同型半胱氨酸聯(lián)合葉酸代謝相關(guān)酶基因在妊娠期高血壓疾病中的臨床價(jià)值*

黃國平,徐 梅,陳月華,王 軍,金 華,葉 強(qiáng)△

四川省自貢市婦幼保健院:1.檢驗(yàn)科;2.產(chǎn)科,四川自貢 643000

妊娠期高血壓疾病(HDP)是孕產(chǎn)婦妊娠期發(fā)病率最高的并發(fā)癥之一,主要包括妊娠高血壓和先兆子癇,表現(xiàn)為高血壓、蛋白尿、水腫,并伴有嚴(yán)重肝腎功能損害、胎盤早剝和死產(chǎn)等,是孕產(chǎn)婦和胎兒死亡的主要原因[1]。研究表明先兆子癇和妊娠高血壓在全球的發(fā)病率分別為1.8%～4.4%和0.2%～9.2%[2],在我國HDP發(fā)病率為9.2%～10.1%[3]。研究發(fā)現(xiàn)妊娠并發(fā)癥可能是女性未來患心血管疾病最早的臨床標(biāo)志之一,HDP患者晚年心血管疾病及慢性高血壓的發(fā)病率顯著高于健康孕婦[4-5],且HDP患者子女的基礎(chǔ)血壓和心血管疾病的長期發(fā)病率更高[6]。HDP對(duì)妊娠期女性和社會(huì)造成嚴(yán)重負(fù)擔(dān),但HDP的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。

同型半胱氨酸(Hcy)是蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物,正常情況下妊娠期女性的Hcy水平會(huì)逐漸下降至孕前的50.0%～60.0%,然后保持相對(duì)較低的水平直至分娩[7]。當(dāng)Hcy代謝酶存在異常缺陷,如亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)C677T或蛋氨酸合成酶(MTR)A2756G發(fā)生突變,使Hcy代謝酶活性明顯下降將導(dǎo)致高Hcy血癥,有研究發(fā)現(xiàn)葉酸代謝MTHFR C677T和MTR A2756G多態(tài)性與血Hcy水平呈正相關(guān)[8],并且葉酸代謝基因多態(tài)性與不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)及孕婦先兆子癇相關(guān)[9-10]。MARUTA等[11]的研究表明妊娠早期Hcy>7.2 μmol/L與HDP的發(fā)生相關(guān)。但Hcy代謝酶異常突變與高Hcy血癥在HDP中是否扮演重要角色尚不清楚。本研究從葉酸代謝MTHFR和MTR基因多態(tài)性和Hcy水平的關(guān)系著手,分析二者在HDP中的臨床意義,旨在為該病的臨床診治提供參考依據(jù)。

1 資料和方法

1.1一般資料 將2021年11月至2022年8月在自貢市婦幼保健院(以下簡稱本院)建檔并定期產(chǎn)檢的65例HDP孕婦作為HDP組,平均年齡(28.2±4.7)歲,平均孕周(38.4±1.3)周,平均收縮壓(140.0±16.0)mm Hg,平均舒張壓(89.0±7.0)mm Hg。另選取同期在本院健康體檢的80例健康孕婦作為正常妊娠組,平均年齡(27.3±4.2)歲,平均孕周(38.1±1.4)周,平均收縮壓(128.0±14.0)mm Hg,平均舒張壓(81.0±5.0)mm Hg。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)妊娠期高血壓疾病診斷參照《妊娠期高血壓疾病診治指南(2015)》[12]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)臨床資料完整;(3)單胎、初產(chǎn)婦;(4)無精神疾病;(5)近期未服用激素類藥物。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并感染性疾病;(2)合并嚴(yán)重的臟器功能障礙;(3)合并原發(fā)性高血壓、糖尿病;(4)合并心臟病;(5)合并血液系統(tǒng)疾病、甲狀腺疾病、免疫系統(tǒng)疾病、過敏史。兩組研究對(duì)象年齡、孕周、收縮壓、舒張壓比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。所有研究對(duì)象簽署知情同意書。

1.2方法 孕婦入院后采集空腹靜脈抗凝血,以3 500 r/min離心10 min,采用全自動(dòng)生化分析儀(邁瑞CL-2000)檢測(cè)血清Hcy、肝功能、腎功能和血脂6項(xiàng);采用奧丞生物的胎盤生長因子(PLGF)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)PLGF水平;采用全自動(dòng)凝血分析儀檢測(cè)(日本積水CP3000)檢測(cè)凝血功能水平;采用重慶鼎潤血栓彈力圖試驗(yàn)(活化凝血)試劑(凝固法)檢測(cè)血栓彈力圖。取3 mL的24 h尿液,以3 500 r/min離心5 min,采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)24 h尿總蛋白定量(24 h UP)水平;采用西安天隆微測(cè)序儀檢測(cè)葉酸代謝相關(guān)酶基因MTHFR 677C>T、MTHFR 1298A>C和MTRR 66A>G的多態(tài)性,并根據(jù)檢測(cè)基因位點(diǎn)功能、純合、雜合及出現(xiàn)頻率,將患者葉酸代謝障礙風(fēng)險(xiǎn)分為未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)、低度風(fēng)險(xiǎn)、中度風(fēng)險(xiǎn)、高度風(fēng)險(xiǎn)4個(gè)風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)。

