鐵皮石斛一步成苗影響因子試驗(yàn)研究

李得萍 陳一鳴 何遠(yuǎn)秦 董洪雨 易元惠 劉艷軍

摘要：為優(yōu)化鐵皮石斛一步成苗培養(yǎng)條件，文章通過(guò)正交試驗(yàn)研究培養(yǎng)容器、培養(yǎng)基用量、接種材料株高以及接種密度4個(gè)因素對(duì)鐵皮石斛組培苗生長(zhǎng)的影響，篩選出最適宜鐵皮石斛組培苗一步成苗的培養(yǎng)組合；研究鐵皮石斛組培苗一步成苗過(guò)程中添加激素和活性炭對(duì)植株生長(zhǎng)的影響，篩選確定鐵皮石斛組培苗一步成苗的最優(yōu)培養(yǎng)組合。試驗(yàn)結(jié)果表明，培養(yǎng)容器是影響鐵皮石斛組培苗一步成苗生長(zhǎng)的主要影響因素，培養(yǎng)基用量、接種材料株高以及接種密度3個(gè)因素分別對(duì)鐵皮石斛組培苗的不同生長(zhǎng)指標(biāo)產(chǎn)生影響；基本培養(yǎng)基中添加激素對(duì)鐵皮石斛組培苗一步成苗的效果較好，優(yōu)于對(duì)照（CK）基本培養(yǎng)基；一步成苗培養(yǎng)基中添加活性炭的效果低于對(duì)照（CK）一步成苗培養(yǎng)基。試驗(yàn)確定鐵皮石斛組培苗一步成苗的最優(yōu)培養(yǎng)組合為：培養(yǎng)容器240 mL、培養(yǎng)基用量40 mL、接種材料株高

1.2 cm、接種密度4芽·瓶-1，培養(yǎng)120 d后鐵皮石斛組培苗的分蘗量為6.55個(gè)，符合出苗標(biāo)準(zhǔn)的合格率為93.67%。

關(guān)鍵詞：鐵皮石斛；正交試驗(yàn)；接種密度；活性炭：一步成苗

中圖分類號(hào)：R284

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

鐵皮石斛為蘭科石斛屬多年生附生草本植物，是十大仙草之首，因其具有極高的藥用價(jià)值而被開發(fā)利用[1]。石斛屬種子細(xì)小入微，沒(méi)有胚乳，在自然條件下很難自然萌發(fā)增殖，主要繁殖方式為分株、扦插等[2]，繁殖速度較慢，培養(yǎng)周期長(zhǎng)，產(chǎn)量不高。因此，為加快鐵皮石斛的繁殖速度以及保護(hù)瀕危物種，通常采用組織培養(yǎng)來(lái)解決這一難題[3-4]。近年來(lái)，關(guān)于鐵皮石斛的組培快繁研究較多，也建立了相應(yīng)的快繁體系[5-6]。由于人工成本越來(lái)越高，相應(yīng)的組培苗成本也逐漸提高，從而導(dǎo)致石斛生產(chǎn)成本上漲，種植效益降低，降低組培苗的生產(chǎn)成本成為發(fā)展石斛組培快繁的有效途徑。本試驗(yàn)采用鐵皮石斛的組培苗為試驗(yàn)材料，通過(guò)對(duì)影響鐵皮石斛一步成苗的培養(yǎng)組合進(jìn)行篩選優(yōu)化，建立鐵皮石斛一步成苗組培快繁體系，為工廠化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)、低成本和遺傳穩(wěn)定的石斛蘭種苗、為石斛快繁技術(shù)的發(fā)展提供依據(jù)。

1? 材料和方法

1.1? ?試驗(yàn)材料及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

鐵皮石斛組培苗：由天津農(nóng)學(xué)院東校區(qū)組培室提供。

供試試劑：活性炭（AC）、生長(zhǎng)素NAA（1-萘乙酸）、MS培養(yǎng)基、水解乳蛋白（LH）等試劑均由天津農(nóng)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供。

采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)研究培養(yǎng)容器類型、培養(yǎng)基用量、接種材料株高以及接種密度對(duì)鐵皮石斛組培苗一步成苗的影響，篩選出適宜鐵皮石斛一步成苗的培養(yǎng)組合。試驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)表1，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)組合見(jiàn)表2。

