IgG抗-G聯(lián)合抗-D、抗-C混合抗體引起Rh(-)患者交叉配血不合1例

黃中海

安徽省蚌埠市第二人民醫(yī)院輸血科,安徽蚌埠 233000

Rh血型系統(tǒng)是非常復(fù)雜、最具多態(tài)性的一個(gè)血液系統(tǒng),重要性僅次于ABO血型系統(tǒng),其中與臨床密切相關(guān)的抗原主要有5個(gè):RhD、RhC、RhE、Rhc和Rhe,這5種抗原均有較強(qiáng)的免疫抗原性,能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生意外抗體,其中RhD抗原性最強(qiáng),抗-D抗體是引起溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血病的重要影響因素[1-3]。2000年版《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》僅要求對(duì)Rh血型系統(tǒng)的RhD抗原進(jìn)行常規(guī)檢測(cè),對(duì)RhC、RhE、Rhc、Rhe抗原未做要求,臨床采用隨機(jī)配血原則,導(dǎo)致抗-C、抗-c、抗-E、抗-e等抗體產(chǎn)生的報(bào)道不斷增多,常引起交叉配血不合、輸血不良反應(yīng)及新生兒溶血病[4],筆者在近期工作中發(fā)現(xiàn)了1例由免疫球蛋白G(IgG)抗-G聯(lián)合抗-D、抗-C混合抗體引起Rh(-)患者交叉配血不合,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 患者,男,52歲,于2022年6月17日在本院診斷為“急性闌尾炎”,擬行手術(shù)治療,術(shù)前常規(guī)備血?；颊咭话闱闆r良好,有過(guò)一次輸血史。輸血前檢查該患者為A型,RhD陰性,抗體篩查陽(yáng)性。因本院無(wú)常規(guī)備RhD陰性血液,遂向當(dāng)?shù)刂行难旧暾?qǐng),血站提供去白紅細(xì)胞懸液2袋,與患者交叉配血均不合,故對(duì)患者血清的抗體特異性及血站提供的2袋血液進(jìn)行Rh血型分型鑒定。

1.2試劑與儀器 ABO血型鑒定卡(長(zhǎng)春博訊生物技術(shù)有限公司,批號(hào):20211205);ABO血型反定型紅細(xì)胞(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司,批號(hào):20225323);抗體篩選細(xì)胞(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司,批號(hào):20227019);抗球蛋白微柱凝膠抗體篩查卡(長(zhǎng)春博訊生物技術(shù)有限公司,批號(hào):20211204);抗球蛋白微柱凝膠交叉配血卡(長(zhǎng)春博訊生物技術(shù)有限公司,批號(hào):20210901);抗體鑒定細(xì)胞(長(zhǎng)春博訊生物技術(shù)有限公司,批號(hào):20220501);酸放散試劑盒(長(zhǎng)春博訊生物技術(shù)有限公司,批號(hào):20220201);Rh血型抗原檢測(cè)卡(長(zhǎng)春博訊生物技術(shù)有限公司,批號(hào):20211201)。OLABO恒溫?cái)?shù)顯水浴鍋(山東博科生物科技有限公司,型號(hào):HH-2),血型血清學(xué)專用離心機(jī)(長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司,型號(hào):TD-3A),免疫微柱孵育器(長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司,型號(hào)FYQ)。

1.3方法 血型鑒定、抗體特異性鑒定及抗體效價(jià)測(cè)定采用微柱凝膠法卡式法,抗體篩查采用微柱凝膠法卡式法及鹽水法,抗-D、抗-C、抗-G的鑒定采用文獻(xiàn)[5]提供的思路進(jìn)行兩步吸收放散試驗(yàn),按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作:第一步用4號(hào)壓積譜細(xì)胞(Dccee)同體積與患者血漿37 ℃孵育2 h,期間每隔20 min混勻一次,取孵育后上清液和4號(hào)譜細(xì)胞進(jìn)行微柱凝膠法間接抗人球蛋白試驗(yàn)(IAT),直到反應(yīng)為陰性,此時(shí)如有抗-D、抗-G均已吸收完全,將吸收后的上清液與5號(hào)譜細(xì)胞(dCcee)進(jìn)行IAT,反應(yīng)有凝集,說(shuō)明上清液有抗-C;再將吸收后的4號(hào)譜細(xì)胞進(jìn)行放散,放散液與4號(hào)譜細(xì)胞和5號(hào)譜細(xì)胞進(jìn)行IAT,結(jié)果均有凝集,說(shuō)明放散下來(lái)的抗體不但和RhD抗原反應(yīng),也和RhC抗原反應(yīng),符合抗-G的特點(diǎn)。第二步用5號(hào)譜細(xì)胞吸收患者血漿,取孵育后上清液與5號(hào)譜細(xì)胞進(jìn)行IAT,直到反應(yīng)為陰性,此時(shí)如有抗-C、抗-G均已吸收完全,吸收后的上清液與4號(hào)譜細(xì)胞有凝集,說(shuō)明上清液有抗-D;再將吸收后的5號(hào)譜細(xì)胞進(jìn)行放散,放散液與4號(hào)譜細(xì)胞和5號(hào)譜細(xì)胞均有凝集,再次證明有抗-G。通過(guò)吸收放散試驗(yàn),可確定患者的意外抗體為抗-G、抗-D和抗-C的混合物。

