、58),這些亞型可額外導(dǎo)致15%的宮頸癌[11]。在開(kāi)發(fā)和改進(jìn)預(yù)防性 HPV 疫苗取得了很大進(jìn)展,但是治療性HPV疫苗仍有待進(jìn)一步開(kāi)發(fā)[12]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),男性更易感染低危型HPV而女性更易感染高危型HPV。男性患者HPV6、11型感染率高于女性患者,男性單純低危型HPV感染率、多重風(fēng)險(xiǎn)混合型HPV感染率明顯高于女性。男性HPV感染集中于低危型HPV6、11亞型,女性HPV感染集中于高危型HPV16、52、53、58。有研究報(bào)道,HPV6、11與尖銳濕疣等疾病密切相關(guān),且男性更易患尖銳濕疣[13];在患宮頸癌及相關(guān)婦科疾病的患者中,女性病例高危型HPV檢出也非常普遍[14],這些分析結(jié)論提示了,在HPV篩查與防治中,可依據(jù)不同性別和疾病對(duì)不同類(lèi)型HPV有所側(cè)重,以期在成本及條件有限的情況下更具有針對(duì)性檢測(cè)HPV,對(duì)臨床診斷和治療提供更有效的幫助。

男性HPV感染也是一個(gè)重要的問(wèn)題,由于HPV主要傳播途徑為直接性接觸傳播,男性在自身承擔(dān)疾病負(fù)擔(dān)的同時(shí),還有傳播給女性的風(fēng)險(xiǎn)[15]。來(lái)自各方面的流行病學(xué)資料顯示直接或間接的證據(jù)表明男性HPV感染對(duì)女性宮頸癌的發(fā)生起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)女性 HPV感染者的男性伴侶有較高的 HPV感染率,且男女雙方感染 HPV的型別高度一致[16]。本研究發(fā)現(xiàn)女性感染率最高的5種HPV亞型中,有2種高危HPV亞型(HPV16、52)與男性前5名高感染率亞型重合,符合客觀傳播規(guī)律。

不同地區(qū)不同年齡段男性和女性的高危HPV感染及常見(jiàn)亞型不盡相同,有研究發(fā)現(xiàn),中國(guó)大陸女性的主要高危HPV亞型為HPV16、52、58、53和18,中國(guó)北方女性高危HPV感染前3個(gè)亞型分別為16、58、52;西北地區(qū)女性前3個(gè)亞型分別為HPV16、58、53[17],與本研究結(jié)果存在差異。有研究報(bào)道,在女性高危HPV感染中,最常見(jiàn)的高危HPV基因型前3名為HPV 52、16、58[18],與本研究結(jié)果具有相似性。在男性HPV感染者中,本研究檢測(cè)的最常見(jiàn)3種高危HPV亞型為HPV52、16、59,與文獻(xiàn)[19]報(bào)道的男性中高危HPV感染率前3名為HPV16、51、52有一定差異。

綜上所述,本研究探討2022年湖北地區(qū)4 819例HPV感染亞型分布及差異分析。由于中國(guó)人口基數(shù)大且未接種疫苗的人口較多,男性人群HPV感染所致疾病未受到足夠重視,不同年齡地區(qū)間HPV感染具有一定差異性,因此對(duì)HPV感染和亞型分布進(jìn)行大標(biāo)本量流行病學(xué)研究可為今后臨床對(duì)HPV的預(yù)防監(jiān)控及治療提供科學(xué)依據(jù)。然而,仍有許多工作要做,例如預(yù)防性九價(jià)HPV疫苗的進(jìn)一步推廣和在男性群體中的宣傳普及,治療性 HPV 疫苗的開(kāi)發(fā)等[20]。相信在科研人員和醫(yī)護(hù)人員的不懈努力下,可以為HPV相關(guān)疾病的診斷預(yù)防治療提供更多的解決方案。