六溴環(huán)十二烷（HBCD）和Cu2+單獨(dú)與聯(lián)合暴露對(duì)海水小球藻的毒性作用

賴麗華，田斐，熊倩，王學(xué)鋒，葉國玲，陳海剛*

（1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所，廣東省漁業(yè)生態(tài)環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部南海漁業(yè)資源環(huán)境科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，廣東珠江口生態(tài)系統(tǒng)野外科學(xué)觀測(cè)研究站，廣州 510300；2.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東 湛江 524088）

阻燃劑是水環(huán)境中的一類新興污染物，其中六溴環(huán)十二烷（hexabromocyclododecane，HBCD）是一種常用的溴化阻燃劑，因其成本低、阻燃效果好等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于塑料聚合物、電子產(chǎn)品和建筑材料的生產(chǎn)中[1]。研究表明HBCD 具有持久性、生物積蓄性、遠(yuǎn)距離遷移性等，可引起內(nèi)分泌干擾作用、神經(jīng)毒性和生殖發(fā)育毒性等[2–5]。由于沒有性能好且足夠安全的替代品，HBCD 在我國還需延用至2024 年，因此，了解HBCD 在環(huán)境中的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)至關(guān)重要[6]。此外，重金屬也是水環(huán)境中廣泛關(guān)注的一類污染物，其中銅被認(rèn)為是毒性最強(qiáng)的金屬之一[7]。高濃度Cu2+會(huì)干擾藻類的生長(zhǎng)和光合作用，并在食物鏈和食物網(wǎng)中傳遞，威脅生物體和人類的健康[8]。通常Cu2+在海水中的濃度為0.03~0.60 μg·L-1，但在受工業(yè)活動(dòng)、生活污水和電子垃圾等污染的沿海水域，其濃度可能會(huì)增加數(shù)倍[9-10]。研究發(fā)現(xiàn)，在電子廢棄物處理區(qū)周圍的海水環(huán)境中，高濃度的溴化阻燃劑和重金屬共存現(xiàn)象非常普遍。例如，在渤海海岸水體中，發(fā)現(xiàn)HBCD 濃度高達(dá)5 080 ng·L-1，Cu2+濃度最高可達(dá)39.99 μg·L-1，這也是目前為止在水體中可檢測(cè)到的HBCD 和Cu2+的最高濃度[11-12]。

溴化阻燃劑和重金屬混合暴露對(duì)生物體的毒性常表現(xiàn)為比單獨(dú)暴露更高，如：Chen等[13]研究發(fā)現(xiàn)，與僅暴露于鎘處理的小鼠相比，同時(shí)暴露于四溴雙酚A和鎘的小鼠體質(zhì)量和肝臟質(zhì)量明顯增加；十溴聯(lián)苯醚的添加不僅增強(qiáng)了鉛對(duì)赤子愛勝蚓的毒性[14]，還會(huì)加劇鎘對(duì)人體肝細(xì)胞的損傷[15]。溴化阻燃劑和重金屬的持續(xù)釋放可能會(huì)對(duì)水生系統(tǒng)造成多重壓力，已證實(shí)單一污染物具有一定的毒性效應(yīng)，但針對(duì)它們的聯(lián)合毒性效應(yīng)研究仍十分匱乏，因此有必要深入探究污染物聯(lián)合暴露對(duì)水生生物的影響。

海岸帶獨(dú)特的地理位置和頻繁的人類活動(dòng)使其成為污染物的最大的匯，因此研究沿海水域中污染物對(duì)水生生物的毒性效應(yīng)迫在眉睫。目前針對(duì)溴化阻燃劑和重金屬的生物毒性研究普遍以動(dòng)物作為生物受試體，缺乏溴化阻燃劑和重金屬對(duì)微藻的毒性研究。藻類作為海洋生態(tài)系統(tǒng)中的重要初級(jí)生產(chǎn)者之一，其分布廣泛、適應(yīng)能力強(qiáng)、易獲得、繁殖快且對(duì)污染物敏感性高，故常被選作污染物毒性評(píng)估和水質(zhì)安全評(píng)價(jià)的模式生物[16]。本研究以普通海水小球藻（Chlorella salina）作為生物受試體，探究HBCD 和Cu2+單獨(dú)和聯(lián)合暴露對(duì)海水小球藻毒性作用，以期為HBCD、Cu2+及其混合物的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和污染防控提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

