高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定冷飲中12 種食品添加劑

◎ 毋修遠(yuǎn)，高海軍，張紅云，高敬銘，劉 瑩

（1.河南省食品和鹽業(yè)檢驗(yàn)技術(shù)研究院，河南 鄭州 450002；2.河南省糧油飼料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，河南 鄭州 450002）

現(xiàn)階段，對(duì)冷飲的食品添加劑檢測(cè)需要以我國(guó)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)作為檢測(cè)的依據(jù)。由于檢測(cè)成本較高，檢測(cè)方法較為煩瑣，造成檢測(cè)工作費(fèi)時(shí)費(fèi)力、效率低下。基于此，本文對(duì)多種常用的食品添加劑進(jìn)行分析，比如納他霉素、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、咖啡因、糖精鈉、安賽蜜、阿斯巴甜等，利用高效液相色譜法進(jìn)行簡(jiǎn)單便捷的檢測(cè)，確保得到準(zhǔn)確度較高的信息，旨在為國(guó)家的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)建立提供依據(jù)，保證食品添加劑的安全，實(shí)現(xiàn)食品安全[1]。

1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

在該實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，用到的實(shí)驗(yàn)冷飲都是超市購(gòu)買所得；糖精鈉、安賽蜜、山梨酸、苯甲酸、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、檸檬黃、亮藍(lán)、脫氫乙酸、丙酸、阿斯巴甜這幾種食品添加劑都購(gòu)買于北京振翔科技有限公司；磷酸二氫鉀，色譜純購(gòu)買于上海麥克林生化科技有限公司；甲醇、乙腈，色譜純購(gòu)買于德國(guó)默克公司。在本文當(dāng)中，主要利用的是Agilent 1290 高效液相色譜儀。C18 色譜柱（Synergi Fusion-RP 00G-4424-E0 C18，4.6 mm×250 mm）主要利用美國(guó)飛諾美公司制造的儀器設(shè)備，GWB-2T 超純水器由北京普析通用儀器有限責(zé)任公司制造，ALC-110.4 分析天平來(lái)自德國(guó)賽多利斯股份公司；MS3 Basic 旋渦混合器來(lái)自廣州艾卡儀器設(shè)備有限公司；TG-19 離心機(jī)來(lái)自四川蜀科儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

（1）對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備。制備的時(shí)候需要將適量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)放置在50 mL 的容量瓶當(dāng)中，利用10%的甲醇水溶液來(lái)對(duì)其進(jìn)行定容操作，在此種操作之后，可以配備成標(biāo)準(zhǔn)品的母液進(jìn)行備用操作。其中，糖精鈉、安賽蜜、山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸、紐甜、阿斯巴甜可以配置成為1.0 g·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；亮藍(lán)、胭脂紅、莧菜紅、日落黃、檸檬黃可以配成 0.5 g·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；丙酸配成 5.0 g·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。在標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備過(guò)程當(dāng)中，需要利用10%的甲醇溶液稀釋定容操作，之后就可以得到一個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液[2]。

（2）處理樣品階段。將5.0 g 的樣品放置到50 mL 的帶蓋離心管當(dāng)中，并加入20 mL 的水溶液，保持渦旋震蕩操作之后，對(duì)其進(jìn)行加熱保持20 min。將冷飲以及果蔬冷飲放置到室溫溫度之后，分別加入2 mL 106 g·L-1的亞鐵氰化鉀溶液和 220 g·L-1的乙酸鋅溶液，利用25 mL 溶液定容，保持混合搖勻，在8 000 r·min-1的狀態(tài)下進(jìn)行5 min 的離心操作之后，就可以進(jìn)行清液的獲取，將其用過(guò)濾膜過(guò)濾之后等待測(cè)量。

（3）對(duì)色譜條件進(jìn)行分析和研究。采用Synergi Fusion-RP 00G-4424-E0（250 mm×4.6 mm，5 μm）的C18 色譜柱，保持35 ℃的柱溫、1.0 ml的流速、10μm 的進(jìn)樣量。其中，50 mmol·L-1的磷酸氫二銨用流動(dòng)相A 表示，pH=3.5，甲醇用流動(dòng)相B 表示，檢測(cè)器屬于二級(jí)管陣列，主要是利用梯度洗脫的方式進(jìn)行操作和應(yīng)用，梯度洗脫程序表如表1所示。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

