不同致敏類型的支氣管哮喘患兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群的差異性研究

龔亮，劉歡，許磊

徐州醫(yī)科大學(xué)附屬徐州兒童醫(yī)院呼吸內(nèi)一科，江蘇徐州 221000

支氣管哮喘是一種兒童非常常見的疾病，主要是由免疫細(xì)胞、炎癥因子以及氣道結(jié)構(gòu)細(xì)胞共同參與引起的一種慢性炎癥疾病[1-3]。該病的主要病理特點(diǎn)為局部滲出增多、黏膜水腫高以及氣道上皮細(xì)胞脫落引起的反復(fù)氣促、咳喘、胸悶等癥狀[4]。隨著生活環(huán)境的變化，該疾病發(fā)生率也隨之上升[5-6]，給家庭與社會(huì)帶來較大的負(fù)擔(dān)。目前臨床醫(yī)學(xué)認(rèn)為Th1/Th2失衡是誘發(fā)該病的重要基礎(chǔ)，近些年來隨著細(xì)胞學(xué)研究的深入，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞亞群數(shù)目與支氣管哮喘的發(fā)生和進(jìn)展存在密切的相關(guān)性[7-9]。T淋巴細(xì)胞大致可分為輔助性T細(xì)胞、細(xì)胞毒性T細(xì)胞以及抑制性T細(xì)胞等[10-11]，同時(shí)根據(jù)表面標(biāo)志可分為CD4+和CD8+這兩個(gè)亞型，在免疫應(yīng)答中具有重要作用。因此本文選取2021年1月—2023年1月徐州醫(yī)科大學(xué)附屬徐州兒童醫(yī)院100例因過敏引起的支氣管哮喘患兒、100例非過敏引起支氣管哮喘患兒和100例健康兒童進(jìn)行對(duì)照分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院100例因過敏引起的支氣管哮喘患兒作為致敏哮喘組，同時(shí)選取100例非過敏引起支氣管哮喘患兒作為非致敏哮喘組，再選取100例健康兒童作為健康對(duì)照組。致敏哮喘組100例患兒中有男孩52例，女孩48例；年齡1～11歲，平均（5.2±1.3）歲；所有患兒經(jīng)皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)（skin prick test, SPT）檢測(cè)為陽性，且根據(jù)SPT檢出陽性變應(yīng)原數(shù)目判斷單一致敏患兒64例，多重致敏患兒36例。非致敏哮喘組100例患兒中有男孩51例，女孩49例；年齡1～12歲，平均（5.3±1.2）歲；所有患兒SPT檢測(cè)為陰性。健康對(duì)照組100例兒童中男孩50例，女孩50例；年齡1～12歲，平均（5.5±1.4）歲；所有兒童經(jīng)體檢未發(fā)現(xiàn)任何呼吸道疾病且SPT檢測(cè)為陰性。3組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。所有研究對(duì)象家屬均知情同意，并經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①致敏哮喘組患兒均為過敏引起的支氣管哮喘；②臨床資料完整；③年齡≤12歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①重度哮喘；②4周內(nèi)伴有呼吸道感染；③近3月使用過激素；④因故退出研究。

1.3 方法

入選兒童均在清晨空腹取4 mL肘靜脈血裝入乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraethylene acid,EDTA）抗凝管，同時(shí)使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行T細(xì)胞亞群測(cè)定，測(cè)定方法為：每支試管加入10 μl熒光素標(biāo)記抗體，然后加入100 μl EDTA抗凝全血，混勻并避光室溫孵育20 min，之后取出食管加入500 mL溶血?jiǎng)芄夥跤?0 min上機(jī)。所有數(shù)據(jù)均采用儀器自帶軟件進(jìn)行分析，并由同一技術(shù)員采用相同標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行讀取。

1.4 觀察指標(biāo)

對(duì)比3組外周血T淋巴細(xì)胞亞群的差異，并比較單一致敏組和多重致敏組外周血T淋巴細(xì)胞亞群的差異。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料運(yùn)用例數(shù)（n）和率來表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組別患兒T淋巴細(xì)胞亞群比較

3組患兒外周血CD3+、CD4+和CD8+表達(dá)水平以及CD4+/CD8+比值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。致敏哮喘組與非致敏哮喘組、致敏哮喘組與健康對(duì)照組外周血CD3+、CD4+和CD8+表達(dá)水平以及CD4+/CD8+比值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同組別患兒T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s)

表1 不同組別患兒T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s)

注：與致敏哮喘組比較，*P＜0.05。

組別致敏哮喘組（n=100）非致敏哮喘組（n=100）健康對(duì)照組（n=100）F值P值CD3+（%）46.80±10.60（59.50±12.28）*（67.85±12.02）*82.685＜0.001 CD4+（%）30.50±12.50（35.21±10.44）*（36.67±9.15）*8.935＜0.001 CD8++（%）28.30±8.60（25.69±9.09）*（20.68±6.81）*22.174＜0.001 CD4+/CD8+1.17±0.60（1.69±1.41）*（1.93±0.69）*16.033＜0.001

2.2 單一致敏組與多重致敏組患兒T淋巴細(xì)胞亞群比較

單一致敏組與多重致敏組在外周血CD3+、CD4+和CD8+表達(dá)水平以及CD4+/CD8+比值方面比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 單一致敏組與多重致敏組患兒T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s)

表2 單一致敏組與多重致敏組患兒T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s)

組別單一致敏組（n=64）多重致敏組（n=36）t值P值CD3+（%）53.22±7.43 35.39±3.02 13.749＜0.001 CD4+（%）32.81±11.58 26.39±13.17 2.532 0.013 CD8+（%）26.91±8.43 30.78±8.44-2.203 0.030 CD4+/CD8+1.28±0.46 0.90±0.51 3.808＜0.001