HBCD（純度：99%）和CuSO4·5H2O（純度：99%）購自上海麥克林科技有限公司。丙酮作為溶劑用于制備HBCD 儲(chǔ)備液（1 g·L-1），實(shí)驗(yàn)中控制其添加比例為0.05%（V/V）。本實(shí)驗(yàn)所用海水采集于中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗(yàn)基地，溫度為29~32 ℃，鹽度為28~32，為保證每次實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)條件一致，根據(jù)該藻種培養(yǎng)條件預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整鹽度為30、pH為8，采用0.45 μm 醋酸纖維濾膜將其過濾，高溫高壓滅菌后用于實(shí)驗(yàn)。海水小球藻種和F/2 培養(yǎng)基購自上海光語科技有限公司。

1.2 藻種及其培養(yǎng)

將海水小球藻接種到無菌的F/2 培養(yǎng)基中，于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：溫度（25±1）℃，光照強(qiáng)度54~74 μmol·m-2·s-1，光暗比為14 h∶10 h。每日定時(shí)手動(dòng)搖勻藻液3 次，以防止藻細(xì)胞沉降，同時(shí)更換位置以保證樣品受光均勻。收集培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的藻細(xì)胞，將其用作毒性實(shí)驗(yàn)的接種物。所有實(shí)驗(yàn)均在無菌條件下進(jìn)行，以避免細(xì)菌或其他藻類的污染。

1.3 急性毒性實(shí)驗(yàn)步驟

HBCD、Cu2+及其混合物對(duì)海水小球藻的毒性測(cè)試實(shí)驗(yàn)方案參考文獻(xiàn)[17]，設(shè)置藻種初始濃度（以cell計(jì)）為5×104個(gè)·L-1。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HBCD 濃度在3 500 μg·L-1以上處理組間的結(jié)果沒有顯著差異，Cu2+濃度達(dá)到2 000 μg·L-1海水小球藻幾乎被完全抑制，而HBCD 濃度在50 μg·L-1以下和Cu2+濃度在200 μg·L-1以下處理組的結(jié)果表現(xiàn)為微弱的促進(jìn)作用，因此，濃度設(shè)置按照等對(duì)數(shù)間距法將HBCD 暴露濃度設(shè)置為0、50、160、500、955、1 830 μg·L-1和3 500 μg·L-1，Cu2+的暴露濃度設(shè)置為0、200、315、500、795、1 260 μg·L-1和2 000 μg·L-1。為了深入研究添加HBCD 是否會(huì)影響Cu2+對(duì)海水小球藻的毒性，選擇目前調(diào)查的最高環(huán)境濃度5 μg·L-1和前面單獨(dú)暴露對(duì)海水小球藻毒性最大的500 μg·L-1兩個(gè)HBCD 濃度與7 組不同濃度的Cu2+（0、200、315、500、795、1 260 μg·L-1和2 000 μg·L-1）進(jìn)行聯(lián)合毒性實(shí)驗(yàn)。各處理組設(shè)置3個(gè)平行，培養(yǎng)條件同1.2，培養(yǎng)96 h后取樣測(cè)定藻細(xì)胞密度、Chl a 含量，并利用FluorPen 手持式葉綠素?zé)晒鈨x測(cè)定葉綠素?zé)晒鈪?shù)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 25 對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，不同濃度處理間對(duì)海水小球藻細(xì)胞密度、Chl a 含量和葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響采用單因素方差分析，顯著性差異采用LSD 法進(jìn)行多重比較，Probit 程序計(jì)算半數(shù)效應(yīng)濃度（EC50）值。細(xì)胞密度抑制率計(jì)算公式如下：

細(xì)胞密度抑制率（%）=[（對(duì)照組細(xì)胞密度-處理組細(xì)胞密度）/對(duì)照組細(xì)胞密度]×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 HBCD單獨(dú)暴露對(duì)海水小球藻的影響