2 結(jié) 果

2.1對(duì)照組和HDP組血清Hcy、PLGF、腎功能、肝功能和血脂水平比較 與對(duì)照組比較,HDP組Hcy水平顯著升高,而PLGF、尿酸(UA)及堿性磷酸酶(ALP)水平顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而兩組肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)及天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)水平比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 對(duì)照組和HDP組血清Hcy、PLGF、腎功能、肝功能和血脂水平比較

2.2對(duì)照組和HDP組凝血功能和血栓彈力圖比較 與對(duì)照組比較,HDP組凝血酶時(shí)間(TT)顯著延長,血栓彈力圖中兩側(cè)曲線的最寬距離(MA)顯著增大,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而兩組凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、D-二聚體(DD)水平及血栓彈力圖中的反應(yīng)時(shí)間(R)、凝固時(shí)間(K)、α角度(Angle)比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 對(duì)照組和HDP組凝血功能和血栓彈力圖水平比較

2.3對(duì)照組和HDP組葉酸代謝障礙風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)比較 HDP組孕婦葉酸代謝障礙風(fēng)險(xiǎn)(低度+中度+高度)比例(81.6%)顯著高于對(duì)照組(61.5%),未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)比例(18.4%)顯著低于對(duì)照組(38.5%),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 對(duì)照組和HDP組葉酸代謝障礙風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)[n(%)]

2.4對(duì)照組和HDP組葉酸代謝相關(guān)酶基因MTHFR的多態(tài)性比較 分析MTHFR677C>T基因型分布發(fā)現(xiàn),對(duì)照組和HDP組攜帶C等位基因的頻率分別為74.4%和56.9%,攜帶T等位基因的頻率分別為25.6%和43.1%,兩組C、T等位基因頻率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。分析MTHFR 1298A>C基因型分布差異發(fā)現(xiàn),對(duì)照組和HDP組攜帶A等位基因的頻率分別為70.0%和80.0%,攜帶C等位基因的頻率分別為30.0%和20.0%,兩組攜帶A、C等位基因的頻率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

表4 對(duì)照組和HDP組葉酸代謝相關(guān)酶基因MTHFR677C>T位點(diǎn)基因型分布和等位基因頻率比較[n(%)]

表5 對(duì)照組和HDP組葉酸代謝相關(guān)酶基因MTHFR1298A>C位點(diǎn)基因型分布和等位基因頻率比較[n(%)]

2.5對(duì)照組和HDP組葉酸代謝相關(guān)酶基因MTRR多態(tài)性比較 分析MTHFR 1298A>C基因型分布發(fā)現(xiàn),對(duì)照組和HDP組攜帶A等位基因的頻率分別為80.6%和77.7%,攜帶G等位基因的頻率分別為19.4%和22.3%,兩組攜帶A、G等位基因的頻率比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表6。

表6 對(duì)照組和HDP組葉酸代謝相關(guān)酶基因MTRR 66A>G位點(diǎn)基因型分布和等位基因頻率比較[n(%)]

2.6HDP孕婦葉酸代謝障礙未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)組和風(fēng)險(xiǎn)組間Hcy、PLGF、24 h UP和UA水平比較 根據(jù)是否發(fā)生葉酸代謝障礙,將HDP組孕婦分為葉酸代謝障礙未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)組(n=12)和風(fēng)險(xiǎn)組(n=53)。風(fēng)險(xiǎn)組的Hcy、24 h UP及UA水平顯著高于未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)組,而PLGF水平顯著低于未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表7。

表7 HDP孕婦葉酸代謝障礙未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)組和風(fēng)險(xiǎn)組Hcy、PLGF、24 h UP和UA水平比較

2.7HDP組中Hcy與PLGF水平的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)性分析結(jié)果表明,HDP組中Hcy水平與PLGF水平呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.543,P<0.05)。