（1）色譜條件的優(yōu)化方面，在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程當(dāng)中，需要利用乙酸銨溶液、磷酸二氫鉀溶液和磷酸氫二銨來(lái)完成實(shí)驗(yàn)，利用磷酸氫二銨緩沖鹽體系進(jìn)行目標(biāo)物質(zhì)的分離，出現(xiàn)的峰形最好，50 mmol·L-1的磷酸氫二銨水當(dāng)中的溶液pH 數(shù)值為8.1。如果處于堿性環(huán)境下，其丙酸的峰形呈現(xiàn)過(guò)寬狀態(tài)且不尖銳，如果處于低酸性條件下，則山梨酸和脫氫乙酸不容易分開，無(wú)法滿足檢測(cè)條件。在不斷的調(diào)試和檢測(cè)之后可以發(fā)現(xiàn)，當(dāng)pH 處于3.5 時(shí)，山梨酸和脫氫乙酸分開操作會(huì)更加良好，丙酸的峰形也相對(duì)良好，因此，磷酸氫二銨的流動(dòng)相采用了pH=3.5[3]。利用檢測(cè)器對(duì)190-700 nm 的范圍進(jìn)行全盤掃描，以此確定各個(gè)組分的吸收波長(zhǎng)長(zhǎng)度。在不同的組分響應(yīng)以及對(duì)應(yīng)的雜峰干擾因素下,可以對(duì)定量的波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)量確定。其中,經(jīng)過(guò)測(cè)定可以得出安賽蜜、苯甲酸以及山梨酸的定量波長(zhǎng)為230 nm，檸檬黃的定量波長(zhǎng)為420 nm，莧菜紅、丙酸、胭脂紅、日落黃、糖精鈉、阿斯巴甜的定量波長(zhǎng)為214 nm，亮藍(lán)的定量波長(zhǎng)為 630 nm。在12 種冷飲組分當(dāng)中，對(duì)最大的吸收波長(zhǎng)進(jìn)行分析之后可以得出，需要對(duì)具體的出峰時(shí)間以及分離效果進(jìn)行綜合化的考量，以此得出檢測(cè)波長(zhǎng)在214 nm 的時(shí)候，組分的吸收相對(duì)良好。

（2）需要對(duì)方法的線性范圍與檢出限進(jìn)行分析和研究。本文將冷飲當(dāng)中的12 種食品添加劑混合標(biāo)液按照上述方法進(jìn)行分析研究之后，得出了最終的結(jié)果。其中，目標(biāo)化合物的峰面積可以利用Y來(lái)表示，標(biāo)樣的質(zhì)量濃度可以用X表示，對(duì)Y和X的線性回歸模型進(jìn)行建立分析之后，可以得出一個(gè)目標(biāo)化合物的線性回歸方程。對(duì)12 種食品添加劑的回歸參數(shù)與檢測(cè)限（信噪比 S/N=3）進(jìn)行分析之后得出，丙酸處于25.0～200.0 mg·L-1的范圍內(nèi)，其他則處于5.0～40.0 mg·L-1的范圍內(nèi)，且最終出現(xiàn)的目標(biāo)物呈良好線性關(guān)系，其中的相關(guān)系數(shù)可以用R2來(lái)表示，其數(shù)值都超出了0.999 00，也就是其中的檢測(cè)限范圍達(dá)到了0.3～10.0 mg·kg-1。

（3）需要進(jìn)行回收率與精密度試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程當(dāng)中需要利用4 種樣品，進(jìn)行3 個(gè)濃度梯度水平的添加之后對(duì)其做回收試驗(yàn)操作。在操作當(dāng)中，需要保持每一個(gè)添加都分為6 次平行實(shí)驗(yàn)，以及2 個(gè)空白實(shí)驗(yàn)來(lái)操作。經(jīng)過(guò)分析可以得出，在各組分當(dāng)中呈現(xiàn)的平均回收率在81.50%～113.12%的范圍內(nèi)，產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差值處于0.5%～3.9%的范圍內(nèi)。利用此種方式進(jìn)行分析得出的精密度和回收率都處于相對(duì)良好的狀態(tài)，且測(cè)試也趨于穩(wěn)定狀態(tài)[4]。本文在對(duì)市面當(dāng)中的超市冷飲進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程當(dāng)中，主要在果蔬汁飲料、碳酸飲料、乳飲料和功能飲料當(dāng)中抽取了40 種冷飲進(jìn)行分析。其中，存在梨酸陽(yáng)性樣品有9 個(gè)，檢測(cè)的數(shù)值分別為185 mg·kg-1、144 mg·kg-1、204 mg·kg-1、118 mg·kg-1、115 mg·kg-1、200 mg·kg-1、157 mg·kg-1、150 mg·kg-1和 85 mg·kg-1；安賽蜜檢出樣品數(shù)量有8 個(gè)，含量分別為75 mg·kg-1、56 mg·kg-1、32 mg·kg-1、38 mg·kg-1、37 mg·kg-1、70 mg·kg-1、36 mg·kg-1和75 mg·kg-1；苯甲酸樣品檢測(cè)數(shù)量為4 個(gè)，檢測(cè)的含量為78 mg·kg-1、80 mg·kg-1、83 mg·kg-1和77 mg·kg-1；阿斯巴甜樣品檢測(cè)數(shù)量為2 個(gè)， 含量分別為7.6 mg·kg-1、21 mg·kg-1。

3 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，對(duì)我們?nèi)粘Ｉ町?dāng)中的冷飲進(jìn)行硝酸鹽含量測(cè)定時(shí)，需要對(duì)其影響測(cè)量不確定度進(jìn)行分析，其中可能產(chǎn)生制約的因素有配制標(biāo)準(zhǔn)曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合和樣品重復(fù)測(cè)量。因此，在實(shí)際的測(cè)定過(guò)程當(dāng)中，需要針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線、擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線以及樣品重復(fù)測(cè)量進(jìn)行分析，以此判斷最終結(jié)果的準(zhǔn)確度和可信程度[5]。同時(shí)，在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程當(dāng)中，不僅需要做好儀器和走基線的調(diào)試，確保儀器、基線處于穩(wěn)定的狀態(tài)，還需要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線、樣品、實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行反復(fù)的核對(duì)測(cè)量，確保其處于規(guī)范的狀態(tài)，以此從多個(gè)角度做好保障工作，從而減少誤差，最大限度提高檢測(cè)的可信度。