不同濃度HBCD 脅迫下，海水小球藻的細(xì)胞密度呈現(xiàn)不同程度的抑制效應(yīng)，而Chl a 和PSⅡ最大光化學(xué)量子產(chǎn)量Fv/Fm無顯著變化。如圖1所示，500 μg·L-1HBCD 處理組對(duì)藻細(xì)胞密度的抑制效應(yīng)最強(qiáng)（32.99%），其次依次為50（24.76%）、1 830 μg·L-1（21.04%）和3 500 μg·L-1（19.95%）處理組。Chl a 含量的變化趨勢(shì)與細(xì)胞密度不同，500 μg·L-1HBCD 處理組，Chl a 含量比對(duì)照組僅降低了13.42%，而1 830 μg·L-1處理組中Chl a含量的抑制率最高（36.45%）。

圖1 HBCD脅迫對(duì)海水小球藻的影響Figure 1 Effects of HBCD stress on C.salina

2.2 Cu2+單獨(dú)暴露對(duì)海水小球藻的影響

如圖2 所示，不同濃度Cu2+脅迫下，海水小球藻的細(xì)胞密度、Chl a 含量和Fv/Fm 發(fā)生明顯變化。當(dāng)Cu2+濃度≤500 μg·L-1時(shí)，藻細(xì)胞密度受到輕微抑制，而當(dāng)其濃度為795、1 260 μg·L-1和2 000 μg·L-1時(shí)，藻細(xì)胞密度顯著下降，較對(duì)照組分別降低了75.71%、92.88%和96.80%，且在培養(yǎng)24 h 后出現(xiàn)明顯的絮凝沉淀，Chl a 含量也較對(duì)照組分別降低了72.83%、87.53%和96.77%。此外，低濃度Cu2+處理組對(duì)Chl a含量的影響大于其對(duì)藻細(xì)胞密度的影響。Cu2+濃度≤795 μg·L-1處理組，F(xiàn)v/Fm無明顯變化，而Cu2+濃度為1 260 μg·L-1和2 000 μg·L-1時(shí)，F(xiàn)v/Fm 與對(duì)照組相比顯著降低，分別下降了24.24%和32.32%。Cu2+單獨(dú)暴露時(shí)，基于細(xì)胞密度和Chl a 計(jì)算的96 h-EC50分別為637 μg·L-1和541 μg·L-1（表1）。

圖2 Cu2+脅迫對(duì)海水小球藻的影響Figure 2 Effects of HBCD and Cu2+stress on C.salina

2.3 HBCD和Cu2+聯(lián)合暴露對(duì)海水小球藻的影響

HBCD和Cu2+聯(lián)合暴露對(duì)海水小球藻細(xì)胞密度和Chl a含量的影響如圖3所示。HBCD和Cu2+聯(lián)合暴露對(duì)海水小球藻的抑制率高于Cu2+單獨(dú)暴露，其抑制率隨HBCD 濃度增加而顯著增高。當(dāng)Cu2+濃度為500 μg·L-1時(shí)，5 μg·L-1和500 μg·L-1HBCD 聯(lián)合處理組中細(xì)胞密度抑制率均顯著高于Cu2+單獨(dú)暴露，分別為Cu2+單獨(dú)暴露的2.5 倍和5.4 倍（圖3A）。在Cu2+濃度為315 μg·L-1處理組中，5 μg·L-1HBCD 聯(lián)合脅迫下Chl a 含量抑制率低于Cu2+單獨(dú)暴露處理組，而在500 μg·L-1HBCD 聯(lián)合脅迫下Chl a 含量抑制率則顯著升高，其抑制率是Cu2+單獨(dú)暴露的2.3 倍（圖3B）。當(dāng)Cu2+和HBCD 濃度均為500 μg·L-1時(shí)，Chl a 含量抑制率是Cu2+單獨(dú)暴露處理組的2倍（圖3B）。

圖3 HBCD和Cu2+聯(lián)合暴露對(duì)海水小球藻的影響Figure 3 Effects of HBCD and Cu2+mixed exposure on C.salina