上述培養(yǎng)基均為1/2MS+0.1 g·L-1 LH（水解乳蛋白）+0.2 mg·L-1 NAA+25 g·L-1蔗糖。將生長(zhǎng)一致的鐵皮石斛組培苗接種到培養(yǎng)基中，每個(gè)處理接種15瓶，重復(fù)3次。培養(yǎng)120 d 后，調(diào)查鐵皮石斛株高、莖粗、生根數(shù)、葉片數(shù)等生長(zhǎng)情況。

1.2 基本培養(yǎng)基添加激素對(duì)鐵皮石斛組培苗一步

成苗的影響

試驗(yàn)設(shè)2個(gè)培養(yǎng)基處理，即基本培養(yǎng)基添加激素（1/2MS+0.1 g·L-1LH +0.2 mg·L-1 NAA+25 g·L-1蔗糖）和基本培養(yǎng)基（1/2MS+0.1 g·L-1 LH+25 g·L-1蔗糖）。將生長(zhǎng)一致、株高0.8 cm的鐵皮石斛組培苗分別接種到上述2個(gè)培養(yǎng)基中，120 d后調(diào)查鐵皮石斛株高、莖粗、葉片數(shù)、生根量、分蘗量等生長(zhǎng)情況。

1.3 基本培養(yǎng)基添加活性炭對(duì)鐵皮石斛組培苗

一步成苗的影響

1.3.1 基本培養(yǎng)基添加不同數(shù)量活性炭對(duì)鐵皮石斛組培苗生長(zhǎng)的影響 試驗(yàn)設(shè)6個(gè)培養(yǎng)基處理，即以1/2MS基本培養(yǎng)基為對(duì)照（CK），其他5個(gè)處理為在1/2MS基本培養(yǎng)基中分別添加0.1、0.25、0.5、0.75、1 g·L-1的活性炭。將生長(zhǎng)一致、株高0.8 cm的鐵皮石斛組培苗分別接種到上述6個(gè)培養(yǎng)基中，45 d后調(diào)查鐵皮石斛株高、莖粗、生根量、分蘗量等生長(zhǎng)情況。

1.3.2 一步成苗培養(yǎng)基添加活性炭對(duì)鐵皮石斛組培苗生長(zhǎng)的影響 試驗(yàn)設(shè)2個(gè)培養(yǎng)基處理，即以一步成苗培養(yǎng)基（1/2MS+0.1 g·L-1 LH+0.1 mg·L-1 NAA）為對(duì)照（CK），另一處理為根據(jù)1.3.1的試驗(yàn)結(jié)果，將效果較好的活性炭（濃度為0.25 g·L-1）添加到一步成苗培養(yǎng)基中。將生長(zhǎng)一致、株高0.8 cm的鐵皮石斛組培苗接種到上述2個(gè)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)120 d后調(diào)查鐵皮石斛莖粗、株高、生根量、分蘗量等生長(zhǎng)情況。

1.4? ?鐵皮石斛組培苗一步成苗優(yōu)化試驗(yàn)

根據(jù)正交試驗(yàn)，將結(jié)果較好的處理組合2（A1B2C2D3）、處理組合3（A1B3C3D2）和處理組合6（A2B3C1D3）以及最優(yōu)處理組合（A1B2C1D2）進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，培養(yǎng)120 d后調(diào)查符合鐵皮石斛出苗標(biāo)準(zhǔn)的合格率、植株分蘗量等生長(zhǎng)情況。

根據(jù)浙江省發(fā)布的鐵皮石斛組培苗出苗標(biāo)準(zhǔn)，用于栽培的鐵皮石斛苗應(yīng)為非污染、無(wú)爛莖、無(wú)爛根、無(wú)黃葉；葉片4片以上，正常展開，葉色呈嫩綠或翠綠，根條數(shù)2～3條，株高≥2.5 cm，莖粗≥0.2 cm；合格苗應(yīng)在總量的80%以上。

1.5? ?培養(yǎng)條件

試驗(yàn)于2022年3—7月在天津農(nóng)學(xué)院組培室進(jìn)行，試驗(yàn)基本培養(yǎng)基為1/2MS，蔗糖含量25 g·L-1、瓊脂含量6.6 g·L-1，pH 5.8～6.0，培養(yǎng)溫度28 ℃～30 ℃，光照強(qiáng)度2 000～2 500 lx，連續(xù)照明培養(yǎng)。

