動物疫病防控樣品采集的方法及注意事項

李艷麗，譚維廣

1.榆樹市動物疫病預(yù)防控制中心，吉林榆樹 130400；2.榆樹市正陽街道綜合服務(wù)中心畜牧獸醫(yī)服務(wù)科，吉林榆樹 130400

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，在畜禽養(yǎng)殖的過程中，為了診斷、預(yù)防和控制動物疫病，常常采取實驗室檢測的方法，而正確的樣品采集是實驗室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和有效性的基礎(chǔ)。因此，采樣人員應(yīng)當(dāng)熟練掌握采樣工作的程序、采樣操作技術(shù)以及采樣時的注意事項。

1 常用的采樣方法

1.1 血液

1.1.1 雞的采血方法：雞的采血分為心臟采血和雞翅靜脈采血。

雞心臟采血時，雛雞采取仰臥保定，采血人員左手抓雞，右手將針平行頸椎從胸腔前口插入，見回血時即可抽拉針芯，血液流入采血針。成年雞心臟采血采取側(cè)臥保定，保定人員抓住雞的兩翅和腿，使雞保持右側(cè)臥的姿勢，采血人員于胸骨脊前端至背部下凹處連線的中點處，手觸心動特別明顯，垂直或稍微前傾下針，刺入2～3 cm，回抽見有回血時即可抽拉針芯使血液進(jìn)入采血針。若無回血，松開采血針，如果采血針隨心臟跳動，表明針扎在了心臟上，需調(diào)節(jié)針頭刺入深度，即可完成采血工作。若采血針不隨心臟跳動，則需調(diào)整入針角度，直到回抽見血。

雞翅靜脈采血時采取雞側(cè)臥保定姿勢，保定人員將雞下側(cè)的翅膀壓于雞的身體下方，兩手固定頭頸和雞腿，術(shù)者于雞翅內(nèi)側(cè)中翅與翅根關(guān)節(jié)處無血管的地方下針，針尖向心端刺入翅靜脈叢，見有血液回流，即可把針芯向外拉，直到血液進(jìn)入采血針。

1.1.2 豬的采血方法：豬采血的方法有耳靜脈采血和前腔靜脈采血。

豬耳靜脈采血時，用鎖口器將豬頭部固定，保定人員一手捏壓豬耳根部靜脈的近心端，另一手拍打耳朵上的靜脈血管，然后用酒精棉球反復(fù)擦拭耳靜脈使其怒張，針頭向心端延耳靜脈血管刺入，見回血緩慢抽拉針芯，也可以用滅菌采血管接血。

豬前腔靜脈采血時可以采取站立保定的姿勢，用鎖口器保定，使豬頭部仰起，暴露腋窩，在右側(cè)腋窩處使針尖向心臟方向刺入，見回血即可抽拉針芯，完成采血工作。豬前腔靜脈采血時還可以采取仰臥保定的姿勢，使豬仰臥，向后方拉直豬的前腿，在胸骨端和耳基部的連線上，胸骨端旁2 cm的凹窩處下針，邊刺入邊回拉針芯，直到有血液進(jìn)入抽血針，即可完成了采血工作。

1.1.3 牛、羊的采血方法：牛、羊一般采取頸靜脈采血，牛還可以采取尾靜脈采血。

牛、羊頸靜脈采血時，保定人員固定牛、羊頭部，使頭稍抬起，頸伸直，在頸部上1/3與中1/3的頸靜脈溝處剪毛消毒，采血人員一手拇指壓近心端頸靜脈使血管怒張，另一只手使針頭呈45°角由下向上方刺入頸靜脈，讓血液延滅菌的采血管壁流入采血管。

牛尾靜脈采血時，保定好牛，把牛尾抬高，在距離尾根10 cm左右中點有一個凹陷，采血針垂直刺入約1 cm左右，在針尖刺到尾骨后稍退出一點，抽拉針芯，見回血，即可完成采血工作。