與Cu2+單獨(dú)暴露處理組相比，HBCD 和Cu2+聯(lián)合暴露處理組中PSⅡ最大光化學(xué)量子產(chǎn)量（Fv/Fm）和PSⅡ?qū)嶋H光化學(xué)量子產(chǎn)量（ΦPSⅡ）值均降低（圖4）。當(dāng)Cu2+濃度為795 μg·L-1時(shí)，500 μg·L-1HBCD 處理組中Fv/Fm值顯著低于Cu2+單獨(dú)暴露，下降了29.2%，僅為0.44（圖4A）。在Cu2+單獨(dú)暴露處理組中，ΦPSⅡ和Fv/Fm 變化趨勢(shì)相同；當(dāng)額外添加5 μg·L-1HBCD 時(shí)，ΦPSⅡ隨Cu2+濃度增加先緩慢升高后迅速降低；當(dāng)添加500 μg·L-1HBCD 時(shí)，ΦPSⅡ則隨Cu2+濃度增加逐漸下降（圖4B）。

圖4 HBCD和Cu2+聯(lián)合暴露對(duì)海水小球藻葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響Figure 4 Effects of HBCD and Cu2+co-exposure on chlorophyll fluorescence parameters of C.salina

表1 給出了不同HBCD 添加濃度下，海水小球藻細(xì)胞密度和Chl a 含量對(duì)Cu2+的96 h-EC50變化情況。5 μg·L-1和500 μg·L-1HBCD 添加濃度聯(lián)合暴露處理組，由細(xì)胞密度得到的96 h EC10（262、199 μg·L-1）和EC50（513、403 μg·L-1）值與Cu2+單獨(dú)暴露均有顯著差異，且隨HBCD 濃度升高而降低。通過細(xì)胞密度計(jì)算的96 h-EC50明顯大于Chl a 含量計(jì)算結(jié)果，與上述細(xì)胞密度和Chl a變化情況相同。析因分析表明，HBCD和Cu2+聯(lián)合暴露對(duì)海水小球藻的影響呈現(xiàn)交互作用（P=0.001）。

3 討論

藻類常用于評(píng)估各類污染物毒性效應(yīng)，但目前針對(duì)HBCD 對(duì)微藻的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究仍很有限。Bertucci 等[18]的研究表明HBCD 的細(xì)胞毒性高度動(dòng)態(tài)，不遵循傳統(tǒng)的濃度反應(yīng)模式，與本研究結(jié)果一致。在本研究中，高濃度HBCD 脅迫下海水小球藻的細(xì)胞密度高于低濃度的，且所有處理中藻細(xì)胞的抑制率均低于50%，可能是由于海水小球藻具有良好的光合活性和較強(qiáng)的抗氧化系統(tǒng)，足以抵御HBCD 的氧化脅迫[19]。低毒性的化合物暴露短時(shí)間內(nèi)一般不會(huì)引起個(gè)體死亡，可能首先導(dǎo)致生物體的生理生化水平發(fā)生異常[20]。例如，Wu等[21]的研究發(fā)現(xiàn)低濃度HBCD暴露斑馬魚72 h 后，斑馬魚胚胎心率和心律失常增加，而存活率和整體畸形率未受到顯著影響，推測(cè)心臟可能是HBCD 的作用靶點(diǎn)。但在本研究中，發(fā)現(xiàn)HBCD 對(duì)微藻Fv/Fm 的影響不顯著，說明Fv/Fm 可能不適用于HBCD對(duì)微藻的毒性檢測(cè)。

Li等[22]的研究發(fā)現(xiàn)，Cu2+會(huì)影響微藻的生長(zhǎng)，且當(dāng)其濃度達(dá)到一定范圍會(huì)抑制藻細(xì)胞生長(zhǎng)。在本研究中，也觀察到當(dāng)Cu2+暴露濃度大于500 μg·L-1時(shí)藻細(xì)胞數(shù)量顯著下降，在一定濃度范圍內(nèi)海水小球藻的細(xì)胞密度與Cu2+濃度呈劑量效應(yīng)關(guān)系。在實(shí)驗(yàn)過程中，高濃度Cu2+處理組出現(xiàn)藻細(xì)胞絮凝沉淀，推測(cè)其原因有：①高濃度Cu2+使微藻細(xì)胞失去懸浮生長(zhǎng)的能力；②細(xì)胞集聚可以在表面形成黏液層，可以一定程度延緩和防止金屬的毒性作用[23]。Cu2+不僅抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，同時(shí)還損傷藻細(xì)胞光合色素。在光合作用中，光合色素是反映藻類光合效率的重要指標(biāo)，Chl a 是藻類的主要捕光色素[24]。光合生物對(duì)重金屬敏感度較高，故Cu2+處理組海水小球藻Chl a 含量比細(xì)胞密度受到抑制程度更高，這主要是由于Cu2+破壞藻細(xì)胞的光合作用系統(tǒng)，導(dǎo)致Chl a含量下降，進(jìn)而影響藻類的生長(zhǎng)[25-26]。

