枯草芽孢桿菌對鯽魚機體免疫力的影響

摘要：試驗旨在研究在鯽（Carassius auratus）的餌料中添加不同水平的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis），探究枯草芽孢桿菌對其機體免疫功能的影響。試驗選擇體質健康、規(guī)格均勻、體重約為5g的鯽320尾，隨機分成4個處理組，每組4個重復，每個重復20尾鯽魚。對照組鯽投喂基礎餌料，試驗組鯽分別投喂添加0.1%、0.2%和0.4%的枯草芽孢桿菌的基礎餌料。試驗鯽馴養(yǎng)2周后進行8周的正式試驗。試驗結束后，每組挑選20尾鯽采集血液，檢測血清免疫指標。結果表明，與對照組相比0.2%組和0.4%組的枯草芽孢桿菌可以使鯽的血清中溶菌酶活性顯著提高8.77%和8.50%（P<0.05），堿性磷酸酶活性顯著提高了20.04%和23.05%（P<0.05），超氧化物歧化酶活性顯著提高了9.93%和13.15%（P<0.05），丙二醛水平顯著降低了27.36%和33.79%（P<0.05），過氧化氫酶活性顯著提高了23.74%和30.55%（P<0.05）。綜上所述，在鯽養(yǎng)殖中餌料中添加0.2%和0.4%的枯草芽孢桿菌可以提高鯽機體的非特異性免疫功能，且綜合數(shù)據(jù)結果，在鯽的養(yǎng)殖中使用0.2%的枯草芽孢桿菌即可。

關鍵詞：枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）；鯽（Carassius auratus）；免疫功能

中圖分類號：S965.117文獻標志碼：A

隨著中國鯽養(yǎng)殖規(guī)模逐漸壯大，養(yǎng)殖密度提高，導致鯽的機體免疫力低下，生長性能受阻，機體健康嚴重受到影響[1]。2020年7月開始禁止在動物飼料端添加具有促生長、預防疾病的抗生素后，尋找具有抗生素功能，安全、高效、綠色、無殘留、無耐藥的飼料添加劑已成為養(yǎng)殖行業(yè)的研究重點。其中，微生態(tài)制劑是一種可以調節(jié)動物腸道菌群結構、改善腸道健康的活菌制劑，在替代抗生素方面具有顯著的效果[2]。而枯草芽孢桿菌屬于芽孢桿菌屬的一種，在腐敗的有機物、土壤、動物腸道中分布較為廣泛[3]。目前，枯草芽孢桿菌在畜禽及水產(chǎn)生物養(yǎng)殖中均有較為廣泛的應用研究成果，如于道德等[4]研究表明，在凡納濱對蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用適量的枯草芽孢桿菌可以提高對蝦機體的免疫力及抗病力，進而改善生長性能。趙峰等[5]研究發(fā)現(xiàn)，在羅非魚生產(chǎn)中添加0.2%的枯草芽孢桿菌可以改善腸道健康，調節(jié)血脂平衡，提高機體免疫力，進而促進生長。但目前枯草芽孢桿菌在鯽魚養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應用研究結果比較少見，因此，該試驗探討不同劑量的枯草芽孢桿菌對鯽魚機體免疫力的影響，為枯草芽孢桿菌在水產(chǎn)動物養(yǎng)殖中的應用及提高水產(chǎn)動物機體健康提供參考依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1 枯草芽孢桿菌和鯽

該研究使用的枯草芽孢桿菌由中國水產(chǎn)科學院淡水漁業(yè)研究中心提供，其有效活菌數(shù)為1.0×108CFU/g。鯽由山東省泰源水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司提供。