1.6? ?數(shù)據(jù)處理與分析

用Excel 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，用SPSS 20.0進(jìn)行差異顯著性比較、極差處理和方差分析。

分蘗量 = 總植株數(shù)

接種植株數(shù)

出苗合格率（%） = 符合出苗標(biāo)準(zhǔn)的數(shù)量 ×100

總植株數(shù)

2? 結(jié)果與分析

2.1? ?正交試驗(yàn)對(duì)鐵皮石斛組培苗的影響

2.1.1 正交試驗(yàn)對(duì)鐵皮石斛一步成苗的影響 由表3和圖1可見(jiàn)，處理組合3（A1B3C3D2），即培養(yǎng)容器為240 mL培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)基用量60 mL、接種材料株高1.2 cm、接種密度4個(gè)芽·瓶-1對(duì)鐵皮石斛組培苗的培養(yǎng)效果較好，植株平均莖粗2.95 mm、株高2.98 cm、生根量3.98條、葉片數(shù)5片，植株長(zhǎng)勢(shì)良好，葉片大且顏色深綠，分蘗多。

處理組合6（A2B3C1D3），即培養(yǎng)容器為350 mL培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)基用量60 mL、接種材料株高0.5 cm、接種密度6個(gè)芽·瓶-1，植株平均莖粗2.83 mm、株高2.91 cm、生根量4.13條、葉片數(shù)4.68片，植株長(zhǎng)勢(shì)好，葉大莖粗，分蘗多。處理組合7（A3B1C3D3）培養(yǎng)效果較差，即培養(yǎng)容器為650 mL培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)基用量20 mL、接種材料株高1.2 cm、接種密度6個(gè)芽·瓶-1的鐵皮石斛各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)較差，植株長(zhǎng)勢(shì)老弱，分蘗少。

2.1.2 正交試驗(yàn)對(duì)鐵皮石斛組培苗植株形狀的影響 因素A即培養(yǎng)容器類型對(duì)鐵皮石斛組培苗莖粗、生根量、葉片數(shù)影響較大，R值均為最高；因素B即培養(yǎng)基用量對(duì)鐵皮石斛組培苗生根量和葉片數(shù)的影響較小，R值均最??；因素C即接種材料大小對(duì)鐵皮石斛組培苗株高的影響較大，R值最高；D因素即接種密度對(duì)鐵皮石斛組培苗莖粗和株高的影響較小，R值最?。ū?）。由此可見(jiàn)，影響鐵皮石斛組培苗莖粗和株高的因素排序?yàn)镃>A>B>D，影響鐵皮石斛組培苗生根量和葉片數(shù)的因素排序?yàn)锳>C>D>B。整體而言，A因素即培養(yǎng)基容器類型對(duì)鐵皮石斛組培苗莖粗、株高、生根量、葉片數(shù)的影響最大。

通過(guò)比較各因素的均值得知（表4），鐵皮石斛組培苗莖粗在A因素下以k1值最大，即A因素的優(yōu)水平為培養(yǎng)容器240 mL；同理，B因素的優(yōu)水平為培養(yǎng)基用量40 mL，C因素的優(yōu)水平為接種材料株高0.5 cm，D因素的優(yōu)水平為4個(gè)芽·瓶-1，即鐵皮石斛正交試驗(yàn)的最優(yōu)培養(yǎng)組合為A1B2C1D2。同理，可以推斷出鐵皮石斛組培苗株高的最優(yōu)培養(yǎng)組合為A1B3C2D2，生根量的最優(yōu)培養(yǎng)組合為A1B2C1D2，葉片數(shù)的最優(yōu)培養(yǎng)組合為A1B2C3D3。綜合考慮鐵皮石斛的植株性狀，應(yīng)以處理組合A1B2C1D2效果最好，但由于正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)是一種均一性設(shè)計(jì)，不可能覆蓋所有的處理組合，因此最優(yōu)組合A1B2C1D2在試驗(yàn)中沒(méi)有顯現(xiàn)出來(lái)。