采集血液時，如果需要的是全血，需要在滅菌試管中加入抗凝劑與血液充分混勻。

1.2 組織

1.2.1 豬扁桃體活體采樣方法：用專用的扁桃體采集器給豬活體采取扁桃體樣品，用開口器打開豬的口腔，采樣勾置于凸起的扁桃體上，要快速的扣動扁桃體采集器的扳機(jī)，取出扁桃體放在滅菌的離心管中。

1.2.2 淋巴結(jié)及內(nèi)臟：在發(fā)生畜禽死亡時，為了查明死亡原因，需要采取病料進(jìn)行實驗室診斷，一般采有病變的臟器和組織，如淋巴結(jié)、肝、脾、腎等送往實驗室進(jìn)行檢測。淋巴結(jié)、內(nèi)臟的病料采取應(yīng)在畜禽死亡后立即進(jìn)行，最晚不超過6 h。根據(jù)不同的疾病，采集相應(yīng)的內(nèi)臟或內(nèi)容物，在無法估計是哪種疾病時，可進(jìn)行全面采集。采集淋巴結(jié)、肺、肝、脾臟器時，應(yīng)采有病變的部位，采1～2 cm3的小方塊，分別置于滅菌的離心管內(nèi)或平皿內(nèi)。若為病理組織切片所用，應(yīng)將典型的病變和其相連接的健康組織一并切取，組織塊的大小邊緣約為2 cm左右，同時避免用金屬容器盛載病料，尤其是病料需要染色時，如馬傳貧、馬腦炎、及焦蟲病，更應(yīng)注意。

1.2.3 腦、脊髓：如采取腦、脊髓做病毒檢查，可將腦、脊髓侵入50%的甘油鹽水中浸泡，或?qū)⒄麄€頭部切下，用油布包裹，裝入木箱或鐵通中送檢。

1.2.4 皮膚：取大約10 cm2×10 cm2的皮膚一塊，置于30%的甘油緩沖液中，或10%的飽和食鹽水中。家畜體表或皮內(nèi)患有疥螨、癢螨時，應(yīng)選擇患病皮膚和健康皮膚交界處，用凸刃小刀，刀刃與皮膚垂直，刮取皮屑，直到皮膚微微出血，此時刮取的皮屑最有檢測價值。

1.2.5 腸：用滅菌的刀片將欲采取病料的腸段切一小口，用無菌棉簽插入腸內(nèi)，蘸取腸內(nèi)容物或腸管黏膜。也可將所欲采取的腸段兩端用滅菌線繩結(jié)扎，然后將兩端切斷，置于滅菌器皿內(nèi)保存。

1.3 牛、羊O-P液

牛、羊在采集O-P液前應(yīng)禁食12 h，可少量飲水，采樣探杯消毒后用與動物體溫一致的溫水侵泡，將探杯送入食道上不10～15 cm處，輕輕抽動探杯2～3次，然后拉出探杯，取出8～10 mL的O-P液，置于含有等量的細(xì)胞培養(yǎng)液的塑料試管內(nèi)。

1.4 拭子

1.4.1 家禽咽喉拭子和泄殖腔拭子：取無菌棉簽，插入雞喉頭或泄殖腔內(nèi)，旋轉(zhuǎn)3圈，放入滅菌的離心管內(nèi)，滅菌離心管內(nèi)要放入含有青鏈霉素pH值7.2的PBS液。

1.4.2 豬鼻腔拭子、咽拭子：用滅菌棉簽沾取豬鼻腔、喉頭的分泌物后，將棉簽置于含有保存液的無菌離心管內(nèi)密封保存，保存液同家禽咽喉拭子保存液相同。

1.4.3 膿汁拭子：若為開口的化膿灶，用無菌棉簽浸蘸膿汁，置于滅菌的離心管中密封保存。

1.5 胃液和瘤胃內(nèi)容物

1.5.1 胃液采集：胃液多用有孔的胃管抽取，將胃管送入胃內(nèi)，外端接在吸引器的負(fù)壓瓶上，加負(fù)壓后，胃液自動流出。

1.5.2 瘤胃內(nèi)容物采集：反芻動物反芻時，食團(tuán)進(jìn)入口腔，采樣人員及時抓住反芻獸的舌頭，另一手探入口腔，即可取得少量的瘤胃內(nèi)容物。

