子癇前期患者血清中aD1和aANXA5效價(jià)與炎癥和凝血指標(biāo)的相關(guān)性*

劉 洪,魏 敏,王 焱,吳 穎,羅彩霞,單燕麗,卡迪麗亞,江雅麗,王曉玉,路宗林

1.徐州醫(yī)科大學(xué)研究生院,江蘇徐州 221000;2.徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科,江蘇徐州 221000;3.伊犁哈薩克自治州友誼醫(yī)院產(chǎn)科,新疆伊犁 835000;4.伊犁哈薩克自治州臨床醫(yī)學(xué)研究院,新疆伊犁 835000

子癇前期是妊娠期特有的疾病,其發(fā)病原因及機(jī)制尚不明確,但可導(dǎo)致全身重要臟器的損傷,嚴(yán)重危及母兒健康和生命。抗磷脂綜合征(APS)是一種自身免疫性血栓性疾病,其特征為復(fù)發(fā)性血管血栓形成和(或)妊娠并發(fā)癥[1]?？沽字贵w的存在是APS的標(biāo)志性特征,也是病理妊娠診斷的重要指標(biāo)[2]。研究顯示抗磷脂抗體與子癇前期關(guān)系密切,APS也被公認(rèn)為導(dǎo)致子癇前期的高危因素[3]。目前研究集中于傳統(tǒng)型抗磷脂抗體如抗心磷脂抗體、抗β2糖蛋白Ⅰ抗體(aβ2GPⅠ)及狼瘡抗凝物,而對(duì)于非傳統(tǒng)型抗磷脂抗體與子癇前期關(guān)系的研究相對(duì)較少。同時(shí)在臨床上會(huì)遇到臨床表現(xiàn)符合APS但傳統(tǒng)型抗磷脂抗體持續(xù)陰性的患者,被稱之為血清陰性抗磷脂綜合征[4],以及由抗磷脂抗體引發(fā)的一系列特異性的臨床癥狀的病態(tài)妊娠稱為產(chǎn)科抗磷脂綜合征。非傳統(tǒng)型抗磷脂抗體檢出率較高,且按APS治療后的妊娠結(jié)局多得到明顯改善。作為非傳統(tǒng)型抗磷脂抗體的代表—抗β2-糖蛋1-D1抗體(aD1)和抗膜聯(lián)蛋白A5抗體(aANXA5)在既往相關(guān)研究中表明與晚期病態(tài)妊娠、血管血栓之間有顯著相關(guān)性,但是與子癇前期的關(guān)系仍在探討中[5-6]。除血栓形成外,由抗磷脂抗體介導(dǎo)的免疫及炎癥反應(yīng)也是病理妊娠發(fā)病的主要機(jī)制[7]。本研究旨在探討子癇前期患者血清中非傳統(tǒng)型抗磷脂抗體aD1和aANXA5效價(jià)與炎癥及凝血指標(biāo)相關(guān)性,進(jìn)一步探討其與子癇前期病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性及其臨床意義,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2021年1月至2022年1月于徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院(簡(jiǎn)稱“本院”)婦產(chǎn)科收治的子癇前期重度患者50例(子癇前期重度組)和子癇前期非重度患者50例(子癇前期非重度組)共100例子癇前期患者(子癇前期組)為研究對(duì)象,研究對(duì)象均符合第9版《婦產(chǎn)科學(xué)》的子癇前期診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]。其中子癇前期伴有下面任何一種表現(xiàn)納入子癇前期重度組:(1)收縮壓≥160 mmHg 和 (或)舒張壓≥110 mmHg;(2)血小板計(jì)數(shù)<100×109/L;(3)肝或腎功能受損;(4)肺水腫;(5)新發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)異?；蛞曈X(jué)障礙。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)既往高血壓病史;(2)多胎妊娠;(3)合并其他妊娠期疾病;(4)肝腎功能不全;(5)免疫系統(tǒng)疾病;(6)心血管系統(tǒng)疾病;(7)內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病;(8)有過(guò)抗凝治療。另同期選取在本院產(chǎn)檢正常的孕婦50例作為正常對(duì)照組。正常對(duì)照組孕婦均無(wú)妊娠合并癥和并發(fā)癥,血壓在140/90 mmHg以下,尿蛋白陰性,排除既往不良妊娠史。本研究通過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批(倫理審批號(hào):XYFY2022-KL042-01),所有研究對(duì)象均知情同意。