3 討論

支氣管哮喘是臨床常見疾病[12]，可引起廣泛可逆性氣流受限，引起患兒胸悶、氣促、喘息等癥狀，且在凌晨、夜間加重。隨著我國兒童生活環(huán)境的變化，支氣管哮喘的發(fā)生率也不斷地升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)指出，我國0～14歲兒童支氣管哮喘發(fā)生率為0.5%～6.3%，平均發(fā)生率為2.6%[13]。雖然有部分患兒可自行緩解或經(jīng)治療后痊愈。但是仍有部分患兒出現(xiàn)反復(fù)發(fā)作的特點(diǎn)，對(duì)兒童的身心健康成長造成了較大的影響。因此，需要引起人們的關(guān)注和重視。

有學(xué)者認(rèn)為CD8+細(xì)胞參與了支氣管哮喘的免疫調(diào)節(jié)，且通過近些年來的研究發(fā)現(xiàn)，免疫調(diào)節(jié)劑在支氣管哮喘兒童中的應(yīng)用表現(xiàn)出較好的療效，其主要是通過糾正輔助性T淋巴細(xì)胞的表達(dá)水平，維持機(jī)體免疫平衡，有助于降低支氣管哮喘的發(fā)作次數(shù)以及持續(xù)時(shí)間，證明了細(xì)胞免疫參與了支氣管哮喘的發(fā)生與進(jìn)展[14-15]。

何其瑞[16]選擇60例支氣管哮喘患兒，根據(jù)過敏原皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)明確致敏模式，并采用流式細(xì)胞法檢測(cè)清晨空腹?fàn)顟B(tài)外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CD3+水平比較，非致敏組＞致敏組患兒[（59.41±13.78）% vs（44.19±12.52）%]（P＜0.05）。本研究中致敏哮喘組CD3+水平高于非致敏哮喘組患兒[（46.80±10.60）% vs （59.50±12.28）%]（P＜0.05）。這與本文的研究結(jié)果相符，本次研究中致敏哮喘組與非致敏哮喘組在外周血CD3+、CD4+和CD8+表達(dá)水平以及CD4+/CD8+比值方面比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這說明哮喘本身會(huì)引起免疫失衡的狀態(tài)，表現(xiàn)在不同T細(xì)胞亞群失衡，且過敏原引起的變態(tài)反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致免疫應(yīng)答介質(zhì)的表達(dá)水平進(jìn)一步升高，表現(xiàn)為CD4+/CD8+比值升高，由此可見，過敏引起的支氣管哮喘患兒更容易出現(xiàn)免疫應(yīng)答反應(yīng)。致敏哮喘患兒外周血CD3+、CD4+表達(dá)水平以及CD4+/CD8+比值低于非致敏哮喘患兒（P＜0.05），可能是因?yàn)橹旅粝純后w內(nèi)的炎癥反應(yīng)導(dǎo)致了免疫系統(tǒng)的異常。在炎癥反應(yīng)的過程中，白細(xì)胞數(shù)量可能會(huì)增加，但其中的T細(xì)胞比例可能會(huì)改變。在哮喘患者中，CD4+T細(xì)胞通常參與呼吸道炎癥反應(yīng)，并且可以引起過度反應(yīng)。CD8+T細(xì)胞則主要參與對(duì)感染病原體和非自身抗原的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)。因此，致敏哮喘患兒中CD8+T細(xì)胞的百分比可能會(huì)升高，而CD4+T細(xì)胞比例會(huì)降低。T細(xì)胞是免疫系統(tǒng)最主要的效應(yīng)細(xì)胞。T細(xì)胞活化后發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能不同細(xì)胞因子間功能相互拮抗從而保證機(jī)體免疫自穩(wěn)狀態(tài)的維持。

本次研究中單一致敏組與多重致敏組在外周血CD3+、CD4+和CD8+表達(dá)水平以及CD4+/CD8+比值方面的比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），可能是因?yàn)椴煌愋偷拿舾性瓕?duì)哮喘患兒的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的影響不同。多重致敏哮喘患兒接觸到不同的致敏原會(huì)導(dǎo)致免疫系統(tǒng)產(chǎn)生更廣泛的反應(yīng)，因此可能會(huì)有較高的CD4+T細(xì)胞濃度。單一致敏哮喘患兒對(duì)于致敏原的反應(yīng)可能就比較局限，因此CD8+T細(xì)胞可能比較少。多重致敏引起變態(tài)反應(yīng)更加嚴(yán)重，導(dǎo)致下游免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)機(jī)制紊亂，從而引起局部甚至是全身炎癥反應(yīng)。致敏哮喘患兒外周血CD3+、CD4+和CD8+表達(dá)水平以及CD4+/CD8+比值低于非致敏哮喘患兒（P＜0.05），可能是由于致敏原與其免疫系統(tǒng)中的T細(xì)胞相互作用，導(dǎo)致T細(xì)胞數(shù)量和活性發(fā)生改變，而非致敏哮喘患兒則不會(huì)出現(xiàn)這種情況。具體機(jī)制尚不清楚，需要進(jìn)一步研究探討。此外，單一致敏患者可能具有更為明顯的致敏病史和臨床癥狀，因此可能會(huì)更早或更積極地就醫(yī)接受治療，從而也可能會(huì)影響其外周血CD3+、CD4+和CD8+表達(dá)水平以及CD4+/CD8+比值。

綜上所述，致敏引起的支氣管哮喘患兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群與健康兒童以及未致敏的支氣管哮喘均存在明顯差異，且單一致敏引起支氣管哮喘與多重致敏支氣管哮喘兒童相比也存在較大差異，因此需要密切觀察致敏支氣管哮喘患兒的免疫指標(biāo)。