加味星蔞承氣顆粒制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

任桂林 蒲清榮 趙劍 黃銳 羅群 唐定洪 李能源 楊思進(jìn)

摘要：目的 研究加味星蔞承氣處方的制備工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為研制成顆粒劑提供基礎(chǔ)。

方法 采用正交實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行水提工藝研究，以出膏率及辛弗林的含量為指標(biāo)，優(yōu)選出最佳的水提工藝。采用薄層鑒別及高效液相色譜法對(duì)加味星蔞承氣顆粒進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

結(jié)果 加味星蔞承氣處方最佳的提取工藝為：十二倍量的水，浸泡0.5 h，煎煮0.5 h，煎煮3次。在此條件下，出膏率為（21.79±0.94）%，辛弗林含量為（2.0097±0.09）mg/g。該水提工藝條件穩(wěn)定可行，干膏率及辛弗林含量較高。加味星蔞承氣顆粒以羌活中紫花前胡苷，大黃中大黃酸、大黃素甲醚，芒硝為鑒別指標(biāo)，以麩炒枳實(shí)中辛弗林為含量指標(biāo)，建立了加味星蔞承氣顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

結(jié)論 本文為加味星蔞承氣顆粒備案為醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑提供了藥學(xué)基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：加味星蔞承氣顆粒；制備工藝；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；辛弗林；正交實(shí)驗(yàn)

中圖分類號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1007-2349（2023）07-0001-03

痰熱腑實(shí)證是中風(fēng)病急性期最常見的證候，化痰通腑法是中風(fēng)病急性期基本治療大法［1］。星蔞承氣湯是化痰通腑的代表方劑［2］。加味星蔞承氣湯是在星蔞承氣湯的基礎(chǔ)上加郁金、石菖蒲、膽南星、雞血藤、麩炒枳實(shí)、姜厚樸、地龍、甘草組成，具有熄風(fēng)清熱，通腑化濁，開玄啟閉的功效，適用于中風(fēng)病急性期風(fēng)火痰瘀所致的玄府郁閉證，癥見神識(shí)昏朦、口舌歪斜、偏癱、肢麻、大便秘結(jié)或不通等。為方便臨床使用，提高治療腦梗死急性期治療水平，本文采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選加味星蔞承氣處方最佳的制備工藝，并研制成顆粒劑，同時(shí)對(duì)顆粒劑進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，為醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑的申報(bào)提供藥學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 紫花前胡苷（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111821-201604）；辛弗林（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110727-201809）；大黃酸（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110757-201607）；大黃素甲醚（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110758-201817）；加味星蔞承氣顆粒（西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院制劑室，批號(hào)：20201128，20201129，20201130）

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 A-SERIES電子天平（常州市幸運(yùn)電子設(shè)備有限公司）；AUW120D十萬分之一電子天平（日本島津）；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇金壇市金城國勝實(shí)驗(yàn)儀器廠）；JPCT0328超聲波發(fā)生器（武漢嘉鵬電子有限公司）；GOODLOOK-1000型薄層成像系統(tǒng)（上?？普苌萍加邢薰荆籐C-20AT高效液相色譜儀（日本島津）

1.3 辛弗林含量測(cè)定［3］ 色譜條件 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-磷酸二氫鉀溶液（取磷酸二氫鉀0.6 g，十二烷基磺酸鈉1.0 g，冰醋酸1 mL，加水溶解并稀釋至1000 mL）（50：50）為流動(dòng)相；流速為1 mL·min-1，檢測(cè)波長為275nm，柱溫為40℃，理論塔板數(shù)按辛弗林計(jì)應(yīng)不低于4000。

對(duì)照品溶液的制備 取辛弗林對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含辛弗林0.5 mg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取干浸膏粉末3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1.5 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，通過聚酰胺柱（60～90目，2.5 g，內(nèi)徑為1.5 cm，干法裝柱）用水20 mL洗脫，收集洗脫液，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

1.4 制備工藝研究 按處方準(zhǔn)確稱取加味星蔞承氣飲片，選擇加水量、浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為因素，選用L9（34）因素水平表安排正交試驗(yàn)，進(jìn)行水提，合并提取液，濃縮，烘干，進(jìn)行干膏率的測(cè)定及含量測(cè)定，優(yōu)選最優(yōu)的水提工藝［4-5］。