1.2儀器與試劑 BH-5360CRP 型全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀(桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子有限公司)、TEK8520 型全自動(dòng)凝血分析儀(江西特康科技有限公司)、aD1試劑盒購(gòu)自美國(guó)依諾瓦診斷公司、aANXA5試劑盒購(gòu)自江蘇博深生物科技公司。

1.3方法 抽取3組孕婦產(chǎn)前空腹肘靜脈血3 mL,置于含有抗凝試管中,靜置、凝血后進(jìn)行離心,設(shè)定離心機(jī)3 000 r/min,離心10 min,收集血清后置于-80 ℃冰箱統(tǒng)一保存?zhèn)溆?待血液標(biāo)本收集完后,采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)待檢者aD1效價(jià),用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)待檢者aANXA5效價(jià)。均嚴(yán)格按照抗體相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作;另同時(shí)抽取所有入組孕婦4 mL肘靜脈血,分別應(yīng)用BH-5360CRP 型全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀檢測(cè)血液指標(biāo)[白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(NC)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)(LY)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、血小板計(jì)數(shù) (PLT) ]及TEK8520型全自動(dòng)凝血分析儀檢測(cè)凝血指標(biāo)[凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶時(shí)間(TT)、纖維蛋白原(FIB)、D -二聚體(D-D)]。

2 結(jié) 果

2.13組孕婦一般資料比較 3組孕婦一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。見(jiàn)表1。

表1 3組孕婦一般資料比較

2.23組孕婦血清中各指標(biāo)水平比較 3組孕婦血清中aD1效價(jià)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);子癇前期重度組血清中aANXA5效價(jià)、WBC、NC、LY、CRP、TT、FIB、D-D水平均較子癇前期非重度組及正常對(duì)照組升高,而PLT、PT、APTT水平低于其他兩組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);子癇前期非重度組血清中aANXA5效價(jià)、WBC、NC、LY、FIB水平較正常對(duì)照組升高,而PT、APTT水平低于正常對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);子癇前期非重度組血清中CRP、PLT、TT水平與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05) 。見(jiàn)表2。

表2 3組孕婦血清中各指標(biāo)水平比較

2.3子癇前期患者血清中aD1和aANXA5效價(jià)與炎癥及凝血指標(biāo)的相關(guān)性 子癇前期患者血清中aD1效價(jià)與D-D呈正相關(guān)(P<0.05),與APTT、TT呈負(fù)相關(guān)(P<0.05);子癇前期患者血清中aANXA5效價(jià)與WBC、NC、LY、CRP、TT、FIB、D-D呈正相關(guān)(P<0.05),與 PLT、PT、APTT呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 子癇前期患者血清中aD1和aANXA5效價(jià)與炎癥及凝血指標(biāo)的相關(guān)性

2.4影響子癇前期重度的多因素Logistic回歸分析 先以子癇前期組患者各觀察指標(biāo)的中位數(shù)為分界標(biāo)準(zhǔn),采用“先單因素分析后多因素分析法”納入單因素分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)(aANXA5效價(jià)、LY、CRP、PLT、PT、APTT、TT、FIB、D-D)作為自變量,以子癇前期作為因變量(子癇前期重度=1,子癇前期=0),進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示aANXA5效價(jià)、CRP、APTT、FIB為子癇前期重度的獨(dú)立影響因素(P<0.05) 。見(jiàn)表4、5。