1.2 試驗設計

試驗選擇體質健康、規(guī)格均勻、體重約為5g的鯽320尾，隨機分成4個處理組，每組4個重復，每個重復20尾鯽。對照組鯽投喂基礎餌料，試驗組鯽分別投喂含有0.1%、0.2%和0.4%的枯草芽孢桿菌的基礎餌料。試驗鯽馴養(yǎng)2周后進行，正式試驗為期8周。試驗結束后，每組挑選20尾鯽采集血液，檢測血清免疫指標。試驗設計如表1所示。試驗鯽基礎餌料配方見表2。

1.3 鯽的養(yǎng)殖管理

正式試驗開始前，鯽馴養(yǎng)2周適應養(yǎng)殖環(huán)境，之后從中挑選320尾體質健壯、規(guī)格均勻、體重約為5g的鯽進行正式試驗。試驗選用16個規(guī)格為（長0.8m×寬0.5m×高0.8m）玻璃缸，每缸放魚20尾。

每日各組鯽分別在8：00、12：30和18：30投喂3次，投喂量約為鯽體重的3.5%。養(yǎng)殖水中連續(xù)充氣，水溫約為22.5℃，pH值約為8.0，溶解氧濃度大于6mg/L，氨氮濃度小于0.1mg/L，亞硝酸鹽濃度小于0.03mg/L。

1.4 免疫指標的測定

試驗結束后，從每組中挑選20尾鯽魚尾靜脈采血，使用離心機4000r/min離心5mins，收集血清用于檢測血清中的溶菌酶、堿性磷酸酶、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶及丙二醛等免疫指標。檢測步驟及方法參考試劑盒說明書，試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

免疫指標數(shù)據(jù)使用SPSS22軟件進行t檢驗分析，組間數(shù)據(jù)兩兩比較使用LSD方法，結果以平均值呈現(xiàn)，P<0.05表示數(shù)據(jù)具有顯著性差異。

2 結果

枯草芽孢桿菌對鯽血清免疫指標的影響見表3，在鯽的餌料中添加0.2%和0.4%的枯草芽孢桿菌可以有效增強機體的免疫力。與對照組相比，溶菌酶活性分別顯著提高了8.77%和8.50%（P<0.05），堿性磷酸酶活性分別顯著提高了20.04%和23.05%（P<0.05），超氧化物歧化酶活性分別顯著提高了9.93%和13.15%（P<0.05），丙二醛水平分別顯著降低了27.36%和33.79%（P<0.05），過氧化氫酶活性分別顯著提高了23.74%和30.55%（P<0.05）。

3 討論

鯽機體的免疫力關系到機體健康及養(yǎng)殖生產(chǎn)的經(jīng)濟效益。邵林等[6]在鯽魚養(yǎng)殖中，在水中添加100mL的枯草芽孢桿菌，可以有效提高血清中溶菌酶、超氧化物歧化酶及堿性磷酸酶活性，降低了丙二醛含量。謝少林等[7]在鯽魚養(yǎng)殖中，在餌料中添加適量的枯草芽孢桿菌可以有效提高鯽魚血清中超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性。以上研究結果與該研究結果類似。

該研究中，使用0.2%和0.4%的枯草芽孢桿菌可以使鯽的血清中溶菌酶活性顯著提高了8.77%、8.50%；堿性磷酸酶活性顯著提高了20.04%、23.05%；超氧化物歧化酶活性顯著提高了9.93%、13.15%；丙二醛水平顯著降低了27.36%、33.79%；過氧化氫酶活性顯著提高了23.74%、30.55%。表明枯草芽孢桿菌有效改善了鯽機體的非特異性免疫力?？莶菅挎邨U菌提高鯽魚機體免疫力主要是由于枯草芽孢桿菌可以抑制養(yǎng)殖中對機體有害的微生物（如弧菌、大腸桿菌和桿狀病毒等）；枯草芽孢桿菌可以能分泌幾丁質酶，可以將水中的有毒有害物質、殘餌、糞便等分解，凈化水質；枯草芽孢桿菌具有較強的消化酶活性（蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶），可以使水產(chǎn)動物采食餌料后，對餌料中營養(yǎng)物質充分消化吸收，供機體利用。

4 結論

該試驗中，在鯽的餌料中添加適量的枯草芽孢桿菌可以顯著提高血清中溶菌酶、超氧化物歧化酶、堿性磷酸酶、過氧化氫酶活性，有效降低了脂質氧化物丙二醛的水平，改善了機體的非特異性免疫力，且枯草芽孢桿菌的最適添加水平為0.2%。

參考文獻：

[1]劉曉東.鯽魚高效養(yǎng)殖技術要點[J].特種經(jīng)濟動植物，2021，24（08）：38-39.