2 樣品采集應(yīng)注意的事項

2.1 采樣前的檢查

凡發(fā)現(xiàn)急性死亡的家畜，包括馬、牛、羊和豬，在未剖檢采樣前應(yīng)判斷是否是炭疽死亡的病畜。炭疽死亡的病畜典型特征是天然孔流煤焦油樣血液，血液凝固不良。剖檢前樣品采集人員可采集病死畜耳尖血做涂片鏡檢，顯微鏡下，炭疽桿菌不能運動，成單或成對存在，少數(shù)3～5個菌體成鏈狀，每個菌體均有明顯的莢膜。在確認(rèn)病死畜不是因炭疽而死亡的方可剖檢采樣。

2.2 采樣取材時間

內(nèi)臟病料的采集，須于患畜死亡后立即采集，最好在2 h之內(nèi)采集，最晚不得超過6 h，特別是在天氣炎熱的季節(jié)，防止死亡時間過長，由腸內(nèi)侵入其它細(xì)菌，尸體易于腐敗，不利于病原菌的檢出。

2.3 應(yīng)用器械的消毒

動物樣品采集，需在無菌的條件下進(jìn)行，避免其它外來菌的侵入，保證實驗室診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，采樣所需器械，如刀、剪、鑷、針等工具一定做好消毒工作，所盛樣品的試管、平皿也應(yīng)消毒，特別是活體采樣時，采樣部位能消毒的也要做好消毒工作，如畜禽活體采血?？傊?，采樣過程應(yīng)做到無菌操作。

采取一種樣品，使用一套器械與容器，不可用其再采其它臟器材料。

2.4 采樣方法的選擇要合理

采樣方法、采樣種類和采樣數(shù)量的選擇應(yīng)根據(jù)采樣的目的、內(nèi)容和要求來確定。不同的疫病，采樣的種類不同，但不管是哪種疫病，采集樣品時盡量采集具有典型性、代表性、尚未進(jìn)行治療和出現(xiàn)典型癥狀的動物，以便保證檢測結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。

2.5 生物安全防護(hù)的問題

樣品采集人員在樣品采集的過程中一定要做好生物安全防護(hù)工作，因為很多家畜傳染病都是借助人類活動而傳播的，特別是人畜共患病，往往因為采樣操作不當(dāng)，造成人感染。因此，在采樣的過程中要嚴(yán)格按照生物安全操作的規(guī)程進(jìn)行采樣，避免樣品對人和環(huán)境的污染，造成疫病的傳播與流行。

采樣的過程中采樣人員應(yīng)穿戴防護(hù)用品，不得進(jìn)食、飲水和吸煙。操作時要嚴(yán)肅認(rèn)真，手、面部有傷口時，應(yīng)避免危險操作。

2.6 樣品登記編號

樣品采集完畢，需將樣品編號登記，填好采樣單。樣品編號需要是連續(xù)性的、唯一性的。盛載樣品的試管、平皿上的編號要與采樣單上的編號一致，并且字跡清晰，不易被擦拭掉和被污染。

2.7 樣品的包裝和運送

樣品種類和來源不同要單獨雙層包裝，包裝上要注明樣品來源、樣品名稱、樣品數(shù)量、樣品編號以及采樣日期。樣品送到獸醫(yī)實驗室的時間應(yīng)該是越快越好。運送途中要避免樣品接觸高溫和日光，以免樣品腐敗變質(zhì)，可以用保溫箱，內(nèi)放冰袋。獸醫(yī)實驗室等檢測機(jī)構(gòu)對于樣品包裝不規(guī)范、樣品腐敗變質(zhì)、樣品數(shù)量不足或者組織樣品過大、樣品編號模糊不清等均可拒絕收樣。因此，我們一定要按照樣品采集的要求，規(guī)范進(jìn)行樣品采集和送檢。