1.5 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 對(duì)加味星蔞承氣顆粒進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，包括鑒別和含量測(cè)定。以羌活中紫花前胡苷、大黃中的大黃酸、大黃素甲醚和芒硝作為鑒別，以枳實(shí)中的辛弗林作為含量測(cè)定指標(biāo)。

2 結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察［6］

2.1.1 線性關(guān)系的考察 取辛弗林對(duì)照品8.47 mg置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得濃度為0.3371 mg/mL的對(duì)照品溶液，作為對(duì)照品貯備液，備用。分別精密量取對(duì)照品貯備液0.25，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0 mL，分別置10 mL的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別制成濃度為0.008 43，0.016 86，0.033 71，0.067 42，0.134 84，0.269 68 mg/mL的對(duì)照品溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液各10 μL，按照上述色譜條件測(cè)定。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)（Y），辛弗林濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到辛弗林的回歸方程為y=5E+06x-876.02，R2=0.999 8（n=6），在0.008 43 mg/mL～0.269 68 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.1.2 精密度試驗(yàn) 取濃度為0.033 371 mg/mL的辛弗林對(duì)照品連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，其峰面積平均值為148 364.3，RSD值為0.93%，表明儀器精密度良好。

2.1.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取加味星蔞承氣浸膏粉，按供試品制備方法制備，平行制備6份樣品，測(cè)定，辛弗林平均含量為1.66 mg/g，RSD%為1.32%，表明分析方法重復(fù)性良好。

2.1.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在0，2，4，8，12，24 h進(jìn)樣分析。記錄峰面積，結(jié)果辛弗林峰面積均值為206 886.5，RSD%為0.69%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.5 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取辛弗林對(duì)照品26.21 mg，加甲醇定容至25 mL，其濃度為1.0432 mg/mL，稱取同一份供試品1.5 g，精密稱定。每3份為一組，每組分別加入辛弗林對(duì)照品溶液1.5 mL，2.6 mL，3.9 mL。按照供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣，測(cè)定。

2.1.6 專屬性試驗(yàn) 取缺枳實(shí)的處方量飲片，按“1.3辛弗林含量測(cè)定”中供試品制備方法制備陰性樣品溶液，對(duì)比陰性樣品、對(duì)照品和供試品的高效液相色譜圖。結(jié)果表明加味星蔞承氣顆粒其他組分對(duì)辛弗林的測(cè)定無干擾，本方法專屬性強(qiáng)。

2.2 制備工藝研究

2.2.1 水提正交實(shí)驗(yàn)研究 取水提正交實(shí)驗(yàn)干浸膏，按照辛弗林含量測(cè)定的方法制備樣品，測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算含量。以辛弗林的含量及干膏率為指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)分，綜合評(píng)分值=［（辛弗林含量/辛弗林含量最大值）×0.6+干膏率/干膏率最大值×0.4］×100［7-8］。正交試驗(yàn)結(jié)果見表3、表4。

由直觀分析可見，影響提取效果的因素順序?yàn)椋禾崛〈螖?shù)C>加水量A>煎煮時(shí)間B>浸泡時(shí)間D，以浸泡時(shí)間D作為誤差項(xiàng)，進(jìn)行方差分析。方差分析結(jié)果表明，提取次數(shù)和加水量對(duì)結(jié)果有顯著性影響（P<0.05），煎煮時(shí)間對(duì)結(jié)果無顯著性影響，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。因此，水提的最佳提取工藝中，最佳的因素組合為A3B1C3D3，考慮到生產(chǎn)實(shí)際，由于浸泡時(shí)間對(duì)結(jié)果影響很小，故最佳的水提工藝定為：十二倍量的水，浸泡0.5 h，煎煮0.5 h，煎煮3次。

2.2.2 水提驗(yàn)證性試驗(yàn) 由于水提工藝的最佳方案沒有在正交試驗(yàn)因素表內(nèi)，因此對(duì)最佳水提工藝進(jìn)行了3次驗(yàn)證。結(jié)果見表5。