表4 影響子癇前期重度的單因素分析

2.5Logistic回歸模型對(duì)子癇前期重度發(fā)生預(yù)測(cè)價(jià)值的初步評(píng)價(jià) ROC曲線以子癇前期重度為研究對(duì)象,以1-特異度作為橫坐標(biāo),以靈敏度作為縱坐標(biāo)繪制曲線。見(jiàn)圖1。ROC曲線分析結(jié)果顯示Logistic回歸模型預(yù)測(cè)子癇前期重度的曲線下面積為0.919(P<0.001)。

圖1 Logistic回歸模型預(yù)測(cè)子癇前期重度發(fā)生的ROC曲線

表5 影響子癇前期重度的多因素 Logistic 回歸分析

3 討 論

子癇前期是妊娠期常見(jiàn)的并發(fā)癥之一,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,目前還不是很明確?，F(xiàn)有研究認(rèn)為子癇前期的發(fā)病與免疫反應(yīng)異常、炎癥反應(yīng)和血管內(nèi)皮損傷相關(guān)[9]。而抗磷脂抗體是一組以血小板和內(nèi)皮細(xì)胞膜上負(fù)電荷磷脂作為靶抗原,識(shí)別磷脂或磷脂結(jié)合蛋白并與其結(jié)合的自身免疫性抗體[10]。研究提示抗磷脂抗體通過(guò)相關(guān)機(jī)制可致內(nèi)皮細(xì)胞功能受損,從而活化血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、中性粒細(xì)胞等,使血液凝固性增加;可直接作用于滋養(yǎng)細(xì)胞,從而改變其分化和成熟,可導(dǎo)致胎盤病理改變和功能損傷,以及螺旋動(dòng)脈的血管病變,進(jìn)而參與相關(guān)病理妊娠的進(jìn)展[9,11]。

既往研究提示,膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)是一種胎盤抗凝蛋白,能與活化細(xì)胞(血小板、內(nèi)皮細(xì)胞等)或凋亡細(xì)胞的質(zhì)膜外層暴露的磷脂酰絲氨酸(PS)結(jié)合形成屏障以防止促凝劑復(fù)合物的活化,從而發(fā)揮抗凝、抗炎、抗凋亡的作用[12]。aANXA5是妊娠期間暴露于循環(huán)免疫細(xì)胞中ANXA5產(chǎn)生的自身抗體,兩者相結(jié)合會(huì)破壞抗凝血?jiǎng)┢琳?暴露前凝血PS,從而易使血栓形成。本研究結(jié)果顯示,子癇前期組孕婦血清中aANXA5效價(jià)顯著高于正常對(duì)照組,其中,子癇前期重度組孕婦的aANXA5效價(jià)顯著高于子癇前期非重度組,提示aANXA5在子癇前期患者中呈高表達(dá)水平,且可能參與病情發(fā)展。aD1是aβ2GPⅠ氨基末端的D1結(jié)構(gòu)域,與APS發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[13]。有研究顯示,aD1可抑制凝血酶原活性及二磷酸腺苷介導(dǎo)的血小板聚集,并且在體外激活單核細(xì)胞并增加其細(xì)胞因子的表達(dá),并且激活自然殺傷細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞,進(jìn)而引起血栓形成及病理妊娠的發(fā)生[14]。本研究中3組孕婦血清中aD1效價(jià)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