2.1.3 正交試驗(yàn)的方差分析結(jié)果 由表5可知，A（容器類型）、B（培養(yǎng)基用量）、D（接種密度）對(duì)鐵皮石斛組培苗莖粗、株高、生根量、葉片數(shù)的影響較大，均達(dá)到極顯著水平；C（接種材料株高）對(duì)鐵皮石斛組培苗莖粗、生根量、葉片數(shù)的作用也達(dá)到極顯著水平，但對(duì)鐵皮石斛組培苗的株高影響較小，差異不顯著。通過(guò)各項(xiàng)指標(biāo)的F值比較得出，在株高、莖粗、葉片數(shù)、生根量這4個(gè)鐵皮石斛植株形狀指標(biāo)中，A因素作用最大，其次為C因素，主要影響鐵皮石斛的莖粗和葉片數(shù)，D因素主要影響鐵皮石斛的株高和生根量，B因素對(duì)鐵皮石斛植株各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)影響較小。

綜上所述，鐵皮石斛一步成苗最優(yōu)的培養(yǎng)組合為A1B2C1D2，即培養(yǎng)容器240 mL+培養(yǎng)基用量40 mL+接種材料株高0.5 cm+接種密度4個(gè)芽·瓶-1為鐵皮石斛一步成苗的最優(yōu)培養(yǎng)組合。

2.2? ?基本培養(yǎng)基添加激素對(duì)鐵皮石斛組培苗一步

成苗的影響

基本培養(yǎng)基是否添加激素NAA對(duì)鐵皮石斛的株高、葉片數(shù)、生根量無(wú)顯著影響，但對(duì)鐵皮石斛的莖粗影響極顯著，對(duì)鐵皮石斛的分蘗量影響達(dá)顯著水平（圖2和圖3、表6）。圖2中對(duì)照

（CK）為一步成苗基本培養(yǎng)基，V為一步成苗基本培養(yǎng)基添加激素NAA?；九囵B(yǎng)基添加NAA處理的鐵皮石斛植株各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)均高于對(duì)照（CK），培養(yǎng)120 d后植株株高達(dá)到2.38 cm、莖粗2.5 mm、生根量4.34條、分蘗量5.12個(gè)，植株長(zhǎng)勢(shì)好，葉片寬大，根較長(zhǎng)。

2.3? ?基本培養(yǎng)基添加活性炭對(duì)鐵皮石斛組培苗一

步成苗的影響

2.3.1 添加不同數(shù)量活性炭對(duì)鐵皮石斛組培苗的影響 由圖4可見(jiàn)，當(dāng)基本培養(yǎng)基添加活性炭濃度為0.25 g·L-1時(shí)，鐵皮石斛的平均株高和莖粗與添加0.5 g·L-1活性炭時(shí)差異不顯著，但均顯著高于其他活性炭濃度處理和對(duì)照（CK）處理。鐵皮石斛組培苗的生根量在基本培養(yǎng)基添加0.25 g·L-1活性炭時(shí)，顯著高于其他處理的生根量，但植株的分蘗量在此濃度下與對(duì)照（CK）差異不顯著，其他活性炭濃度處理的鐵皮石斛組培苗的分蘗量均與對(duì)照（CK）差異不顯著。鐵皮石斛組培苗的生根量在添加0.25 g·L-1活性炭時(shí)，顯著高于對(duì)照（CK）及其他濃度活性炭處理，且當(dāng)添加的活性炭濃度超過(guò)0.5 mg·L-1時(shí)，鐵皮石斛組培苗基本沒(méi)有生根量，因此可以得出，添加過(guò)高的活性炭濃度可能對(duì)鐵皮石斛組培苗的生根起到抑制作用。綜上所述，基本培養(yǎng)基中添加0.25 g·L-1活性炭對(duì)鐵皮石斛組培苗的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，培養(yǎng)45 d后鐵皮石斛組培苗平均株高1.29 cm、莖粗2.62 mm、分蘗量2.5個(gè)、生根量2.75條，植株長(zhǎng)勢(shì)好，葉片大且顏色深綠。

2.3.2 一步成苗培養(yǎng)基添加活性炭對(duì)鐵皮石斛組培苗的影響 一步成苗培養(yǎng)基對(duì)照（CK）和一步成苗培養(yǎng)基添加0.25 g·L-1活性炭（V）對(duì)鐵皮石斛組培苗的株高、莖粗沒(méi)有顯著影響，但植株的生根量和分蘗量對(duì)照（CK）處理明顯優(yōu)于添加活性炭的處理（圖5和表7）。在一步成苗培養(yǎng)基中添加活性炭，培養(yǎng)120 d后鐵皮石斛組培苗平均株高2.4 cm、莖粗2.48 mm、生根量1.96條、分蘗量3.21個(gè)，長(zhǎng)勢(shì)很弱，基部葉片腐爛，葉片淡綠，葉尖變白。表明一步成苗培養(yǎng)基添加活性炭不利于鐵皮石斛組培苗生長(zhǎng)，抑制植株生根和分蘗。