3 討 論

HDP常伴有嚴(yán)重的并發(fā)癥,嚴(yán)重威脅母嬰的安全。本研究結(jié)果表明與對(duì)照組比較,HDP組ALP、UA水平顯著升高、TT延長,血栓彈力圖中兩側(cè)曲線的MA增大,說明HDP孕婦伴有肝功能和腎功能損害、凝血功能和血栓彈力圖異常。孕婦在妊娠期特別是孕晚期出現(xiàn)高凝狀態(tài)是機(jī)體為了避免產(chǎn)后大出血的自我保護(hù)機(jī)制,但HDP孕婦較普通孕婦出現(xiàn)更為極端的血液高凝狀態(tài)伴繼發(fā)性纖溶亢進(jìn),將會(huì)大大增加HDP孕婦出現(xiàn)血栓和出血的風(fēng)險(xiǎn)[13]。需要加大對(duì)HDP孕婦凝血和血栓彈力圖的監(jiān)測(cè),便于早期發(fā)現(xiàn)問題并及時(shí)進(jìn)行干預(yù)。

Hcy是蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物,在人體內(nèi)主要有2種代謝途徑:(1)在葉酸和維生素B12的輔助作用下重新合成蛋氨酸。(2)在維生素B6依賴酶支持下形成半胱氨酸[14]。當(dāng)Hcy代謝酶異常缺陷如MTHFR或MTR突變時(shí),Hcy代謝酶活性明顯下降將造成高Hcy血癥。有研究發(fā)現(xiàn)MTHFR C677T和MTR-A2756G多態(tài)性與孕婦先兆子癇相關(guān)[10]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),HDP組MTHFR677C>T位點(diǎn)中攜帶T等位基因的頻率顯著高于對(duì)照組,而MTHFR1298A>C位點(diǎn)中攜帶C等位基因的頻率及MTRR66A>G位點(diǎn)中攜帶G等位基因的頻率與對(duì)照組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),表明HDP患者葉酸代謝障礙風(fēng)險(xiǎn)的主要原因與MTHFR677C>T位點(diǎn)的突變有關(guān),與胡勤等[15]的研究結(jié)果MTHFR 677C>T基因型與妊娠期高血壓的發(fā)生有關(guān)、其基因多態(tài)性增加了患妊娠期高血壓的風(fēng)險(xiǎn)、而MTHFR1298A>C和MTRR66A>G基因型與妊娠期高血壓的發(fā)生無關(guān)相符合。

有研究表明MTHFR 677C>T和MTR2756A>G多態(tài)性與血清Hcy水平正相關(guān)[8];MARUTA等[11]的研究表明妊娠早期Hcy水平>7.2 μmol/L與HDP的發(fā)生相關(guān)。PLGF是一種胎盤源性因子,具有調(diào)節(jié)并滋養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞的功能。對(duì)于疑似先兆子癇且孕周<35周的孕婦,篩查陽性(PLGF<100 pg/mL),對(duì)2周內(nèi)發(fā)生的先兆子癇具有96.0%的靈敏度和98.0%的陰性預(yù)測(cè)值[16]。本研究結(jié)果中HDP組Hcy水平顯著高于對(duì)照組,而PLGF水平顯著低于對(duì)照組,且Hcy水平與PLGF水平呈顯著負(fù)相關(guān),表明Hcy水平在HDP中升高,可通過檢測(cè)PLGF、Hcy水平對(duì)子癇患者進(jìn)行盡早干預(yù)和處理,從而保護(hù)孕婦和胎兒的健康。

MTHFR677C>T基因多態(tài)性與中國漢族先兆子癇孕婦的腎功能受損相關(guān),基因多態(tài)性是中國漢族先兆子癇孕婦腎功能受損的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[17]。本研究中HDP患者葉酸代謝障礙風(fēng)險(xiǎn)的原因主要與MTHFR677C>T位點(diǎn)的突變有關(guān),且在HDP患者中,葉酸代謝障礙風(fēng)險(xiǎn)組患者的Hcy、24 h UP和UA水平較葉酸代謝未發(fā)現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)組患者更高,表明HDP葉酸代謝障礙風(fēng)險(xiǎn)的患者血清Hcy進(jìn)一步升高,其腎功能受損情況更嚴(yán)重,與YUN等[17]的研究結(jié)論吻合。此外,Hcy可激活氧化應(yīng)激反應(yīng)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞,導(dǎo)致高血壓和冠心病,是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[18]。

綜上所述,在HDP中,MTHFR677C>T基因突變使葉酸代謝障礙從而導(dǎo)致高Hcy血癥,高水平血清Hcy可能通過激活氧化應(yīng)激反應(yīng)損傷胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞并導(dǎo)致HDP的進(jìn)展。未來應(yīng)進(jìn)一步研究其中的發(fā)病機(jī)制及Hcy與PLGF在HDP中的作用,為HDP的治療提供有價(jià)值的方向。