[2]孫遠遠，管劍峰，黃曉慧，等.微生態(tài)制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖水質調控中的應用[J].水產(chǎn)養(yǎng)殖，2022，43（11）：15-17+31.

[3]吳孔陽，婁亞芳，楊同香，等.枯草芽孢桿菌功能及相關機制研究進展[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2020（23）：55-58.

[4]于道德，陳勝林，郭少菁，等.飼料中添加枯草芽孢桿菌HSP05對凡納濱對蝦生長性能、抗病力和非特異性免疫力的影響[J].動物營養(yǎng)學報，2022，34（10）：6634-6642.

[5]趙峰，陸娟娟，夏中生，等.果寡糖、枯草芽孢桿菌和金霉素對奧尼羅非魚生長性能、血清生化指標和腸道菌群的影響[J].飼料研究，2019，42（04）：123-128.

[6]邵林，李璟，樂露，等.枯草芽孢桿菌和沼澤紅假單胞菌對鯽魚免疫機能的影響及其代謝產(chǎn)物的抑菌活性研究[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2018（20）：176-178.

[7]謝少林，王超，李正光，等.飼料中添加枯草芽孢桿菌對彭澤鯽生長、免疫的影響[J].水產(chǎn)科技情報，2015，42（05）：268-271.

Effect of Bacillus subtilis on the immunity of Carassius auratus organism

DU Hongyi

（Dongming County Fisheries Service Centre， Dongming 274500， Shandong China）

Abstract：The experiment aimed to investigate the effect of Bacillus subtilis on the immune function of Carassius auratus by adding different levels of Bacillus subtilis to their baits. The test was conducted on 320 healthy， uniformly sized Carassius auratus weighing about 5g， randomly divided into 4 treatment groups with 4 replicates of 20 carp each. The control Carassius auratus were fed with basal bait and the test Carassius auratus were fed with basal bait supplemented with 0.1%， 0.2% and 0.4% of Bacillus subtilis respectively. The test Carassius auratus were domesticated for 2 weeks and then subjected to a formal trial for 8 weeks. At the end of the trial， blood was collected from 20 Carassius auratus in each group and serum immunological parameters were tested. The results showed that Bacillus subtilis in the 0.2% and 0.4% groups significantly increased the serum lysozyme activity of the Carassius auratus by 8.77% and 8.50% （P<0.05）; alkaline phosphatase activity by 20.04% and 23.05% （P<0.05）; superoxide dismutase activity by 9.93% and 13.15% （P<0.05）; malondialdehyde level significantly decreased by 27.36% and 33.79% （P<0.05）; catalase activity significantly increased by 23.74% and 30.55% （P<0.05）. In conclusion， the addition of 0.2% and 0.4% Bacillus subtilis to the bait in Carassius auratus culture could improve the non-specific immune function of the Carassius auratus organism. According to the comprehensive data results， 0.2% Bacillus subtilis can be used in Carassius auratus culture.

Keywords：Bacillus subtilis; Carassius auratus; immune function

作者簡介：杜洪義（1970.9- ），男，漢族，山東東明人。山東省東明縣水產(chǎn)服務中心高級工程師。主要從事淡水養(yǎng)殖、漁業(yè)病害防治、水生動物營養(yǎng)與飼料加工、水產(chǎn)品質量安全檢測員等技術工作。