從植株長(zhǎng)勢(shì)看，一步成苗培養(yǎng)基中添加活性炭后鐵皮石斛組培苗的長(zhǎng)勢(shì)極弱（圖6），表明一步成苗培養(yǎng)基添加活性炭對(duì)鐵皮石斛組培苗生根和分蘗產(chǎn)生了抑制作用。

2.4? ?鐵皮石斛組培苗一步成苗優(yōu)化試驗(yàn)

由表8可見(jiàn)，處理組合3（A1B3C3D2）與處理組合A1B2C1D2的鐵皮石斛組培苗分蘗量以及符合出苗標(biāo)準(zhǔn)的合格率均無(wú)顯著差異，分蘗量顯著高于處理組合6（A2B3C1D3），出苗合格率顯著高于處理組合2（A1B2C2D3）。4個(gè)處理組合中，處理組合2（A1B2C2D3）顯著低于其他處理，植株長(zhǎng)勢(shì)雖然較好，但基部有大量的叢生芽，符合出苗標(biāo)準(zhǔn)的合格率僅為56.16%；處理組合6（A2B3C1D3）植株長(zhǎng)勢(shì)較好，葉片較大，莖粗較粗，但植株的分蘗量顯著小于處理組合3（A1B2C3D2）和最優(yōu)處理組合A1B2C1D2。

試驗(yàn)表明，處理組合3（A1B2C3D2）和最優(yōu)處理組合A1B2C1D2均適合鐵皮石斛一步成苗的培養(yǎng)條件，但處理組合3（A1B3C3D2）效果更突出，即培養(yǎng)容器為240 mL培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)基用量60 mL、接種材料株高1.2 cm、接種密度4個(gè)芽·瓶-1，更適合鐵皮石斛一步成苗生長(zhǎng)，培養(yǎng)120 d后植株分蘗量為6.55個(gè)，達(dá)到出苗標(biāo)準(zhǔn)的合格率為93.67%（表8）。

3? 結(jié)論與討論

關(guān)于鐵皮石斛組培苗培養(yǎng)一步成苗的研究頗多，但大多數(shù)研究都與培養(yǎng)基的研究以及外植體的選擇有關(guān)[7-8]。本試驗(yàn)選用鐵皮石斛種子萌發(fā)出的微型芽（組培苗）為試驗(yàn)材料，通過(guò)培養(yǎng)容器、培養(yǎng)基用量、接種材料株高以及接種密度4個(gè)因素3個(gè)水平的正交試驗(yàn)，篩選出最佳鐵皮石斛組培苗的培養(yǎng)組合，結(jié)果顯示培養(yǎng)容器是影響鐵皮石斛組培苗生長(zhǎng)的主要因素，這一結(jié)論符合植物生長(zhǎng)規(guī)律。培養(yǎng)容器空間大，植物呼吸釋放的CO2較多；培養(yǎng)容器較小，吸入外界O2少，氣體交換量少，而植株吸收CO2過(guò)多將導(dǎo)致植株生長(zhǎng)不良，因此選用的培養(yǎng)容器為240 mL培養(yǎng)瓶效果較好。培養(yǎng)基用量影響鐵皮石斛組培苗的生長(zhǎng)，培養(yǎng)基用量不足會(huì)導(dǎo)致鐵皮石斛組培苗營(yíng)養(yǎng)不良，培養(yǎng)基用量過(guò)多將導(dǎo)致培養(yǎng)濕度過(guò)大，不利于鐵皮石斛的生長(zhǎng)，也造成資源浪費(fèi)。培養(yǎng)基用量與培養(yǎng)容器大小有關(guān)，本試驗(yàn)顯示培養(yǎng)容器240 mL適合培養(yǎng)基用量40 mL，培養(yǎng)容器