2 結(jié) 果

2.1血型、抗體篩查及鑒定結(jié)果 患者血型為A型,Rh分型為dccee。血站提供的2份供血者血型為A型,Rh分型分為dCcee和dCCee?；颊呖贵w篩查及鹽水法鑒定結(jié)果均為陰性,卡式法血型鑒定結(jié)果顯示患者可能有IgG抗-D、抗-C兩種抗體,無(wú)法確定是否有抗-G。

2.2抗-D、抗-C、抗-G的鑒定結(jié)果 采用兩步吸收放散的方法,確定患者的意外抗體為抗-G、抗-D和抗-C的混合物。

2.3抗-C、抗-D和抗-G效價(jià)測(cè)定 用5號(hào)譜細(xì)胞和第一步吸收后的上清液微柱凝膠卡式法測(cè)得抗-C效價(jià)為8;用4號(hào)譜細(xì)胞和第二步吸收后的上清液微柱凝膠卡式法測(cè)得抗-D效價(jià)為16;用5號(hào)譜細(xì)胞對(duì)第一步的放散液進(jìn)行吸收后,放散下來(lái)即為抗-G,和11號(hào)譜細(xì)胞(DCCEE)微柱凝膠卡式法測(cè)得抗-G效價(jià)為4。

3 討 論

本例患者在輸血前抗體篩查卡式法鑒定結(jié)果為陽(yáng)性,鹽水法鑒定結(jié)果為陰性,確定其抗體性質(zhì)為IgG類。從抗體鑒定結(jié)果可以看到,凡是含有RhD或RhC抗原的譜細(xì)胞均有凝集,說(shuō)明有抗-D和抗-C兩種抗體,但無(wú)法確定是否有抗-G。G抗原為Rh血型系統(tǒng)抗原,最初由ALLEN和TIPPET在1958年報(bào)道,RhD和RhCE的C等位基因外顯子2編碼的Ser103是G抗原的活性關(guān)鍵,通常RhD及RhC陽(yáng)性紅細(xì)胞上都有G抗原存在[6],抗-G可與抗-D和(或)抗-C陽(yáng)性的紅細(xì)胞反應(yīng),在臨床上易誤認(rèn)為抗-D或抗-C,但不能被分離為抗-C和抗-D[7]。理論上抗-G可以用rG/dce或r″G/dce的紅細(xì)胞通過(guò)吸收放散法進(jìn)行鑒定,但此類細(xì)胞極難獲得,因此常采用兩步吸收放散試驗(yàn)來(lái)鑒定抗-G[8]。筆者通過(guò)兩步吸收放散試驗(yàn),確定患者血漿中意外抗體為Rh血型系統(tǒng)的抗-G、抗-D和抗-C的混合物。

Rh血型系統(tǒng)是ABO血型系統(tǒng)外最復(fù)雜和最具有臨床意義的血型系統(tǒng),截至目前已增至56個(gè)抗原,Rh血型系統(tǒng)意外抗體導(dǎo)致的血型鑒定正反不符、交叉配血不合及新生兒ABO溶血病在臨床上占大多數(shù)[9],一般是通過(guò)胎母血型不合的多次妊娠、輸血、注射及器官移植等免疫刺激產(chǎn)生的IgG型抗體[10]。本研究患者30多年前在鄉(xiāng)下衛(wèi)生院輸過(guò)一次血,因此筆者推斷其血中的抗-G、抗-D和抗-C,可能是由那次輸血誘發(fā),紅細(xì)胞同種抗原暴露后是否產(chǎn)生同種抗體準(zhǔn)確的機(jī)制仍不清楚。有研究認(rèn)為與抗原密度的高低、人類HLA等位基因及多種免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用和受體的炎癥狀態(tài)、免疫耐受情況都有關(guān)系[11-14],有的人雖然多次輸過(guò)不相容的血液,但都未產(chǎn)生同種抗體,而有的人僅輸血一次便可誘發(fā)多種抗體[15]。目前為止,還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)哪一種檢測(cè)項(xiàng)目能把這種易于免疫應(yīng)答者篩選出來(lái),本研究案例僅輸血一次就產(chǎn)生多種抗體,且時(shí)隔30多年仍維持抗-G、抗-D、抗-C效價(jià)分別為4、16和8,這樣的效價(jià)足以引起遲發(fā)型輸血反應(yīng)。向東等[16]報(bào)道,引起免疫性溶血性輸血反應(yīng)的抗體80%是效價(jià)≤4的弱抗體。本研究患者為中年患者,身體情況尚好,最后未輸血康復(fù)出院。

綜上所述,意外抗體是導(dǎo)致交叉配血不合的常見(jiàn)原因,輸血前抗體篩查是保證臨床輸血安全重要手段。