HBCD和Cu2+是電子垃圾回收過程中釋放的主要有害物質(zhì)[27]，然而目前關(guān)于其聯(lián)合暴露的毒性作用機(jī)制知之甚少，因此本研究展開HBCD 和Cu2+聯(lián)合暴露對(duì)海水小球藻的毒性作用研究。污染物引起的氧化應(yīng)激是損傷微藻的主要方式，研究表明溴化阻燃劑和重金屬都會(huì)引起氧化應(yīng)激，損傷葉綠體膜，并抑制抗氧化酶的活性[28-29]。在本實(shí)驗(yàn)中，HBCD 和Cu2+聯(lián)合暴露下海水小球藻細(xì)胞密度和Chl a 含量降低，推測(cè)可能是HBCD 和Cu2+誘導(dǎo)微藻葉綠體產(chǎn)生大量活性氧引起脂質(zhì)過氧化的結(jié)果?；旌衔廴疚镆蚋鹘M分物理化學(xué)性質(zhì)不同而產(chǎn)生不同的影響，但各成分的混合比例起著重要的作用[30]。在本研究中，500 μg·L-1Cu2+與不同濃度HBCD組合對(duì)海水小球藻生長(zhǎng)的影響有顯著差異，而低濃度Cu2+混合物處理組則未表現(xiàn)出類似規(guī)律，表明污染物本身的化學(xué)性質(zhì)對(duì)聯(lián)合毒性的影響小于其濃度組合的影響。

在藻類光合作用研究中，葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)技術(shù)是一種簡(jiǎn)單、無損傷的檢測(cè)方法[31]。葉綠素?zé)晒馀c光合作用過程密切相關(guān)，對(duì)污染物響應(yīng)敏感，其中Fv/Fm 和ΦPSⅡ是2 個(gè)反映光合效率的葉綠素?zé)晒鈪?shù)[32]。本研究發(fā)現(xiàn)，高濃度Cu2+處理下，F(xiàn)v/Fm顯著降低，在Chen 等[33]的研究中也發(fā)現(xiàn)類似變化規(guī)律，可能是由于Cu2+破壞PSⅡ系統(tǒng)并強(qiáng)烈抑制光合電子傳輸速率。藻細(xì)胞密度的顯著下降進(jìn)一步證實(shí)Cu2+誘導(dǎo)毒性并超過藻細(xì)胞的耐受極限，可能致使細(xì)胞結(jié)構(gòu)斷裂解體，進(jìn)而導(dǎo)致相關(guān)熒光參數(shù)下降[34]。此外，Cu2+還可通過破壞電子傳遞鏈和取代Chl a 分子中的Mg 來破壞光合系統(tǒng)[35]。然而，HBCD 對(duì)藻細(xì)胞光合作用的毒性機(jī)制仍未可知。有限的研究發(fā)現(xiàn)，溴化阻燃劑三（2，3-二溴丙基）異氰尿酸酯會(huì)抑制psbC 的表達(dá)，從而減少編碼蛋白質(zhì)與Chl a 的結(jié)合，破壞PSⅡ反應(yīng)中心[36]；還有研究發(fā)現(xiàn)溴化阻燃劑BDE-47 會(huì)影響類囊體膜的通透性[37]，并產(chǎn)生活性氧降解光合色素和破壞葉綠素結(jié)構(gòu)[38]。本研究中，HBCD 單獨(dú)暴露時(shí)，F(xiàn)v/Fm和ΦPSⅡ無明顯變化，而它們?cè)贖BCD 和Cu2+聯(lián)合暴露中隨HBCD 添加濃度的升高而降低，表明HBCD 加劇了Cu2+對(duì)微藻光合系統(tǒng)的損傷。