350 mL適合培養(yǎng)基用量60 mL。試驗(yàn)顯示，接種材料大小對(duì)鐵皮石斛組培苗的生長(zhǎng)沒(méi)有顯著影響，這可能由于鐵皮石斛自身生長(zhǎng)能力較強(qiáng)，一步成苗培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，后期植株停滯生長(zhǎng)。接種密度影響鐵皮石斛組培苗的分蘗能力以及生長(zhǎng)性能，密度過(guò)高，植株吸收的營(yíng)養(yǎng)和O2較少，長(zhǎng)勢(shì)較弱。因鐵皮石斛植株為叢生形態(tài)，密度過(guò)低不利于植株生長(zhǎng)。試驗(yàn)表明，培養(yǎng)容器240 mL適宜的接種密度為4個(gè)芽·瓶-1，培養(yǎng)容器350 mL

適宜的接種密度為6個(gè)芽·瓶-1。

試驗(yàn)表明，鐵皮石斛一步成苗過(guò)程中添加激素的生長(zhǎng)效果優(yōu)于對(duì)照（CK）；基本培養(yǎng)基中添加0.25 g·L-1活性炭對(duì)鐵皮石斛組培苗的生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用，但將同樣濃度的活性炭添加到一步成苗培養(yǎng)基（1/2MS+0.1 g·L-1 LH+0.2 mg·L-1NAA+25 g·L-1蔗糖）中培養(yǎng)120 d后，鐵皮石斛組培苗長(zhǎng)勢(shì)較弱，葉片變白，極少生根，表明一步成苗培養(yǎng)基添加活性炭對(duì)鐵皮石斛組培苗產(chǎn)生抑制，這一結(jié)論與許多學(xué)者研究不一致[9-10]，這可能是由于所選鐵皮石斛組培苗外植體的狀態(tài)不同。本試驗(yàn)所選的鐵皮石斛微型芽體內(nèi)所含的內(nèi)生菌較少，添加活性炭后吸收過(guò)多的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分，導(dǎo)致植株吸收營(yíng)養(yǎng)不足而長(zhǎng)勢(shì)較弱。

本試驗(yàn)得出，鐵皮石斛組培苗一步成苗的優(yōu)化培養(yǎng)條件為培養(yǎng)容器240 mL、培養(yǎng)基用量40 mL、接種材料株高1.2 cm、接種密度4個(gè)芽·瓶-1，需添加激素，不添加活性炭。培養(yǎng)120 d后，鐵皮石斛組培苗分蘗量為6.55個(gè)，符合出苗標(biāo)準(zhǔn)的合格率為93.67%。

參考文獻(xiàn)

[1]王治丹，代云飛，羅尚娟，等．鐵皮石斛化學(xué)成分及藥理作用的研究進(jìn)展[J]．華西藥學(xué)雜志，2022，37（4）：472-476.

[2]蔡時(shí)可，鄭希龍，劉曉津，等．鐵皮石斛生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)[J]．廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011（S1）：115-117.

[3]朱慶豎，陳勇，余花，等．鐵皮石斛組織培養(yǎng)及快繁技術(shù)研究[J]．中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2015，31（31）：19-24.

[4]成丹，聶天驕，李成慧．鐵皮石斛一次成苗技術(shù)初探[J]．現(xiàn)代園藝，2018（9）：16-17.

[5]鄧瑞云，羅煥明，劉曉津，等．鐵皮石斛組培快繁技術(shù)研究[J]．廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，29（6）：608-611.

[6]鄭寬瑜，鄧君浪，趙輝．鐵皮石斛組培快繁技術(shù)體系研究[J]．云南農(nóng)業(yè)科技，2009（S2）：57-59.

[7]梁暉輝，張成才，高真，等．響應(yīng)面法探究鐵皮石斛種子一步成苗[J]．中藥材，2019，42（11）：2473-2479.

[8]陳爾，王華新，陳寶玲，等．正交試驗(yàn)優(yōu)選鐵皮石斛生根培養(yǎng)基[J]．廣西林業(yè)科學(xué)，2019，48（3）：357-360.

[9]才真，劉海學(xué)，王緒．基于正交設(shè)計(jì)的鐵皮石斛組織培養(yǎng)和耐鹽性研究[J]．種子，2018，37（7）：64-67.

[10]李忠玥，徐元江，何焱，等．西藏野生金釵石斛幼苗培養(yǎng)基的優(yōu)化[J]．高原農(nóng)業(yè)，2019，3（2）：203-209.