結(jié)合抗磷脂抗體的“一擊再擊”模型解說(shuō)[15],當(dāng)機(jī)體局部或全身發(fā)生炎癥或者損傷時(shí),細(xì)胞表面的磷脂成分發(fā)生結(jié)構(gòu)的改變,隱蔽的磷脂分子便會(huì)暴露于免疫系統(tǒng),致使機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗磷脂抗體,機(jī)體在受到抗磷脂抗體的“攻擊”時(shí)會(huì)產(chǎn)生一系列病理改變,進(jìn)而導(dǎo)致疾病的發(fā)生,會(huì)加重血栓前狀態(tài)。WBC、NC、LY、CRP都是機(jī)體炎癥反應(yīng)即免疫防御重要組成部分[16]。另外子癇前期患者往往存在血小板減少、凝血功能異常等情況,從而導(dǎo)致血液高凝容易發(fā)生血栓事件[17]。本研究結(jié)果顯示,子癇前期重度組患者的WBC、NC、LY、CRP、TT、FIB、D-D水平均較子癇前期非重度組及正常對(duì)照組高,而PLT、PT、APTT低于其他兩組。這與已有相關(guān)研究結(jié)果一致[18-20]。本研究中雖然子癇前期組有些指標(biāo)水平與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但是并沒(méi)有超過(guò)正常檢驗(yàn)范圍,例如WBC、LY、PLT、TT,這可能是因?yàn)槿焉飲D女體內(nèi)原本就存在著非感染性炎癥反應(yīng),整體數(shù)據(jù)偏態(tài)分布所致,但結(jié)合結(jié)果來(lái)看,子癇前期會(huì)加重孕婦體內(nèi)炎癥反應(yīng)和凝血功能指標(biāo)的異常變化,且與疾病嚴(yán)重程度有關(guān)。本研究將aD1和aANXA5效價(jià)與炎癥和凝血相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示,子癇前期患者血清aANXA5效價(jià)與WBC、NC、LY、CRP、TT、FIB、D-D呈正相關(guān),與PLT、PT、APTT呈負(fù)相關(guān)。提示aANXA5在血清中的高表達(dá)可能加重全身炎癥反應(yīng)及血栓高凝狀態(tài),這可能是因?yàn)閍ANXA5破壞抗凝血?jiǎng)┢琳?同時(shí)促進(jìn)母體發(fā)生免疫炎癥反應(yīng)及加重血栓前狀態(tài),從而加速子癇前期病情的進(jìn)展?；貧w分析結(jié)果也顯示,aANXA5是影響子癇前期重度病情的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。ROC曲線分析結(jié)果顯示Logistic回歸模型預(yù)測(cè)子癇前期重度的曲線下面積為0.919,提示該回歸模型對(duì)預(yù)測(cè)子癇前期重度的發(fā)生具有較高價(jià)值,但Logistic回歸模型對(duì)子癇前期重度預(yù)測(cè)有一定的局限性和漏診率,所得結(jié)果仍需后期更多數(shù)據(jù)驗(yàn)證。3組孕婦血清中aD1效價(jià)沒(méi)有可比性,但進(jìn)行相關(guān)性分析結(jié)果顯示子癇前期患者血清aD1效價(jià)與D-D呈正相關(guān),與APTT、TT 呈負(fù)相關(guān)。雖然DE LAAT等[21]的多中心研究發(fā)現(xiàn)aD1與產(chǎn)科并發(fā)癥顯著相關(guān),尤其是在妊娠10周后。而文獻(xiàn)[22-23]研究顯示,aD1是血栓事件和病理妊娠顯著的危險(xiǎn)因素,特別是妊娠晚期。但本研究顯示,aD1與子癇前期沒(méi)有相關(guān)聯(lián)系,但是aD1的高表達(dá)使APTT、TT縮短,D-D升高,加速了血栓形成。這也與ZHANG等[24]研究結(jié)果一致,即aD1與血栓形成有一定的相關(guān)性,但與病理妊娠無(wú)關(guān)。在aD1與產(chǎn)科合并癥的研究中仍存在較多爭(zhēng)議,結(jié)合既往相關(guān)研究不排除地區(qū)地域及種族所造成的這種結(jié)果差異。同時(shí)這也可能與各研究納入標(biāo)準(zhǔn)、檢測(cè)時(shí)機(jī)不完全一致有關(guān)。

綜上所述,子癇前期組孕婦血清中aANXA5水平明顯高于正常對(duì)照組,是影響子癇前期重度病情的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,同時(shí)在臨床上加強(qiáng)炎癥和凝血指標(biāo)的檢測(cè),對(duì)評(píng)估子癇前期病情有一定的幫助。但目前aD1與病理妊娠的相關(guān)性尚無(wú)定論,其在臨床上的應(yīng)用價(jià)值亟需更多的臨床證據(jù)及進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究來(lái)證實(shí)。