半數(shù)效應(yīng)濃度（EC50）是劑量反應(yīng)關(guān)系研究中廣泛運(yùn)用的標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)量，被認(rèn)為是化合物毒性的決定因素[39]。小球藻屬隸屬于綠藻門，是水環(huán)境中分布最廣泛的類群之一。研究發(fā)現(xiàn)，同一屬的不同小球藻之間Cu2+的96 h-EC50差異明顯，蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）的96 h-EC50為68 μg·L-1[40]，而橢圓小球藻（Chlorella ellipsoidea）的96 h-EC50為489 μg·L-1[41]，淡水普通小球藻（Chlorella vulgaris）的96 h-EC50為591 μg·L-1[42]，甚至 有些藻株的96 h-EC50可高達(dá)110.3 μmol·L-1（約7 059 μg·L-1）[43]。一般認(rèn)為具有較大的比表面積的藻細(xì)胞能夠提供更多的金屬結(jié)合位點(diǎn)，隨著藻細(xì)胞表面吸附的Cu2+增多，其對(duì)藻細(xì)胞的毒性作用加強(qiáng)。本研究所用的海水小球藻對(duì)Cu2+脅迫的耐受性高于大部分的藻類，可能與其細(xì)胞較小、Cu2+的初始吸附量小有關(guān)[40]。污染物的敏感性會(huì)隨受試對(duì)象的形態(tài)和生理特征或本身形態(tài)而異，通常認(rèn)為生理終點(diǎn)比生存終點(diǎn)具有更高的敏感性[44]。在本研究中觀察到基于Chl a 計(jì)算的96 h EC10和EC50更小，即Chl a 對(duì)污染物更為敏感。EC10、EC50、無觀察效應(yīng)濃度（no observed effect concentration，NOEC）和最低觀察效應(yīng)濃度（lowest observed effect concentration，LOEC）是評(píng)價(jià)污染物急性毒性的重要指標(biāo)。在本研究中EC10和EC50隨污染物濃度顯著變化，而NOEC 和LOEC 則明顯變化。NOEC 和LOEC 與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)假設(shè)檢驗(yàn)方法的選擇有關(guān)，EC10和EC50是基于劑量效應(yīng)曲線獲得，因此認(rèn)為選擇EC10和EC50更適合評(píng)價(jià)污染物的毒性。交互作用可以反映一個(gè)因素不同水平變化受其他因素不同水平影響，雙因素方差分析是最簡(jiǎn)單且有效評(píng)價(jià)兩個(gè)污染物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否有交互作用的工具，在本研究中HBCD 和Cu2+對(duì)海水小球藻的影響具有交互作用[45]。

4 結(jié)論

（1）六溴環(huán)十二烷（HBCD）對(duì)海水小球藻的毒性低，96 h-EC50大于3 500 μg·L-1，HBCD對(duì)Chl a含量和Fv/Fm的影響不顯著。

（2）Cu2+對(duì)海水小球藻的毒性呈劑量依賴性抑制，基于細(xì)胞密度和Chl a 計(jì)算的96 h-EC50分別為637 μg·L-1和541 μg·L-1，Chl a 對(duì)Cu2+的響應(yīng)高于細(xì)胞密度。

（3）HBCD 和Cu2+對(duì)海水小球藻的影響具有交互作用，同時(shí)HBCD 會(huì)加劇Cu2+對(duì)海水小球藻的毒性，表現(xiàn)為細(xì)胞密度、Chl a 含量、葉綠素?zé)晒鈪?shù)（Fv/Fm、ΦPSⅡ）和96 h-EC50降低，Chl a 對(duì)HBCD 和Cu2+聯(lián)合暴露的響應(yīng)高于細(xì)胞密度。因此，溴化阻燃劑和重金屬一旦釋放，會(huì)引起水生生物中毒，進(jìn)而威脅整個(gè)海洋生態(tài)系統(tǒng)。