2.3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

2.3.1 羌活TLC鑒別［9-10］ 取加味星蔞承氣顆粒??? 5 g，加甲醇50 mL，超聲處理20 min，靜置，過濾，濾液濃縮至2 mL，作為加味星蔞承氣顆粒供試品溶液。另取紫花前胡苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方（除羌活外）與制法，制成陰性樣品，其余處理同供試品溶液，作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法（四部通則0502）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一3%醋酸鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（8∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，且陰性樣品無干擾。同時(shí)在三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶1∶5∶0.5）驗(yàn)證系統(tǒng)一和三氯甲烷-甲醇（9∶5）驗(yàn)證系統(tǒng)二為展開劑的條件下，樣品中分離情況均良好，缺羌活陰性樣品無干擾。見圖3。

2.3.2 大黃TLC鑒別［11-14］ 取加味星蔞承氣顆粒5 g，加甲醇50 mL，浸泡1 h，濾過，蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，再加鹽酸1 mL，加熱回流30 min，立即冷卻，用乙醚分2次振搖提取，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄? mL使溶解，作為加味星蔞承氣顆粒供試品溶液。另取大黃酸和大黃素甲醚對(duì)照品，分別加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按處方（除大黃外）與制法，制成陰性樣品，其余處理同供試品溶液，作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光主斑點(diǎn)，陰性無干擾。同時(shí)在正己烷-乙酸乙酯-甲酸（30∶10∶0.5）驗(yàn)證系統(tǒng)一和環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸（12∶5∶0.1）驗(yàn)證系統(tǒng)二為展開劑的條件下，樣品中分離情況均良好，缺大黃陰性樣品無干擾。見圖4。

2.3.3 芒硝鑒別 芒硝中含有Na2SO4，取加味星蔞承氣顆粒1 g，加10 mL水溶解后，加鹽酸1 mL，攪拌，加入氯化鋇試液5 mL，作為加味星蔞承氣顆粒供試品溶液。另取芒硝0.2 g，加10 mL水溶解后，加鹽酸1 mL，攪拌，加入氯化鋇試液5 mL，作為芒硝對(duì)照溶液。芒硝對(duì)照溶液和加味星蔞承氣顆粒供試品均生成白色沉淀。

2.3.4 含量測(cè)定 加味星蔞承氣顆粒的含量測(cè)定色譜條件及供試品制備方法同“1.3辛弗林含量測(cè)定”，根據(jù)加味星蔞承氣顆粒（批號(hào)：20201128，20201129，20201130）三批中試結(jié)果，規(guī)定本品每1 g顆粒含麩炒枳實(shí)以辛弗林（C9H13NO2）計(jì)，不得少于0.94 mg。

3 討論

加味星蔞承氣顆粒供試品色譜中，在與紫花前胡苷相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，且陰性無干擾，可作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別項(xiàng)。加味星蔞承氣顆粒供試品色譜中，在與大黃酸、大黃素甲醚相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的橙黃色熒光斑點(diǎn)，且陰性無干擾，可作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別項(xiàng)。加味星蔞承氣顆粒供試品與芒硝顯相同的白色沉淀，可作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別項(xiàng)。

同時(shí)，本文對(duì)其他部分藥材也進(jìn)行了鑒定試驗(yàn)，加味星蔞承氣顆粒供試品色譜中，在與郁金、姜厚樸、地龍對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，無相應(yīng)的斑點(diǎn)，故未選擇郁金、姜厚樸、地龍作為鑒別。加味星蔞承氣顆粒供試品色譜中，在與瓜蔞皮對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，斑點(diǎn)顏色較淺，加大取樣量和點(diǎn)樣量后，斑點(diǎn)顏色仍較淺，故不作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的鑒別指標(biāo)項(xiàng)。加味星蔞承氣顆粒供試品色譜中，在與雞血藤對(duì)照藥材相應(yīng)的色譜位置上，紅色主斑點(diǎn)無相應(yīng)斑點(diǎn)，故未選擇雞血藤作為鑒別項(xiàng)。加味星蔞承氣顆粒和缺膽南星陰性樣品在兩液相交處均能產(chǎn)生環(huán)，故膽南星不作為鑒別項(xiàng)。加味星蔞承氣顆粒中含量測(cè)定以辛弗林為指標(biāo)，且缺麩炒枳實(shí)陰性樣品無干擾，可作為含量測(cè)定指標(biāo)。

本文按照四川省醫(yī)療機(jī)構(gòu)機(jī)制備案管理的相關(guān)

要求，本文主要完成了工藝研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，為醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑的申報(bào)提供基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2022-08-18）